Methodenartikel

Ein Mausmodell von unvollständig resected Soft Tissue Sarcoma for Testing (Neo)adjuvante Therapien

DOI:

10.3791/60882

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28. Juli 2020

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1School of Biomedical Sciences, University of Western Australia, 2Telethon Kids Institute, University of Western Australia, 3College of Science, Health, Engineering and Education, Murdoch University

In diesem Artikel

Zusammenfassung

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In diesem Protokoll beschreiben wir ein Mausmodell der unvollständigen chirurgischen Resektion von Weichteilsarkom zum Testen (neo)adjuvante Therapien.

Zusammenfassung

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Chirurgie ist oft die erste Behandlung für viele solide Tumoren. Lokale Rückfälle treten jedoch häufig nach primärer Tumorresektion auf, trotz adjuvanten oder neoadjuvanten Therapien. Dies tritt auf, wenn chirurgische Ränder nicht ausreichend tumorfrei sind, was zu Restkrebszellen führt. Aus biologischer und immunologischer Sicht ist die Operation kein Nullereignis; die Wundheilungsumgebung ist dafür bekannt, sowohl pro- als auch antitumorigenice Wege zu induzieren. Infolgedessen sollten präklinische Modelle für die Arzneimittelentwicklung, die darauf abzielen, einen lokalen Rückfall zu verhindern, eine chirurgische Resektion bei der Prüfung neuer (neo-)adjuvanten Therapien beinhalten, um die klinischen Einstellungen bei Patienten zu modellieren, die mit einer Operation behandelt wurden.

Hier beschreiben wir ein Mausmodell der unvollständigen chirurgischen Resektion von WEHI 164 Weichteilsarkom, das das Testen von (neo)adjuvanten Therapien bei der Einstellung einer Wundheilungsreaktion ermöglicht. In diesem Modell werden 50% oder 75% des Tumors entfernt, so dass einige Krebsgewebe in situ zurückbleiben, um grobe Resterkrankungen nach der Operation im klinischen Umfeld zu modellieren. Dieses Modell ermöglicht das Testen von Therapien im Rahmen der Operation unter Berücksichtigung der Wundheilungsreaktion, die die Wirksamkeit von (neo)adjuvanten Behandlungen beeinflussen kann. Die unvollständige chirurgische Resektion führt zu einem reproduzierbaren Nachwachsen des Tumors bei allen Mäusen in Ermangelung einer adjuvanten Therapie. Adjuvante Behandlung mit Checkpoint-Blockade führt zu reduziertem Tumorwachstum. Dieses Modell eignet sich somit für die Erprobung von Therapien im Rahmen der Entschärbungschirurgie und der damit verbundenen Wundheilungsreaktion und kann auf andere Arten von festem Krebs ausgedehnt werden.

Einleitung

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Chirurgie bleibt die Hauptbehandlungsoption für viele solide Tumoren1, einschließlich Weichteilsarkom2,3. Trotz Verbesserungen in der Krebschirurgie Und Kombinationen mit (neo)adjuvanten Therapien besteht nach wie vor ein hohes Risiko für Krebsrückfälle und Metastasen nach primärer Tumorresektion4,5. Bei Weichteilsarkomen treten Rückfälle besonders lokaregional am Operationsort auf, was zu erhöhter Morbidität und Mortalität führt. Im klinischen Umfeld kann es schwierig sein, genügend ausreichende Margen zu erhalten (z. B. aufgru....

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Protokoll

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Die in diesen Experimenten verwendeten Tiere wurden aus dem Animal Resource Centre (Perth, Western Australia) gewonnen. Die Tiere wurden am Harry Perkins Institute of Medical Research Bioresources North Facility (Perth, Western Australia) unter standard pathogenfreien Bedingungen gehalten. Alle Experimente wurden nach dem Protokoll durchgeführt, das vom Harry Perkins Institute of Medical Research Animal Ethics Committee genehmigt wurde. IN diesen Experimenten wurden BALB/c-Mäuse im Alter von 8-12 Wochen eingesetzt. Die WEHI 164 Fibrosarkom-Zelllinie wurde von CellBank Australia (Westmead, NSW) gewonnen.

1. Impfung von Zellen

  1. Vorbe....

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Ergebnisse

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Tumorwachstum bis zu einer Größe von 50 mm2 ist eine ideale Größe für partielle Ablagerungen. Die unvollständige chirurgische Resektion von 50 mm2 Tumoren führt zu 100% (n=5) reproduzierbarem Nachwachsen der Tumoren in Abwesenheit einer adjuvanten Immuntherapie (Abbildung 4A). Als nächstes verwendeten wir das Modell, um adjuvante Immuntherapien mit Antikörpern gegen Checkpoint-Moleküle Cytotoxic T Lymphozyten Associated .......

