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Methodenartikel

Vorbereitung von Gushukang (GSK) Granulat en for In Vivo und In Vitro Experiments

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DOI:

10.3791/59171

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9. Mai 2019

 ,  ,  ,  ,  , 
1Longhua Hospital, Shanghai University of Traditional Chinese Medicine, 2Spine Institute, Shanghai University of Traditional Chinese Medicine, 3Key Laboratory of Theory and Therapy of Muscles and Bones, Ministry of Education, 4School of Rehabilitation Science, Shanghai University of Traditional Chinese Medicine

In diesem Artikel

Zusammenfassung

Dieser Artikel enthält ein detailliertes Protokoll zur Vorbereitung einer Arbeitslösung von Gushukang-Granulat für Tierstudien und GSK-Granulat, das Serum für In-vitro-Experimente enthält. Dieses Protokoll kann auf pharmakologische Untersuchungen von pflanzlichen Arzneimitteln sowie auf Verschreibungen für In-vivo- und In-vitro-Experimente angewendet werden.

Zusammenfassung

Die traditionelle chinesische Kräutermedizin spielt eine Rolle als alternative Methode bei der Behandlung vieler Krankheiten, wie postmenopausale Osteoporose (POP). Gushukang (GSK) Granulat, ein vermarktetes Rezept in China, haben knochenschützende Wirkung bei der Behandlung von POP. Vor der Verabreichung an den Körper, ein Standard-Vorbereitungsverfahren ist allgemein erforderlich, die die Freisetzung von aktiven Bestandteilen aus Rohkräutern fördern und die pharmakologischen Wirkungen sowie therapeutische Ergebnisse zu verbessern. Diese Studie schlägt ein detailliertes Protokoll für die Verwendung von GSK-Granulat in in vivo- und in vitro-Experimentellen Assays vor. Die Autoren liefern zunächst ein detailliertes Protokoll zur Berechnung der tiergerechten Dosierungen von Granulaten für in vivo-Untersuchungen: Wiegen, Auflösen, Lagern und Verstoffen. Zweitens werden in diesem Artikel Protokolle für Mikro-CT-Scans und die Messung von Knochenparametern beschrieben. Die Probenvorbereitung, Protokolle zum Betrieb der Mikro-CT-Maschine und die Quantifizierung der Knochenparameter wurden ausgewertet. Drittens werden serumhaltige GSK-Granulate hergestellt und medikamentenhaltiges Serum für In-vitro-Osteoclastogenese und Osteoblastogenese extrahiert. GSK-Granulat wurde zweimal täglich an drei aufeinanderfolgenden Tagen intragastrisch an Ratten verabreicht. Anschließend wurde Blut entnommen, zentrifugiert, inaktiviert und gefiltert. Schließlich wurde Serum verdünnt und zur Durchführung von Osteoclastogenese und Osteoblastogenese verwendet. Das hier beschriebene Protokoll kann als Referenz für pharmakologische Untersuchungen von verschreibungspflichtigen pflanzlichen Arzneimitteln wie Granulaten betrachtet werden.

Einleitung

Die Traditionelle Chinesische Medizin (TCM) ist einer der wichtigen ergänzenden und alternativen Ansätze zur Behandlung von Osteoporose1,2. Wasserabkochung ist die grundlegende und am häufigsten verwendete Form der Formel3. Es gibt jedoch auch Nachteile: schlechter Geschmack, Unannehmlichkeiten für den Transport, kurze Haltbarkeit und inkonsistente Protokolle, Begrenzung der Verwendungen sowie die heilende Wirkung. Um die oben genannten Nachteile zu vermeiden und um bessere Effekte zu erzielen, wurden Granulate entwickelt und weit verbreitet4verwendet. Obwohl viele Studien die pharmakologischen Mechanismen einer oder mehrerer wirksamer Komponenten aus dem Granulat5,6,7untersucht haben, sind die genauen Mechanismen und zugrunde liegenden pharmakologischen Prozesse schwer zu identifizieren. Dies liegt daran, dass zu viele effektive Komponenten aus einem Granulat gleichzeitig ähnliche oder entgegengesetzte Effekte ausüben können4. Daher würde die Entwicklung eines Standardprotokolls zur Vorbereitung des Granulats vor der Lieferung an den Körper nicht nur einen großen Einfluss auf die therapeutischen Ergebnisse haben, sondern ist auch für In-vivo- und In-vitro-Assays erforderlich.

