Ein Abonnement von JoVE ist erforderlich, um diesen Inhalt anzuzeigen. Melden Sie sich an oder beginnen Sie noch heute mit einer kostenlosen Testphase.

Methodenartikel

Ein Tripeptid-stabilisierten Nanoemulsion Ölsäure

8.6K Aufrufe

⸱

DOI:

10.3791/59034

⸱

27. Februar 2019

 ,  ,  ,  , 
1Department of Chemistry, Brooklyn College, The City University of New York, 2Ph.D. Program in Chemistry, The Graduate Center of The City University of New York, 3Ph.D. Program in Biochemistry, The Graduate Center of The City University of New York, 4Department of Genetics and Genomic Sciences, Icahn School of Medicine at Mount Sinai, 5Women's Health Research Institute, Icahn School of Medicine at Mount Sinai, 6Laboratory for Translational Research, Western Connecticut Health Network

In diesem Artikel

Zusammenfassung

Dieses Protokoll beschreibt eine effiziente Methode um eine Nanoemulsion eine Ölsäure acids-platinum(II) Konjugat mit einer Lysin-Tyrosin-Phenylalanin (KYF) Tripeptid stabilisiert zu synthetisieren. Die Nanoemulsion Formen unter milden synthetischen Bedingungen über Self-assembly von der KYF und das Konjugat.

Zusammenfassung

Wir beschreiben eine Methode um eine Nanoemulsion bestehend aus einem Ölsäure acids-Pt(II) Kern und einer Lysin-Tyrosin-Phenylalanin (KYF) Beschichtung (KYF-Pt-NE) zu produzieren. KYF-Pt-NE Pt(II) bei 10 Gew.-% kapselt, hat einen Durchmesser von 107 ± 27 nm und eine negative Oberflächenladung. KYF-Pt-NE ist stabil im Wasser und im Serum und ist biologisch aktiv. Die Konjugation der Fluorophor, KYF ermöglicht die Synthese von einem fluoreszierenden Nanoemulsion die für biologische Bildgebung geeignet sind. Die Synthese von der Nanoemulsion wird in einer wässrigen Umgebung und die KYF-Pt-NE Formen über Self-assembly eine kurze KYF-Peptid und ein Konjugat Ölsäure acids-platinum(II) durchgeführt. Die Selbstmontage Prozess hängt die Temperatur der Lösung, das molare Verhältnis der Substrate und der Durchflussmenge des Substrats hinaus. Entscheidende Schritte umfassen Beibehaltung der optimalen rühren Rate während der Synthesis, genügend Zeit für die Selbstmontage bei schönem und Pre-Konzentration der Nanoemulsion allmählich in eine zentrifugale Konzentrator.

Einleitung

In den letzten Jahren gab es ein wachsendes Interesse an der Technik von Nanopartikeln für biomedizinische Anwendungen wie Drug Delivery und Bioimaging1,2,3,4. Die Multifunktionalität von Nanopartikel-basierten Systemen erfordert oft unter Einbeziehung mehrerer Komponenten innerhalb einer Formulierung. Die Bausteine, die oft auf Lipide oder Polymeren basieren unterscheiden sich hinsichtlich ihrer physikalisch-chemischen Eigenschaften sowie ihrer Biokompatibilität und biologische Abbaubarkeit, was letztlich die Funktion der Nanostruktur1, beeinträchtigt 5,6. Biologisch abgeleitete Materialien, wie Proteine und Peptide, wurden lange als viel versprechende Komponenten von multifunktionalen Nanostrukturen aufgrund ihrer Sequenz Flexibilität7,8anerkannt. Peptide, die selbst-zusammenbauen in hochgeordnete supramolekularen Architekturen bilden spiralförmige Bänder9,10, faserigen Gerüste11,12und viele mehr, und ebnete damit den Weg zu Haus Biomolekül-basierten Hybrid Nanostrukturen mit einem Bottom-up-Ansatz13.

Peptide wurden für Anwendungen in Medizin und Biotechnologie, vor allem für die Krebstherapie14 und Herz-Kreislauf-Krankheiten15 sowie für antibiotische Entwicklung16,17, metabolische untersucht Störungen18und Infektionen19. Es gibt über hundert kleinen Peptid-Therapeutika, die in klinischen Studien20. Peptide sind einfach zu ändern und schnell, kostengünstig zu synthetisieren. Darüber hinaus sind sie biologisch abbaubar, das erleichtert ihre biologische und pharmazeutische Anwendungen21,22. Die Verwendung von Peptiden als strukturelle Komponenten umfasst das Engineering von responsive, Peptid-basierte Nanopartikel und Hydrogel Depots für kontrollierte Freisetzung23,24,25,26 , 27, Peptid-basierte Biosensoren28,29,30,31, oder Bio-elektronische Geräte32,33,34. Wichtig ist, fanden sich auch kurze Peptide mit zwei oder drei Aminosäure-Resten, die Phenylalanin enthalten, führen die Selbstmontage35,36,37 verarbeitet und stabilisierte Emulsionen38 zu schaffen .

