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Research Article
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Erratum Notice
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Retraction Notice
The article Assisted Selection of Biomarkers by Linear Discriminant Analysis Effect Size (LEfSe) in Microbiome Data (10.3791/61715) has been retracted by the journal upon the authors' request due to a conflict regarding the data and methodology. View Retraction Notice
Dieses Protokoll ermöglicht eine effiziente Erfassung experimenteller Hochgeschwindigkeitsbilder von Flüssigkeitstropfeneinschlägen und eine schnelle Analyse dieser Daten in Batches. Um diese Prozesse zu optimieren, beschreibt die Methode, wie Geräte kalibriert und eingerichtet, eine geeignete Datenstruktur generiert und ein Bildanalyseskript bereitgestellt wird.
Experimentelle Untersuchungen von Flüssigkeitstropfeneinschlägen auf Oberflächen sind aufgrund der vielzahl möglicher experimenteller Parameter wie Materialeigenschaften, Aufprallbedingungen und experimentelle Konfigurationen oft in ihrem Umfang eingeschränkt. Zusammen mit dieser Verbindung werden Falleinschläge oft mit datenreicher Hochgeschwindigkeitsfotografie untersucht, so dass es schwierig ist, viele Experimente detailliert und zeitnah zu analysieren. Ziel dieser Methode ist es, eine effiziente Untersuchung von Tröpfcheneinschlägen mit Hochgeschwindigkeitsfotografie durch einen systematischen Ansatz zu ermöglichen. Das Gerät wird ausgerichtet und kalibriert, um Videos zu erstellen, die mit einem benutzerdefinierten Bildverarbeitungscode genau verarbeitet werden können. Darüber hinaus gewährleisten die hier beschriebenen Dateistruktur-Setups und -Workflows Effizienz und eine klare Organisation der Datenverarbeitung, die während des Labors des Forschers durchgeführt wird. Die Bildverarbeitungsmethode extrahiert die digitalisierte Umrisslinie des einwirkenden Tröpfchens in jedem Bild des Videos, und verarbeitete Daten werden bei Bedarf zur weiteren Analyse gespeichert. Das Protokoll geht davon aus, dass ein Tröpfchen vertikal unter der Schwerkraft freigesetzt wird und der Aufprall von einer Kamera aufgezeichnet wird, die von Seite an betrachtet wird, wobei der Tropfen mit Schattengraphie beleuchtet wird. Viele ähnliche Experimente, die bildanalyse von Hochgeschwindigkeitsereignissen beinhalten, könnten mit geringfügiger Anpassung an das verwendete Protokoll und die verwendete Ausrüstung angegangen werden.
Flüssigkeitstropfeneinschläge auf Oberflächen sind sowohl für das Verständnis grundlegender Phänomene1 als auch für industrielle Prozesse2von großem Interesse. Tropfeneinwirkungen werden seit über 100 Jahren untersucht3, aber viele Aspekte sind noch nicht vollständig untersucht. Hochgeschwindigkeitsfotografie wird fast überall für Untersuchungen von Tropfenschlägen4 verwendet, da sie umfangreiche, zugängliche Daten liefert, die analytische Messungen mit guter Zeitauflösung ermöglichen. Die Ergebnisse eines Tropfenschlags auf einer festen Oberfläche5,6,7 reichen von einfacher Ablagerung bis hin zum Spritzen8. Auswirkungen auf superhydrophobe Oberflächen werden oft untersucht, da sie besonders interessante Ergebnisse erzeugen können, einschließlich Tropfenspringen9,10,11,12. Das hier beschriebene Protokoll wurde entwickelt, um Wassertropfeneinschläge auf Polymeroberflächen mit mikroskaliger Musterung zu untersuchen, insbesondere den Einfluss des Musters auf die Tropfenschlagergebnisse13,14.
