Methodenartikel

Isolierung und Charakterisierung der menschlichen Nabelschnur gewonnenen mesenchymalen Stammzellen aus Frühgeborenen und Kleinkindern Begriff

DOI:

10.3791/58806

⸱

26. Januar 2019

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Pediatrics, Kobe University Graduate School of Medicine, 2Department of Pathology, Kobe Children's Hospital, 3Department of Pediatrics, Hyogo College of Medicine, 4Department of Developmental Pediatrics, Shizuoka Children's Hospital, 5Department of Pediatrics, Nihon University School of Medicine

In diesem Artikel

Zusammenfassung

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Menschlichen Nabelschnur (UC) erhalten Sie während der Perinatalperiode durch Frühgeburt, Begriff und postterm Lieferung. In diesem Protokoll beschreiben wir die Isolierung und Charakterisierung von UC-mesenchymale Stammzellen (UC-MSCs) von Föten/Säuglinge bei 19-40 Wochen der Schwangerschaft.

Zusammenfassung

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Mesenchymaler Stammzellen (MSCs) haben erhebliches therapeutische Potenzial und zunehmendes Interesse im Bereich Biomedizin zu gewinnen. MSCs sind ursprünglich isoliert und charakterisiert, die aus dem Knochenmark (BM), dann gewonnenen Gewebe, wie Fettgewebe, Synovialis, Haut, Zahnpulpa und fetalen Anhängseln wie Plazenta, Nabelschnurblut (UCB) und Nabelschnur (UC). MSCs sind eine heterogene Zellpopulation mit einer Kapazität für (1) die Einhaltung Kunststoff in standard Kulturbedingungen, (2) Oberfläche Marker Ausdruck CD73+/CD90+/CD105+/CD45 /CD34––/CD14–/CD19 –/HLA-DR– Phänotypen, und (3) Trilineage Differenzierung in Adipozyten, Osteozyten und Chondrozyten, wie Sie derzeit von der internationalen Gesellschaft für zelluläre Therapie (ISCT) definiert. Obwohl BM die am weitesten verbreitete Quelle der MSCs ist, schränkt die invasive Art des Strebens BM ethisch seiner Zugänglichkeit. Proliferation und Differenzierung Kapazität von MSCs von BM erhalten in der Regel nimmt mit dem Alter des Spenders. Im Gegensatz dazu haben fetalen MSCs UC gewonnenen Vorteile wie kräftige Proliferation und Differenzierung Kapazität. Da es in der Regel als medizinische Abfälle gilt, gibt es keine ethischen Bedenken für UC Probenahme. Menschlichen UC mit anhaltenden Wachstum des Fruchtwassers Hohlraums bei 4 bis 8 Wochen der Schwangerschaft zu entwickeln beginnt und hält bis zu 50-60 cm in der Länge wachsen, und es kann während der gesamten Neugeborenen Lieferzeit isoliert werden. Um einen Einblick in die Pathophysiologie der hartnäckigen Krankheiten, haben wir UC abgeleitet MSCs (UC-MSCs) vom Säugling geliefert in verschiedenen gestational Alter verwendet. In diesem Protokoll beschreiben wir die Isolierung und Charakterisierung von UC-MSCs aus Föten/Säuglinge bei 19-40 Wochen der Schwangerschaft.

Einleitung

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Mesenchymaler Stammzellen (MSCs) sind ursprünglich isoliert und charakterisiert aus dem Knochenmark (BM)1,2 aber erhalten Sie auch bei einer Vielzahl von Geweben einschließlich Fettgewebe, Synovialis, Haut, Zahnpulpa und fetalen Anhängsel 3. MSCs sind anerkannt als eine heterogene Zellpopulation, die sich vermehren und in Adipozyten, Osteozyten und Chondrozyten differenzieren kann. Darüber hinaus MSCs besitzen die Fähigkeit, migrieren auf Seiten der Verletzung, zu unterdrücken und zu modulieren, Immunantworten, umgestalten und Verletzungen zu reparieren. MSCs aus verschiedenen Quellen haben derzeit wachsendes Interesse als Quelle für die Zelltherapie gegen eine Reihe von hartnäckigen Krankheiten, einschließlich Graft - Versus - Host-Seuche, Myokardinfarkt und Hirninfarkt4,5 angezogen .