Platin-basierte Medikamente, aufgrund ihrer hohen Wirksamkeit in vielen Krebs-Behandlungsschemata, sowohl allein als auch in Kombination mit anderen Agenten39,40eingesetzt. Platin Verbindungen verursachen DNA-Schäden durch die Bildung von Interstrand, Monoadducts bzw. Intrastrand Querverbindungen. Die Pt-DNA-Läsionen sind durch die zelluläre Maschinerie erkannt und wenn nicht repariert, zu zellulären Apoptose führen. Der wichtigste Mechanismus, den PT(II) zum Krebs Zelltod beiträgt ist die Hemmung der DNA-Transkription41,42. Allerdings sind die Vorteile von Platin-Therapie durch systemische Toxizität des Pt(II) verringert, die schweren Nebenwirkungen auslöst. Dies führt zu niedrigeren klinische Dosierung von Pt(II)43, führt oft zu Sub-therapeutische Konzentrationen von Platin erreichen die DNA. Infolgedessen trägt die DNA-Reparatur, die folgt, Krebs Zelle überleben und den Erwerb von Pt(II) Widerstand. Die Platin Chemo-Widerstand ist ein großes Problem in der Anti-Krebs-Therapie und die Hauptursache für Behandlung Scheitern44,45.

Wir haben eine stabile Nanosysteme entwickelt, die den Pt(II)-Agent um eine Schirmwirkung im systemischen Kreislauf versorgen und die Pt II-induzierten Nebenwirkungen zu vermindern kapselt. Das System basiert auf einem Ölsäure acids-Pt(II) Kern mit einem KYF Tripeptid bilden eine Nanoemulsion (KYF-Pt-NE)46stabilisiert. Die Bausteine der KYF-Pt-NE, die Aminosäuren der Tripeptid sowie die Ölsäure, haben den Status im allgemeinen erkannt als Safe (GRAS) mit Food and Drug Administration (FDA). KYF-Pt-NE wird mithilfe einer Nanoprecipitation Methode47vorbereitet. Kurz gesagt, wird die Ölsäure acids-Pt(II) Konjugat in einem organischen Lösungsmittel gelöst und dann tropfenweise zu einer wässrigen Lösung KYF (Abbildung 1) bei 37 ° C. Die Lösung wird für mehrere Stunden in Selbstmontage KYF-Pt-ne erlauben gerührt. Die Nanoemulsion wird in 10 kDa zentrifugale Konzentratoren konzentriert und dreimal mit Wasser gewaschen. Die chemische Modifizierung von KYF mit einem Fluorophor ermöglicht die Synthese von fluoreszierenden FITC-KYF-Pt-NE für biomedizinische Bildgebung geeignet.

Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.

Protokoll

1. Synthese von Ölsäure Acids–Platinum(II) Konjugat

  1. Aktivierung von cisplatin
    1. Aussetzen von 50 mg (0.167 Mmol) von Cisplatin in 4 mL Wasser (z.B. Nanopure) bei 60 ° C.
    2. Die Lösung von Cisplatin tropfenweise 55,2 mg (0.325 Mmol) AgNO3 in 0,5 mL Wasser hinzu und rühren Sie die Reaktion für mindestens 2 h bei 60 ° C. Zeigt den Fortschritt der Reaktion bilden der weiße Niederschlag von AgCl.
    3. Um festzustellen, ob die Aktivierung Reaktion abgeschlossen ist, führen Sie den Test mit 10 % HCl auf das Vorhandensein von freien Ag+ -Ionen in Lösung. Sollte der Test negativ sein (keine zusätzliche AgCl Niederschlag sollte zu bilden).
    4. Zentrifugieren Sie das Reaktionsgemisch 3.220 x g für 10 min und entfernen Sie die weißen Niederschlag von AgCl.
    5. Den Überstand zu sammeln und über einen 0,2 mm Spritze Filter filtern. Den Überstand für die Anwesenheit von Platin indem Sie 2-3 Tropfen der Lösung über Pasteurpipette auf SnCl2 Kristalle zu testen. Der Test ist positiv, wenn die Farbe der Koordinate Komplex von Zinn mit Platin dunkel gelb/Orange ist.
    6. Verwenden Sie den Überstand mit aktivierten Pt(II) für den zweiten Schritt.
  2. Reaktion von Ölsäure mit aktivierten Pt(II)
    1. Aussetzen von 94,2 Ölsäure (0.333 Mmol) mg in 3 mL Wasser bei 60 ° C.
    2. Fügen Sie 13,3 mg (0.333 Mmol hinzu) von NaOH in 1 mL Wasser und mischen Sie sich mit der Lösung der aktivierten Pt(II) aus Schritt 1.1
    3. Rühren Sie die Reaktion für 2 h bei 60 ° C und anschließend bei Raumtemperatur über Nacht. Das Rohprodukt ist eine ölige braun/gelben Niederschlag.
    4. Das Reaktionsgemisch 3.220 x g für 10 min Zentrifugieren und den Überstand zu entfernen. Trocknen Sie das Rohprodukt bei 25 ° C mit einer Drehverdampfer. Reinigen Sie das Produkt, indem mehrere Wäschen mit Acetonitril. Die endgültige Farbe des reinen Ölsäure acids–Pt(II) Konjugat ist hellgelb.