Das Ergebnis eines Drop-Impact-Experiments kann durch eine Vielzahl möglicher Variablen beeinflusst werden. Die Größe und Geschwindigkeit des Tropfens kann variieren, zusammen mit Flüssigkeitseigenschaften wie Dichte, Oberflächenspannung und Viskosität. Der Tropfen kann entweder Newtonian15 oder nicht-Newtonian16sein. Es wurde eine Vielzahl von Schlagflächen untersucht, darunterflüssige 7,17, feste18und elastische19 Oberflächen. Verschiedene mögliche experimentelle Konfigurationen wurden zuvor von Rein et al.17beschrieben. Das Tröpfchen kann verschiedene Formen annehmen. Es kann oszillierend sein, drehen oder in einem Winkel zur Oberfläche aufpralln. Die Oberflächenstruktur und Umgebungsfaktoren wie die Temperatur können variieren. All diese Parameter machen das Feld der Tröpfcheneinschläge extrem breit gefächert.
Aufgrund dieser großen Palette von Variablen beschränken sich Studien über dynamische Flüssigkeitsbenetzungsphänomene oft darauf, sich auf relativ spezifische oder enge Themen zu konzentrieren. Viele dieser Untersuchungen verwenden eine moderate Anzahl von Experimenten (z. B. 50 bis 200 Datenpunkte), die aus manuell verarbeiteten Hochgeschwindigkeitsvideos10,20,21,22gewonnen werden. Die Breite solcher Studien wird durch die Menge der Daten begrenzt, die der Forscher in einem angemessenen Zeitraum erhalten kann. Die manuelle Verarbeitung von Videos erfordert, dass der Benutzer sich wiederholende Aufgaben ausführt, wie z. B. die Messung des Durchmessers von Schlagtropfen, die häufig mit der Verwendung von Bildanalysesoftware erreicht werden (Fidschi23 und Tracker24 sind beliebte Optionen). Die am weitesten verbreitete Messung zur Charakterisierung von Tropfenschlägen ist der Durchmesser eines Streutropfens25,26,27,28.
Aufgrund von Verbesserungen in der Bildverarbeitung beginnen automatische computergestützte Methoden, die Effizienz der Datenerfassung zu verbessern. So stehen beispielsweise Bildanalysealgorithmen zur automatischen Messung des Kontaktwinkels29 und der Oberflächenspannung mit der Pendeltropfenmethode30 zur Verfügung. Viel größere Effizienzgewinne können für die Hochgeschwindigkeitsfotografie von Tropfenschlägen erzielt werden, die Filme produziert, die aus vielen Einzelbildern für die Analyse bestehen, und in der Tat haben einige neuere Studien begonnen, automatisierte Analyse15,18zu verwenden, obwohl sich der experimentelle Workflow nicht eindeutig geändert hat. Weitere Verbesserungen im experimentellen Design für Tropfenschlagexperimente ergeben sich aus Fortschritten in handelsüblichen LED-Lichtquellen, die mit Hochgeschwindigkeitskameras über die Schattengraphentechnik31,32,33,34gekoppelt werden können.
In diesem Artikel wird eine standardisierte Methode zum Erfassen und Analysieren von Drop Impact-Filmen beschrieben. Das vorrangige Ziel besteht darin, eine effiziente Sammlung großer Datensätze zu ermöglichen, die im Allgemeinen für die Vielzahl der oben beschriebenen Drop-Impact-Studien nützlich sein sollten. Mit dieser Methode kann die zeitaufgelöste, digitalisierte Umrisslinie eines einwirkenden Tropfens für 100 Experimente pro Tag erhalten werden. Die Analyse berechnet automatisch die Tröpfchenschlagparameter (Größe, Geschwindigkeit, Weber- und Reynolds-Zahlen) und den maximalen Streudurchmesser. Das Protokoll ist direkt anwendbar für alle grundlegenden Tröpfchenparameter (einschließlich Flüssigkeit, Größe und Aufprallgeschwindigkeit), Substratmaterial oder Umgebungsbedingungen. Studien, die eine große Bandbreite experimenteller Parameter scannen, können in relativ kurzer Zeit durchgeführt werden. Die Methode fördert auch hochauflösende Studien, die einen kleinen Bereich von Variablen abdecken, mit mehreren Wiederholungsexperimenten.
