Dieser Artikel stellt experimentelle Verfahren zur Beurteilung von Gedächtnisstörungen bei pilocarpine-induzierten epileptischen Mäusen vor. Dieses Protokoll kann verwendet werden, um die pathophysiologischen Mechanismen der Epilepsie-assoziierten kognitiven Abnahme zu studieren, die eine der häufigsten Komorbiditäten bei Epilepsie ist.
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Methodenartikel
Beurteilung der Gedächtnisfunktion bei Pilocarpin-induzierten epileptischen Mäusen
In diesem Artikel
Zusammenfassung
Zusammenfassung
Kognitive Beeinträchtigung ist eine der häufigsten Komorbiditäten bei der temporalen Lappenepilepsie. Um epilepsieassoziierte kognitive Abnahme in einem Tiermodell der Epilepsie zu rekapitulieren, haben wir pilocarpinebehandelte chronische epileptische Mäuse generiert. Wir präsentieren ein Protokoll für drei verschiedene Verhaltenstests mit diesen epileptischen Mäusen: neuartige Objektposition (NL), neuartige Objekterkennung (NO) und Mustertrennungstests (PS), um Lernen und Gedächtnis für Orte, Objekte bzw. Kontexte zu bewerten. Wir erklären, wie man die Verhaltensvorrichtungen einstellt und experimentelle Verfahren für die NL-, NO- und PS-Tests nach einem Offenen Feldtest durchführt, der die basalen Bewegungsaktivitäten der Tiere misst. Wir beschreiben auch die technischen Vorteile der NL-, NO- und PS-Tests im Vergleich zu anderen Verhaltenstests zur Beurteilung der Gedächtnisfunktion bei epileptischen Mäusen. Schließlich besprechen wir mögliche Ursachen und Lösungen für epileptische Mäuse, die während der Einarbeitungssitzungen keinen guten Kontakt zu den Objekten herstellen, was ein entscheidender Schritt für erfolgreiche Gedächtnistests ist. Daher bietet dieses Protokoll detaillierte Informationen darüber, wie Epilepsie-assoziierte Gedächtnisstörungen mit Mäusen bewertet werden können. Die NL-, NO- und PS-Tests sind einfache, effiziente Assays, die für die Bewertung verschiedener Arten von Gedächtnis bei epileptischen Mäusen geeignet sind.
Einleitung
Epilepsie ist eine chronische Erkrankung, die durch spontane wiederkehrende Anfälle1,2,3gekennzeichnet ist. Da sich wiederholende Anfälle strukturelle und funktionelle Anomalien im Gehirn verursachen können1,2,3, abnormale Anfallsaktivität kann zu kognitiver Dysfunktion beitragen, Die eine der häufigsten Epilepsie-assoziierten Komorbiditäten4,5,6. Im Gegensatz zu den chronischen Anfallsereig....
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Protokoll
Alle experimentellen Verfahren wurden von der Ethikkommission der Katholischen Universität Korea genehmigt und in Übereinstimmung mit dem National Institutes of Health Guide for the Care and Use of Laboratory Animals (NIH Publications No. 80-23) durchgeführt.
1. Neuartiger Objektpositionstest (NL)
- Bereiten Sie epileptische C57BL/6 oder transgene Mäuse 4-6 Wochen nach Derphäapin-Injektion vor.
HINWEIS: Akute Anfälle wurden durch intraperitoneale (IP) Pilokarininjektion induziert, nach dem Protokoll, das in unserem vorherigen Bericht14beschrieben wurde. - Übertragen Sie die epileptischen Mäuse aus ....
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Ergebnisse
Abbildung 1zeigt einen allgemeinen Versuchsplan und ein allgemeines Setup für die Bewertung der kognitiven Funktion. Sechs Wochen nach der Einführung von pilocarpine-induzierten akuten Anfällen wurden Mäuse den NL-, NO- und PS-Tests in dieser Reihenfolge unterzogen, die durch 3 Tage Ruhezeiten zwischen den Tests getrennt waren (Abbildung 1A). Für den NL-Test wurden während der Einarbeitungssitzung (F1) zwei identische Objekte im offenen Feld platziert, und am nä.......
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Diskussion
Diese Arbeit beschreibt experimentelle Verfahren zur Bewertung der kognitiven Funktion bei Mäusen mit chronischer Epilepsie. Viele verschiedene Verhaltenstestparadigmen werden verwendet, um Lern- und Gedächtnisfunktionen bei Mäusen18zu bewerten. Das Morris-Wasserlabyrinth, das Radialarmlabyrinth, das Y-Labyrinth, die kontextbezogene Angstkonditionierung und objektbasierte Tests sind die am häufigsten verwendeten Verhaltenstests und liefern zuverlässige Ergebnisse. Unter ihnen sind die NL-, NO- und.......
