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Methodenartikel

Eine Verhaltenstherapie Testbatterie für die wiederholte Beurteilung der Motorik, Stimmung und Kognition bei Mäusen

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DOI:

10.3791/58973

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2. März 2019

 ,  , 
1Nanjing Key Laboratory of Pediatrics, Children's Hospital of Nanjing Medical University, 2Nanjing Key Laboratory of Pediatrics, Nanjing Medical University, 3Laboratory of Neurodegenerative Disease, Li Ka Shing Faculty of Medicine, University of Hong Kong, Pokfulam, Hong Kong Special Administrative Region (HK SAR)

In diesem Artikel

Zusammenfassung

Eine umfassende Verhaltens-Testbatterie der Motorik, Stimmung – einschließlich sozialer Interaktion, Depression und Angst – und Kognition ist für die wiederholte Bewertung der Neurodegeneration im Zusammenhang mit Veränderungen im Verhalten von Mäusen.

Zusammenfassung

Pharmakologischen und toxikologische Studien in Neurodegeneration erfordern umfassende Verhaltensanalyse bei Mäusen da motorische Störungen und Störungen in der Stimmung und Wahrnehmung häufig sind und oft gemeinsame Symptome bei neurodegenerativen Erkrankungen. Hier wird eine Verhaltens-Testbatterie für Motor, Stimmung und Wahrnehmung, die wiederholt in einer Längsschnittstudie getestet werden kann. Diese Batterie beurteilt den insgesamt Verhalten Phänotyp bei Mäusen durch die Untersuchung von jeder Domäne des Verhaltens mit mindestens zwei unabhängigen anerkannten Tests (z.B. Open-Feldtest und Rotarod Test für Motorik, Sozialverhalten Test, erhöhte plus Labyrinth Test und erzwungene schwimmen Test für emotionale Funktion und Morris Wassertest Labyrinth und neuartige Objekt Anerkennung Test für die kognitive Funktion). Daher ist diese sensible und umfassende Testbatterie ein leistungsfähiges Werkzeug für die Untersuchung des Verhaltens Wechsel in Neurodegeneration.

Einleitung

Neurodegenerative Erkrankungen vorgestellten verheerenden behavioral Symptome, einschließlich kognitiven Beeinträchtigung, Stimmung Störungen wie Angst und Depression oder motorische Störungen1. Die Pathogenese der verschiedenen Arten von neurodegenerativen Erkrankungen ist unklar2. Kumulative Studien zeigen, dass genetische und umweltbedingte Faktoren sowohl zur Pathogenese von neurodegenerativen Erkrankungen beitragen könnten. Identifizieren der Risikofaktor der Neurodegeneration erfordert Verhaltensanalyse. Obwohl jede Art von Neurodegenerative Erkrankung seine Unterschrift Verhaltens Symptom hat (z.B. Alzheimer-Krankheit [AD] wird mit kognitiver Beeinträchtigung und Krankheit Parkinson [PD] mit motorische Störungen gekennzeichnet). Mit dem Fortschreiten der Krankheit manifestieren die Patienten Komorbidität von verschiedenen Verhaltens-Auffälligkeiten3. Zum Beispiel zeigen Alzheimer-Patienten Symptome der Stimmung Dysfunktion im fortgeschrittenen Stadium4,5. PD-Patienten können Fortschritte in PD-im Zusammenhang mit Demenz und kognitive Beeinträchtigung6zu entwickeln. Anhand dieser Merkmale, ist die Verhaltensanalyse in Neurodegeneration Modelle in der Regel umfassend und wiederholte.

