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Methodenartikel

Datenerfassung und -analyse in Brainstem Evokierte Reaktion Audiometrie bei Mäusen

12K Ansichten

DOI:

10.3791/59200

10. Mai 2019

In diesem Artikel

Zusammenfassung

Brainstem evozierte Reaktion Audiometrie ist ein wichtiges Werkzeug in der klinischen Neurophysiologie. Heutzutage wird die Hirnstamm-Evokologie auch in der Grundlagenforschung und in präklinischen Studien angewendet, an denen sowohl pharmakologische als auch genetische Tiermodelle beteiligt sind. Hier bieten wir eine detaillierte Beschreibung, wie auditive Hirnstammreaktionen erfolgreich bei Mäusen aufgezeichnet und analysiert werden können.

Zusammenfassung

Brainstem evozierte Reaktion Audiometrie (BERA) ist von zentraler Bedeutung in der klinischen Neurophysiologie. Da andere evozierte Potential-Techniken (EP) wie visuell evozierte Potentiale (VEPs) oder somatosensorische evozierte Potentiale (SEPs) ausgelöst werden, werden die auditiv evozierten Potentiale (AEPs) durch die sich wiederholende Darstellung identischer Reize ausgelöst, elektroenzephalographische (EEG) Reaktion, deren anschließend gemittelt wird, was zu deutlichen positiven (p) und negativen (n) Verformungen führt. Beim Menschen können sowohl die Amplitude als auch die Latenz einzelner Peaks verwendet werden, um Veränderungen der Synchronisation und Leitungsgeschwindigkeit in den zugrunde liegenden neuronalen Schaltkreisen zu charakterisieren. Wichtig ist, dass AEPs auch in der Grundlagen- und Präklinischen Wissenschaft angewendet werden, um die auditive Funktion in pharmakologischen und genetischen Tiermodellen zu identifizieren und zu charakterisieren. Darüber hinaus werden Tiermodelle in Kombination mit pharmakologischen Tests genutzt, um mögliche Vorteile bei der Behandlung von sensorineuralem Hörverlust (z. B. alters- oder lärminduzierte Hördefizite) zu untersuchen. Hier bieten wir eine detaillierte und integrative Beschreibung, wie man auditive Brainstem-evovoked Responses (ABRs) bei Mäusen mit Click- und Tone-Burst-Anwendung aufzeichnet. Ein besonderer Schwerpunkt dieses Protokolls liegt auf vorexperimentellen Tierhaltung, Anästhesie, ABR-Aufzeichnung, ABR-Filterprozessen, automatisierter Wavelet-basierter Amplitudenwachstumsfunktionsanalyse und Latenzerkennung.

Einleitung

Ein zentraler Aspekt der Hirnphysiologie ist seine Fähigkeit, Umweltinformationen zu verarbeiten, die zu unterschiedlichen intrinsischen oder extrinsischen Ergebnissen führen, wie Lernen, Gedächtnis, emotionale Reaktionen oder motorische Reaktionen. Verschiedene experimentelle und diagnostische Ansätze können verwendet werden, um die elektrophysiologische Reaktionsfähigkeit einzelner neuronaler Zelltypen oder Cluster/Ensembles von Neuronen innerhalb einer stimulusbezogenen neuronalen Schaltung zu charakterisieren. Diese elektrophysiologischen Techniken decken verschiedene raumzeitliche Dimensionen auf der Mikro-, Meso- und Makroskala1ab. Der Mi....

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Protokoll

Alle Tierverfahren wurden nach den Richtlinien des Deutschen Tierschutzrates durchgeführt und alle Protokolle wurden vom Landesamt für Natur, Umwelt und Verbraucherschutz genehmigt. Amt Nordrhein-Westfalen, Ministerium für Natur, Umwelt und Verbraucherschutz (LANUV NRW). Die Autoren bescheinigen ferner, dass alle Tierversuche in Übereinstimmung mit dem National Institutes of Health Guide for the Care and Use of Laboratory Animals (NIH Publications No. 80-23) revidiert 1996 oder dem UK Animals (Scientific Procedures) Act durchgeführt wurden. 1986 und die dazugehörigen Leitlinien oder die Richtlinie des Rates der Europäischen Gemeinschaften vom 24. November 1986 (86/609....

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Ergebnisse

Klick- und Ton-Burst-evozierte ABR-Aufnahmen können verwendet werden, um Hörschwellenunterschiede, Amplitudenwachstumsfunktion und Latenzvergleich zu bewerten. Klick-evozierte ABRs im SPL-Erhöhungsmodus sind in Abbildung 1 für Steuerungen und zwei beispielhaft emutierte Mauslinien dargestellt, die für den Cav3.2 T-Typ spannungsgebundenen Ca2+ Kanal (d.h. Cav3.2+/- und Ca) mangelhaft sind. v3.2 Nullmutante.......

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Diskussion

Dieses Protokoll bietet eine detaillierte und integrative Beschreibung, wie auditive evozierte Hirnstammreaktionen bei Mäusen aufzuzeichnen sind. Es legt besonderen Fokus auf Tiervorbehandlung, Anästhesie, und mögliche methodische Störfaktoren. Zu letzteren gehören unter anderem Geschlecht, Mauslinie, Alter und Wohnverhältnisse. Es sollte beachtet werden, dass all diese Faktoren einen Einfluss auf sensorineuralen Hörverlust und grundlegende Aspekte der auditiven Informationsverarbeitung haben können. Daher ist eine angem.......

