Ein Abonnement von JoVE ist erforderlich, um diesen Inhalt anzuzeigen. Melden Sie sich an oder beginnen Sie noch heute mit einer kostenlosen Testphase.

Methodenartikel

Messung von Sauerstoff Verbrauchsmengen in intakten Caenorhabditis elegans

10K Aufrufe

⸱

DOI:

10.3791/59277

⸱

23. Februar 2019

 , 
1Department of Regenerative and Cancer Cell Biology, Albany Medical College

In diesem Artikel

Zusammenfassung

Mitochondriale Atmung ist entscheidend für das organismal überleben; Sauerstoff-Verbrauch ist daher ein hervorragender Indikator für mitochondriale Gesundheit. In diesem Protokoll wir beschreiben die Verwendung von handelsüblichen Respirometer basale messen und maximale Sauerstoff-Verbrauch im Leben, intakt und frei bewegliche Caenorhabditis Elegans.

Zusammenfassung

Optimale Funktion der Mitochondrien ist wichtig für gesunde Zellaktivität, besonders in Zellen mit hohem Energiebedarf wie in das Nervensystem und Muskel. Einklang mit diesem, wurde mitochondriale Dysfunktion assoziiert mit einer Vielzahl von neurodegenerativen Erkrankungen und Altern im Allgemeinen. Caenorhabditis Elegans wurden mächtige Modellsystem für die Aufklärung der vielen Feinheiten der mitochondrialen Funktion. Mitochondriale Atmung ist ein starker Indikator für die Funktion der Mitochondrien und neu entwickelte Respirometers bieten eine State-of-the-Art Plattform, um die Atmung in den Zellen zu messen. In diesem Protokoll bieten wir eine Technik, um live, intakte C. Eleganszu analysieren. Dieses Protokoll umfasst einen Zeitraum von ~ 7 Tage und umfasst Schritte für (1) wachsen und Synchronisation von C. Elegans (2) Vorbereitung von Verbindungen injiziert werden und Hydratation der Sonden, be- und Patrone Gleichgewichtherstellung Medikament (3), (4) Vorbereitung der Wurm assay Platte und Assay laufen und (5) nach dem Experiment Datenanalyse.

Einleitung

Adenosintriphosphat (ATP), die Hauptquelle der Zellenergie, wird durch Enzyme in der Elektronentransport-Kette (etc.) befindet sich in der inneren mitochondrialen Membran in den Mitochondrien produziert. Pyruvat, eine wichtige Metaboliten genutzt für mitochondriale ATP-Produktion, wird in der mitochondrialen Matrix importiert es decarboxyliert ist, Acetyl Coenzym A (CoA) zu produzieren. Acetyl-CoA tritt anschließend der Zitronensäure-Zyklus, was bei der Erzeugung von Nicotinamid Adenin Dinucleotide (NADH), eine wichtige Elektron Trägermolekül. Da Elektronen von NADH zu Sauerstoff über die usw. übergeben werden, aufbauen Protonen in die mitochondriale Intermembran Raum, die Ergebnisse in der Generation eines elektrochemischen Gradienten durch die Membran. Diese Protonen fließt dann aus dem Intermembran Raum in diesem elektrochemischen Gradienten zurück in der mitochondrialen Matrix durch die Proton-Pore des ATP-Synthase, fahren die Rotation und die Synthese von ATP1 (Abbildung 1).

Mitochondriale Funktion beschränkt sich nicht nur zur Energiegewinnung sondern ist auch entscheidend für die Kalzium-Homöostase, reaktive Sauerstoffspezies (ROS) aufräumen und Apoptose, kritisch Positionierung ihrer Funktion im organismal Gesundheit2. Mitochondriale Funktion kann mit einer Vielzahl von Tests, einschließlich aber nicht beschränkt auf Analysen, die mitochondriale Membranpotential messen, ATP und ROS Ebenen und mitochondriale Kalzium-Konzentrationen bewertet werden. Jedoch diese Assays zur Verfügung stellen einer Momentaufnahme der mitochondrialen Funktion und daher möglicherweise nicht bietet einen umfassenden Überblick der mitochondrialen Gesundheit. Da Sauerstoff-Verbrauch bei der ATP-Generierung auf eine Vielzahl von sequentiellen Reaktionen angewiesen ist, dient es als eine überlegene Indikator für die Funktion der Mitochondrien. Interessanterweise sind Variationen in Sauerstoff-Verbrauch durch mitochondriale Dysfunktion3,4,5beobachtet worden.