Darüber hinaus sind die heilenden Wirkungen von Granulaten in der Klinik schwer zu bestätigen und anhand von In-vitro- oder Ex-vivo-Studien genau zu identifizieren, was eine Herausforderung schafft, da die pharmakologischen Mechanismen zu komplex sind. Um dies zu lösen, wurde die Herstellung von drogenhaltigem Serum zuerst von Tashino in den 1980er Jahrenvorgeschlagen 8. Von da an wandten zahlreiche Forscher medikamentenhaltiges Serum auf die Kräutermedizin an, einschließlich Granulat9,10,11. Derzeit wird die Wahl des medikamentenhaltigen Serums für In-vitro-Untersuchungen als eine Strategie betrachtet, die physiologische Bedingungen genau nachahmt.

Gushukang (GSK) Granulat wurde entwickelt, um postmenopausale Osteoporose (POP) auf der Grundlage der klinischen Praxis im Lichte der Theorie der TCM zu behandeln. GSK-Granulat verhindert Knochenverlust bei ovariectomisierten (OVX) Mäusen in vivo, hemmt die osteoklastische Knochenresorption und stimuliert die osteoblastische Knochenbildung4. Daher fanden Li et al.12 heraus, dass GSK-Granulate bei OVX-Mäusen Knochenschutzwirkungen haben, indem sie die Aktivitäten des Calciumrezeptors zur Stimulierung der Knochenbildung verbessern. Zur Bestätigung der knochenschützenden Wirkungen sowie der pharmakologischen Wirkungen von GSK-Granulat stellen die Autoren hier ein detailliertes Verfahren zur Herstellung von Arbeitslösungen und Medikamenten (GSK-Granulat) -haltigem Serum zur Verfügung. Darüber hinaus beschreibt dieser Artikel die Anwendung von GSK-Granulat in einem OVX-induzierten osteoporotischen Mausmodell und GSK-Granulat-haltigem Serum für In-vitro-Osteoclastogenese/Osteoblastogenese.

GSK-Granulat besteht aus mehreren Kräutern13,14 und kann leicht in Derinline gelöst werden. Daher dient Saline als Fahrzeug. Scheinoperierte Mäuse (Sham) und OVX-Mäuse wurden das gleiche Volumen an Salin verabreicht wie die mit Granulat verabreichten Mäuse. Die Äquivalentdosen von GSK-Granulat für die Maus wurden auf der Grundlage der Meeh-Rubner-Gleichung15berechnet. Diese Gleichung hat nicht nur den Vorteil, sichere Dosierungen zu erhalten, sondern garantiert auch pharmakologische Effekte15. Die drei Dosierungen von GSK-Granulat wurden wie folgt erzeugt: (1) GSKL: OVX + niedrig dosierte GSK-Granulate, 2 g/kg/Tag. (2) GSKM: OVX + mitteldosiertes GSK-Granulat, 4 g/kg/Tag. (3) GSKH: OVX + hochdosiertes GSK-Granulat, 8 g/kg/Tag. Mäuse in den GSKL-, GSKM- und GSKH-Gruppen wurden intragastrisch mit GSK-Granulat verabreicht. Als Positivkontrolle wurde beispielsweise Calciumcarbonat (600 mg/Tablette) mit Vitamin D3 (125 internationale Einheit/Tablette) in einem ausgereiften und vermarkteten Produkt (z. B. Caltrat [CAL]) zur Behandlung und Vorbeugung von Osteoporose verwendet.

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Protokoll

Alle experimentellen Verfahren wurden mit Genehmigung des Institutional Animal Care and Use Committee der Shanghai University of TCM (SZY201604005) durchgeführt.