Obwohl BM die meisten gut-gekennzeichneten Quelle der MSCs ist, schränkt die Invasivität der BM Aspiration ethisch seiner Zugänglichkeit. Proliferation und Differenzierung Kapazität von MSCs von BM erhalten in der Regel nimmt mit dem Alter des Spenders. Im Gegensatz dazu fetalen MSCs aus fetalen Anhängseln wie Plazenta und Nabelschnurblut (UCB), und Nabelschnur (UC) haben Vorteile, einschließlich weniger ethische Bedenken hinsichtlich Probenahme und robuste Proliferation und Differenzierung Kapazität6 , 7. unter fetalen Anhängsel, die in der Regel als medizinischer Abfall entsorgt werden, UCB und UC sind als eine fetale Orgel, während Plazenta Fetomaternal gilt. Darüber hinaus müssen Plazenta und UCB abgetastet und auf den genauen Zeitpunkt der Neugeborenen Lieferung erhoben, während Plazenta und UC gesammelt und nach der Neugeborenen Lieferung verarbeitet werden kann. UC ist eine vielversprechende MSC-Quelle für Zelle Therapie8,9.

Menschlichen UC mit fortschreitenden Ausbau der Fruchtblase Hohlraum 4-8 Wochen der Schwangerschaft zu entwickeln beginnt, wächst weiter bis 50-60 cm in der Länge und kann während der gesamten Laufzeit des Neugeborenen Lieferung10isoliert werden. Um einen Einblick in die Pathophysiologie der hartnäckigen Krankheiten, verwenden wir UC abgeleitet MSCs (UC-MSCs) vom Säugling bei verschiedenen gestational Alter11,12geliefert. In diesem Protokoll beschreiben wir, wie zu isolieren und zu charakterisieren UC-MSCs aus Föten/Säuglinge bei 19-40 Wochen der Schwangerschaft.

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Protokoll

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Die Verwendung von humanen Proben für diese Studie wurde von der Ethikkommission der Kobe University Graduate School of Medicine (Zulassungs-Nr. 1370 und 1694) genehmigt und im Einklang mit den genehmigten Richtlinien.

1. Isolierung und Kultur der UC-MSCs

Hinweis: UC-MSCs wurden erfolgreich isoliert, kultiviert, und erweitert (mehr als Durchgangsnummer 4) von mehr als 200 BKS ausgesetzt zu diesem Protokoll. Unter mehr als 200 BKS, 100 % haben gezeigt erfolgreiche UC-MSC-Isolierung, weniger als 5 % haben zufällige Kontaminierung gezeigt, weniger als 15 % Wachstum Verhaftung gezeigt haben, und mehr als 80 % haben erfolgreichen UC-MSC Expansion gezeigt.