Sauerstoff-Verbrauch (OCR) von lebenden Proben gemessen werden, mit Techniken, die im großen und ganzen in zwei Gruppen eingeteilt werden können: amperometrischen Sauerstoffsensoren und Porphyrin-basierte Leuchtstoffe, die durch Sauerstoff6gestillt werden können. Amperometrischen Sauerstoffsensoren sind weitgehend nach Maß OCR in kultivierten Zellen, Geweben, und Modellsysteme, wie C. Elegansbenutzt worden. Porphyrin-basierte Phosphore mit Respirometers besitzen jedoch folgende Vorteile: (1) sie ermöglichen eine Gegenüberstellung zweier Proben in dreifacher Ausfertigung, (2) sie benötigen kleinere Stichprobengröße (z. B. 20 Würmer pro Bohrloch im Vergleich zu ~ 2, 000−5, 000 Würmern, in der Zeiten während der experimentellen ausführen, wodurch die Notwendigkeit für manuelle Anwendung gewünscht Kammer)7, und (3) der Respirometer kann programmiert werden, dazu vier verschiedene zusammengesetzte Injektionen an.

In diesem Protokoll sind Schritte im Umgang mit einem Porphyrin-basierte Sauerstoff-Sensor Respirometer Maßnahme OCR in live, intakte C. Elegans beschrieben. Zwar gibt es ein schriftliches Protokoll für die Verwendung von großformatigen, Hochdurchsatz Respirometer8, wurde dieses Protokoll für die Verwendung mit einem mehr Budget-freundlich, zugänglich und kleineren Maßstab-Instrument angepasst. Dieses Protokoll eignet sich besonders für die Beurteilung des Unterschied in OCR zwischen zwei Stämmen, wo Hochdurchsatz-Screening ist nicht erforderlich und seine Verwendung wäre übertrieben.

Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.

Protokoll

Hinweis: Abbildung 2 bietet einen schematischen Überblick über das vollständige Protokoll.

1. Wachstum und Synchronisation von Nematoden Bevölkerung9,10

  1. L4-Larven von gewünschten genetischen Hintergründen zu übertragen (z. B. N2 [Wildtyp] und Sel-12 Tiere) auf Nematoden Medien (NGM) Wachstumsfugen (Rezept siehe Tabelle 1 ) mit einem Rasen von Escherichia coli (OP50)11frisch ausgesät. Verwenden Sie mindestens zwei 100 mm oder drei 60 mm Platten für jede Belastung. Inkubieren Sie die Würmer bei der entsprechenden Wachstum Temperatur (zwischen 15 – 25 ° C), für 3 – 4 Tage oder bis Platten mit großen Anzahl von Eiern und trächtigen Würmern konzentriert sind.
  2. Waschen Sie die Eier und Würmer von den Tellern mit ca. 6 mL M9 Puffer (siehe Tabelle 1 für Rezept) pro 100 mm Platte von Nematoden und Transfer Glas mit Pasteur Pipetten in einzelnen 15 mL Zentrifuge Rohre für jede Belastung. Diese Rohre Spin-down für 3 min bei 6.180 x g und Absaugen, die M9-Puffer, behalten nur die Tiere und Eier Pellet.
  3. 3 – 4 mL Bleichmittel-Lösung zugeben (siehe Tabelle 1 für Rezept) zu jedem Rohr und zeitweise Wirbel für 6 min. hinzufügen M9 Puffer füllen jedes Rohr und drehen bei 6.180 x g für 1 min und aspirieren überstand. Diese waschen mit M9 dreimal wiederholen und das Ei Pellet in eine frische 15 mL Röhrchen mit ca. 9 mL M9 Puffer verschieben.
  4. Synchronisieren der frisch geschlüpften Würmer durch Nutating bei 20 ° C für 16 / 48 h. Spin diese Rohre nach unten bei 6.180 x g für 1,5 min und legte die synchronisierten L1 Tiere auf NGM Einzelplatten, frisch entkernt mit einem Rasen von OP50 (ca. 6.000-10.000 Tiere pro 100 mm Platte) und halten Sie bei 20 ° C.
  5. Diese Tiere erreichen das Larvenstadium L4 nach ~ 42 h. Zu diesem Zeitpunkt verschieben die L4-Larven mit einem Platin Pick, OP50 ausgesät NGM Platten mit 0,5 mg / mL 5-Fluoro-2'-Deoxyuridine (FUdR) zu verhindern, dass sie Nachkommen produzieren.
    Hinweis: Stellen Sie sicher, dass alle Stämme innerhalb eines Experiments über einen ähnlichen Zeitraum hinweg synchronisiert werden. FUdR Behandlung der Tiere sterilisiert und verhindert, dass Ei legen und Nachkommen-Produktion, die OCR beeinflussen könnten. Diese sterilisierte Tiere werden am nächsten Tag (Tag 1 Erwachsene Tiere ~ 66 h) für die Tests ausgewertet. FUdR wurde gemeldet, die Physiologie und die Lebensdauer von bestimmten mutierten Würmern auswirken. Daher sollte dies berücksichtigt werden wenn das Medikament für Sterilisation12,13,14verwendet wird. Würmer können auch mittels der Femininisierung Mutationen wie fem-1(hc17) oder fem-3(e2006) sterilisiert werden. Allerdings könnte diese Mutationen mitochondriale Funktion auswirken.