2. Synthese von KYF-Pt-NE und die FITC-markierte Nanoemulsion FITC-KYF-Pt-NE

  1. Synthese von KYF Tripeptid und das Eindringmittel beschrifteten Tripeptid FITC-KYF
    1. Die KYF mit standard Solid-State-Peptidchemie zu synthetisieren. Verwenden Sie den folgenden Standard Kupplung Bedingungen jede Aminosäure zu befestigen: Wang Harz (2,19 Mmol), Fmoc geschützten Aminosäure (4.38 Mmol), 2-(1H-Benzotriazole-1-yl)-1,1,3,3-tetramethylaminium Tetrafluoroborate (TBTU) (4.38 Mmol) und Diisopropylethylamine (DIPEA) (8,76 Mmol). Auflösen der Aminosäuren mit TBTU in Dimethylformamid (DMF) und DIPEA.
    2. 5,7 g Fmoc-L-Phe-4-Alkoxybenzyl-Alkohol-Harz (0,382 Meq/g) in 25 mL DMF für 1 h vor der Verwendung einweichen.
    3. Deprotect der Amingruppe der Aminosäure L-Phenylalanin mit 15 mL 20 % Piperidin/DMF-Lösung für 5 min, das Lösungsmittel zu verwerfen und das Waschen mit 20 min Zyklus wiederholen.
    4. Das Harz für 1 min mit folgenden Lösungsmitteln waschen: DMF, Isopropylalkohol (IPA), DMF, IPA, DMF, IPA, DMF, DMF. Entsorgen Sie das Lösungsmittel nach jedem Waschen.
    5. Führen Sie den Kaiser-Test um festzustellen, das Vorhandensein von freien NH2 Gruppe auf dem Harz (siehe Teilschritte) und wenn positiv (der Harz-Samen ist lila), fügen Sie die Fmoc-L-Tyrosin Aminosäure und führen Sie die Kopplung über Nacht.
      1. Bereiten Sie Kaiser Testlösungen in separate Flaschen.
      2. 5 g Ninhydrin in 100 mL Ethanol auflösen.
      3. 80 g von Phenol in 20 mL Ethanol auflösen.
      4. Mischen Sie 2 mL 0.001 M wässrige Lösung von Zyankali mit
        98 mL Pyridin.
      5. Fügen Sie 2-3 Tropfen von jedem Kaiser Lösungen für Probe und Wärme in kochendem Wasser für 5 Minuten testen.
    6. Nach erfolgreicher Kopplung der zweiten Aminosäure, die Kaiser-Test durchführen und wenn Negative Deprotection Protokoll (Schritte 2.1.3 zu 2.1.5) fortsetzen. Wiederholen Sie den Vorgang mit der Fmoc-Phenylalanin-Aminosäure.
      1. Waschen Sie bei der Kopplung von allen Aminosäuren das Harz für 1 min mit 5 mL DMF, IPA, DMF, Methanol, Dichlormethan und Diethylether, nach jedem Waschen verwerfen das Lösungsmittel. Das Harz zur Weiterverarbeitung zu speichern.
      2. Verwenden Sie die Hälfte des Harzes für die nächsten Schritte (2.1.7-2.1.9) um das Peptid mit FITC ändern. Um unveränderte KYF Tripeptid zu erhalten, folgen Sie den Anweisungen ab 2.1.10.
    7. Ändern Sie die N-terminalen Aminosäure von KYF KYF-N3 mit 6-Azidohexanoic Säure. Zu diesem Zweck mix 1 g (0,382 Mmol) von KYF Wang Harz und 120,1 mg (0.764 Mmol) 6-Azidohexanoic Säure mit 245,2 mg (0.764 Mmol) aus TBTU und 197,1 mg (1.528 Mmol) DIPEA in 30 mL DMF. Rühren Sie die Reaktion über Nacht bei Raumtemperatur.
    8. Die Synthese von KYF-N-3 mit Propargyl Fluorescein per Klick Reaktion KYF-FITC einzuholen. Mischen Sie zu diesem Zweck 253 mg (0.097 Mmol) der KYF-N3 Wang Harz mit 3,78 mg (0.019 Mmol) CuI solide, 71,9 mg (0.193 Mmol) Propargyl Fluorescein und 2,24 mg (0.017 Mmol) DIPEA. Die Reaktion sollte seine Farbe von grün bis braun ändern.
    9. Waschen Sie nach 24 h das Harz für 1 min abwechselnd mit 5 mL DMF und IPA fünfmal, Methanol und Wasser dreimal, DMF und Wasser dreimal, und mit Dichlormethan und Diethylether dreimal. Entsorgen Sie das Lösungsmittel nach jedem Waschen.
    10. Cleave KYF-FITC oder KYF Peptid aus dem Harz mit einer Lösung aus Trifluoroacetic Säure (TFA) / Triisopropylsilane (Tipps) / h2O im Verhältnis des 95/2.5/2.5 mehr als 3 Stunden.
    11. Überstürzen Sie das rohe Peptid in einer kalten Diethylether, dreimal mit kalten Äther waschen, und dann trocknen unter Vakuum.
  2. Synthese von FITC-KYF-stabilisierten Nanoemulsion mit Pt(II) (FITC-KYF-Pt-NE) und KYF-Pt-NE
    1. 10 mg (0.0126 Mmol) der Ölsäure acids–Pt(II) Konjugat in 1,5 mL Isopropanol und Ort in einer 5 mL Spritze auflösen.
    2. Legen Sie die Spritze mit Ölsäure acids–Pt(II) Konjugat in eine Spritzenpumpe und den Fluss auf 0,1 mL/min festgelegt.
    3. Um die FITC-KYF-Pt-NE zu synthetisieren, 1 mg (0.00105 Mmol) FITC-KYF und 1 mg (0.00219 Mmol) KYF auflösen (1:2 molare Verhältnis von FITC-KYF:KYF) in 20 mL Wasser und stellen Sie die Temperatur der Lösung auf 37 ° C. Bedecken Sie die Wände des Behälters mit Alu-Folie, Immunofluoreszenz FITC Fluorophor zu vermeiden. Um dem KYF-Pt-NE zu synthetisieren, 2 mg (0.0044 Mmol) von KYF Tripeptid in 20 mL Wasser auflösen und die Temperatur der Lösung auf 37 ° C.
    4. Fügen Sie die Ölsäure acids–Pt(II) Konjugat tropfenweise zur Lösung der FITC-KYF/KYF oder KYF Tripeptid. Führen Sie diesen Schritt unter der Haube.
    5. Rühren Sie die Lösung über Nacht bei Raumtemperatur, organische Lösungsmittel verdunsten und ermöglichen die Selbstmontage der FITC-KYF-Pt-NE oder KYF-Pt-ne
    6. FITC-KYF-Pt-NE oder KYF-Pt-NE in einem zentrifugalen Konzentrator zu konzentrieren (10k MWCO), und dreimal mit 4 mL Nanopure Wasser waschen.
    7. Lagern Sie die wässrigen Lösungen von KYF-Pt-NE und FITC-KYF-Pt-NE bei 4 ° c
    8. Platin mit Atomabsorptionsspektroskopie (AAS), nach der Hersteller Handbuch48Inhalte analysieren.
      1. Die Eichkurve Platin Normen in 10 % HCl Lösung vorbereiten (effektive Reichweite für AAS liegt zwischen 100 bis 1.200 ppb (Teile pro Milliarde)).
      2. Lösen Sie 50 µL KYF-Pt-NE Lösung von Schritt 2.2 in 100 µL Aqua Regia (eine Mischung aus konzentrierter Salzsäure und Salpetersäure mit 3:1) und lassen Sie über Nacht bei Raumtemperatur. Fügen Sie 850 µL Wasser zu einem endgültigen Probenvolumen von 1 mL zu erreichen. Analysieren Sie die Probe mittels AAS. Die endgültige Säurekonzentration sollte 10 % in allen untersuchten Proben.
      3. Aufzeichnung der Lesung des Pt-Konzentration in ppb und den endgültigen Platin Inhalt in der Probe (Konto für Probenverdünnung und Ausgangsvolumen der Nanoemulsion) zu berechnen.