  1. UC zu sammeln.
    1. Bereiten Sie eine 50 mL-Kunststoff-Rohr, eine aseptische Scheren und einen 500-mL-Flasche von Alpha modifiziert Adlers minimale wesentliche Medium (Alpha MEM) bei 4 ° C.
    2. Aseptisch UC mit einer chirurgischen Schere bei ca. 5-10 cm in der Länge schneiden Sie aus und sammeln Sie es bald nach der Neugeborenen Geburt durch Kaiserschnitt.
    3. Sofort setzen Sie die UC in 50 mL Kunststoffhülse und 20-30 mL Alpha MEM in die Röhre.
    4. Speichern Sie die UC bei Raumtemperatur (RT), bis es ins Labor transportiert wird.
      Hinweis: Aseptische UC kann bis zu 2 Tage in serumfreien Medium bei RT aufbewahrt werden. Daher kann UC erhalten von den benachbarten Krankenhäusern gesammelt werden, wenn es ins Labor innerhalb von 2 Tagen geliefert wird.
  2. UC zu sezieren.
    1. Bereiten Sie eine Plastikschale, sterilisierte Scheren und Pinzetten, Pipetten 10 mL, 25 mL Pipetten, zwei 60 mm Gewebekultur Schalen, Phosphat-gepufferte Kochsalzlösung (PBS), gereinigtes Enzym verbindet (siehe Tabelle der Materialien, rekonstituiert mit sterilen PBS in einer Konzentration von 13 Wünsch Einheiten/mL und bei-80 ° C gelagert), und eine 500 mL Flasche reduzierte Serum-Medium (siehe Tabelle der Materialien).
    2. Aufwärmen der PBS, gereinigtes Enzym mischt, Serum, und Kultur Medium [alpha MEM mit 10 % fetalen bovine Serum (FBS) und 1 % Antibiotikum antimykotische Lösung (AA) bei 4 ° C gelagert] auf RT reduziert
    3. Nehmen Sie die UC aus der Tube und legen Sie sie in eine Plastikschale.
    4. Wiegen und 5 g UC mit einer sterilisierten Schere zu sezieren.
    5. Die UC für die Sterilisation mit einer 10 mL-Pipette übergießen Sie 10 mL 70 % igem Ethanol.
    6. Waschen Sie die UC mit 10 mL PBS zweimal mit einer 10 mL-Pipette.
    7. Die UC in der Kulturschale sterilisierte 60 mm Gewebe zu platzieren (siehe Abbildung 1, Schritt 1).
    8. Fügen Sie 10 mL Medium reduzierte Serum in die Schüssel.
    9. Fügen Sie 0,5 mL gereinigtes Enzym-Mischungen, eine Endkonzentration von etwa 0,62 Wünsch Einheiten/mL zu erreichen.
      Hinweis: Die Verwendung von gereinigten Enzyms Mischungen anstelle von traditionellen Kollagenase wurde gezeigt, um den Ertrag zu verbessern und Lebensfähigkeit der UC-MSCs von UC isoliert.
    10. Schneiden Sie die UC in 2-3 mm Stücke, mit sterilisierten Schere und Zange (siehe Abbildung 1, Schritt 2).
      Hinweis: Dieser Vorgang dauert etwa 30 Minuten.
    11. Inkubieren Sie die UC-Stücke bei 37 ° C für 30 min in einem 5 % CO2 Inkubator.
    12. Schneiden Sie die teilweise verdaut UC-Stücke in kleinere Stücke, die leicht durch einen 25-mL-Pipette fließen.
      Hinweis: Dieser Vorgang dauert etwa 30 Minuten.
    13. Inkubieren Sie die kleineren Stücke der UC bei 37 ° C für 15-45 min in einem 5 % CO2 Inkubator.
      Hinweis: Inkubation muss weiterhin, bis die Homogenates zähflüssig geworden. Die gesamte Dauer der Verdauung ist ca. 120 Minuten. Im Falle der Verwendung von UCs von Frühgeborenen, kann jedoch die Aufschlusszeit gekürzt werden, weil die leicht geschnitten und verdaut werden.
  3. UC-MSCs zu isolieren.