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Diskussion

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Wir bieten ein Protokoll für ein Mausmodell der unvollständigen chirurgischen Resektion von Weichteilsarkom, um perioperative Therapien zu testen. Wir standardisierten auch den chirurgischen Schnitt, um die Beurteilung der Wundheilung zwischen Mäusen nach der Behandlung zu ermöglichen.

Die Tumorplatzierung ist ein wichtiger Bestandteil dieses Protokolls. Wir haben uns für ein subkutanes Tumormodell entschieden, um einen einfachen chirurgischen Zugang zur Tumorstelle und die Verabreichung lokal.......

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Offenlegungen

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Keine Angaben.

Danksagungen

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Diese Arbeit wird durch Zuschüsse von der Socke es an Sarcoma unterstützt! Foundation, die Australian and New Zealand Sarcoma Association, die Children es Leukemia & Cancer Research Foundation und Perpetual Philanthropy. W.J.L wird von einem Simon Lee Fellowship und einem Forschungsstipendium des National Health and Medical Research Council und des Cancer Council WA unterstützt.

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Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien
NameUnternehmenKatalognummerKommentare
26 gauge 0,5 mL InsulinspritzeBecton Dickinson, Australien326769Keine
2-MercaptoethanolLife Technologies Australia Pty Ltd21985023Keine
Anässetische GasmaschineDarvall Vet, AustralienArtikelnummer: 2848Keine
Anti-CTLA-4BioXcell, USABE0164Keine
Anti-PD-1BioXcell, USABP0273Keine
Buprenorphinhydrochlorid-Injektion, 0,3 mg/mlRB Gesundheitswesen UK Limited, UK55175Verschreibungspflichtige Bestellung
Chlorhexidin Chirurgisches Peeling 4%Perigo Australien, AustralienCHL01449F(PeelingKeine
Fötales RinderserumCellSera, AustralienAU-FBS-PGKeine
Pinzette Fein 10,5 cmChirurgisches Haus, WestaustralienCC74110Keine
Pinzette Fein 12 cm GezahntChirurgisches Haus, WestaustralienCC74212Keine
Zange Hals 14 cmChirurgisches Haus, WestaustralienCD01114Keine
HeizkammerDatesand Ltd, UKMini-ThermacageKeine
HEPES (1M)Life Technologies Australia Pty Ltd15630080Keine
IsofluranHenry Schein Animal Health, AustraliaArtikelnummer: 29405Rezeptbestellung
Gleitende AugensalbeAlconn/aKeine
Penicillin / Streptomycin 1000XLife Technologies Australia Pty Ltd15140122Keine
Phosphat gepufferte Lösung 10xLife Technologies Australia Pty Ltd70013-032Keine
Reflex 7mm ClipsAble wissenschaftlich, AustralienAS59038Keine
Reflex 7mm Wound Clip ApplikatorFähig wissenschaftlich, AustralienAS59036Keine
Reflex Wound Clip RemoverFähig wissenschaftlich, AustralienAS59037Keine
Nagetier Qube Anästhesie AtemkreislaufDarvall Vet, Australien#7885Keine
Roswell Park Memorial Institute (RPMI) 1640 Medium + L-GlutaminLife Technologies Australia Pty Ltd21870092Keine
Schere Iris STR 11 cmOP-Haus, WestaustralienKF3211Keine
Schere Iris STR 9 cmOP-Haus, WestaustralienJH4209Keine
Kleine InduktionskammerDarvall Vet, AustralienArtikelnummer: 9630Keine
TrypLE express 1xLife Technologies Australia Pty Ltd12604-021Keine
Germinator 500 Glasperlen-SterilisatorCellpoint Scientific Inc., USA5-1460-DK

Referenzen

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  1. Orosco, R. K., et al. Positive Surgical Margins in the 10 Most Common Solid Cancers. Scientific Reports. 8 (1), 5686(2018).
  2. Haas, R. L., et al. Perioperative Management of Extremity Soft Tissue Sarcomas. Journal of Clinical Oncology. 36<....

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Schlagwörter

Unvollst ndige ResektionTumor DebulkingWundheilungadjuvante TherapieCheckpoint BlockadeAnti CTLA 4Anti PD 1Durchflusszytometrie

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