Das Ziel dieser Technik ist die ex vivo Visualisierung von pulmonalen arteriellen Netzwerken von frühpostnatalen und erwachsenen Mäusen durch Lungeninflation und Injektion einer radio-opaque polymerbasierten Verbindung über die Lungenarterie. Mögliche Anwendungen für gegossenes Gewebe werden ebenfalls diskutiert.
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Methodenartikel
Vaskuläres Gießen von Erwachsenen und frühpostnatalen Mauslungen für Micro-CT Imaging
In diesem Artikel
Zusammenfassung
Zusammenfassung
Blutgefäße bilden komplizierte Netzwerke im dreidimensionalen Raum. Daher ist es schwierig, visuell zu schätzen, wie vaskuläre Netzwerke interagieren und sich verhalten, indem sie die Oberfläche eines Gewebes beobachten. Diese Methode bietet eine Möglichkeit, die komplexe dreidimensionale Gefäßarchitektur der Lunge zu visualisieren.
Um dies zu erreichen, wird ein Katheter in die Lungenarterie eingeführt und die Vaskulatur wird gleichzeitig von Blut gespült und chemisch erweitert, um den Widerstand zu begrenzen. Die Lunge wird dann bei einem Standarddruck durch die Luftröhre aufgeblasen und die Polymerverbindung wird bei einer Standarddurchflussrate in das Gefäßbett infundiert. Sobald das gesamte arterielle Netzwerk gefüllt ist und geheilt werden kann, kann die Lungenvaskulatur direkt visualisiert oder auf einem Mikro-CT-Scanner abgebildet werden.
Wenn erfolgreich durchgeführt, kann man das lungenarteriende Netzwerk bei Mäusen vom frühen postnatalen Alter bis zu Erwachsenen zu schätzen wissen. Darüber hinaus kann diese Methode, während sie im pulmonalen Arterienbett demonstriert wird, auf jedes Gefäßbett mit optimierter Katheterplatzierung und Endpunkten angewendet werden.
Einleitung
Der Schwerpunkt dieser Technik liegt auf der Visualisierung der pulmonalen arteriellen Architektur mit einer polymerbasierten Verbindung bei Mäusen. Während umfangreiche Arbeiten an systemischen Gefäßbetten wie Gehirn, Herz und Niere1,2,3,4,5durchgeführt wurden, stehen weniger Informationen über die Vorbereitung und Füllung des lungenarterienartigen Netzwerks zur Verfügung. Das Ziel dieser Studie ist es daher, auf frühere Arbeiten6,7,
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Protokoll
Alle hier beschriebenen Methoden wurden vom Institutional Animal Care and Use Committee (ACUC) des National Heart Lung and Blood Institute genehmigt.
1. Vorbereitung
- Injizieren Sie die Maus intraperitoneal mit Heparin (1 Einheit/g Maus Körpergewicht) und lassen Sie es für 2 min ambulate.
- Euthanisieren Sie das Tier in einerCO2-Kammer.
- Ordnen Sie die Maus in einer Supine-Position auf einem chirurgischen Brett an und sichern Sie alle vier Gliedmaßen mit Klebeband am Brett. Verwenden Sie die Vergrößerung für die feine Sezierung.
2. Aussetzen von Lungen und Luftröhre
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Ergebnisse
Eine erfolgreiche Besetzung wird eine gleichmäßige Befüllung des gesamten Lungenarteriennetzes aufweisen. Wir zeigen dies in C57Bl/6J-Mäusen im Alter: Postnataler Tag P90 (Abbildung 4A), P30 (Abbildung 4B), P7 (Abbildung 4C) und P1 (Abbildung 4D). Durch die Steuerung der Durchflussrate und die visuelle Überwachung der Füllung in Echtzeit wurden zuverlässige Endpunkte der.......
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Diskussion
Diese Methode, die richtig ausgeführt wird, liefert eindrucksvolle Bilder von pulmonalen arteriellen Netzwerken, die Vergleich und Experimente in Nagetiermodellen ermöglichen. Mehrere kritische Schritte auf dem Weg sorgen für den Erfolg. Zunächst müssen die Ermittler das Tier in der Vorbereitungsphase heparinisieren, um zu verhindern, dass sich Blutgerinnsel in der Lungenvaskulatur und den Kammern des Herzens bilden. Dies ermöglicht den vollständigen arteriellen Transit von Polymerverbindungen. Zweitens, wenn Sie das Zwe.......