Um dieses Ziel zu erreichen, wurde eine Batterie, die klassische und am weitesten verbreiteten Verhaltens Tests mit ausgezeichneten Gültigkeit enthält für verhaltensbezogene Analysen im Motor, die Stimmung und Wahrnehmung entwickelt. Die Motorik kann durch die offenen Feldversuch7,8 und der beschleunigten Rotarod Test getestet werden. Stimmung-Dysfunktion, einschließlich soziale Dysfunktion, Depression und Angst, sind am häufigsten neurodegenerativen Erkrankungen5gesehen. Daher enthält dieser Batterie eine soziale Interaktion-Test für Geselligkeit9, die erhöhte plus Labyrinth Test für Angst-10und der erzwungenen schwimmen Test für Depression11. Kognitiver Beeinträchtigung ist eines der charakteristischsten Symptome bei neurodegenerativen Erkrankungen wie AD und Frontotemporal lobäre Demenz12. Kognitive Domänen, darunter Kurzzeitgedächtnis und episodisches Gedächtnis, sind anfällig für Neurodegeneration13,14,15. Daher sind die Morris Labyrinth Wassertest für räumliche lernen und Gedächtnis16 und der neuartige Objekt Anerkennung Test für kurzfristige Speicher17 in der Batterie enthalten. Diese Tests sind miteinander kompatibel. Die Reihenfolge der Tests wurde entwickelt, um Gewöhnung zu maximieren und Störungen, zur weiteren Erhöhung der Kompatibilität innerhalb der Batterie zu minimieren. Da jede Funktion von mindestens zwei unabhängigen Tests, die im Prinzip und Methode unterscheiden getestet werden, können die Ergebnisse der einzelnen Tests weiter validiert werden. Darüber hinaus werden die Protokolle einiger Tests für die wiederholte Prüfung hervorgehoben erleichtern die Langzeitstudie der Entwicklung von neurodegenerativen Erkrankungen. Daher, dieses Verhalten Testbatterie Studien verschiedene Sub-Domains der Verhaltensänderungen in verschiedenen Stadien der Neurodegeneration zu sehen, während die Kosten einer minimalen Anzahl von Tieren. Diese Batterie wurde in einer Längsschnittstudie eingesetzt die Verhaltensänderungen bei jungen Erwachsenen (3-Monate-alten) männlichen C57BL/6N Mäusen nach der Atemwege Exposition gegenüber Silica-Nanopartikel, ein Berufsrisiko ausgewertet, die ein potenzieller Risikofaktor der Neurodegeneration18. Jedoch können andere Stämme oder Modelle, wie z. B. im Alter von Mäusen und genmanipulierten Mäusen, anders als die jungen Mäuse C57BL/6N Verhalten. Vorsicht kann daher erforderlich sein, wenn diese Batterie in diesen Mäusen mit.

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Protokoll

Alle hier beschriebene Methoden wurden vom Ausschuss für die Verwendung von lebenden Tieren in Lehre und Forschung (CULATR), der University of Hong Kong genehmigt.

1. Allgemeine Protokoll

Hinweis: Dieser Abschnitt basiert auf Deacon19.