Die Vorteile dieser Methode bieten das standardisierte Experiment sowie eine übersichtliche Datenstruktur und ein klarer Workflow. Das experimentelle Setup erzeugt Bilder mit konsistenten Eigenschaften (Räumundlich und Kontrast), die an einen benutzerdefinierten Bildanalysecode (als ergänzende Codierungsdatei, die auf MATLAB ausgeführt wird) übergeben werden können, um aufgezeichnete Videos unmittelbar nach dem Experiment schnell verarbeiten zu können. Die Integration von Datenverarbeitung und -erfassung ist ein Hauptgrund für die verbesserte Gesamtgeschwindigkeit der Datenerfassung. Nach einer Sitzung der Datenerfassung wurde jedes Video verarbeitet und alle relevanten Rohdaten zur weiteren Analyse gespeichert, ohne dass das Video erneut aufbereitet werden muss. Darüber hinaus kann der Anwender die Qualität jedes Experiments unmittelbar nach der Durchführung visuell überprüfen und das Experiment bei Bedarf wiederholen. Ein erster Kalibrierungsschritt stellt sicher, dass der Versuchsaufbau zwischen verschiedenen Laborsitzungen mit guter Präzision reproduziert werden kann.
Es wird davon ausgegangen, dass der Benutzer zur Implementierung dieser Methode Zugriff auf eine Hochgeschwindigkeitskamera hat, die so angeordnet ist, dass sie die Oberfläche aus einem horizontalen (Side-on)-Sichtbild abstellt. Eine schematische Darstellung dieser Anordnung ist in Abbildung 1dargestellt, einschließlich der Definition kartesischer Achsen. Das System sollte in der Lage sein, kamera und sample präzise in drei Dimensionen (X, Y und Z) zu positionieren. Zur Beleuchtung des Tröpfchens wird eine Schattengraphenmethode implementiert, die entlang des optischen Pfades der Kamera platziert wird. Das System sollte ein hochwertiges Gleichstrom-LED-Beleuchtungssystem (einschließlich einer kollimierenden Kondensatorlinse) verwenden, das in X- und Z-Richtung bewegt werden kann, um den optischen Pfad an der Kamera auszurichten. Es wird auch angenommen, dass der Benutzer Zugang zu einer Spritzenpumpe hat, die er programmieren kann, um einzelne Tröpfchen des gewünschten Volumens zu produzieren, wenn er mit einer bestimmten Nadel35verbunden ist. Das Tröpfchen fällt unter die Schwerkraft, so dass seine Aufprallgeschwindigkeit durch die Position der Nadel über der Oberfläche gesteuert wird. Obwohl diese Einrichtung recht allgemein ist, listet die Werkstofftabelle bestimmte Geräte auf, die verwendet werden, um die repräsentativen Ergebnisse zu erhalten, und stellt einige potenzielle Einschränkungen fest, die durch die Auswahl der Ausrüstung auferlegt werden.

Abbildung 1: Schematische Darstellung des minimalen Versuchsaufbaus. Eine Hochgeschwindigkeitskamera ist so positioniert, dass Bildtröpfchen vertikal von seiteweise auf eine Probe einwirken. Eine LED-Lichtquelle ist an der Sichtlinie der Kamera für die Schattengraphie ausgerichtet. Für die individuelle Tröpfchenproduktion wird eine Nadel verwendet, und kartesische Achsen werden definiert. Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.
Die Methodenbeschreibung konzentriert sich auf die Messung der Kanten von Flüssigkeitströpfchen beim Fallen und Aufprall. Bilder werden aus dem häufig verwendeten Side-on-Sichtpunkt erhalten. Es ist möglich, die Streutröpfchen sowohl aus Seiten- als auch von Bottom-up-Ansichten mit zwei Hochgeschwindigkeitskameras13,14zu untersuchen, aber die Bottom-up-Ansicht ist bei undurchsichtigen Materialien nicht möglich, und eine Ansicht von oben nach unten führt zu Ausrichtungskomplikationen. Der grundlegende Workflow könnte verwendet werden, um die Forschung für kleine Objekte (2 bis 3 mm Durchmesser), die Oberflächen beeinflussen, zu verbessern, und er könnte für größere oder kleinere Objekte mit weiteren geringfügigen Änderungen verwendet werden. Verbesserungen und Alternativen zum Versuchsaufbau und zur Versuchsmethode werden im Diskussionsteil weiter geprüft.