1. Vorbereitung und Verwaltung der GSK-Arbeitslösung

  1. Berechnen Sie die äquivalenten Dosen von GSK-Granulat für die Maus.
    1. Berechnen Sie die Körperoberfläche basierend auf der Meeh-Rubner-Gleichung15: Körperoberfläche = K x (Körpergewicht2/3)/1000, wobei die K-Werte 10,6 für den Menschen und 9,1 für die Maus sind. Geht man von einem menschlichen Körpergewicht von 70 kg aus, dann die Körperoberfläche des Menschen (m2) = 10,6 x (702/3)/1000 = 1,8 m2. Bei einem Mauskörpergewicht von 20 g (0,02 kg; z.B. 1 Monat alt, weiblich, C57/BL6), dann Mauskörperoberfläche (m2) = 9,1 x (0,022/3)/1000 = 0,0067 m2.
    2. Berechnen Sie auf der Grundlage der berechneten Körperoberfläche das Körpertransformationsverhältnis für Mensch und Maus. Mensch: 70 kg/1,8 m2 = 39. Maus: 0,02 kg/0,0067 m2 = 3. GSK-Granulat = 20 g/70 kg x 39/3 = 3,72 g/kg bei 4 g/kg.
    3. Berechnen Sie auf Der Grundlage eines Körpergewichts von 20 g pro Maus die äquivalente Dosierung für die Maus: 4 g/kg x 0,02 kg = 0,08 g.
    4. Berechnen Sie drei Äquivalentdosen von GSK-Granulat auf der Grundlage von 20 Mäusen pro Gruppe und einer Intervention von 3 Monaten (90 Tage): (1) GSKL (OVX + niedrig dosierte GSK-Granulat [2 g/kg/Tag]): 0,04 g Maus/Tag x 20 Mäuse x 90 Tage = 72 g. (2) GSKM (OVX + mitteldosiertes GSK-Granulat [4 g/kg/ Tag]): 0,08 g Maus/Tag x 20 Mäuse x 90 Tage = 144 g. (3) GSKH (OVX + hochdosiertes GSK-Granulat [8 g/kg/Tag]): 0,12 g Maus/Tag x 20 Mäuse x 90 Tage = 216 g.
      HINWEIS: Bereiten Sie zusätzliche 20 % des GSK-Granulats in der Praxis vor, um den Verlust auszugleichen.
  2. Berechnen Sie das Volumen des GSK-Granulats pro Maus basierend auf dem Körpergewicht15: z.B. Volumen (V) = 0,24 ml/Maus/Tag.
    HINWEIS: Das Volumen für die intragastrische Verabreichung für die Maus beträgt 0,12 ml/10 g.
  3. Wiegen Sie 10 Tage im Wert von drei Dosen GSK-Granulat. Wiegen Sie 8 g, 16 g und 24 g GSK-Granulat und dienen als GSKL, GSKM und GSKH.
  4. Berechnen Sie die Äquivalentdosis von Calciumcarbonat mit Vitamin D3 (CAL) für die Maus auf der Grundlage der Meeh-Rubner-Gleichung15 wie in den Schritten 1.1.1 und 1.1.2: CAL-Dosierung = 2 Tablette/70 kg x 39/3 = 0,372 Tabletten/kg bei 0,4 Tabletten/kg.
  5. Berechnen Sie auf der Grundlage eines Körpergewichts von 20 g pro Maus (z. B. 1 Monat alt, weiblich, C57/BL6) die äquivalente Dosierung von CAL für die Maus: 0,4 Tabletten/kg x 0,02 kg = 0,008 Tablette. Berechnen Sie dann die Äquivalentdosis von CAL basierend auf 20 Mäusen pro Gruppe und einer Intervention, die 3 Monate (90 Tage) dauert: 0,008 Tabletten x 20 x 90 = 14,4 Tabletten. Wiegen Sie 10 Tage CAL (1,6 Tabletten).
  6. auflösung
    1. 8 g GSK-Granulat in ein 50 ml-Rohr geben. 48 ml Saline hinzufügen und Rohr schütteln, um sich vollständig aufzulösen.
      HINWEIS: Der Standard für die vollständige Auflösung ist das Fehlen von Sedimenten. Die vollständige Auflösung kann weiter bestätigt werden, wenn eine Gavage-Nadel die Arbeitslösung aufstellen und dann reibungslos vertreiben kann.
    2. Wiederholen Sie Schritt 1.5.1 mit 16 g und 24 g GSK-Granulat.
    3. Legen Sie 1,6 Tabletten (10 Tage Wert) von CAL in ein 50 ml Rohr. 48 ml Saline hinzufügen und Rohr schütteln, um sich vollständig aufzulösen.
      HINWEIS: Die Arbeitslösungen können bei -4 °C gelagert und alle 10 Tage vorbereitet werden.
  7. Intragastrische Verabreichung
    1. Greifen Sie die Rückseite der Maus (1 Monat alt, weiblich, C57/BL6) mit der Maus nach vorne und stellen Sie sicher, dass sie fest in dieser Position bleibt. Halten Sie die Maus vor der Verabreichung für 2 x 3 min ruhig.
      HINWEIS: Stellen Sie sicher, dass der Forscher die Vorderseite der Maus deutlich sehen kann. Tragen Sie Handschuhe, um Mausbisse zu verhindern, vor allem für neue Forscher.
    2. Die Gavage-Nadel (Größe: #12, 40 mm) in die Arbeitslösung des GSK-Granulats geben und 0,24 ml der Arbeitslösung ziehen.
    3. Setzen Sie die Gavage-Nadel durch eine Seite ihres Mundes in die Maus, bis die Gavage-Nadel den Magen erreicht.
      HINWEIS: Um zu bestätigen, dass die Gavage-Nadel den Magen erreicht hat: (1) Die Gavage-Nadel trifft auf das Gefühl des Widerstands. In der Zwischenzeit zeigt die Maus die Wirkung des Schluckens, bevor die Gavage-Nadel die physische Verengung der Speiseröhre passiert. (2) Etwa 0,5 ml der Arbeitslösung in die Maus injizieren und 1 min warten. Wenn es keine Lösung aus der Maus kommt, bedeutet dies, dass die Gavage-Nadel den Magen erreicht hat.
    4. Injizieren Sie die Arbeitslösung von GSK-Granulat (0,24 ml/Maus) in den Magen und ziehen Sie dann die Gavage-Nadel heraus. Bringen Sie die Maus in ihren Käfig zurück.
    5. Wiederholen Sie Schritt 1.6.4 mit der CAL-Lösung und injizieren Sie 0,24 ml CAL-Lösung pro Maus.
      HINWEIS: Das Volumen der CAL-Lösung wird wie in Schritt 1.2 berechnet.