(3) confocal Imaging der zellulären Aufnahme von FITC-KYF-Pt-NE

  1. Samen 6 Eierstock-Krebs-Zelllinien (A2780, CP70, SKOV3, OV90, TOV21G und ES2), in 4 Brunnen-Kammer konfokale Gerichte an der Dichte von 4,7 x 104 -Zellen pro Kammer und Pre-Kultur über Nacht bei 37 ° C.
  2. Nach 24 h, waschen Sie die Zellen dreimal mit Phosphat Puffer Kochsalzlösung (PBS) und inkubieren Sie mit FITC-KYF-Pt-NE im Zellkulturmedium (siehe Schritt 6.1 für Zelle spezifische Details Linie) für 15 min bei 37 ° C.
  3. Entfernen Sie nach der Inkubation das Medium und waschen Sie die Zellen dreimal mit PBS.
  4. Befestigen Sie die Zellen mit kaltem Methanol für 5 min bei-20 ° C und drei Mal mit 1 mL PBS waschen.
  5. Permeabilize der Zellen mit 1 mL 0,1 % Triton-X für 10 min bei Raumtemperatur und waschen dreimal mit 1 mL PBS.
  6. Inkubation der Zellen für 90 min mit LAMP1 Antikörper konjugiert mit Alexa Fluor 647 (1 mL) bei 01:50 Verdünnung mit PBS-Puffer bei Raumtemperatur. Als nächstes waschen Sie die Zellen 3 Mal mit PBS.
  7. Verdünnen Sie DAPI-Stammlösung (1 mg/mL) auf 1 mg/mL in PBS. Dann fügen Sie 1 mL der verdünnten Lösung zu jeder Kammer und 15 min bei Raumtemperatur inkubieren. Waschen Sie die Zellen 3 Mal mit PBS.
  8. Montieren Sie auf einer Folie mit Eindeckmedium Deckgläsern.
  9. Bild der Zellen mittels live Zelle confocal Mikroskop bei Erregung Wellenlänge von 405 nm, 488 nm und 633 nm. Die Erkennung-Parameter wie folgt eingestellt: Laserleistung von 0,2 % und nicht mehr als 1 %, Pinole 1 luftig Einheit gewinnen Meister 650-750, Digital Offset 0.
  10. Bild im imaging-Software öffnen. Unter angezeigte Bild wählen Sie Grafiken und Einfügeleiste Skala, der Maßstab für das Bild einfügen.