  1. Verhaltens Zimmer Einrichtung
    1. Befreien Sie sich von unabhängigen Stimulation/Ablenkung, inkl. direkte helles Licht auf den experimentellen Apparat, Geruch, Lärm und andere irrelevant Tiere im behavioral Zimmer (die sollten ca. 10 m2 mit einstellbarer Beleuchtung und, vorzugsweise, haben eine Vorraum).
      Hinweis: Da die Maus ein nachtaktives Tier ist, Beleuchtung unter 15 Lux im Open-Feldtest, könnte neuartige Objekt Anerkennung und soziale Interaktion Test Störungen/Stress aus dem Licht minimieren und helfen die Maus auf den Test konzentrieren.
    2. Stellen Sie die Kamera für Video-Aufzeichnung mindestens 1,5 m über dem Boden, um sicherzustellen, dass es außer Sichtweite der Test Maus ist.
  2. Gehäuse und Gewöhnung
    1. Gruppenhaus die Mäuse in einem tierischen Einheit unter Beobachtung (z.B. Gruppenhaltung nicht mehr als vier Erwachsenen Mäusen).
      Hinweis: Hier 3-Monate-alten männliche C57BL/6N Mäusen verwendet wurden und in einem 1144B Käfig untergebracht. Schließen Sie aus, Kranken, verletzten oder stark beanspruchten Mäuse. Erfahrungen von Hunger, Durst oder gemobbt beeinträchtigen die Leistung der Maus.
    2. Ordnen Sie der gleichen Tier Handler Durchführung der behavioral Tests, um Variabilität zu vermindern. Führen Sie den Transport, handling, und experimentieren Sie während der Licht-Zyklus von 07:00 bis 19:00 Wenn möglich, vereinbaren Sie alle die Handhabung, wie die Verwaltung von Drogen/Toxin (z. B. intranasale Instillation Silica-Nanopartikel) oder Käfig Reinigung, nach dem Test.
    3. Müssen Sie die Käfige mit Zufallszahlen auf den Experimentator vor jedem Experiment blind. Gewöhnen Sie die Mäuse, die experimentelle Umgebung im behavioral Zimmer für 15 bis 30 min. in ihrer Heimat Käfigen. Halten Sie die Heimat Käfige im behavioral Zimmer während des gesamten Experiments.
    4. Setzen Sie vor Beginn des Experiments eine nonexperimental C57BL/6N-Maus im Apparat, so dass die Versuchsbedingung für die erste Maus das gleiche wie der Rest ist. Reinigen Sie das Gerät dann wie folgt: Urin und Kot mit einem sauberen Papiertuch entfernen, reinigen Sie das experimentelle Gerät mit Leitungswasser und anschließend den Geruch, die Links mit der Maus durch Abwischen der Apparat mit einem Papiertuch leicht mit 70 % igem Ethanol besprüht.
    5. Um die Ablenkung durch den Experimentator verursacht zu minimieren, bitten Sie die Versuchsleiter den Verhaltensstörungen Raum verlassen, während der Videoaufnahme, oder bleiben hinter dem Vorhang während des Morris-Wasser-Labyrinth-Tests.
  3. Verhaltens Versuchsanordnung
    1. Ordnen Sie Verhalten Test in der Reihenfolge, wie in Figur 1Adargestellt. Möchten Sie die Tests verteilt durch 24 h, mit Ausnahme der erhöhten plus Labyrinth-Test durchführen.
      Hinweis: Da das gesamte Verfahren bis zu 2 Wochen benötigt werden, vereinfachen Sie die Batterie durch die Wahl unter ähnliche Tests vor der Anwendung in einer akuten oder kurzfristige Studie.
      Vorsicht: 2 Tage geöffnet-Feldtest sorgt für richtige Gewöhnung für die neuartige Objekt Anerkennung zu testen. Test der erzwungenen Schwimmtest dauern, wie es bei Mäusen C57BL/6N Stress verursachen kann.

