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Methodenartikel

Natriumtaurocolat induzierte schwere akute Pankreatitis bei C57BL/6 Mäusen

3.8K Aufrufe

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DOI:

10.3791/61547

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28. Juni 2021

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* These authors contributed equally

In diesem Artikel

Zusammenfassung

Tiermodelle für schwere akute Pankreatitis ermöglichen die Untersuchung pathophysiologischer Veränderungen im Anfangsstadium und erleichtern die Beobachtung der Evolution von Entzündungsereignissen. Hier stellen wir ein Protokoll für die Induktion einer schweren akuten biliären Pankreatitis durch retrograde Infusion von Natriumtaurocholat in den Pankreasgang von anästhesierten C57BL/6-Mäusen zur Verfügung.

Zusammenfassung

Die Induktion einer biliären akuten Pankreatitis durch Natriumtautolett-Infusion wurde von der wissenschaftlichen Gemeinschaft aufgrund der Darstellung des klinischen Zustands des Menschen und der Reproduktion entzündlicher Ereignisse, die dem Beginn der klinischen biliären Pankreatitis entsprechen, weit verbreitet verwendet. Die Schwere der Pankreasschädigung kann durch Messung der Konzentration, Geschwindigkeit und des Volumens der infundierten Gallensäure beurteilt werden. Diese Studie bietet eine aktualisierte Checkliste der Materialien und Methoden, die bei der Protokollreproduktion verwendet werden, und zeigt die wichtigsten Ergebnisse dieses akuten Pankreatitis (AP) -Modells. Die meisten früheren Veröffentlichungen haben sich darauf beschränkt, dieses Modell bei Ratten zu reproduzieren. Wir haben diese Methode bei Mäusen angewendet, die zusätzliche Vorteile bietet (d.h. die Verfügbarkeit eines Arsenals von Reagenzien und Antikörpern für diese Tiere zusammen mit der Möglichkeit, mit genetisch veränderten Mäusstämmen zu arbeiten), die für die Studie relevant sein könnten. Für die Induktion einer akuten Pankreatitis bei Mäusen präsentieren wir ein systematisches Protokoll mit einer definierten Dosis von 2,5% Natriumtarocholat bei einer Infusionsgeschwindigkeit von 10 μL/min für 3 min bei C57BL/6-Mäusen, die ihren maximalen Schweregrad innerhalb von 12 h nach der Induktion erreichen, und heben Ergebnisse mit Ergebnissen hervor, die die Methode validieren. Mit Übung und Technik beträgt die geschätzte Gesamtzeit von der Einleitung der Anästhesie bis zum Abschluss der Infusion 25 Minuten pro Tier.

Einleitung

Beim Menschen ist das Vorhandensein von Gallensteinen die häufigste Ursache für eine Pankreatitis aufgrund der Obstruktion des terminalen Teils des Choledochals, die den Fluss der Pankreassekrete unterbricht und einen intensiven Entzündungsprozess in der Bauchspeicheldrüse verursacht, mit einer Erhöhung der Konzentration von Verdauungsenzymen im Serum und Entzündungsmediatoren1,2.

Zwei verschiedene Theorien wurden vorgeschlagen, um die Entwicklung einer akuten Pankreatitis (AP) zu erklären. Die Theorie des "gemeinsamen Kanals" legt nahe, dass die in der Gallenblase vorhandenen Stein....

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Protokoll

Dieses Protokoll wurde von der Ethikkommission für die Verwendung von Tieren der USP Medicine School, Nr. Projekt: 1343/2019-CEUA: FMUSP genehmigt. Für dieses Protokoll wurden C57BL/6-Mäuse im Alter von 6 Wochen mit einem Gewicht von 20 ± 2 g verwendet (n = 9/Gruppe).