    1. Bereiten Sie vier 50 mL-Kunststoff-Rohre und eine Flasche 500 mL Kulturmedium.
    2. Teilen Sie die UC-Homogenat in zwei 50 mL Kunststoffrohre mit einen 25-mL-Pipette mit ca. 7,5 mL in jedem Röhrchen auf.
    3. 20 mL Kulturmedium in jedes Rohr hinzufügen und gut verrühren.
    4. Filtern Sie jeder UC-Homogenat durch ein 100 µm Zelle Sieb platziert ein neues 50 mL Sammelröhrchen, mit einer 25 mL-Pipette, um UC-abgeleitete Zellen zu sammeln.
      Hinweis: Dieser Vorgang dauert ca. 15 min., da die verdaute UC-Lösung klebrig ist.
    5. Zentrifugieren Sie zwei Röhren bei 1.000 x g für 5 min.
    6. Vorsichtig aspirieren Sie überstand und entsorgen.
    7. Die Zelle-Pellets in zwei Röhren mit 5 mL Kulturmedium aufzuwirbeln.
    8. Die Zellsuspension in eine neue 60 mm Platte und Kultur bei 37 ° C in einem 5 % CO2 Inkubator zu übertragen (siehe Abbildung 1, Schritt 3).
  4. UC-MSCs Kultur.
    1. PBS, Trypsin-EDTA (0,25 w/v%), Aufwärmen und Kultur Medium (Alpha MEM mit 10 % FBS und 1 % AA), RT
    2. Wenn Zellen mit einer 60 mm Platte angeschlossen sind, entfernen das Kulturmedium und waschen mit 5 mL PBS zweimal, um Schmutz und roten Blutkörperchen zu entfernen.
      Hinweis: Angeschlossene Zellen erscheinen in der Regel 3-5 Tage nach anfänglichen Beschichtung (siehe Abbildung 1, Schritt 4).
    3. Ersetzen Sie das Kulturmedium zweimal pro Woche und Inkubation bei 37 ° C in einem 5 % CO2 Inkubator bis 90-100 % Konfluenz.
      Hinweis: Dies dauert in der Regel 7-14 Tage nach der ersten Beschichtung.
    4. Zellen mit 5 mL PBS zweimal waschen, 0,5 mL Trypsin-EDTA hinzufügen und bei 37 ° C für ca. 5-10 min inkubieren.
    5. Wenn Zellen werden gerundet und losgelöst, 9 mL Kulturmedium hinzufügen und gut verrühren, Trypsin zu inaktivieren.
    6. Die Zellsuspension in eine neue 100 mm Platte und Kultur bei 37 ° C in einem 5 % CO2 Inkubator zu übertragen (siehe Abbildung 1, Schritt 5).
    7. Ersetzen Sie das Kulturmedium zweimal pro Woche und Inkubation bei 37 ° C in einem 5 % CO2 Inkubator bis 90-100 % Konfluenz.
      Hinweis: Dies dauert in der Regel 4-8 Tage nach der ersten Beschichtung.
    8. Waschen Sie Zellen mit 10 mL PBS zweimal, fügen Sie 1 mL Trypsin-EDTA und bei 37 ° C für ca. 5-10 min inkubieren.
    9. Wenn Zellen werden gerundet und losgelöst, 9 mL Kulturmedium hinzufügen und gut verrühren, Trypsin zu inaktivieren.
    10. Die Zellsuspension in zwei neuen 100 mm Platten und Kultur bei 37 ° C in einem 5 % CO2 Inkubator zu übertragen (siehe Abbildung 1, Schritt 5).
    11. Subkultur (1:2 Splits) bis zehnten Durchgang zu wiederholen (siehe Abbildung 1, Schritt 5).
      Hinweis: Da Zellen kultiviert unter weniger konfluierende Bedingungen neigen dazu, frühere Verbreitung Verhaftung zu erreichen, ist es wichtig, Durchgang Zellen mit einem Split-Verhältnis von 1:2.
    12. Verwenden Sie Zellen in der fünften bis achten Passage für Zelle Oberfläche Markeranalyse, Zelle Differenzierung Assay und andere Experimente.
      Hinweis: Um die starke Verbreitung so lange wie möglich zu halten, sind Zellen in der Regel unter mehr als 70-80 % konfluierende Bedingungen kultiviert.