2. BehavioralTest-Protokoll

  1. Open-Feldtest8,18,19,20
    1. Ausführen der Open-Feldtest in einem 60 cm (Länge [L]) x 60 cm x 40 cm (Höhe [H]) nicht transparenten weißen Kunststoff-Arena (Breite [W]).
      Hinweis: Mit mehreren Arenen kann den Durchsatz des Tests zu erhöhen.
    2. Starten Sie die Kamera-Aufnahme und legte sanft die Maus neben der Mitte einer Wand der Arena, mit Blick auf die gleiche Wand. Notieren Sie das Verhalten der Maus für 10 min vor der Rückgabe an die Heimat Käfig. Reinigen Sie das Gerät, wie in Schritt 1.2.4 beschrieben.
      Hinweis: Der Startpunkt im offenen Feld Test kann auch die Mitte der Arena. Seien Sie konsequent unter den Mäusen.
    3. Wiederholen Sie, bis alle Mäuse des Protokolls zu beenden. Gegengewicht der testen Reihenfolge zwischen den Gruppen.
    4. Die Datenanalyse wie folgt.
      1. Teilen Sie die Arena in vier Quadrate von vier Quadraten (imaginären Raster) auf dem Computerbildschirm. Zur Beurteilung der motorischen Funktion die Anzahl der Linien mit der Maus in der Arena-19.
        Hinweis: Die Definition von "Trennungslinie" ist, wenn beide Hinterbeine es überqueren. Diese Definition gilt auch für die erhöhte plus Labyrinth-Test.
      2. Messen Sie die Zeit im zentralen Bereich als Indikator für Angst. Der zentrale Bereich ist die vier Quadrate in der Mitte der Arena.
        Hinweis: Zusätzliche Parameter, z. B. Aufzucht (beide Vorderpfoten über dem Boden, mit den Vorderpfoten gegen eine Wand oder stehen), Latenz zum ersten hinten, Pflege und Einfrieren zeigen die Emotionalität der Maus.
      3. Alternativ verwenden Sie eine Tracking-Software, wie von Seibenhener und Wooten8, zur Messung der zurückgelegten Entfernung, die Geschwindigkeit und die Verweildauer im mittleren Bereich im Detail beschrieben.
  2. Beschleunigende Rotarod Test18
    1. Führen Sie die 3-tägige Schulung der beschleunigten Rotarod vor jeder Behandlung von Drogen oder Toxin/Modellierung/Ausbruch der Krankheit testen und testen Sie die Motorfunktion für 1 Tag, wie in Figur 1Ageplant.
      Hinweis: Die Maus erhält drei Versuche pro Tag während der Ausbildung und Prüfung. Jede Studie mit der Drehung des Stabes beginnt und endet mit dem Absinken der Maus.
    2. Ort Rotarod Apparat auf der Bank im behavioral Zimmer. Vermeiden Sie direkten Beleuchtung des Geräts. Programmieren Sie die Ausstattung wie ab 4 u/min und beschleunigt bis 40 u/min innerhalb von 5 Minuten.
    3. In jeder Studie, setzen Sie die Maus auf die statische Stab, Gesicht zur Wand der Maschine. Starten Sie das Gerät, wenn die Maus ausgeglichen wird. Stoppen Sie das Gerät zu, sobald die Maus fällt, und notieren Sie die Zeit, die Maus auf dem Stab. Sofort für eine weitere zwei Prüfungen vor der Rückkehr der Maus zurück in die Heimat Käfig wiederholen.
    4. Wiederholen Sie den Vorgang auf den anderen Mäusen.
    5. Die durchschnittliche Verweildauer auf dem Stab von drei Studien während der Tests zur Abschätzung der motorischen Funktion zu messen.
      Hinweis: Die durchschnittliche Besuchszeit auf der Rute am dritten Tag der Ausbildung ist die Basis der motorischen Funktion.
  3. Soziale Interaktion Test18
    1. Für die soziale Interaktion-Test verwenden eine Open-Field-Arena mit zwei identische transparente Kammern (8 cm [L] X 6 cm [W] x 12 cm [H]) mit Löchern an der Oberfläche – und eine neuartige Maus (Helfer), die eine gleichgeschlechtliche juvenile Artgenosse ist, das keinen vorherigen Kontakt mit gehabt hat die Thema Maus. Abbildung 1 b zeigt das Schema des Verfahrens. Reinigen Sie die Arena und die Kammern wie in Schritt 1.2.4 beschrieben.
      Hinweis: Die neue Maus sein kein stellt oder Käfig Kumpel von der Maus Thema. Es ist gesund und Gruppe untergebracht. Gewöhnen Sie die neuartige Maus zum behavioral Raum für 15 bis 30 min., wie in Schritt 1.2.3 beschrieben.