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Offenlegungen

Die Autoren haben nichts zu verraten.

Danksagungen

Die Autoren danken Dr. Christina Kolb (Deutsches Zentrum für Neurodegenerative Erkrankungen (DZNE) und Dr. Robert Stark (DZNE) für ihre Unterstützung in der Tierzucht und Tiergesundheit. Diese Arbeit wurde vom Bundesinstitut für Arzneimittel und Medizinprodukte, BfArM, Bonn, finanziert.

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Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien
NameUnternehmenKatalognummerKommentare
AEP/OAE Software für RZ6 (BioSigRZ Software)Tucker-Davis Technologies (TDT)BioSigRZ
Binokulares Mikroskop mit chirurgischer VergrößerungZeiss Stemi 20000000001003877, 435540000000, 0000001063306, 4170530000000, 4170959255000, 4551820000000, 4170959040000, 4170959050000
Cages (Macrolon)Techniplast1264C, 1290D
Carprox vet, 50mg/ mlVirbac Tierarzneimittel GmbHPZN 11149509
KaltlichtquelleSchott KL2500 LCD9.705 202
Wattestäbchen-Applikatoren (steril)Carl RothEH12.1
Faradayscher Käfig aus Metall nach Maß (Edelstahl, 2 mm Dicke, 1 cm Maschenweite)Sonderanfertigung
5% Dexpanthenole (Bepanthen Augen- und Nasencreme)Bayer Vital GmbHPZN: 01578681
Einweg-Nadel
Elektroden aus Edelstahl, 27GA, 12mm
Rochester Electro-Medical, Inc.S03366-18
OP-Abdecktücher (steril)HartmannPZN 0366787
Ethanol, 70%Carl Roth9065.5
1/4'' Freifeldmessgerät Kalibrierung Mikrofon KitTucker-Davis Technologies (TDT)PCB-378C0
Handschuhe (steril)Unigloves1570
Graefe Pinzette gebogen, gezahntFST11052-10
GraphPad Prism 6 Software, V6.07GraphPad Prism Software, Inc.https://www.graphpad.com/
Sterilisator für chirurgische Instrumente auf WärmebasisFST18000-50
Homöothermic
Heizung
blanked ThermoLux461265 / -67
Ketanest S (Ketamin), 25mg/mlPfizerPZN 08707288
Ringer" s Lösung (steril)B.BraunPZN 01471434
Matlab SoftwareMathWorks, Inc.
Medusa 4-Kanal Low Imped. HeadstageTucker-Davis Technologies (TDT)RA4LI
Medusa 4-Kanal Pre-Amp/DigitizerTucker-Davis Technologies (TDT)RA4PA
MikrofonPCB Pieztronics378C01
Multi Field Speaker- StereoTucker-Davis Technologies (TDT)MF1-S
OszilloskopTektronixDPO3012
Optische PC1 Expresskarte für Optibit Interface)Tucker-Davis Systems (TDT)PO5e
Askina Braucel Pads (Zellulose-Absorbet-Pads)B.BraunPZN 8473637
VorverstärkerPCB Pieztronics480C02
RZ6 Multi I/O Processor System (BioSigRZ)Tucker-Davis Technologies (TDT)RZ6-A-PI
0,9% Kochsalzlösung (NaCl, steril)B. BraunPZN:8609255
SigGenRZ SoftwareTucker-Davis Technologies (TDT)https://www.tdt.com/
Software R (Version 3.2.1) + Reshape 2 (Version 1.4.1) + ggplot 2 (Version 1.0.1) + datatable (Version 1.9.4), + gdata (Version 2.13.3), + pastecs (Version 1.3.18), + waveslim (Version 1.7.5), + MassSpecWavelet (Version 1.30.0)The R Foundation, R Core Team 2015Open Source Software (frei verteilbar)
SchalldämmkabineMed Associates Inc.ENV-018V
Zange mit Standardmuster, 12cm und 14,5 cm LängeFST11000-12, 11000-14
Leukosilk TapeBSN medical GmbH & Co. KGPZN 00397109
Gewebezange - 1x2 Zähne 12 cmFST11021-12
Uniprotect Belüfteter SchrankBioscapeTHF3378
Belüfteter SchrankTecniplast9AV125P
Xylazin (Rompun), 2%Bayer Vital GmbHPZN 1320422
https://de.mathworks.com/products/matlab.html

Referenzen

  1. Sporns, O., Tononi, G., Kotter, R. The human connectome: A structural description of the human brain. PLOS Computational Biology. 1 (4), e42(2005).
  2. Bebarova, M. Advances in patch clamp technique: towards higher quality and quantity. Ge....

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Nachdrucke und Genehmigungen

Schlagwörter

H rstammreaktionClick Tonsto stimulationautomatisierte Wavelet AnalyseABR SchwellenwertermittlungABR Latenzanalyseauditorisches Profiling bei M usenschallisolierte Kabinesubdermale ElektrodenplatzierungVorverst rker Kalibrierung