2. Micro-CT-Scannen

  1. T ibia Ernte und Zubereitung
    1. Intraperitoneal anästhesieren Maus mit 300 ml/100 g 80 mg/kg Ketamin am Tag nach der 90-tägigen Intervention. Verwenden Sie eine Nadelprise der Zehen, um zu bestätigen, ob die Maus vollständig beästhetisiert ist. Keine Antwort deutet auf eine erfolgreiche Anästhesie hin. Dann töten Sie die Maus mit Zervix-Dislokation.
    2. Fixieren Sie die Maus mit den Armen und Beinen auf Schaum mit Tacks.
    3. Schneiden Sie die Haut mit Schere (Größe: 8,5 cm) und Pinzette (Größe: 10 cm) der Beine vom proximalen bis zum distalen Ende ab und ernten Sie tibias.
    4. Die Tibias sofort in 70% Ethylalkohol geben und 3 Mal waschen.
  2. Die linke Tibia der Maus mit Schwammschaum umwickeln und in ein Probenrohr (35 mm Durchmesser, 140 mm Länge) geben.
    HINWEIS: Die lange Achse der Probe sollte zusammen mit der des Probenrohrs sein. Stellen Sie sicher, dass das proximale Ende der Tibia nach oben zeigt.
  3. Ausführen der Micro-CT 80 Scanmaschine
    1. Starten Sie die Micro-CT 80 Scanmaschine bei Raumtemperatur.
    2. Stellen Sie das Probenrohr in micro-CT 80 ein und starten Sie den Querschnittsscan mit den folgenden Scanparametern: Pixelgröße 15,6 m, Röhrenspannung 55 kV, Röhrenstrom 72 a, Integrationszeit 200 ms, räumliche Auflösung 15,6 m, Pixelauflösung 15,6 m und Bildmatrix 2048 x 2048.
      HINWEIS: Der Cancellousknochen unterscheidet sich durch Vorscannen vom kortikalen Knochen. Der Scanbereich der Tibia ist definiert als der cancellous Knochenbereich von 5 mm unterhalb des Tibialplateaus bis zum distalen Ende.
  4. Quantifizierung des Knochenparameters
    1. Nach Abschluss des Querschnittsscans erhalten Sie die Bilder der linken Tibias.
    2. Legen Sie den Dichteschwellenwert auf 245 bis 1000 fest. Verwenden Sie das Mikro-CT-Evaluierungsprogramm V6.6, um die folgenden Knochenparameter zu messen: Knochenmineraldichte (BMD), Knochenvolumen über Gesamtvolumen (BV/TV), trabekuläre Knochenzahl (Tb.N), trabekuläre Knochendicke (Tb.Th) sowie Knochen-Trabekularknochen-Trennung ( Tb.Sp).