    2. Legen Sie separat die beiden Kammern in der Mitte von zwei gegenüberliegenden Wänden der Arena. Die Thema Maus in der Arena als in Schritt 2.1.2 beschrieben und dargestellt in Abbildung 1 b, für eine Erkundung von 3 min einführen. Die Thema Maus zu Hause Käfig zurück und entfernen Sie alle Urin oder Kot in der Arena.
    3. Legen Sie die Helfer in einer der Kammern. Wiedereinführung der Thema-Maus in die Arena und Rekord für 3 min. danach wieder beide Mäuse um jeweils ihre eigenen Hause Käfige. Wiederholen Sie die Schritte mit anderen Thema Mäuse wie oben beschrieben.
      Hinweis: Die Seite des Helfers auszugleichen oder nach dem Zufallsprinzip innerhalb der Gruppe zuweisen.
    4. Aus dem Video, Schätzung den Parameter beschreiben die soziale Interaktion-Aktivität der Mäuse als tHelfer/tleer, d.h. das Verhältnis der Zeit, die im Zusammenspiel mit der Helfer-Kammer (t-Helfer) und die leeren einer (tleer), oder verwenden Sie die Anerkennung index t-Helfer/ (t-Helfer + tleer).
      Hinweis: Eine Interaktion zwischen dem Thema Maus und die Kammer wird als definiert, wenn die Maus Nase innerhalb von 2 cm von der Kammer und in Richtung es ist.
  4. Erhöhte plus Labyrinth test 10
    1. Führen die erhöhte plus Labyrinth Test am selben Tag nachdem alle Mäuse in den offenen Feldversuch getestet wurden. Reinigen Sie das Gerät, wie in Schritt 1.2.4 beschrieben.
      Hinweis: Die Konfiguration von der erhöhten plus Maze ist ein "+"-Form. Es verfügt über zwei offene Arme (30 x 5 cm x 0,5 cm) gegenüber einander und senkrecht zur geschlossenen zweiarmig (30 x 5 x 16 cm) mit einem Center-Plattform (5 x 5 cm x 0,5 cm). Das Labyrinth ist erhöhte 40 cm über dem Boden.
    2. Platzieren Sie den Mauszeiger an der Kreuzung der offenen und geschlossenen Arme, mit Blick auf den offenen Arm gegenüber der Experimentator (Abbildung 1). Notieren Sie das Verhalten für 5 min vor der Rückkehr der Maus in die Heimat Käfig. Wiederholen Sie, bis alle Mäuse getestet werden.
      Hinweis: Eintritt in das Labyrinth mit dem Gesicht zum offenen Arm könnte die Maus Exploration des open Arms erhöhen.
    3. Messen Sie die Zeit, die Maus in die offenen Arme (tÖffnen) und in den geschlossenen Armen (tSchließen) basierend auf dem Video: tÖffnen/tSchließen gibt den Grad der Angst.
  5. Erzwungene schwimmen Test11
    1. Das Gerät von der erzwungenen schwimmen-Test ist ein zylindrischer Behälter, der 30 cm hoch und 20 cm im Durchmesser ist. Füllen Sie den Tank bis zu 15 cm hoch mit Wasser bei Raumtemperatur (23-25 ° C).
      Hinweis: Verwenden Sie frisches Wasser für jede Maus.
    2. Starten Sie die video-Aufnahme und legte sie sanft die Maus im Wasser, in der Mitte des Gerätes. Das Video 6 min. bevor man die Maus wieder zurück in seine Heimat Käfig unter Infrarotlicht Datensatz.
      Hinweis: Stören Sie nicht die Maus durch Ertrinken es oder verdrehen Schwanzspitze.
    3. Messen Sie die Unbeweglichkeit-Zeit in den letzten 5 Minuten des aufgezeichneten Videos. Mobilität bedeutet keine Bewegungen nicht erforderlich, um den Körper auszugleichen und den Kopf über Wasser zu halten.
  6. Neuartige Objekterkennung testen17,18
    1. Richten Sie die neuartige Objekt Anerkennung Test 2 Tage der Gewöhnung, 1 Tag Einarbeitung und 1 Tag des Tests (Abbildung 1); Jede Sitzung ist 10 min per Mausklick, und das ab Intervall 24 h.
      Hinweis: Die Gewöhnung mit dem Open-Field-Test wird durchgeführt, wie in Abschnitt 2.1 beschrieben. Die Maus arbeitet mit zwei identische Objekte (alt) in Einarbeitung. Im Test die Maus interagiert mit einem alten Gegenständen und ein neues Objekt, beide an der gleichen Stelle wie die Objekte in Einarbeitung gelegt. Die Vorrichtung des neuartigen Objekt Anerkennung Tests enthält eine Open-Field-Arena und zwei Sätze von Objekten. Jedes Set enthält zwei identische Objekte (Objekte A und A und B und B-Objekte). Objekte A und B sind in der Größe ähnlich, aber unterschiedlich in Textur (Glas/Kunststoff/Papier), Form (Runde/Cubic) und Farbe (hell/dunkel). Die Objekte sollten geruchsfrei und groß genug für die Maus, um innerhalb von 10 min zu erkunden sein. Die geeignete Größe für Erwachsene Mäuse C57BL/6N ist 8 cm hoch und 5 cm breit/im Durchmesser.
