Ein bakterieller oraler Fütterungstest mit antibiotikabehandelten Moskitos

Zusammenfassung

Dieser Artikel stellt ein Protokoll vor, um die Wirkung einzelner Mückendarmbakterien zu untersuchen, einschließlich Isolierung und Identifizierung von Mücken-Mittelgut-anbaufähigen Mikroben, Antibiotika-Erschöpfung von Mückendarmbakterien und Wiedereinführung einer bestimmten Bakterienart.

Zusammenfassung

Die Mücke Midgut beherbergt ein hochdynamisches Mikrobiom, das den Wirtsstoffwechsel, die Fortpflanzung, die Fitness und die Vektorkompetenz beeinflusst. Es wurden Studien durchgeführt, um die Wirkung von Darmmikroben als Ganzes zu untersuchen; jedoch könnten verschiedene Mikroben unterschiedliche Auswirkungen auf den Wirt ausüben. Dieser Artikel enthält die Methodik, um die Wirkung jeder spezifischen Mückendarmmikrobe und den potenziellen Mechanismus zu untersuchen.

Dieses Protokoll besteht aus zwei Teilen. Der erste Teil stellt vor, wie man das Mückenmittelgut seziert, kultivierbare Bakterienkolonien isoliert und Bakterienarten identifiziert. Der zweite Teil sieht das Verfahren zur Erzeugung von antibiotikabehandelten Mücken und zur Wiedereinführung einer bestimmten Bakterienart vor.

Einleitung

Mücken gelten als die wichtigsten Vektoren menschlicher pathogener Krankheiten, die über hundert Krankheitserreger übertragen, darunter das Zika-Virus, das Dengue-Virus und die Plasmodium-Parasiten ¹. Wenn Mücken eine Blutmahlzeit nehmen, um Nährstoffe für die Oviposition zu erhalten, können sie versehentlich Krankheitserreger von einem infizierten Wirt über den Verdauungstrakt²aufnehmen. Wichtig ist, dass das Mückenmittelgut, das sowohl bei der Blutmahlzeit als auch beim Eintritt von Krankheitserregern eine zentrale Rolle spielt, ein hochdynamisches Mikrobiom³beherbergt.

Protokoll

1. Midgut-Sektion und kultivierbare Bakterienisolierung

1. Bereiten Sie die Mücke für die Zerlegung vor.
   1. Sammeln Sie die Mücken 7-9 Tage nach der Entstehung mit einem Aspirator. Anästhesisieren Sie die gesammelten Mücken, indem Sie sie 3-5 min einer Temperatur von 4 °C unterziehen und die Mücken in einer eiskalten Petrischale bis zur Zerlegung anbesäufen.
2. Sterilisieren Sie Laborinstrumente und die Mückenoberfläche.
   1. Sterilisieren Sie die Experimentierbank, sezieren Sie Mikroskop, Zange und Glasschlitten, indem Sie 75% Ethanol sprühen, um eine Kontamination durch Bakterien aus der Umwelt zu v....

Ergebnisse

Die Mittelguts von Mücken, die mit Antibiotika und ohne Antibiotika behandelt wurden, wurden zur DNA-Extraktion herausgenommen, und qPCR wurde mit universellen bakteriellen Primern durchgeführt. Abbildung 1 zeigt die Expression von bakteriellen 16S rRNA in der Kontrollgruppe und der Antibiotika-Behandlungsgruppe. Die Ergebnisse zeigen, dass etwa 98% der Darmbakterien entfernt wurden, und die Darmsterilisation von Penicillin und Streptomycin war erfolgreich.

Mit den beschrieben.......

Diskussion

Untersuchungen an Wirt-Mikroben-Wechselwirkungen haben ergeben, dass verschiedene Darmmikroben ihre Wirtsphysiologie über divergierende Mechanismen beeinflussen. Dieser Artikel stellt die Methode vor, um die jeweilige Rolle der Moskito-Darm-Mikrobe zu untersuchen, einschließlich der Sezieren von Mückenmittelgut, Kultivieren von kultivierbaren Darmbakterien, Antibiotika-Behandlung, und Wiedereinführung der Bakterien von Interesse.

Für eine erfolgreiche Antibiotikabehandlung müssen bei der Durch.......

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
Adenosin 5′-triphosphat Dinatriumsalzhydrat	Sigma	A2383	Adenosin 5′-triphosphat Dinatriumsalzhydrat wurde zur Herstellung von Adenosintriphosphat (ATP) Standardlösungen verwendet
Aedes aegypti			Weibliche Mücken
Antikoagulanzienröhrchen	BD Vacutainer	363095	Frisches Blut sammeln
Zentrifugenröhrchen	Sangon Biotech	F601620-0010	1,5 ml, natürlich, graduiert, steril
Wattebällchen
Einweg-Taschentuchschleifstößel	Sangon Biotech	F619072-0001	70 mm lang, konisch, blau, steril
Ethanol absolut	Paini		Verdünnen Sie es auf 75%
Ethanol Pinzette	RWD	F11029	Dissektion
Hemotek Membran Zuführung System	Hemotek		Komponenten des Fütterungssystems, einschließlich  Hemotek Temperaturregler, Dosierer-Gehäuse-Baugruppe, Metall-Dosierer montiert.
Inkubatorschüttler		ZQZY-78AN
Impfösen	Sangon Biotech	F619312-0001	10 μ l, Gelbes
LB Agar Pulver	Sangon Biotech	A507003	Trypton 10,0 g, Hefeextrakt 5,0 g, NaCl 10,0 g, Agar 15,0 g.
LB Bouillon Pulver	Sangon Biotech	A507002	Trypton 10,0 g, Hefeextrakt 5,0 g, NaCl 10,0 g.
Mikroskop	Zeiss	Stemi508
Pappbecher			Place Moskito
Parafilm	Sangon Biotech	F104002	4 inx 125 ft
Petrischale	Sangon Biotech	F611203
Penicillin G Procainsalz hydrat	Sangon Biotech	A606248	Weißes Pulver. Löslich in Wasser, löslich in Methanol, schwer löslich in Wasser, Ethanol
Single Channal Pipettier	Gilson
Streptomycinsulfat	Sangon Biotech	A610494	Streptomycinsulfat ist ein Glucosamin-Antibiotikum, das die Synthese von prokaryotischen Proteinen stört.
Saccharose	Sangon Biotech	A502792	Löslich in Wasser, Ethanol und Methanol, schwer löslich in Glycerin und Pyridin.
TIANamp Bakterien DNA Kit	TIANGEN	DP302	Extrakt DNA
Utility Fabric-Moskitonetz Weißer
Vortex-Mischer	Scintic Industries	S1-0246
1,5 ml EP-Tube	Sangon Biotech	F600620
10X PBS-Puffer	Sangon Biotech	E607016	Dieses Produkt ist eine 10-fache Lösung. Bitte vor Gebrauch 10 Mal verdünnen. Der pH-Wert liegt bei 7,4.