Vorbereitung der Stimmlippe der Ratte für neuromuskuläre Analysen

Zusammenfassung

Dieses Protokoll beschreibt Methoden zur Vorbereitung von Rattengespinkeln für histochemische neuromuskuläre Studien.

Zusammenfassung

Der Zweck dieses Tutorials ist es, die Vorbereitung der Rattengespinstfalte für histochemische neuromuskuläre Studien zu beschreiben. Dieses Protokoll beschreibt Verfahren für die Larynxdissektion von Ratten, das Schockgefrieren und die Kryosektion der Stimmlippen. Diese Studie beschreibt, wie man Stimmlippen sowohl in Längs- als auch in Querschnittsebene kryosektioniert. Eine Neuheit dieses Protokolls ist die Kehlkopfverfolgung während der Kryosektion, die eine genaue Identifizierung der intrinsischen Kehlkopfmuskulatur gewährleistet und die Wahrscheinlichkeit eines Gewebeverlusts verringert. Die Abbildungen zeigen die fortschreitende Kryosektion in beiden Ebenen. Neunundzwanzig Ratten-Hemi-Laryngen wurden kryosektiert und vom Aufkommen des Schilddrüsenknorpels bis zum Erscheinen des ersten Abschnitts verfolgt, der die volle Stimmlippe enthielt. Die volle Stimmlippe wurde für alle Tiere in beiden Ebenen visualisiert. Es gab eine hohe Variabilität im Abstand vom Auftreten des Schilddrüsenknorpels bis zum Auftreten der vollen Stimmlippe in beiden Ebenen. Das Gewicht korrelierte nicht mit der Tiefe der Kehlkopfmarkierungen, was darauf hindeutet, dass die individuelle Variabilität und andere Faktoren im Zusammenhang mit der Gewebepräparation für die hohe Variabilität des Auftretens von Landmarken während des Schneidens verantwortlich sein könnten. Diese Studie beschreibt eine Methodik und präsentiert morphologische Daten zur Vorbereitung der Stimmlippe der Ratte für histochemische neuromuskuläre Untersuchungen. Aufgrund der hohen individuellen Variabilität sollten Kehlkopfmarkierungen während der Kryosektion genau verfolgt werden, um eine Übersektion von Gewebe und Gewebeverlust zu verhindern. Die Verwendung einer konsistenten Methodik, einschließlich einer angemessenen Gewebevorbereitung und des Bewusstseins für Landmarken im Kehlkopf der Ratte, wird zu konsistenten Ergebnissen in allen Studien beitragen und neuen Forschern helfen, die daran interessiert sind, die Stimmlippe der Ratte als Modell zur Untersuchung der neuromuskulären Kehlkopfmechanismen zu verwenden.

Einleitung

Der Kehlkopf der Ratte ist ein etabliertes Modell zur Untersuchung struktureller und funktioneller neuromuskulärer Kehlkopfanpassungen an Entwicklung, Alterung, Krankheit und pharmakologische Wirkstoffe1,2,3,4,5. Die Konsistenz histologischer Methoden ist für diese Arbeit von entscheidender Bedeutung, da bei der Muskelvorbereitung und -analyse mehrere Feinheiten beteiligt sind, sowie Herausforderungen im Zusammenhang mit der Größe, Form und Topographie der in den Kehlkopfknorpeln eingekapselten

Protokoll

Diese Studie wurde in Übereinstimmung mit dem Institutional Animal Care and Use Committee der New York University School of Medicine durchgeführt.

1. Zerlegen Sie den Kehlkopf der Ratte

1. Euthanasierung der Ratte gemäß dem institutionell genehmigten Protokoll. Rasieren Sie den ventralen Hals vom Unterkiefer bis zum Manubrium und tupfen Sie ihn mit Alkohol ab, um eine Fellkontamination in den Gewebeproben zu verhindern.
2. Unter einem Sezierfernrohr mit 10-facher Vergrößerung wird der gesamte Kehlkopf ausgeschnitten, indem mit einem Skalpell ein Mittellinien-Halsschnitt erstellt wird, bis die Luftröhre freigelegt wird.
<....

Ergebnisse

Die repräsentativen Ergebnisse waren Teil einer laufenden Untersuchung der Auswirkungen von Stimmübungen auf das kehlkopfe neuromuskuläre System. Neunundzwanzig männliche Fischer 344/braune Wanderratten (12 9 Monate alt, 17 24 Monate alt) wurden gewogen und mit _{CO2-Inhalation} gefolgt von einer bilateralen Thorakotomie eingeschläfert.

Die Verfahren folgten dem skizzierten Protokoll zur Kennzeichnung von NMJs und Fasergröße der lateralen und medialen TA-Muskeln. Der Abstand zwischen K.......

Diskussion

Die Vorbereitung der Stimmlippen von Ratten für die neuromuskuläre Analyse kann verschiedene Herausforderungen mit sich bringen. Die Kehlkopfmuskulatur ist nicht nur klein und von Knorpel umgeben, was es schwierig macht, den Zielmuskel direkt zu extrahieren, sondern es wurde auch eine hohe Variabilität zwischen Tieren in der Tiefe der anatomischen Kehlkopfmarkierungen festgestellt. Für das Protokoll der Querschnittsebene des Muskels traten vollständige Stimmlippenabschnitte zwischen 21-85 Abschnitten (10 μm pro Abschnitt.......

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
2-Methylbutan-zertifizierte	Fisher Chemical	35514
Aluminiumfolie	Fisherbrand	1213101
Kryozange SS	Thermo Scientific	11679123
Kryostat	Leica Biosystems	CM3050
Kryostaten Klingen	C.L. Sturkey D554X50	22-210-045
Einweg-Basisformen 15mm x 15 mm	Thermo Scientific	41-741
Einweg-Unterlage	Medline	23-666-062
Sezierset	Thermo Scientific	9996969
DPBS - Dulbecco's phosphatgepufferte Kochsalzlösung	Gibco	14190136
Tiefkühlschnitt Medium	Fisher Healthcare	23-730-571
Eiskübel	Bel-Art
Immunostain Feuchtigkeitskammer	Ted Pella Inc	NC9425474
Nadelhalter	Assi	ASSI. B148
Vliesschwämme, 4-lagig	Quick Medical	9023
Orbitalschüttler	Troemner	02-217-987
Pap-Stift
Paraformaldehyd, 16% w/v aq. soln., methanolfrei	Alfa Aesar	50-00-0
Premium Mikrozentrifugenröhrchen	Fisherbrand	5408129
Probenlagerung Beutel	Fisherbrand	19240093
Edelstahl Graduiertenmaß 32 oz/100 mL	Polar Ware	114231B
Superfrost Plus Objektträger	Fisherbrand	12-550-15
Aufgabenwischer	Kimberly-Clark Professional™ 34155	06666A
Timer	Fisherbrand	2261840
Vannas Muster Schere	Assi	ASSI.
: Für alle Verbrauchsmaterialien sind dies Beispiele für Geräte, die gekauft werden müssen. Das genaue Modell ist nicht notwendig, um unsere Methoden zu vervollständigen.

11999054SAS15RV HINWEIS