1. Einrichten der Hochgeschwindigkeitskamera



2. Durchführung von Experimenten
3. Analyse von Rohdaten
Die Umwandlung von Entfernungen, die von Bildern in Pixel in Millimeter gemessen werden, wird mit einem bekannten Referenzquadrat erreicht. Dieses Quadrat muss im FOV der Kamera und im Fokus(Abbildung 2A) ungehindert sein. Ein falscher Fokus des Referenzquadrats (Abbildung 2B) führt zu einem systematischen Fehler in den berechneten Variablen, z. B. Geschwindigkeit. Um den Fehler bei der Berechnung des Umrechnungsfaktors zu reduzieren, sollte das Referenzquadrat so viel wie möglich vom FOV abdecken. Die Seitenlänge des Quadrats sollte angesichts der Auflösungsgrenze der Kamera so hoch wie möglich bekannt sein.
Die Tröpfchenidentifikationssoftware beruht auf der Oberfläche der Probe, die der Kamera horizontal präsentiert wird, wie in Abbildung 2Cdargestellt. Flächen, die gebogen oder schlecht aufgelöst sind (Abbildung 2D), führen zu Bildverarbeitungsfehlern. Die Software kann verwendet werden, um Tröpfchen zu analysieren, die flache Oberflächen betreffen, die nicht horizontal sind, solange die Oberflächenkante einen scharfen Kontrast zum Hintergrund erzeugt.
Um sicherzustellen, dass die gesamte Tröpfchenausbreitung von der Software verfolgt wird, sollte das Tröpfchen in der Mitte der Probe landen (Abbildung 2E). Wenn das System falsch ausgerichtet ist, kann das Tröpfchen von der mittleren Position driften und azentrisch sein (Abbildung 2F). Wenn das Tröpfchen nicht im Fokus ist, ist die berechnete Größe falsch. Dieser Effekt wird häufig durch eine schlechte Ausrichtung des Systems verursacht, das verwendet wird, um die Nadel vertikal von der Oberfläche weg zu bewegen, was eine Drift in der Aufprallposition als Funktion der Höhe erzeugt. Es wird vorgeschlagen, dass der Benutzer ein optisches Steckbrettsystem (oder ähnliches) implementiert, um eine parallele und senkrechte Ausrichtung zu gewährleisten.
Um sicherzustellen, dass die abgebildeten Kanten des aufprallenden Tröpfchens scharf erscheinen, wird empfohlen, die kürzeste Belichtungszeit mit der verfügbaren Lichtquelle zu verwenden (Abbildung 2G). Eine falsche Ausrichtung des Beleuchtungspfades relativ zur Kamera führt häufig zur Einstellung anderer Einstellungen wie Kameraöffnung und Belichtungszeit. Dies erzeugt eine unscharfe Kante zum reisenden Tröpfchen (Abbildung 2H)

Abbildung 2: Häufige Probleme bei einer falschen Kalibrierung des Systems. (A) Kalibrierquadrat richtig ausgerichtet und fokussiert. (B) Kalibrierquadrat abl. (C) Die Probenoberfläche ist horizontal und bietet einen hohen Kontrast zwischen Probenoberfläche und Hintergrund. (D) Die Probe befindet sich in einem Winkel zur Kamera und erzeugt eine reflektierende Oberfläche. (E) Droplet landet in der Mitte der Probe in der Fokusebene. (F) Droplet landet aus der Mitte und ist aufgrund der verwendeten breiten Blende nicht im Fokus. (G) Ein Tröpfchen wird aufgrund einer kurzen Belichtungszeit (10 s) mit scharfen Kanten abgebildet. (H) Suboptimale Beleuchtung und eine längere Belichtungszeit (99 s) erzeugen Bewegungsunschärfe. Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.
Falsche Beleuchtung und Ausrichtung der Probe können Blendung und Schatten in den aufgezeichneten Bildern erzeugen. Diese produzieren oft Artefakte in den Bildverarbeitungsphasen, was die Anzahl der gesammelten Datenpunkte in guter Qualität reduzieren kann. Blendung ist bei transparenten Flüssigkeiten üblich, wenn der Beleuchtungspfad nicht horizontal ausgerichtet ist. Die Software sollte in der Lage sein, die gesamte Umrisslinie des Tröpfchens in den Videobildern zu verfolgen (Abbildung 3A). Wenn die Ablaufverfolgung nicht abgeschlossen ist, sind die Messwerte wie die Länge des Streutröpfchens falsch (Abbildung 3B).