2. Vorbereitung von Verbindungen injiziert werden und Hydratation der Sonden

Hinweis: Während der Test ausführen, werden beide basal und maximale Atmung Sätze von den Nematoden gemessen. Maximale Atmung wird bei den Tieren auf die Zugabe von Carbonyl Zyanid-4 (Trifluormethoxy) Phenylhydrazone (FCCP), ein abkoppeln Ionophore, der mitochondrialen Membranpotentials stört und damit die ATP-Synthese mit dem Transport von Protonen ausgelöst durch die mitochondriale Membran abgekoppelt gleichzeitig Protonen Pumpen, Elektronentransport und Sauerstoffverbrauch,4,15 gehen von der ATP Synthese (Abbildung 1). Der letzte Schritt im Test beinhaltet die Zugabe von Natriumazid (NaN-3), ein Medikament, das hemmt die komplexe IV und V in die ETC, so dass man nicht mitochondriale Atmung16 (Abbildung 1) zu bestimmen. Die folgenden Schritte können am Tag vor dem eigentlichen Test-Lauf durchgeführt werden.

  1. Bereiten Sie 1 mL Stammlösungen der FCCP (10 mM in Dimethyl Sulfoxid [DMSO]: 1000 x die endgültige Assay-Konzentration) und NaN3 (400 mM dH2O: 10 x letzte Assay-Konzentration) und bei-20 ° C.
    Hinweis: Führen Sie verpflichtet eine Konzentrationskurve optimieren die Konzentration von FCCP um maximale OCR-Antwort für jedes Instrument und Laborumgebung zu entlocken.
  2. Hydrat der Sensorkassette durch Zugabe von 200 µL dH2O jedes gut (und die umliegenden Reservoir) in der Platte, sicherzustellen, dass des Sensors, die Sonden im dH2O und über Nacht bei Raumtemperatur lagern untergetaucht sind.
    Hinweis: Die Patrone, die Sonden gelassen werden können bis zu 72 h untergetaucht, aber im Falle einer längeren Hydration, sollten die Platten in Paraffin Film gewickelt und bei 4 ° c gelagert Wenn über Nacht Flüssigkeitszufuhr nicht möglich ist, sollte der Sensorkassette für mindestens 4 Stunden vor Assay hydratisiert.
  3. Schalten Sie das Heizelement innerhalb der Respirometer-Schnittstelle und lagern Sie das Gerät in einer Brutmaschine 15 ° C über Nacht zu niedrigeren Kerntemperatur innerhalb des Instruments zu verhindern, dass die Tieren Überhitzung während des Tests ausführen.
    Hinweis: Die Respirometer ist mit einem Heizelement ausgestattet aber kann nicht gekühlt werden. Innerhalb einer 15 ° C Inkubator haben die Respirometer eine stabile Temperatur zwischen 18-22 ° C, die eine gesunde Temperatur für C. Elegans Wartung ist.