    2. Markieren Sie die Positionen der beiden Objekte in Einarbeitung und Test, die 5 cm weg von der Seite und 7 cm vom oberen Rand der Arena.
      Hinweis: Markieren Sie die Position am Abend vor der Einarbeitung, den Geruch des Markers zu vermeiden.
    3. In der Einarbeitung interagiert die Maus mit einem Satz von identischen Objekten. Reinigen Sie die Arena und Objekte wie in Schritt 1.2.4 beschrieben vor dem Platzieren des Cursors in der Arena, mit Blick auf die Mitte der Wand, wie in Abbildung 1dargestellt. Rekord für 10 min vor der Rückkehr der Maus in die Heimat Käfig. Wiederholen Sie, bis alle Mäuse fertig sind und die Käfige zu tierischen Einheit zurückkehren.
      Hinweis: Gegengewicht zu die Objekten in Einarbeitung innerhalb der Gruppe verwendet, um Verzerrungen zu vermindern (z. B. Mäuse Nr. 1 und 2 Objekte A und A, erforschen und erkunden Mäuse Nr. 3 und 4 Objekte B und B, auf diese Weise ist das neue Objekt Objekt A für Mäuse, Objekt B für Mäuse Nr. 1 und 2 Nein 3 und 4).
    4. Führen Sie den Test 24 h nach der Einarbeitung. Verwenden Sie das gleiche Verfahren wie bei der Einarbeitung, mit der Ausnahme eines der Objekte mit einem aus einem anderen Satz (Abbildung 1) zu ersetzen. Wiederholen Sie, bis alle Mäuse den Test durchgeführt haben und danach die Käfige wieder in das Tier Gerät.
      Hinweis: Gegengewicht zu die Seite des neuen Objekts innerhalb der Gruppe, Neigung zu vermindern (z.B., stellen Mäuse Nr. 1 und 3 Objekte A und B, und Mäuse Nr. 2 und 4 auf Objekte B und A). Auf diese Weise zeigt das neue Objekt auf der rechten Seite für Mäuse Nr. 1 und 4, und auf der linken Seite für Mäuse Nr. 2 und 3. Hier ist die linke Seite der linken Seite des Experimentators, wenn mit Blick auf die Arena.
    5. Messen Sie die Zeit, die jede Maus mit dem neuen Objekt (tneuen) und das alte Objekt (talt) getrennt, aus dem Videomaterial in der Testphase interagiert. Eine Interaktion zwischen dem Tier und das Objekt wird in der Anmerkung nach Schritt 2.3.4 beschrieben. Berechnen Sie die Erinnerung an die Maus als die Einstellung auf das neue Objekt = tNeues/talten; oder tneue/ (neue t + talt).
      Hinweis: tNeues/talten entspricht 1 oder tneue/ (neue t + talt) entspricht 0,5 bedeutet die Maus hat keine Präferenz für das neue Objekt (z.B. Beeinträchtigung des Gedächtnisses). Die Zeit, die Interaktion mit Objekten in der Einarbeitung kann als eine Kontrolle über das Experiment dienen. Die Gesamtzeit zeigt die Exploration Aktivität der Maus und tLinks/tRechts schlägt räumliche Verzerrungen.
  7. Morris-Wasser-Irrgarten testen16
    1. Richten Sie das Gerät wie folgt.
      1. Setzen Sie die Wasser-Irrgarten, einen kreisförmigen Pool (von 120 cm im Durchmesser und 60 cm tief), in der Mitte eines Verhaltens Raumes, und markieren Sie die Position des Labyrinths um sicherzustellen, dass die Position unverändert bleibt während des gesamten Experiments.
      2. Teilen Sie das Labyrinth in vier gleichen imaginären Quadranten. Hängen Sie die visuelle Hinweise (z.B., Kreis, Quadrat, Dreieck und Pentagon) in der Mitte der einzelnen Quadranten, 130 cm über dem Boden und 53 cm von der Wand des Labyrinths.
        Hinweis: Das Labyrinth und das Stichwort müssen bleiben in der gleichen Position während des gesamten Tests, so dass die Maus genaue räumliche Gedächtnis bilden kann.
      3. Platzieren einer Plattform 25 cm von der Wand Weg in der Mitte des vierten Quadranten, und markieren Sie die Position. Die Plattform für die Maus ist 10 cm im Durchmesser.