4. Freigabe Medikamentenstudien

  1. Führen Sie Freigabe Medikamentenstudien in PBS. Die pH-Werte der drei PBS-Puffer 7,4, 6.8 und 5.0 bzw. anpassen.
  2. 5 μL der KYF-Pt-NE in 180 μL der entsprechenden pH-PBS-Puffer verdünnen, transfer zum 3,5 kDa MWCO Mini Dialyse Tasse und Inkubation bei 37 ° C mit PBS-Puffer.
  3. Puffer aus jeweils drei Mini-Dialyse Rohre bei 2, 4, 6, 24, 48 und 140 h entfernen und die Platin-Konzentrationen von AAS zu messen. Alle Proben gemäß Schritt 2.2.8 vorbereiten, aber der letzte Band der Probe zu 500 µL anpassen.

(5) Zelle Kulturmethoden

  1. Kultur-Zelle Linien A2780, CP70, SKOV-3, OV-90, TOV - 21G, ES-2 im Zellkulturmedium (DMEM) mit 10 % (A2780, CP70, SKOV-3, ES-2) oder mit 15 % (TOV - 21G, OV-90) fetalen bovine Serum (FBS), ergänzt mit L-Glutamin und Penicillin/Streptomycin. Wachsen Sie alle Zellen in einer 5 % CO2und Wasser gesättigte Atmosphäre bei 37 ° C.
  2. 3 x 105 Samenzellen in jedem 96-Well-Platte und Vorkultur über Nacht für in-vitro-Inkubation Experimente. Bereiten Sie die KYF-Pt-NE, Cisplatin und Carboplatin Lösungen in Wasser. Passen Sie die Konzentration der Pt(II) im KYF-Pt-NE um die Konzentration von Carboplatin und Cisplatin für jede Zelllinie zu entsprechen. 72 Stunden bei 37 ° c inkubieren
  3. Bewerten Sie nach der Inkubation die zelluläre Lebensfähigkeit mit einer kolorimetrischen Assay (Zellproliferation MTT-Assay). Kurz, entfernen Sie Medium zu, und fügen Sie 110 μl 10 % MTT in Medium zu jedem gut und 2 h bei 37 ° c inkubieren Dann 100 μL Waschmittel in jede Vertiefung und 5 h bei 37 ° c inkubieren
  4. Überprüfen Sie die Extinktion bei 570 nm mit Platte Leser. Analysieren Sie Ergebnisse mit statistischer Analyse mit Z-Test und P-Test.

Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.

Ergebnisse

Vertreter TEM Bild von KYF-Pt-NE unter Verwendung dieses Protokolls ist in Abbildung 2Adargestellt. KYF-Pt-NEs sind sphärische Morphologie, gut verteilt, und einheitlich in der Größe. Der Kerndurchmesser des KYF-Pt-NEs, gemessen direkt von drei TEM Bilder mit einem Minimum von 200 Messungen durchgeführt, ist 107 ± 27 nm. Die hydrodynamische Durchmesser von KYF-Pt-NE, mit dynamischen Licht Spektroskopie (DLS), analysiert erwies sich 240 nm mit einem Polydisper...

Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.

Diskussion

Wichtige Schritte bei der Nanoemulsion Synthese gehören das molare Verhältnis der Substrate anpassen, Erhaltung Temperatur und Durchflussmenge Tarifsteuerung während Ölsäure acids–Pt(II) Zugabe und ausreichend Zeit für die Selbstmontage und Reinigung das Produkt mit einer zentrifugale Konzentrator Spalte. Diese Parameter beeinflussen die Größe und Morphologie der KYF-Pt-NE; Daher ist es besonders wichtig, das richtige molare Verhältnis pflegen und die synthetischen Bedingungen korrekt einstellen.

Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.

Offenlegungen

Autoren müssen kein Interessenkonflikt besteht, offen zu legen.

Danksagungen

Gewähren Sie wir dankbar anerkennen, finanziellen Unterstützung durch das National Cancer Institute SC2CA206194. Keine finanziellen Interessenkonflikte werden erklärt.

Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien
NameUnternehmenKatalognummerKommentare
2-(1H-benzotriazol-1-yl)-1,1,3,3-tetramethyluronium
tetrafluoroborat (TBTU)		ANASPEC INC.:AS-20376SPPS
Konfokalschale mit 4-Well-KammerLab-Tek II, Thermo Fisher Scientific154526Zur Bildgebung
von 6-BromhexansäureChem-Impex INT' L INC.24477Click-Modifikation für Peptid
A2780Großzügig zur Verfügung gestellt von Professor John Martignetti von The Mount Sinai HospitalOvarian cancer
Barnstead NanopureThermo FisherD11901Wasserfiltersystem
BÜCHI rotavapor R-3BüchiZ568090Zur Lösungsmittelentfernung und Probentrocknung
Zentrifuge 5810 Reppendorf5811FFür die Trennung von Platinkomplexen
Cis-DichlordiaminPlatin (II) 99%Acros Organics19376-0050In-vitro-Tests
CP70Großzügig durchgeführt von Professor John Martignetti von derOvarialkrebs-Zelllinie
Digitales WasserbadVWR97025-134Zum Aufwärmen von Medien für die Zellkultur
Dynamische Lichtstreuung (DLS)Brookhaven Instrument CorporationFür Größenmessungen von Nanopartikeln
ES-2ATCCCRL-1978Eierstockkrebs-Zelllinie
Fmoc-L-Lys(Boc)-OH 99,79%Chem-Impex INT' L INC.00493SPPS
Fmoc-L-Phe 4-Alkoxybenzylalkoholharz (0,382 meq/g),Chem-Impex INT" L INC.01914SPPS
Fmoc-LTyr(tBu)-OH 98%Alfa AesarH59730SPPS
HERACELL 150i CO2-InkubatorThermo Scientific FisherInkubator
Hochdruck-SpritzenpumpeNew Era1010-USFür die Zugabe von Platinkomplexen in der Nanopartikelsynthese
Heizplatte/RührerVWR12365-382Zum Rühren und Erhitzen
von ProbenLAMP-1 Antikörper (kojugiert mit Alexa Fluor 647)Santa Cruz Biotechnologysc-18821 AF647Zur Bildgebung
N,N-Diisopropylethylamin (DIPEA)Oakwood Chemical005027SPPS
Ninhydrin 99%Alfa Aesar A10409Kaiser Test
ÖlsäureChem-Impex INT' L INC.01421Für die Platinkomplexsynthese
OV90ATCCCRL-11732Eierstockkrebs-Zelllinie
PBSCorning21-031-CVFür die Zellwäsche
Permount EindeckmediumFisher ChemicalSP15-100Für die Bildgebung
PhenolFisher ChemicalA92500Kaiser Test
PhosphotungssäureFisher ChemicalA248-25Negativfärbung für TEM
Piperidin 99%BTC219260-2.5L
SPPS Platinum AAS StandardlösungAlfa Aesar880861000ug/ml für Kalibrierkurve
Propargylbromid 97%Alfa AesarL10595Für Alkinmodifikation von Fluorescein
Scientific biologischer SchrankThermo Scientific Fisher1385Biohaube für Zellkulturen
Selbstreinigendes VakuumsystemWelch2028Vakuumpumpe für Rotavapor
Silbernitrat Acros Organics19768-0250Cisplatin-Aktivierung
SKOV3ATCCHTB-77Eierstockkrebs-Zelllinie
NatriumhydroxidFisher ScientificS313-1Für die Platinkomplexsynthese
Zinn(II)-chloridSigma Aldrich208256Test auf das Vorhandensein von Platin
TOV21GATCCCRL-11730Eierstockkrebs-Zelllinie
Trifluoressigsäure 99% (TFA)Alfa AesarL06374SPPS
Triisopropylsilan (TIPS)Chem-Impex INT' L INC.01966SPPS
Triton-XSigma AldrichT8787-100MLFür die Bildgebung
von Uraninpulver 40%FisherScientific S25328AFür die Alkinmodifikation von Fluorescein
Vivaspin 20 (10000 MWCO)SartoriousVS2001Für die Waschung und Kondensation von Nanopartikeln
VWR Inverses MikroskopVWR89404-462Für die Zellkulturüberwachung
cell linedes Mount Sinai Hospital

