Hier beschreiben wir ein Schritt-für-Schritt-Protokoll der chirurgischen Aortendepaling im etablierten Mäusemodell der Aortenverengung. Dieses Verfahren ermöglicht es nicht nur, die Mechanismen zu untersuchen, die dem linksventrikulären Reverse Remodeling und der Regression von Hypertrophie zugrunde liegen, sondern auch neue therapeutische Optionen zu testen, die die Myokardregeneration beschleunigen könnten.
Ein Abonnement von JoVE ist erforderlich, um diesen Inhalt anzuzeigen. Melden Sie sich an oder beginnen Sie noch heute mit einer kostenlosen Testphase.
Methodenartikel
Untersuchung des linksventrikulären Reverse Remodeling durch Aortendefletieren bei Nagetieren
* These authors contributed equally
In diesem Artikel
Zusammenfassung
Zusammenfassung
Um das linksventrikuläre (LV) Reverse Remodeling (RR) besser zu verstehen, beschreiben wir ein Nagetiermodell, bei dem Mäuse nach einem durch Aortenbänder induzierten LV-Remodeling nach Entfernung der Aortenverengung einer RR unterzogen werden. In diesem Artikel beschreiben wir ein schrittweises Verfahren zur Durchführung einer minimalinvasiven chirurgischen Aortendebandung bei Mäusen. Die Echokardiographie wurde anschließend verwendet, um den Grad der Herzhypertrophie und -dysfunktion während des LV-Umbaus und der RR zu beurteilen und den besten Zeitpunkt für die Aortendebandierung zu bestimmen. Am Ende des Protokolls wurde eine terminale hämodynamische Bewertung der Herzfunktion durchgeführt und Proben für histologische Studien gesammelt. Wir haben gezeigt, dass die Debandierung mit chirurgischen Überlebensraten von 70-80% verbunden ist. Darüber hinaus löst zwei Wochen nach der Debandierung die signifikante Verringerung der ventrikulären Nachlast die Regression der ventrikulären Hypertrophie (~ 20%) und Fibrose (~26%), Wiederherstellung der diastolischen Dysfunktion, beurteilt durch die Normalisierung der linksventrikulären Füllung und enddiastolischen Drücken (E / e ' und LVEDP). Aortendevolrierung ist ein nützliches experimentelles Modell, um LV RR bei Nagetieren zu untersuchen. Das Ausmaß der myokardialen Erholung ist zwischen den Probanden variabel und ahmt daher die Vielfalt der RR nach, die im klinischen Kontext auftritt, wie z. B. Aortenklappenersatz. Wir kommen zu dem Schluss, dass das Aortenbanding/Debanding-Modell ein wertvolles Werkzeug darstellt, um neue Erkenntnisse über die Mechanismen der RR zu gewinnen, nämlich die Regression der Herzhypertrophie und die Wiederherstellung der diastolischen Dysfunktion.
Einleitung
Die Verengung der transversalen oder aufsteigenden Aorta in der Maus ist ein weit verbreitetes experimentelles Modell für Drucküberlastungs-induzierte Herzhypertrophie, diastolische und systolische Dysfunktion und Herzinsuffizienz1,2,3,4. Aortenverengung führt zunächst zu kompensierter konzentrischer Hypertrophie des linken Ventrikels (LV), um die Wandspannung zu normalisieren1. Unter bestimmten Umständen, wie z. B. einer längeren Herzüberlastung, reicht diese Hypertrophie jedoch nicht aus, um die Wandbelastung zu ver....
Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.
Protokoll
Alle Tierversuche entsprechen dem Leitfaden für die Pflege und Verwendung von Versuchstieren (NIH-Publikation Nr. 85–23, überarbeitet 2011) und dem portugiesischen Tierschutzgesetz (DL 129/92, DL 197/96; S. 1131/97). Die zuständigen lokalen Behörden haben dieses Versuchsprotokoll genehmigt (018833). Sieben Wochen alte männliche C57B1/J6-Mäuse wurden in geeigneten Käfigen mit einer regelmäßigen 12/12 h Hell-Dunkel-Zyklusumgebung, einer Temperatur von 22 °C und 60% Luftfeuchtigkeit mit Zugang zu Wasser und einer Standarddiät ad libitum gehalten.
1. Vorbereitung des Operationsfeldes
- Desinfizieren Sie die Operationsstelle mit 70% Alko....
Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.
Ergebnisse
Postoperatives und spätes Überleben
Das perioperative Überleben des Banding-Verfahrens beträgt 80% und die Mortalität im ersten Monat beträgt typischerweise <20%. Wie bereits erwähnt, hängt der Erfolg der Debanding-Operation stark davon ab, wie invasiv die vorherige Operation war. Nach einer Lernkurve liegt die Sterblichkeitsrate während der Debanding-Verfahren bei etwa 25%. Für diese Mortalität sind hauptsächlich Todesfälle während des chirurgischen Eingriffs verantwortlich, einschließlich Aorta o.......
Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.
Diskussion
Das hier vorgeschlagene Modell ahmt den Prozess des LV-Umbaus bzw. der RR nach Aortenbanding bzw. Debanding nach. Daher stellt es ein ausgezeichnetes experimentelles Modell dar, um unser Wissen über die molekularen Mechanismen, die an der nachteiligen LV-Umgestaltung beteiligt sind, zu erweitern und neue therapeutische Strategien zu testen, die in der Lage sind, die myokardiale Genesung dieser Patienten zu induzieren. Dieses Protokoll beschreibt Schritte zur Erstellung eines Nagetiertiermodells für Aortenbanding und -deb.......
Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.
Offenlegungen
Die Autoren haben keinen Interessenkonflikt.
Danksagungen
Die Autoren danken der Portugiesischen Stiftung für Wissenschaft und Technologie (FCT), der Europäischen Union, der Quadro de Referência Estratégico Nacional (QREN), der Fundo Europeu de Desenvolvimento Regional (FEDER) und dem Programa Operacional Factores de Competitividade (COMPETE) für die Finanzierung der Forschungseinheit UnIC (UID/IC/00051/2013). Dieses Projekt wird von FEDER durch COMPETE 2020 – Programa Operacional Competitividade E Internacionalização (POCI), das Projekt DOCNET (NORTE-01-0145-FEDER-000003), unterstützt durch das regionale operationelle Programm Norte Portugal (NORTE 2020), im Rahmen der Partnerschaftsvereinbarung Portugal 2020, über den Euro....
Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.
Materialien
| Name | Unternehmen | Katalognummer | Kommentare |
|---|---|---|---|
| Absorptionsspeere | F.S.T | 18105-03 | Zur Aufnahme von Flüssigkeiten während der Operation |
| Klingen | F.S.T | 10011-00 | Zur Durchführung des Hautschnitts |
| Buprenorphin | Buprelief | Analgesiemedikament | |
| Catutery | F.S.T | 18010-00 | Zur Vorbeugung von Blutung |
| Catutery Tipps | F.S.T | 18010-01 | Zur Vorbeugung Ausbluten |
| Wattestäbchen | Johnson's | Zur Aufnahme von Flüssigkeiten | |
| Enthaarungscreme | Veet | Zur Verfeinerung des Tieres | |
| Einweg-Tischabdeckung für den Operationssaal | MEDKINE | DYND4030SB | Zur Abdeckung des Operationsbereichs |
| Echosonde | Siemens | Sequoia 15L8W | Ultraschallsignalerfassung |
| Echokardiograph | Siemens | Acuson Sequoia C512 | Ultraschall-Signalerfassung |
| Endtidaler CO2-Monitor | Kent Scientific | CapnoStat | Zur Kontrolle der Sättigung des Exspirationsgases |
| Pinzette/Pinzette | F.S.T | 11255-20 | Zum Präzieren des Gewebes und der Aorta |
| Pinzette/Pinzette | F.S.T | 11272-30 | Zum Präparieren des Gewebes und der Aorta |
| Pinzette/Pinzette | F.S.T | 11151-10 | Zum Präparieren des Gewebes und der Aorta |
| Pinzette | F.S.T | 11152-10 | Zum Präparieren des Gewebes und der Aorta |
| Gassystem | Penlon Sigma Delta | Zur Anästhesie und mechanischen Beatmung | |
| Hämostatika | F.S.T | 13010-12 | Zum Halten der Naht vor dem Festziehen der Aorta |
| Hämostatika | F.S.T | 13011-12 | Um die Naht zu halten, bevor die Aorta festgezogen |
| Ligaturhilfen | F.S.T | 18062-12 | Um eine Naht um die Aorta zu legen |
| Magnetischer Retraktor | F.S.T | 18200-20 | Um das Tier in der richtigen Position zu halten |
| Nadelhalter | F.S.T | 12503-15 | Zum Nähen des Tieres |
| Nadel 26G | B-BRAUN | Als Form für die Aortenverengung Durchmesser | |
| Sauerstoff | Luft Flüssigkeit | Zur Anästhesie und mechanischen Beatmung | |
| Polipropilen-Naht | Vycril | W8304/W8597 | Zum Nähen des Tieres und zur Verengung |
| Povidon-Jod-Lösung | Betadine® | Hautantiseptikum | |
| Millar Instruments | Zur Analyse der hämodynamischen Daten | ||
| PVSchleifenkatheter | Millar instruments | SPR-1035. 1.4 F | PV-Schleife Signalerfassung |
| Retraktor | F.S.T | 17000-01 | Zur besseren Übersicht über die Aorta |
| Skalpellgriff | F.S.T | 10003-12 | Zur Durchführung des Hautschnitts |
| Schere | F.S.T | 15070-08 | Zum Schneiden der Naht bei der Debandierungschirurgie |
| Schere | F.S.T | 14084-09 | Zum Schneiden von anderem Material während der Operation, z.B. Naht, papper |
| Sevofluran | Baxter | 533-CA2L9117 | |
| Temperiermodul | Kent Scientific | RightTemp | Zur Kontrolle der Körpertemperatur von Tieren |
| Beatmungsgerät | Kent Scientific | PhysioSuite | Zur Beatmung des |
| Tieres Wasserbad | Thermo Scientific™ | TSGP02 | Zur Aufrechterhaltung einer Wassertemperatur, die zur Erwärmung der P-V-Schleifenkatether ausreicht |
Referenzen
- Arany, Z., et al. Transverse aortic constriction leads to accelerated heart failure in mice lacking PPAR-gamma coactivator 1alpha. Proceedings of the National Academy of Science U. S. A. 103 (26), 10086-10091 (2006).
- Tavakoli, R., Nemska, S., Jamshidi, P., Gassmann, M., Frossard, N.
Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.
Nachdrucke und Genehmigungen