        Hinweis: Die Lage und Durchmesser der Plattform bestimmen die Schwierigkeit der Aufgabe. Die näher an der Wand das Labyrinth oder je größer die Plattform, die einfachere Aufgabe ist.
      4. Füllen Sie den Wasser-Irrgarten mit Wasser (mit einer Temperatur von 23 bis 25 ° C, eingefärbt in weiß und undurchsichtig gemacht von Milchpulver/Essen Bleaching Pulver) bis der Wasserstand 1 cm höher als die Plattform steht. Bringen Sie die Mäuse in den Verhaltensstörungen Raum für 15 bis 30 min. der Gewöhnung zu, wie in Schritt 1.2.3 gezeigt und schalten Sie das Infrarot-Licht über der Käfige, die verwendet wird, um die Mäuse zu trocknen.
        Hinweis: Decken Sie die Spitze der Plattform mit weißem Tuch und Net, so dass die Maus einfach auf sie klettern kann. Stellen Sie sicher, es gibt keine direkte Beleuchtung über dem Wasser.
    2. Durchzuführen Sie die Trainingsphase wie folgt.
      1. Die Trainingsphase dauert 5 Tage, vier Versuche pro Tag. Semi-zufällig ordnen Sie Ausgangspunkte an jedem Tag wie in Literatur16gezeigt an. Dieser Aufwand wird verhindert, dass die Maus Aufbau assoziativer Speicher, die die allgemeinste Weise zu "betrügen" im Test.
      2. Zu Beginn jeder Studie, die Videoaufnahme zu starten und legte sie sanft die Maus in das Labyrinth.
        Hinweis: Nicht fallen lassen Sie die Maus in den Tank oder drehen Sie seinen Schweif, der zusätzlichen Stress und Desorientierung führen kann.
      3. Fragen des Experimentators, aus den Augen der Maus zu bleiben und zurückkehren, um die Maus zurück zu seinem Haus Käfig, wenn eines der folgenden nehmen passiert: (i) die Maus nicht finden kann die Plattform innerhalb von 60 s; (Ii) die Maus findet es die Plattform innerhalb von 60 s und Aufenthalte für 10 s. Unter Umständen (i), Fragen den Experimentator, platzieren Sie den Mauszeiger auf der Plattform und lassen es dort für 10 s.
        Hinweis: Punkt (Ii) bedeutet, dass die Maus erfolgreich die Plattform liegt.
      4. Stoppen Sie das Video und setzen Sie die Maus zurück in die Heimat Käfig unter Infrarotlicht.
        Hinweis: Gleichzeitig die Mäuse Körpertemperatur ist entscheidend für ihre Leistung, da Unterkühlung Mäuse betont und die folgenden Tests beeinflussen kann.
      5. Wiederholen Sie den Vorgang mit einer anderen Maus.
      6. Basierend auf dem Video, sucht Datensatz die Flucht-Latenz die Dauer der Periode ist, die Maus im Labyrinth, vom Betreten des Labyrinths bis zu dem Moment verbringt es, erfolgreich die Plattform. Wenn die Maus die Plattform bleibt dort für weniger als 10 nicht oder finden kann s 60 s, die Flucht Latenz zählt als 60 S. Plot die Lernkurve gegen die Trainingstage mit der durchschnittlichen Flucht Wartezeit pro Tag.
        Hinweis: Die Flucht-Latenz beinhaltet nicht die 10 s auf der Plattform zu verbringen.
    3. Führen Sie die Sonde Phase wie folgt.
      1. Am sechsten Tag des Morris Wasser-Labyrinth-Test, richten Sie das Gerät wie unter Punkt 2.7.1 beschrieben., nehmen Sie ein Bild des Labyrinths, die Position der Plattform aufzeichnen und dann die Plattform aus dem Becken nehmen.
      2. Starten Sie die Video-Aufnahme, und legte sie sanft die Maus in das Labyrinth im Quadranten schräg gegenüber dem Ziel-Quadranten.
      3. Fragen Sie den Versuchsleiter, aus den Augen der Maus während der Videoaufnahme 1 min zu bleiben. Danach haben des Experimentators nehmen Sie die Maus aus dem Labyrinth und steckte es wieder in der Heimat Käfig.
      4. Verwenden Sie das Bild in Schritt 2.7.3.1 genommen. als Referenz für die Messung der Dauer von jeder Plattform-Kreuzung. Zeit, die Dauer, die die Maus in der Ziel-Quadrant (tZiel), bleibt nach dem Video. Die Gesamtzeit ist tinsgesamt. Messen Sie die Vorliebe zum Ziel-Quadranten als t Ziel/tGesamt.