Referenzen

  1. Agrahari, V., Agrahari, V., Mitra, A. K. Nanocarrier fabrication and macromolecule drug delivery: challenges and opportunities. Therapeutic Delivery. 7 (4), 257-278 (2016).
  2. Anselmo, A. C., Mitragotri, S. Nanoparticles in the clinic. Bioengineering & Translational Medicine. 1 (1), 10-29 (2016).
  3. Peer, D., Karp, J. M., Hong, S., Farokhzad, O. C., Margalit, R., Langer, R. Nanocarriers as an emerging platform for cancer therapy. Nature Nanotechnology. 2 (12), 751-760 (2007).
  4. Roy Chowdhury, M., Schumann, C., Bhakta-Guha, D., Guha, G. Cancer nanotheranostics: Strategies, promises and impediments. Biomedicine & Pharmacotherapy. 84, 291-304 (2016).
  5. Jeevanandam, J., Chan, Y. S., Danquah, M. K. Nano-formulations of drugs: Recent developments, impact and challenges. Biochimie. , 99-112 (2016).
  6. Meerum Terwogt, J. M., Groenewegen, G., Pluim, D., Maliepaard, M., Tibben, M. M., Huisman, A., ten Bokkel Huinink, W. W., Schot, M., Welbank, H., Voest, E. E., Beijnen, J. H., Schellens, J. M. Phase I and pharmacokinetic study of SPI-77, a liposomal encapsulated dosage form of cisplatin. Cancer Chemotherapy and Pharmacology. 49 (3), 201-210 (2002).
  7. Fan, Z., Sun, L., Huang, Y., Wang, Y., Zhang, M. Bioinspired fluorescent dipeptide nanoparticles for targeted cancer cell imaging and real-time monitoring of drug release. Nature Nanotechnology. 11 (4), 388-394 (2016).
  8. Jeong, Y., et al. Enzymatically degradable temperature-sensitive polypeptide as a new in-situ gelling biomaterial. Journal of Controlled Release. 137 (1), 25-30 (2009).
  9. Uesaka, A., et al. Morphology control between twisted ribbon, helical ribbon, and nanotube self-assemblies with his-containing helical peptides in response to pH change. Langmuir. 30 (4), 1022-1028 (2014).
  10. Hwang, W., Marini, D. M., Kamm, R. D., Zhang, S. Supramolecular structure of helical ribbons self-assembled from a B-sheet peptide. Journal of Chemical Physics. 118 (1), 389-397 (2003).
  11. Svobodova, J., et al. Poly(amino acid)-based fibrous scaffolds modified with surface-pendant peptides for cartilage tissue engineering. Journal of Tissue Engineering and Regenerative Medicine. 11 (3), 831-842 (2017).
  12. Kumar, V. A., et al. Highly angiogenic peptide nanofibers. ACS Nano. 9 (1), 860-868 (2015).
  13. Romera, D., Couleaud, P., Mejias, S. H., Aires, A., Cortajarena, A. L. Biomolecular templating of functional hybrid nanostructures using repeat protein scaffolds. Biochemical Society Transactions. 43 (5), 825-831 (2015).
  14. Medina, S. H., Schneider, J. P. Cancer cell surface induced peptide folding allows intracellular translocation of drug. Journal of Controlled Release. 209, 317-326 (2015).
  15. Recio, C., Maione, F., Iqbal, A. J., Mascolo, N., De Feo, V. The Potential Therapeutic Application of Peptides and Peptidomimetics in Cardiovascular Disease. Frontiers in Pharmacology. 7, 526(2016).
  16. McCarthy, K. A., et al. Phage Display of Dynamic Covalent Binding Motifs Enables Facile Development of Targeted Antibiotics. Journal of the American Chemical Society. 140 (19), 6137-6145 (2018).
  17. Lazar, V., et al. Antibiotic-resistant bacteria show widespread collateral sensitivity to antimicrobial peptides. Nature Microbiology. 3 (6), 718-731 (2018).
  18. Czeczor, J. K., McGee, S. L. Emerging roles for the amyloid precursor protein and derived peptides in the regulation of cellular and systemic metabolism. Journal of Neuroendocrinology. 29 (5), (2017).
  19. Branco, M. C., Sigano, D. M., Schneider, J. P. Materials from peptide assembly: towards the treatment of cancer and transmittable disease. Current Opinion in Chemical Biology. 15 (3), 427-434 (2011).
  20. Cheetham, A. G., et al. Targeting Tumors with Small Molecule Peptides. Current Cancer Drug Targets. 16 (6), 489-508 (2016).
  21. Ndinguri, M. W., Solipuram, R., Gambrell, R. P., Aggarwal, S., Hammer, R. P. Peptide targeting of platinum anti-cancer drugs. Bioconjugate Chemistry. 20 (10), 1869-1878 (2009).
  22. Eskandari, S., Guerin, T., Toth, I., Stephenson, R. J. Recent advances in self-assembled peptides: Implications for targeted drug delivery and vaccine engineering. Advanced Drug Delivery Reviews. 110, 169-187 (2017).
  23. Zhou, J., Du, X., Yamagata, N., Xu, B. Enzyme-Instructed Self-Assembly of Small D-Peptides as a Multiple-Step Process for Selectively Killing Cancer Cells. Journal of the American Chemical Society. 138 (11), 3813-3823 (2016).
  24. Sun, J. E., et al. Sustained release of active chemotherapeutics from injectable-solid beta-hairpin peptide hydrogel. Biomaterials Science. 4 (5), 839-848 (2016).
  25. Lock, L. L., Reyes, C. D., Zhang, P., Cui, H. Tuning Cellular Uptake of Molecular Probes by Rational Design of Their Assembly into Supramolecular Nanoprobes. Journal of the American Chemical Society. 138 (10), 3533-3540 (2016).
  26. Kalafatovic, D., Nobis, M., Son, J., Anderson, K. I., Ulijn, R. V. MMP-9 triggered self-assembly of doxorubicin nanofiber depots halts tumor growth. Biomaterials. 98, 192-202 (2016).