3. Medikament be- und Patrone entnehmen

  1. Pipette heraus und entsorgen Sie die dH2O verwendet, um die Sensor-Hydrat-Sonden und ersetzen Sie es mit 200 µL der Kalibrator Lösung (pH-Wert 7,4) in jede Vertiefung. FCCP Vorratslösung bis 100 µM FCCP dH2O verdünnen und die Injektion Port A in der Sensorkassette 20 µL der verdünnten Lösung hinzufügen. Anschluss B der Senor Patrone 22 µL 400 mM Natriumazid hinzufügen.
  2. Aktivieren Sie die Respirometer und wählen Sie im home-Bildschirm starten; die Vorlagen-Seite wird angezeigt. Wählen Sie auf der Seite "Vorlagen" leere oder eine zuvor entworfenen Vorlage; die Seite "Gruppen" wird angezeigt. Auf der Seite "Gruppen" die Brunnen A und H als die Hintergrund-Brunnen und zuordnen der verbleibenden 6 Brunnen in entsprechende Gruppen entsprechend der Versuchsplan.
  3. Drücken Sie den Pfeil auf der rechten unteren Ecke, um das Protokoll-Seite gehen. Sicherstellen Sie auf der Seite "Protokoll", dass die äquilibriert, basale und Injektionen 1 und 2 -Tasten ausgewählt werden. Auf dieser Seite stellen Sie die Anzahl der Messwerte der basalen OCR sowie maximale OCR (nach Injektion 1 mit FCCP) und nicht-mitochondriale OCR (nach Injektion 2 mit Natriumazid).
    Hinweis: Jede Messung vorangestellt ist eine Mischung und Warteschritt und den Zeitrahmen für diese Parameter sind in Tabelle 2gezeigt.
  4. Wählen Sie den Pfeil in der unteren rechten Ecke und erscheint eine Aufforderung, die Sensorplatte Patrone zu laden. Sicherstellen Sie, dass die Sensorplatte Patrone in der richtigen Orientierung, nach den Anweisungen auf der Erinnerungsseite Prompt geladen wird. Die Respirometer wird nun die Patrone equilibrate.
    Hinweis: Diese Gleichgewichtherstellung bietet genügend Zeit, setzen Sie die Tiere in entsprechenden Vertiefungen der Zellplatte untersucht werden.

4. Vorbereitung der Wurm Platte und Assay laufen

  1. Fügen Sie 200 µL Puffer M9 in jeder der 8 Brunnen der Zellplatte und in den Stauseen rund um den Brunnen.
  2. Wählen Sie ~ 100 Würmer aus jedem Stamm auf ungesetzte NGM Teller und Ruhe für ca. 2-3 min. nass am Ende der Platin Pick mit M9 Puffer und wählen Sie 20 Alter synchronisiert Tiere in Brunnen B-G, wobei der Hintergrund Brunnen A und H leer lassen.
    Hinweis: Nach dem Laden jedes nun, warten Sie ca. 2 min, die Tiere in den Boden der Näpfchen zu begleichen. Es ist auch ratsam, dass eine Wurm Nummer Kurve ausgeführt werden, um die Wurm-Anzahl pro Bohrloch für jedes Instrument und das Labor zu optimieren.
  3. Jetzt sollte das Respirometer kalibriert werden und indem Sie auf OK , auf dem Bildschirm, die Platte mit Kalibrierung Puffer wird ausgeworfen und kann aus der Respirometer entfernt werden, während der Sensorkassette im Inneren des Gerätes bleibt. Ersetzen Sie die Kalibrator-Platte mit der Platte mit Tieren. Platte zu laden und die Tür schließen, indem Sie auf weiter und ermöglichen des Tests ausgeführt.

5. nach dem Experiment Datenanalyse

  1. Sobald der Test abgeschlossen ist, folgen Sie den Anweisungen auf dem Bildschirm und entfernen Sie der Zellplatte und Sensor-Steckmodul und fügen Sie ein Flash-Laufwerk am USB-Anschluss die Laufdaten in der .war-Format zu speichern. Entfernen Sie der Sensorkassette und die Tiere auf den Boden der Näpfchen zu begleichen, für ca. 2 min. statt Zellplatten unter ein Stereo-Mikroskop seziert und die Anzahl der Tiere pro Bohrloch.
  2. Öffnen Sie die Analysesoftware auf dem Computer und öffnen Sie die Registerkarte "Normalisierung" um OCR auf tierische Zahl zu normalisieren. Gelten Sie entsprechende Bezeichnungen für die verschiedenen Gruppen unter der Registerkarte ändern und exportieren Sie die Datei als Prisma-Datei zur weiteren Analyse.
    Hinweis: Der Durchschnitt der ersten fünf Messungen, bevor die Zugabe von FCCP die basale OCR, während der Durchschnitt der fünf Messungen ist nach FCCP Zusatz die maximale OCR ist und dem Durchschnitt der letzten fünf Messungen (mindestens zwei Messungen durchgeführt werden sollte) nach Natrium-Azid Zusatz der nicht-mitochondriale Atmung beträgt. Der Test sollte dreimal wiederholt werden, um die Reproduzierbarkeit zu gewährleisten.

Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.

Ergebnisse

Mit dem Protokoll beschriebenen, OCR Wildtyp Tiere und drei verschiedenen Sel-12 mutierte Stämme wurden ermittelt. SEL-12 kodiert das C. Elegans Ortholog Presenilin17. Mutationen im menschlichen Presenilin sind die häufigste genetische Aberration, verbunden mit der Entwicklung der familiären Alzheimer-Krankheit18. Unsere Studien haben erhöhte mitochondriale Kalziumspiegel Sel / 12 mutierte Tieren im Vergle...

Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.

Diskussion

Mitochondriale Atmung ist eine aufschlussreiche Indikator für die Funktion der Mitochondrien; Daher ist es sehr wertvoll, in der Lage, den Sauerstoff-Verbrauch in einem biologischen System, ob in vitro oder in vivo zu messen. Respirometers spüren Sauerstoffgehalt mit Porphyrin-basierte Leuchtstoffe, die durch Sauerstoff oder über amperometrischen Sauerstoffsensoren, die auf die Erzeugung von einer elektrischen aktuelle Proportional zur Sauerstoffdruck gestillt bekommen. Clark-Elektrode fällt in diese Kategorie und wurde ...

Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.

Offenlegungen

Die Autoren haben nichts preisgeben.

Danksagungen

Die Autoren möchten Dr. Kevin Bittman für seine Führung bei der Festlegung der Seepferdchen XFp im Labor zu bestätigen. National Institutes of Health zu gewähren, dass GM088213 diese Arbeit unterstützt.

Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien
NameUnternehmenKatalognummerKommentare
100 mm, 60 mm PetrischalenKord-Valmark Labware Products2900, 2901
1,5 mL ZentrifugenröhrchenGlobe Scientific6285
15 mL konische RöhrchenCorning430791
22 & 22 mmDeckglas Globe Scientific1404-10
50 mL konische RöhrchenCorning430829
AgarFisher ScientificBP1423-2
Bacto PeptonBD, Bacto211677
Bacto TryptonBD, Bacto211705
Bacto HefeextraktBD, Bacto212705
BleicheGenerisches
Calciumchlorid-Dihydrat (CaCl2 & Middot; 2H2O)Fisher ScientificC79-500
Carbonylcyanid 4-(trifluormethoxy)phenylhydrazon (FCCP)Abcamab120081
CholesterinFisher ScientificC314-500
Deionisiertes Wasser (dH2O)
Dimethylsulfoxid (DMSO)Thomas Scientific C987Y85
Glas Pasteur PipettenKrackeler Scientific6-72050-900
Magnesiumsulfat Heptahydrat (MgSO4· 7H2O)Fisher ScientificBP213-1
Kaliumphosphat zweibasisch (K2HPO4)Fisher ScientificBP363-1
Kaliumphosphat einbasig (KH2PO4)Fisher ScientificP285-500
NatriumchloridFisher ScientificBP358-10
Natriumhydroxid (NaOH)Fisher ScientificBP359-500
Natriumphosphat zweibasisch wasserfrei (Na2HPO4)Fisher ScientificBP332-1
Seepferdchen XFp AnalysatorAgilent
Seepferdchen XFp FluxPakAgilent103022-100
NatriumazidSigma-AldrichS2002