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Ergebnisse

Dieses Verhaltens Testbatterie wurde entwickelt für die umfassende und gültige Verhaltensanalyse von Motor, Stimmung und Wahrnehmung, die häufig in Neurodegeneration5betroffen sind. Wir haben diese Batterie um die Verhaltensänderungen bei jungen Erwachsenen C57BL/6N Mäusen nach Atemwege Exposition gegenüber Silica-Nanopartikel für 1 Monat und 2 Monate18Studie angewendet. Die Ergebnisse zeigten, dass C57BL/6N Mäuse ausgesetzt Silica-Nanoparti...

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Diskussion

Verhaltensanalyse von Mäusen ist entscheidend für die Neurodegeneration Forschung. Kognitive Funktion ist, zwar häufig der empfindlilchsten Domäne des Verhaltens bei neurodegenerativen Erkrankungen betroffen ist die Stimmung Dysfunktion, wie Depressionen und Angstzuständen, oft multifaktoriell. Darüber hinaus beeinflusst Motorik oft die Interpretation der Ergebnisse in einigen Tests, wie die neuartige Objekt Anerkennung zu testen, die erhöhte plus Labyrinth-Test und die soziale Interaktion-Test. Basierend auf diesen Geda...

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Offenlegungen

Die Autoren haben nichts preisgeben.

Danksagungen

Die Autoren danken Dr. Cora SW Lai von School of Biomedical Sciences der University of Hong Kong, für die Kreditvergabe, die erhöhte plus Labyrinth-Test und der Abteilung für Anästhesiologie von der University of Hong Kong für die Kreditvergabe Rotarod Prüfvorrichtung.

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Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien
NameUnternehmenKatalognummerKommentare
Kammern im sozialen Interaktionstesthausgemacht(8 cm (L) x 6 cm (B) x 12 cm (H)), transparent mit Löchern,
zylindrische Kunststofftanks im Zwangsschwimmtest verwendet Hausgemacht30 cm Höhe, 20 cm Durchmesser, Glas
erhöht plus Labyrinthhausgemachtoffene Arme (30 cm x 5 cm x 0,5 cm), geschlossene Arme (30 cm x 5 cm x 16 cm), Mittelplattform (5 cm x 5 cm x 0,5 cm), 40 cm hoch. Kunststoff, nicht transparent
IITC Roto-Rod ApparaturIITC life science Inc.755, Serie 8
Freifeld-ArenaEigenbau60 cm (L) x 60 cm (B) x 40 cm (H), Kunststoff, undurchsichtiges
WasserlabyrinthEigenbau120 cm Durchmesser, 60 cm tief, Stahl

Referenzen

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