2. Oberfläche Marker Ausdruck der UC-MSCs

  1. Bereiten Sie Zellen in einem 100 mm-Platte und mit 1 mL Trypsin-EDTA bei 37 ° C für ca. 5-10 min distanzieren.
  2. 9 mL Kulturmedium und Zentrifuge bei 1.000 x g für 5 min zugeben.
  3. Den Überstand abgesaugt und entsorgen.
  4. Die Zelle-Pellets mit 10 mL PBS Aufschwemmen und Zentrifuge bei 1.000 x g für 5 min. wiederholen waschen zweimal.
  5. Aufzuwirbeln Sie Zellen mit Flow Cytometry (FCM) Puffer (PBS mit 2 mM EDTA und 10 % blockierende Reagenzien) ~ 1 × 106 Zellen/ml.
  6. 50-100 µL Zellsuspension in ein 1,5 mL Röhrchen zu übertragen; Hinzufügen von Phycoerythrin (PE)-konjugierten Antikörpern gegen CD14, CD19, CD34, CD45, CD73, CD90, CD105 oder HLA-DR; und inkubieren Sie für 45 min auf Eis.
  7. Wash-Zellen mit FCM doppelt gepuffert und fügen Sie 50-100 µL 0,2 % Lebensfähigkeit Farbstofflösung (siehe Tabelle der Materialien).
  8. Bei inkubieren Sie RT 15 min waschen Zellen mit FCM Puffer zweimal und Filterzellen durch ein Sieb 70 µm Zelle.
  9. Der FCM Zellen durchlaufen und die erzielten Ergebnisse mit FCM-Software gemäß den Anweisungen des Herstellers zu analysieren.

3. Trilineage Differenzierung der UC-MSCs

  1. Durchführen Sie angereizte.
    1. Bereiten Sie eine Zellsuspension in Kulturmedium in einer Konzentration von 5 × 103 Zellen/mL.
    2. Platte 1 mL Zellsuspension in einem 12-Well-Platte und Inkubation bei 37 ° C in einem 5 % CO2 Inkubator für ~ 24 h.
    3. Ersetzen Sie das Kulturmedium mit adipogenen Differenzierung Medium (siehe Tabelle der Materialien) und 2-3 Wochen bei 37 ° C in einem 5 % CO2 Inkubator inkubieren. Adipogenen Differenzierung Medium zweimal wöchentlich gewechselt.
    4. Waschen Sie Zellen mit PBS dreimal.
    5. Inkubieren Sie Zellen in 4 % Formaldehyd-Lösung für 30 min bei RT
    6. Waschen Sie Zellen mit PBS dreimal und mit 60 % Isopropanol dreimal.
    7. Bereiten Sie 0,5 % Öl rot O Lösung durch Auflösen von 84 mg Öl rot O in 10 mL 100 % Isopropanol und Hinzufügen von 6,7 mL destilliertem Wasser. Zellen mit 1 mL 0,5 % rot O Öllösung bei RT für 20 min. Fleck.
    8. Zellen mit 60 % Isopropanol dreimal waschen und unter dem Mikroskop zu visualisieren.
  2. Durchführen Sie Osteogenesis.
    1. Bereiten Sie eine Zellsuspension in Kulturmedium in einer Konzentration von 1 × 104 Zellen/mL.
    2. Platte 1 mL Zellsuspension in einem 12-Well-Platte und Inkubation bei 37 ° C in einem 5 % CO2 Inkubator für ~ 24 h.
    3. Ersetzen Sie das Kulturmedium mit Osteogeneic Differenzierung Medium (siehe Tabelle der Materialien) und 1-2 Wochen bei 37 ° C in einem 5 % CO2 Inkubator inkubieren. Osteogene Differenzierung Medium zweimal wöchentlich gewechselt.
    4. Waschen Sie Zellen mit PBS dreimal.
    5. Inkubieren Sie Zellen in 4 % Formaldehyd-Lösung für 30 min bei RT
    6. Waschen Sie Zellen mit PBS dreimal.
    7. Bereiten Sie 2 % rote Alizarin S-Lösung durch Auflösen von 200 mg von Alizarin Rot S mit 10 mL destilliertem Wasser. Führen Sie Zellen mit 1 mL 2 % rote Alizarin S Lösung bei RT 3 min zu Flecken.
    8. Dreimal mit PBS waschen und unter dem Mikroskop zu visualisieren.
  3. Durchführen Sie werden.
    1. Bereiten Sie eine Zellsuspension in Kulturmedium in einer Konzentration von 1,6 × 107 Zellen/mL.
    2. Einen Tropfen 5 µL Zellsuspension auf der Mitte der Brunnen in einem 12-Well-Platte (Micromass Kulturen) und Inkubation bei 37 ° C in einem 5 % CO2 Inkubator für 2-3 h.
    3. Sanft fügen Sie 1 mL Chondrogenic Differenzierung Medium (siehe Tabelle der Materialien) und 4-7 Tage bei 37 ° C in einem 5 % CO2 Inkubator inkubieren. Chondrogenic Differenzierung Medium zweimal wöchentlich gewechselt.
    4. Waschen Sie Zellen mit PBS dreimal.
    5. Inkubieren Sie Zellen in 4 % Formaldehyd-Lösung für 30 min bei RT
    6. Waschen Sie Zellen mit PBS dreimal.
    7. Bereiten Sie 0,05 % Toluidin blau Lösung durch Auflösen von 250 mg Toluidin blau mit 500 mL 0,1 M Natrium-Acetat-Puffer mit pH 4,1. Zellen mit 1 mL 0,05 % Toluidin blau Lösung bei RT für 30 min. Fleck.
    8. Zellen mit PBS dreimal waschen und unter dem Mikroskop zu visualisieren.