Referenzen

  1. Nelson, D. L., Cox, M. M. Ch. 19. Lehninger Principles of Biochemistry. Ahr, K. , W. H. Freeman and Company. 707-772 (2008).
  2. Marchi, S., et al. Mitochondrial and endoplasmic reticulum calcium homeostasis and cell death. Cell Calcium. 69, 62-72 (2018).
  3. Sarasija, S., et al. Presenilin mutations deregulate mitochondrial Ca(2+) homeostasis and metabolic activity causing neurodegeneration in Caenorhabditis elegans. eLife. 7, (2018).
  4. Luz, A. L., et al. Mitochondrial Morphology and Fundamental Parameters of the Mitochondrial Respiratory Chain Are Altered in Caenorhabditis elegans Strains Deficient in Mitochondrial Dynamics and Homeostasis Processes. PLoS One. 10, e0130940(2015).
  5. Ryu, D., et al. Urolithin A induces mitophagy and prolongs lifespan in C. elegans and increases muscle function in rodents. Nature Medicine. 22, 879-888 (2016).
  6. Perry, C. G., Kane, D. A., Lanza, I. R., Neufer, P. D. Methods for assessing mitochondrial function in diabetes. Diabetes. 62, 1041-1053 (2013).
  7. Schulz, T. J., et al. Glucose restriction extends Caenorhabditis elegans life span by inducing mitochondrial respiration and increasing oxidative stress. Cell Metabolism. 6, 280-293 (2007).
  8. Koopman, M., et al. A screening-based platform for the assessment of cellular respiration in Caenorhabditis elegans. Nature Protocols. 11, 1798-1816 (2016).
  9. Sarasija, S., Norman, K. R. Analysis of Mitochondrial Structure in the Body Wall Muscle of Caenorhabditis elegans. Bio-protocol. 8, (2018).
  10. Sarasija, S., Norman, K. R. Measurement of ROS in Caenorhabditis elegans Using a Reduced Form of Fluorescein. Bio-protocol. 8, (2018).
  11. Chaudhuri, J., Parihar, M., Pires-daSilva, A. An introduction to worm lab: from culturing worms to mutagenesis. Journal of Visualized Experiments. 47 (47), (2011).
  12. Aitlhadj, L., Sturzenbaum, S. R. The use of FUdR can cause prolonged longevity in mutant nematodes. Mechanisms of Ageing and Development. 131, 364-365 (2010).
  13. Rooney, J. P., et al. Effects of 5'-fluoro-2-deoxyuridine on mitochondrial biology in Caenorhabditis elegans. Experimental Gerontology. 56, 69-76 (2014).
  14. Van Raamsdonk, J. M., Hekimi, S. FUdR causes a twofold increase in the lifespan of the mitochondrial mutant gas-1. Mechanisms of Ageing and Development. 132, 519-521 (2011).
  15. Heytler, P. G., Prichard, W. W. A new class of uncoupling agents--carbonyl cyanide phenylhydrazones. Biochemical and Biophysical Research Communications. 7, 272-275 (1962).
  16. Massie, M. R., Lapoczka, E. M., Boggs, K. D., Stine, K. E., White, G. E. Exposure to the metabolic inhibitor sodium azide induces stress protein expression and thermotolerance in the nematode Caenorhabditis elegans. Cell Stress Chaperones. 8, 1-7 (2003).
  17. Levitan, D., Greenwald, I. Facilitation of lin-12-mediated signalling by sel-12, a Caenorhabditis elegans S182 Alzheimer's disease gene. Nature. 377, 351-354 (1995).
  18. Sherrington, R., et al. Cloning of a gene bearing missense mutations in early-onset familial Alzheimer's disease. Nature. 375, 754-760 (1995).
  19. Glancy, B., Balaban, R. S. Role of mitochondrial Ca2+ in the regulation of cellular energetics. Biochemistry. 51, 2959-2973 (2012).
  20. Sarasija, S., Norman, K. R. A gamma-Secretase Independent Role for Presenilin in Calcium Homeostasis Impacts Mitochondrial Function and Morphology in Caenorhabditis elegans. Genetics. 201, 1453-1466 (2015).

Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.

Nachdrucke und Genehmigungen

Tags

SauerstoffverbrauchrateC. elegansmitochondriale RespirationWurmsynchronisationRespirometer-AssayMedikamenteninjektionDatennormalisierungbasale OCRmaximale OCRnicht-mitochondriale OCR
Messung von Sauerstoff Verbrauchsmengen in intakten Caenorhabditis elegans
Kontaktieren Sie uns
Der Bibliothek empfehlen

Datenschutz

Nutzungsbedingungen

Richtlinien

Urheberrecht © 2026 MyJoVE Corporation. Alle Rechte vorbehalten.