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Offenlegungen
Die Autoren haben nichts zu verraten.
Danksagungen
Wir danken Dr. Jae-Min Lee für seine technische Unterstützung. Diese Arbeit wurde von der National Research Foundation of Korea (NRF) Von der koreanischen Regierung finanziert (NRF-2019R1A2C1003958, NRF-2019K2A9A2A08000167).
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Materialien
| Name | Unternehmen | Katalognummer | Kommentare |
|---|---|---|---|
| 1 ml Spritze | Sung-shim | Verwenden Sie es mit der 26- oder 30-Gauge-Nadel | |
| 70% Ethanol | Duksan | UN1170 | Spray zur Reinigung der Box und der Gegenstände |
| schwarzer Vorhang | Zur Vermeidung unnötiger visueller Hinweise | ||
| Cresylviolett | Sigma | C5042 | Für Kryotome mit Kresylviolett-Färbung |
| Leica | E21040041 | Für Gewebe Trennen | |
| doppelseitiges Klebeband | Für die feste Platzierung der Objekte | ||
| DPX Montagemedium Sigma | 06522 | ||
| Ethanol Serie | Duksan | UN1170 | Make 100%, 95%, 90%, 80%, 70% Ethanol |
| Lösungen Bodenplatte mit schmalen Gittermustern | Leehyo-bio | Verhaltensexperimentiergerät, Plattengröße: 42,5 x 42,5 x 0,5 cm, Rastergröße: 2,75 x 2,75 cm | |
| Bodenplatte mit breiten Gittermustern | Leehyo-bio | Behavioral Experiment Equipment, Plattengröße: 42,5 x 42,5 x 0,5 cm, Rastergröße: 5,5 x 5,5 cm | |
| Illuminometer | TES Electrical Electronic Corp. | 1334A | Zur Messung der Raumbeleuchtung (60 Lux) |
| Intensivstation | Thermocare | #W-1 | |
| Ketaminhydrochlorid | Yuhan | 7003 | Zur Betäubung der Maus für die transkardiale Perfusion |
| LED-Lampe | Lungo | P13A-0422-WW-04 | Beleuchtung für die verhaltensbezogenen |
| Testraumobjekte | Gummipuppe, 50 ml Kunststofftube, Coplin-Glas aus Glas, T-Flasche aus Kunststoff, Glasflasche | ||
| offene Feldbox | Leehyo-bio | Verhaltensexperimentiergerät, Größe: 44 x 44 x 31 cm | |
| Papiertuch | Yuhan-Kimberly | 47201 | Zum Trocknen von offenen Feldkästen und Gegenständen |
| verwenden Paraformaldehyd | Merck Millipore | 104005 | 4% ige Lösung |
| herstellen Pilocarpinhydrochlorid | Sigma | P6503 | |
| Lineal | Verwenden Sie die Lokalisierung der Objekte in der offenen Feldbox | ||
| Scopolamin Methylnitrat | Sigma | S2250 | Make 10X Stock |
| Smart System 3.0 | Panlab | Video Tracking System | |
| Stoppuhr | Junso | JS-307 | Für die Messung der explorativen Aktivitäten von Mäusen |
| Saccharose | Sigma | S9378 | Für die Kryoprotektion von Gewebeschnitten |
| Terbutalin-Hemisulfat-Salz | Sigma | T2528 | Machen Sie 10X Stock-Videokamera |
| (CCD-Kamera) | Vision | VCE56HQ-12 | Platzieren Sie die Kamera direkt über der offenen Feldbox |
| Xylazin (Rompun) | Bayer Korea | KR10381 | Verwenden Sie, um die Maus für die transkardiale Perfusion zu betäuben |
| Xylol Duksan | UN1307 | Für Kresylviolett-Färbung |
Referenzen
- Chang, B. S., Lowenstein, D. H. Mechanisms of disease - Epilepsy. New England Journal of Medicine. 349 (13), 1257-1266 (2003).
- Scharfman, H. E. The neurobiology of epilepsy. Current Neurology and Neuroscience Report. 7 (4), 348-354 (2007).
- Rakhade, S. N., Jensen, F. E. ....
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Nachdrucke und Genehmigungen