  27. Frederix, P. W., et al. Exploring the sequence space for (tri-)peptide self-assembly to design and discover new hydrogels. Nature Chemistry. 7 (1), 30-37 (2015).
  28. Horsley, J. R., et al. Photoswitchable peptide-based 'on-off' biosensor for electrochemical detection and control of protein-protein interactions. Biosensors and Bioelectronics. 118, 188-194 (2018).
  29. Hoyos-Nogues, M., Gil, F. J., Mas-Moruno, C. Antimicrobial Peptides: Powerful Biorecognition Elements to Detect Bacteria in Biosensing Technologies. Molecules. 23 (7), 1683(2018).
  30. Xiao, X., et al. Advancing Peptide-Based Biorecognition Elements for Biosensors Using in-Silico Evolution. ACS Sensors. 3 (5), 1024-1031 (2018).
  31. Puiu, M., Bala, C. Peptide-based biosensors: From self-assembled interfaces to molecular probes in electrochemical assays. Bioelectrochemistry. 120, 66-75 (2018).
  32. Wang, J., et al. Developing a capillary electrophoresis based method for dynamically monitoring enzyme cleavage activity using quantum dots-peptide assembly. Electrophoresis. 38 (19), 2530-2535 (2017).
  33. Etayash, H., Thundat, T., Kaur, K. Bacterial Detection Using Peptide-Based Platform and Impedance Spectroscopy. Methods in Molecular Biology. 1572, 113-124 (2017).
  34. Handelman, A., Apter, B., Shostak, T., Rosenman, G. Peptide Optical waveguides. Journal of Peptide Science. 23 (2), 95-103 (2017).
  35. Chen, C., Liu, K., Li, J., Yan, X. Functional architectures based on self-assembly of bio-inspired dipeptides: Structure modulation and its photoelectronic applications. Advances in Colloid and Interface Science. 225, 177-193 (2015).
  36. Reddy, S. M., Shanmugam, G. Role of Intramolecular Aromatic pi-pi Interactions in the Self-Assembly of Di-l-Phenylalanine Dipeptide Driven by Intermolecular Interactions: Effect of Alanine Substitution. Chemphyschem. 17 (18), 2897-2907 (2016).
  37. Marchesan, S., et al. Unzipping the role of chirality in nanoscale self-assembly of tripeptide hydrogels. Nanoscale. 4 (21), 6752-6760 (2012).
  38. Scott, G. G., McKnight, P. J., Tuttle, T., Ulijn, R. V. Tripeptide Emulsifiers. Advanced Materials. 28 (7), 1381-1386 (2016).
  39. Galanski, M., Jakupec, M. A., Keppler, B. K. Update of the preclinical situation of anticancer platinum complexes: novel design strategies and innovative analytical approaches. Current Medicinal Chemistry. 12 (18), 2075-2094 (2005).
  40. Wheate, N. J., Walker, S., Craig, G. E., Oun, R. The status of platinum anticancer drugs in the clinic and in clinical trials. Dalton Transactions. 39 (35), 8113-8127 (2010).
  41. Oberoi, H. S., Nukolova, N. V., Kabanov, A. V., Bronich, T. K. Nanocarriers for delivery of platinum anticancer drugs. Advanced Drug Delivery Reviews. 65 (13-14), 1667-1685 (2013).
  42. Fichtinger-Schepman, A. M., van Oosterom, A. T., Lohman, P. H., Berends, F. cis-Diamminedichloroplatinum(II)-induced DNA adducts in peripheral leukocytes from seven cancer patients: quantitative immunochemical detection of the adduct induction and removal after a single dose of cis-diamminedichloroplatinum(II). Cancer Research. 47 (11), 3000-3004 (1987).
  43. Englander, E. W. DNA damage response in peripheral nervous system: coping with cancer therapy-induced DNA lesions. DNA Repair. 12 (8), 685-690 (2013).
  44. Galluzzi, L., et al. Molecular mechanisms of cisplatin resistance. Oncogene. 31 (15), 1869-1883 (2012).
  45. Boeckman, H. J., Trego, K. S., Turchi, J. J. Cisplatin sensitizes cancer cells to ionizing radiation via inhibition of nonhomologous end joining. Molecular Cancer Research. 3 (5), 277-285 (2005).
  46. Dragulska, S. A., et al. Tripeptide-Stabilized Oil-in-Water Nanoemulsion of an Oleic Acids-Platinum(II) Conjugate as an Anticancer Nanomedicine. Bioconjugate Chemistry. 29 (8), 2514-2519 (2018).
  47. Martinez Rivas,, J, C., et al. Nanoprecipitation process: From encapsulation to drug delivery. International Journal of Pharmaceutics. 532 (1), 66-81 (2017).
  48. Agilent Technologies. Analytical Methods for Graphite Tube Atomizers, User's Guide Manual, 8th edition. , (2012).
  49. Park, S. Y., et al. A smart polysaccharide/drug conjugate for photodynamic therapy. Angewandte Chemie. 50 (7), 1644-1647 (2011).
  50. Canton, I., Battaglia, G. Endocytosis at the nanoscale. Chemical Society Reviews. 41 (7), 2718-2739 (2012).
  51. Lokich, J., Anderson, N. Carboplatin versus cisplatin in solid tumors: an analysis of the literature. Annals of Oncology. 9 (1), 13-21 (1998).

Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.

Nachdrucke und Genehmigungen

Tags

Ölsäure-Platin-KonjugatBeschichtung mit KYF-PeptidSelbstassemblierungsprozessZentrifugalkonzentrationfluoreszierende NanoemulsionPlatinfreisetzungOvarialkarzinomzellenTransmissionselektronenmikroskopieSpritzenpumpenmethode
Ein Tripeptid-stabilisierten Nanoemulsion Ölsäure
Kontaktieren Sie uns
Der Bibliothek empfehlen

Datenschutz

Nutzungsbedingungen

Richtlinien

Urheberrecht © 2026 MyJoVE Corporation. Alle Rechte vorbehalten.