Abbildung 3: Länge eines aufprallenden Tröpfchens als Funktion der Videorahmennummer (Aufprallrahmen = 0). Jeder blaue Datenpunkt entspricht den Einsetbildern. (A) Korrekte Beleuchtung ermöglicht es der Software, die gesamte Umrisslinie des Tröpfchens (gelbe Linie) zu verfolgen. Kontaktpunkte (grüne Kreuze) werden korrekt identifiziert, und die aufgezeichnete Länge des streunenden Tröpfchens ist eine glatte Funktion der Rahmennummer. (B) Schlechte Beleuchtung erzeugt Blendung auf der Flüssigkeit und der linke Rand des Tröpfchens wird nicht richtig zurückverfolgt. Die aufgezeichnete Länge des streunenden Tröpfchens zeigt Ungenauigkeiten in den Daten. Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.
Ergänzende Codierungsdatei. Bitte klicken Sie hier, um diese Datei herunterzuladen.
Die Autoren haben nichts zu verraten.
Dieses Protokoll ermöglicht eine effiziente Erfassung experimenteller Hochgeschwindigkeitsbilder von Flüssigkeitstropfeneinschlägen und eine schnelle Analyse dieser Daten in Batches. Um diese Prozesse zu optimieren, beschreibt die Methode, wie Geräte kalibriert und eingerichtet, eine geeignete Datenstruktur generiert und ein Bildanalyseskript bereitgestellt wird.
Diese Arbeit wurde vom Marsden Fund unterstützt, der von der Royal Society of New Zealand verwaltet wird.
| 24 Gauge Nadel mit stumpfer Spitze | Sigma Aldrich | CAD7930 | |
| 4 x 4 mm Ausrichtungsquadrat (Chrom auf Glas) | Hergestellt im eigenen Haus mit Lithographie. | ||
| 5 ml Spritze | ~ | ~ | Sollte mit der Spritzenpumpe kompatibel sein. Leur Lock-Konnektoren verbinden die Spritze mit der Nadel. |
| Asphärische Kondensorlinse | Thor Labs | ACL5040U | Bestimmt die Strahlbreite, die das Sichtfeld abdecken soll. |
| Cat 5e Ethernet-Kabel | ~ | ~ | Eine schnelle Datenverbindung zwischen der Hochgeschwindigkeitskamera und dem PC, geeignet für Photron-Kameras. |
| Software zur Analyse der Tröpfchenwirkung | ~ | ~ | Wird als ergänzende Codierungsdatei bereitgestellt. Gliederungsdaten werden in .mat-Dateien gespeichert. Berechnungen werden als .csv Dateien ausgegeben. |
| Frontfläche Hochleistungs-LED | Luminus | CBT-40-G-C21-JE201 LED | Die separate Stromversorgung sollte Gleichstrom sein, um ein Flackern zu vermeiden. |
| Hochgeschwindigkeitskamera | Photron | Photron SA5 | Arbeitet in der Regel mit ~10.000 fps für Fallstöße. |
| Die Hochgeschwindigkeitskamera-Software | Photron | Photron Fastcam Viewer | Protocol geht davon aus, dass die Kamera über einen Endauslöser verfügt, dass Filmdateien in .avi Format und Screenshots in .tif Format in einem bestimmten Ordner gespeichert werden können und dass Filme zugeschnitten werden können. |
| Lineare Translationstische | Thor Labs | DTS25/M | Wird zur Positionierung der LED, der Probe und der Kamera verwendet. |
| Makro Kameraobjektiv mit F-Mount | Nikon | Nikkor 105mm f/2.8 Objektiv | Die Wahl des Objektivs bestimmt das Sichtfeld. |
| PC mit Matlab 2018b | Matlab | ~ | PC-Rechenleistung und RAM können die Protokollgeschwindigkeit und damit die Effizienz beeinflussen. |
| Polydimethylsiloxan (PDMS) | Dow | SYLGARD™ 184 Silikonelastomer-Substrate | ,die mit einem Verhältnis von 10:1 (Monomer:Vernetzer) hergestellt werden. |
| PTFE-Schlauch | ~ | ~Spritzenpumpe | |
| Pump Systems Inc | NE-1000 | Protokoll geht davon aus, dass dies so eingestellt werden kann, dass ein bestimmtes Volumen ausgegeben wird. |