3. Vorbereitung von Blutserum für In-vitro-Experimente

  1. berechnung
    1. Berechnen Sie auf der Grundlage eines Körpergewichts der Ratte von 0,2 kg (1 Monat alt, weiblich, Sprague-Dawley) die Dosierung von GSK-Granulat: menschliche Dosierung/Tag x Körpergewicht der menschlichen x K/Körpergewicht der Ratte = 20 g/70 kg/Tag x 70 kg x K (K = 0,018) /0,2 kg = 2 g/kg/Tag.
      HINWEIS: K ist der pharmakologische Transformationskoeffizient zwischen Mensch und Maus15 (K = 0,018).
    2. Wiederholen Sie Schritt 3.1.1 und berechnen Sie die folgenden Dosierungen.
      1. Berechnen Sie die Dosierung von GSKL: 10 g/70 kg/Tag x 70 kg x K/0,2 kg = 1 g/kg/Tag.
      2. Berechnung der Dosierung von GSKM: 20 g/70 kg/Tag x 70 kg x K/0,2 kg = 2 g/kg/Tag.
      3. Berechnen Sie die Dosierung von GSKL: 40 g/70 kg/Tag x 70 kg x K/0,2 kg = 4 g/kg/Tag.
      4. Berechnen Sie die Dosierung von CAL: 2 Tabletten /70 kg/Tag x 70 kg x K/0,2 kg = 0,2 Tabletten/kg/Tag.
    3. Berechnen Sie die Gesamtdosis von GSK-Granulat und CAL.
      1. Berechnen Sie die Gesamtdosis für GSKL: 1 g/kg/Tag x 0,2 kg x 6 Ratten x 3 Tage = 3,6 g.
      2. Berechnen Sie die Gesamtdosis für GSKM: 2 g/kg/Tag x 0,2 kg x 6 Ratten x 3 Tage = 7,2 g.
      3. Berechnen Sie die Gesamtdosis für GSKH: 4 g/kg/Tag x 0,2 kg x 6 Ratten x 3 Tage = 14,4 g.
      4. Berechnen Sie die CAL-Dosierung = 0,2 Tabletten/kg/Tag x 0,2 kg x 6 Ratten x 3 Tage = 0,72 Tabletten.
        HINWEIS: Für die Herstellung von 100 ml Kulturmedium (20% GSK-Granulat-haltiges Serum) werden insgesamt 10 ml GSK-Granulat-haltiges Serum benötigt. Es wird erwartet, dass jede Ratte (6 Ratten/Gruppe) nach der Zentrifugation 1,5 x 2 ml GSK-Granulat-haltiges Serum liefert.
    4. Berechnen Sie das Volumen des Pro-Ratten-Granulats aufderte GSK-Granulat auf der Grundlage des Körpergewichts15: z. B. Volumen (V) = 2 ml/Ratte/Tag.
      HINWEIS: Das Volumen für die intragastrische Verabreichung bei Ratten beträgt 0,1 ml/10 g.
  2. Wiegen Sie 3 Tage im Wert von drei Dosen GSK-Granulat. Wiegen Sie 3,6 g, 7,2 g und 14,4 g GSK-Granulat und dienen als GSKL, GSKM und GSKH. Wiegen Sie 0,72 Tablette für die CAL-Gruppe.
  3. 7,2 g GSK-Granulat in ein 50 ml-Rohr geben. 36 ml Saline hinzufügen und Rohr schütteln, um sich vollständig aufzulösen. Wiederholen Sie dies mit 3,6 g und 14,4 g GSK-Granulat.
  4. Wiederholen Sie Abschnitt 1.6 für die intragastrische Verabreichung mit 2 ml GSK-Arbeitslösung.
    HINWEIS: Verabreichen Sie das gleiche Volumen an Saline (2 ml pro Ratte) zur Herstellung von Serum und dient als leere Kontrollgruppe für In-vitro-Assays.
  5. Zubereitung des GSK-haltigen Serums