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Ergebnisse

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Die Verfahren von UC Sammlung MSC Kultur sind in Abbildung 1zusammengefasst. UC von ca. 5-10 cm Länge kann alle Neugeborenen geliefert per Kaiserschnitt abgeholt werden. UC beginnt bei 4 bis 8 Wochen der Schwangerschaft entwickeln und wächst weiter bis 50-60 cm in der Länge, wie in Abbildung 2dargestellt. Es gibt zwei Arterien (A), eine Vene (V), Kabel-Futter (CL) und Wharton Gelee (WJ) in UC, wie in Abbildun...

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Diskussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

MSCs können aus einer Vielzahl von Geweben isoliert und sind heterogene Bevölkerung der Zellen, die nicht alle Express derselben phänotypischer Marker tun. Wir beschrieben hier, eine Protokoll, die leitet die Sammlung und sezieren von UC von Frühgeborenen und Begriff Säuglingen und Isolation und Kultur der UC-MSCs ermöglicht. Nach diesem Protokoll haben wir erfolgreich UC-MSCs isoliert, die erfüllen die ISCT Kriterien19 von Föten/Säuglinge bei 19-40 Wochen der Schwangerschaft geliefert und gezeigt...

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Offenlegungen

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Die Autoren haben nichts preisgeben.

Danksagungen

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Diese Arbeit wurde unterstützt durch Grants-in-Aid für Scientific Research (C) (Gewährungsnummer: 25461644) und junge Wissenschaftler (B) (Nummern zu gewähren: 15 K 19614, 26860845, 17 K 16298) von JSPS KAKENHI.