1. Laparotomie

  1. Tiere mit Xylazin (10 mg/kg) und Ketaminlösung (80 mg/kg) subkutan (0,1 ml/10 g Körpergewicht) mit einer 1 ml Spritze und einer 13x0,45 mm Nadel 26G 1/2 betäuben. Überprüfen Sie auf ausreichende Anästhesietiefe, indem Sie den Zeh einklemmen. Kontrollieren Sie die Körpertemperatur mit beheizten Pads. Stellen Sie sicher, dass alle chirurgischen Materiali....

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Ergebnisse

Der Schweregrad der Pankreatitis wurde nach der Schmidt-Skala21 zwischen 0-3 bewertet, wobei Null der Abwesenheit, 1 einer leichten Präsenz (<25%), 2 einer moderaten Präsenz (zwischen 25 und 50%) und 3 einer intensiven Präsenz (> 50%) entspricht (Tabelle 1). Die durchgeführten Messungen waren Plasma-Amylase-Aktivität, Pankreasödem, Azinuszellen, Verletzungen/Nekrose, Pankreasentzündungen (durch histologische Analyse von H &E-gefärbten Abs.......

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Diskussion

Die Methode zur Induktion einer akuten Pankreatitis durch retrograde Natriumtaurocholat-Infusion wurde bereits bei Ratten gezeigt22,23,24. Drei ähnliche Werke, die 2008, 2010 und 2015 veröffentlicht wurden, dienten als Referenz für das Protokoll3,14,15. In dieser Arbeit listen wir alle kritischen Schritte zur Reproduktion dieser Methode.......

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Offenlegungen

Die Autoren haben nichts preiszugeben.

Danksagungen

Die Autoren danken dem Postgraduiertenprogramm in der Medizinischen Klinik der Universität von São Paulo; Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) und University of São Paulo Medical School (FMUSP).

....

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Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien
NameUnternehmenKatalognummerKommentare
0,4 mm NadelINTRAG MEDICAL TECH30G
  0,54 mm Polyethylen-SchlauchTygon730010-Styroporblock
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Abdeckband zur Montage der MausMissner1236-Infusionspumpe
geplant auf 10µ L / min.Havard Aparatus-Schlauchpumpe SerieMA1 55-7766  Modell 66 Kleine peristaltische
Schere und Pinzette
Antiseptisches Providin JodPfizer12086ORAntisepsis
70% EthanolSIGMA459836Mix 700 mL 100% Ethanol mit 300 mL dH2O
RasierklingeLordbdk9a1ghk6Für Trichotomie
NatriumtaurocholatSigma-Aldrich86339- 1GCAS-NUMMER- 345909-26-4
Mikrogefäß-ClipMedicon Surgical56.87.35Approximator, Öffnung 4,0 mm, Schließdruck 30 -  40 g
6-0 ProlenBioline5162Nahtleitung
Ketamin NP (Cloridrato de dextrocetamina) 50mg/mlCristá lia
Xilazin 2%Syntec
Sterile Kochsalzlösung (0,9% (wt/vol) Kochsalzlösung)Farmace105851
Methyl BlueSigma-Aldrich ChemicalsM5528
MILLIPLEX  KARTE  Maus-Zytokin/Chemokin-Magnetbead-Panel - Immunologie-Multiplex-AssayMERCKMCYTOMAG-70KGleichzeitige Analyse mehrerer Zytokin- und Chemokin-Biomarker mit Bead-basierten Multiplex-Assays unter Verwendung der Luminex-Technologie in Mausserum-, Plasma- und Zellkulturproben.
Amylase AssayLabtest11
Desmarres Retraktor 13 mm
Breite
ROBOZRS-6672
90183210

Referenzen

  1. Li, X., et al. Significantly different clinical features between hypertriglyceridemia and biliary acute pancreatitis: A retrospective study of 730 patients from a tertiary center. BMC Gastroenterology. 18 (1), 1-8 (2018).
  2. Rechreche, H., Abbes, A., Iovanna, J. L.

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Nachdrucke und Genehmigungen

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