    1. Intraperitoneal anästhesieren die Ratten mit 300 ml/100 g 80 mg/kg Ketamin 1 h nach der letzten Verabreichung von GSK-Granulat. Verwenden Sie eine Nadelprise der Zehen, um zu bestätigen, ob die Ratte vollständig beäschend ist. Keine Antwort deutet auf eine erfolgreiche Anästhesie hin.
    2. Setzen Sie den Bauch nach dem Einschneiden der Haut und des Peritoneums mit einer geraden Schere auf den Boden des Thorax von Ratten aus.
      HINWEIS: Das chirurgische Instrument muss vor der Anwendung bei hohen Temperaturen und hohen Drücken sterilisiert werden. Der Operationsbereich muss während der Blutentnahme mit 70% Ethanol sterilisiert werden.
    3. Entfernen Sie das Bindegewebe der Bauchaorta mit Gewebepapier, um das Gefäß deutlich zu belichten.
    4. Mit einer 10 ml, 22 G Spritze Blut aus der Bauchaorta ziehen. Entfernen Sie dann die Nadel und übertragen Sie das Blut in ein 15 ml steriles Rohr. In der Regel können 6-8 ml Blut von einer Ratte erhalten werden.
      HINWEIS: Jede Ratte muss beim Blutziehen am Leben erhalten bleiben. Ein Indikator ist, dass die Bauchaorta pulsiert, wenn die Ratte am Leben ist. Die Ratte ist nach dem Blutziehen tot.
    5. Halten Sie die Röhre bei Raumtemperatur 30 bis 60 min aufrecht, bis das Blut in der Röhre geklont wird. Dann zentrifugieren Sie das Rohr bei 500 x 600 x g für 20 min. Übertragen Sie den gesamten Überstand (Serum) von einer Gruppe (6 Ratten) auf eine 50 ml sterile Röhre und schütteln, um zu mischen.
    6. Inaktivieren Sie das Serum, indem Sie 30 min in einem 56 °C-Wasserbad inkubieren. Filtern Sie das Serum mit einem hydrophilen Polyethersulfonspritzenfilter im Porenformat. Bei -80 °C für den langzeitigen Einsatz (weniger als 1 Jahr) lagern.
      HINWEIS: Das gefilterte Serum kann für In-vitro-Osteoclastogenese und Osteoblastogenese verwendet werden.
  6. bewerbung
    1. In-vitro-Osteoclastogenese
      1. Verdünnen Sie die drei Dosierungen des GSK-haltigen Serums (GSKL, GSKM, GSKH) im Verhältnis 1:4 mit dem minimalen Eagle-Medium (-MEM), das L-Glutamin, Ribonukleoside und Desoxyribonukleoside enthält.
        HINWEIS: Stellen Sie sicher, dass die endige Konzentration von GSK-haltigem Serum für In-vitro-Osteoclastogenese und Osteoblastogenese 20 % beträgt.
      2. Fügen Sie das verdünnte GSK-haltige Serum (200 L/Well) von Schritt 3.6.1.1 zu Knochenmarkmakrophagen (BMMs) von 4-6 Wochen alten C57BL/6-Mäusen für Osteoclastogenese hinzu und stimulieren BMMs mit Makrophagenkolonie-stimulierendem Faktor (M-CSF, 10 ng/mL) und Rezeptoraktivator für Kernfaktor-B-Ligand (RANKL, 100 ng/ml) wie zuvor beschrieben2.
    2. In-vitro-Osteoblastogenese
      1. Wiederholen Sie Schritt 3.6.1.1.
      2. Fügen Sie das verdünnte GSK-haltige Serum (2 ml/well) zu den mesenchymalen Knochenstammzellen (BMSCs) von 4-6 Wochen alten C57BL/6-Mäusen hinzu, um Osteoblasten zu erzeugen, wie zuvor beschrieben16.