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Offenlegungen
Die Autoren haben nichts zu verraten
Danksagungen
Diese Forschung wurde teilweise durch das NHLBI Intramural Research Program (DIR HL-006247) unterstützt. Wir danken der NIH Mouse Imaging Facility für die Anleitung bei der Bildaufnahme und -analyse.
....Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.
Materialien
| Name | Unternehmen | Katalognummer | Kommentare |
|---|---|---|---|
| 1cc Spritze | Becton Dickinson | 309659 | |
| 20ml Glas Szintillation Fläschchen | Fisher | 03-340-25P | |
| 30G Nadel | Becton Dickinson | 305106 | |
| 50mL konische Röhrchen | Cornin | 352098 | Zum Aufbewahren und Scannen von Proben |
| 60cc Spritze | Becton Dickinson | 309653 | |
| 7-0 Seide Naht | Teleflex | 103-S | |
| Analyze 12.0 Software | AnalyzeDirect Inc. | N/A | Primärsoftware |
| Amira 6.7 Software | Thermo Scientific | N/A | Alternative Software |
| CeramaCut Schere 9cm | Fine Science Werkzeuge | 14958-09 | |
| Keramikbeschichtete gebogene Pinzette | Fine Science Werkzeuge | 11272-50 | |
| CO2-Tank | Robert's Oxygen Co. | n/a | |
| Dual-Spritzenpumpe | Cole Parmer | EW-74900-10 | |
| Dumont Mini-Pinzette | Fine Science Werkzeuge | 11200-14 | |
| Ethanol | Pharmco | 111000200 | |
| Formalin | Sigma - Life Sciences | HT501128 | |
| Gaze | Covidien | 441215 | |
| Hämostat | Fine Science Werkzeuge | 13013-14 | |
| Heparin (1000USP Einheiten/ml) | Hospira | NDC 0409-2720-01 | |
| Horos Software | Horos Project | N/A | Alternative Sofware |
| Induktionskammer | n/a | n/a | |
| Kimwipe | Fisher | 06-666 | faseroptisches Reinigungstuch |
| Beschriftungsband | Fisher | 15966 | |
| Magnetische Basis | Kanetec | N/A | |
| Micro-CT System | PerkinElmer | Quantum GX | |
| Microfil (Polymer Compound) | Flowech Inc. | Kit B - MV-122 | 8 Unzen MV-Verbindung; 8 Unzen Verdünnungsmittel; MV-Curing Agent |
| Micromanipulator | Stoelting | 56131 | |
| Monoject 1/2 ml Insulinspritze | Covidien | 1188528012 | |
| Octagon Pinzette Gerade Zähne | Fine Science Werkzeuge | 11042-08 | |
| Parafilm | Bemis company, Inc. | ||
| PE-10 Schlauch | Instech | BTPE-10 | |
| Phospahte gepuffert Kochsalzlösung | BioRad | #161-0780 | |
| Ringständer | Fisher | S13747 | Höhe 24in. |
| Natriumnitroprussid | sigma | 71778-25G | |
| Stahlplatte | N/A | N/A | 16 x 16 Zoll Fläche, 1/16 Zoll dick |
| Gerade Federschere | Fine Science Werkzeuge | 15000-08 | |
| SURFLO 24G Teflon IV Katheter | Santa Cruz Biotechnologie | 360103 | |
| Chirurgisches Brett | Fisher | 12-587-20 | Dies ist ein umgebauter Objektträgerhalter |
| Universal 3-Zacken Klemme | Fisher | S24280 | |
| Winged Inf. Set 25X3/4, 12" Schlauch | Nipro | PR25G19 | |
| Zeiss Stemi-508 Dissektions-Zielfernrohr | Zeiss | n/a |
Referenzen
- Vasquez, S. X., et al. Optimization of microCT imaging and blood vessel diameter quantitation of preclinical specimen vasculature with radiopaque polymer injection medium. PLoS One. 6 (4), 19099(2011).
- Hong, S. H., et al.
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Nachdrucke und Genehmigungen