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Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien
NameUnternehmenKatalognummerKommentare
50 mL KunststoffröhrchenAS One Coporation, Osaka, JapanViolamo 1-3500-22
12-Well-PlatteAGC Techno Glass, Tokio, JapanIwaki 3815-012
60 mmSchüssel AGC Techno Glass, Tokio, JapanIwaki 3010-060
Zellsieb (100 μ m)Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA Falcon 35-2360
Zellsieb (70 μ m)Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA Falcon 35-2350
Alpha MEMWako Pure Chemical, Osaka, Japan135-15175
Fötales RinderserumSigma Aldrich, St. Louis, MO172012
Reduziertes SerummediumThermo Fisher Scientific, waltham, MAOPTI-MEM Gibco 31985-070
Antibiotikum-AntimykotikumThermo Fisher Scientific, Waltham, MA Gibco 15240-062
Trypsin-EDTAWako Pure Chemical, Osaka, Japan209-16941
PBSTakara BIO, Shiga, JapanT900
Gereinigte EnzymmischungenRoche, Mannheim, DeutschlandLiberase DH Research Grade 05401054001
PE-konjugierter Maus-Primärantikörper gegen CD14BD Bioscience, Franklin Lakes, NJ347497Los: 3220644, RRID: AB_400312
PE-konjugierter Maus-Primärantikörper gegen CD19BD Bioscience, Franklin Lakes, NJ340364Lot: 3198741, RRID: AB_400018
PE-konjugierter Maus-Primärantikörper gegen CD34BD Bioscience, Franklin Lakes, NJ555822Lot: 3079912, RRID: AB_396151
PE-konjugierter Maus-Primärantikörper gegen CD45BD Bioscience, Franklin Lakes, NJ555483Los: 2300520, RRID: AB_395875
PE-konjugierter Maus-Primärantikörper gegen CD73BD Bioscience, Franklin Lakes, NJ550257Los: 3057778, RRID: AB_393561
PE-konjugierter Maus-Primärantikörper gegen CD90BD Bioscience, Franklin Lakes, NJ555596Los: 3128616, RRID: AB_395970
PE-konjugierter Maus-Primärantikörper gegen CD105BD Bioscience, Franklin Lakes, NJ560839Los: 4339624, RRID: AB_2033932
PE-konjugierter Maus-Primärantikörper gegen HLA-DRBD Bioscience, Franklin Lakes, NJ347367Los: 3219843, RRID: AB_400293
PE-konjugierter Maus IgG1 k IsotypBD Bioscience, Franklin Lakes, NJ555749Los: 3046675, RRID: AB_396091
PE-konjugierter Maus IgG2a k IsotypBD Bioscience, Franklin Lakes, NJ555574Los: 3035934, RRID: AB_ 395953
PE-konjugierte Maus IgG2b k IsotypBD Bioscience, Franklin Lakes, NJ555743Lot: 3098896, RRID: AB_396086
ViabilitätsfarbstoffBD Bioscience, Franklin Lakes, NJFixierbarer Viabilitätsfleck 450 562247
BlockierungsreagenzDainippon Pharmaceutical, Osaka, JapanBlock Ace UKB80
FCMBD Bioscience, Franklin Lakes, NJBD FACSAria  III Cell Sorter
FCM-SoftwareBD Bioscience, Franklin Lakes, NJBD FACSDiva Adipogenes
DifferenzierungsmediumInvitrogen, Carlsbad, CAStemPro Adipogenese-Differenzierungskit A10070-01
Osteogenese-DifferenzierungsmediumInvitrogen, Carlsbad, CAStemPro Osteogenese-Differenzierungskit A10072-01
Chondrogene Differenzierung mittel Invitrogen, Carlsbad, CAStemPro Chondrogenesis Differenzierungskit A10071-01
FormaldehydPolyscience, Warrigton, PA16% Ultrareines Formaldehyd EM Grade #18814
Öl Rot OSigma Aldrich, St. Louis, MOO0625
Arizarin Rot SSigma Aldrich, St. Louis, MOA5533
Toluidin BlauSigma Aldrich, St. Louis, MO
MikroskopKeyence, Osaka, JapanBZ-X700
198161

Referenzen

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Mesenchymale Stammzellen aus der NabelschnurProtokoll zur ZellisolationDurchflusszytometrische AnalyseTrilineage DifferenzierungsassayOberfl chenmarker ExpressionZellkulturtechnikNabelschnurdissektionEnzymische VerdauungsmethodeZellen von Fr h und NeugeborenenProtokoll zur MSC Charakterisierung

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