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Ergebnisse

Die Ergebnisse des Mikro-CT-Scans zeigten, dass die OVX-Mäuse im Vergleich zu Saline-Kontrollmäusen einen signifikanten Knochenverlust zeigten (Abbildung 1A). Die Intervention (90 Tage) von GSK-Granulat hat die BMD stark erhöht, insbesondere in der GSKM-Gruppe (Abbildung 1B). Die Knochenstrukturparameter wie BMD, BV/TV, Tb.N und Tb.Th wurden quantifiziert. GSK-Granulatbehandlungen führten zu erhöhten BMD, BV/TV, Tb.N und Tb.Th, v...

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Diskussion

Granulat von TCM-Agenten sind eine der gemeinsamen Entscheidungen für Formulierungen oder Rezepte geworden. GSK-Granulat besteht aus mehreren pflanzlichen Arzneimitteln auf der Grundlage klinischer Erfahrungen oder der TCM-Theorie, und sie üben bessere heilende Effekte mit weniger Nebenwirkungen4. Im Vergleich zur Wasserabkochung haben die Granulate folgende Vorteile: guter Geschmack, Lieferkomfort, Langzeitlagerung, Standardprotokoll und konsistente Heileffekte sowie höhere Produktivität. Derzeit...

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Offenlegungen

Die Autoren haben nichts zu verraten.

Danksagungen

Diese Studie wurde durch Stipendien der National Natural Science Foundation of China (81804116, 81673991, 81770107, 81603643 und 81330085), das Programm für Innovatives Team, Ministerium für Wissenschaft und Technologie chinas (2015RA4002 bis WYJ), das Programm für Innovatives Team, Bildungsministerium Chinas (IRT1270 bis WYJ), Shanghai TCM Medical Center of Chronic Disease (2017ZZ01010 bis WYJ), Dreijahre Aktion zur Beschleunigung der Entwicklung des Plans für traditionelle chinesische Medizin (ZY(2018-2020)-CCCX-3003 bis WYJ) und nationalen wichtigsten Forschungsentwicklungsprojekte (2018YFC1704302).

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Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien
NameUnternehmenKatalognummerKommentare
α-MEMHyclone
Laboratorien		SH30265.018Für Zellkultur
β-GlycerophosphatSigmaG5422Osteoblastogenese-Caltrat
(CAL)WyethL96625Tierintervention
C57BL/6 MäuseSLAC Laboratory
Animal Co., Ltd.		ZufälligeAinimalpräparation
DexamethsomSigmaD4902
DimethylsulfoxidSigmaD2438Zelle gefrorene
Ethylendiamintetraessigsäure (EDTA)Sangon Biotech60-00-4Proben behandeln
Fötales RinderserumGibcoFL-24562Für die Zellkultur
Gushukang GranulatKangcheng Unternehmenin ChinaZ20003255Pflanzliches verschreibungspflichtiges
LichtmikroskopOlympus BX50Olympus BX50Bilder für Osteoklastogenese
L-Ascorbinsäure 2-Phosphat Sequinagneium Slat HyclratSigmaA8960-5GOsteoblastogenese
MikroskopLeicaDMI300BOsteocast und Osteoblasten imagine
M-CSFPeprotechAF-300-25-10Osteoklastogenese
Μ icro-CTScanco
Medical AG		μ CT80 Röntgenmikroskop MikrotomographKnochenstrukturanaallyse
RANKLPeprotech11682-HNCHFOsteoklastogenese
Sprague DawleySLAC Laboratory
Animal Co., Ltd.		StichprobenartigeBlutserumentnahme
Tartratresistentes Säurephosphat (TRAP) KitSigma-Aldrich387A-1KTTRAP Färbung

Referenzen

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