Gewebekultur der Rinderovariarinde

Courtney  M. Sutton; Shelby  A. Springman; Mohamed  A. Abedal-Majed; Andrea S. Cupp

doi:10.3791/61668

Methodenartikel

Gewebekultur der Rinderovariarinde

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DOI:

10.3791/61668

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14. Januar 2021

Courtney M. Sutton^*¹ , Shelby A. Springman^*¹ , Mohamed A. Abedal-Majed² , Andrea S. Cupp¹

¹Department of Animal Science, University of Nebraska-Lincoln, ²Department of Animal Production, School of Agriculture, University of Jordan

^* These authors contributed equally

In diesem Artikel

Zusammenfassung

In-vitro-Kultur der rindereigenen Ovarialrinde und die Wirkung der ernährungsphysiologischen Stair-Step-Diät auf die ovarielle Mikroumgebung wird vorgestellt. Eierstockkortexstücke wurden sieben Tage lang kultiviert und Steroide, Zytokine und Follikelstadien wurden bewertet. Die Stair-Step-Diätbehandlung hatte eine erhöhte Steroidogenese, was zu einer Follikelprogression in Kultur führte.

Zusammenfassung

Die Follikelentwicklung vom primordialen zum antralen Stadium ist ein dynamischer Prozess innerhalb des Ovarialkortex, der endokrine und parakrine Faktoren aus somatischen Zellen und kumululuszell-eizelliger Kommunikation umfasst. Über die Mikroumgebung der Eierstöcke ist wenig bekannt und wie die im umgebenden Milieu produzierten Zytokine und Steroide die Progression oder den Stillstand der Follikel beeinflussen. Die In-vitro-Kultur des Ovarialkortex ermöglicht es follikeln, sich in einer normalisierten Umgebung zu entwickeln, die vom benachbarten Stroma unterstützt wird. Unser Ziel war es, die Wirkung der ernährungsphysiologischen Stair-Step-Diät auf die ovarielle Mikroumgebung (Follikelentwicklung, Steroid- und Zytokinproduktion) durch In-vitro-Kultur der Rinderovariarinde zu bestimmen. Um dies zu erreichen, wurden kortikale Ovarialstücke von Färsen entfernt, die vor der Pubertät zwei verschiedenen ernährungsphysiologisch entwickelten Schemata unterzogen wurden: Kontrolle (traditionelle Ernährungsentwicklung) und Stair-Step (Fütterung und Einschränkung während der Entwicklung), die in etwa 0,5-1 mm³ Stücke geschnitten wurden. Diese Stücke wurden anschließend einer Reihe von Waschungen unterzogen und auf einem Gewebekultureinsatz positioniert, der in einen Brunnen mit Waymouths Kulturmedium eingesetzt wird. Der Ovarialkortex wurde 7 Tage lang mit täglichen Veränderungen der Kulturmedien kultiviert. Histologische Schnitte wurden durchgeführt, um Follikelstadiumsveränderungen vor und nach der Kultur zu bestimmen, um die Auswirkungen der Ernährung und die Auswirkungen der Kultur ohne zusätzliche Behandlung zu bestimmen. Cortex-Kulturmedium wurde über Tage gepoolt, um Steroide, Steroidmetaboliten und Zytokine zu messen. Es gab Tendenzen für erhöhte Steroidhormone in der ovariellen Mikroumgebung, die eine Follikelprogression in den Stair-Step versus Control-Ovarialkortexkulturen ermöglichten. Die Kulturtechnik des ovariellen Kortex ermöglicht ein besseres Verständnis der ovariellen Mikroumgebung und wie Veränderungen in der endokrinen Sekretion die Progression und das Wachstum der Follikel sowohl durch In-vivo- als auch durch In-vitro-Behandlungen beeinflussen können. Diese Kulturmethode kann sich auch als vorteilhaft erweisen, um potenzielle Therapeutika zu testen, die die Follikelprogression bei Frauen verbessern können, um die Fruchtbarkeit zu fördern.

Einleitung

Der Ovarialkortex stellt die äußere Schicht des Eierstocks dar, in der die Follikelentwicklung stattfindet¹. Primordiale Follikel, die zunächst in der Entwicklung gestoppt wurden, werden aktiviert, um primäre, sekundäre und dann antrale oder tertiäre Follikel zu werden, basierend auf parakrinen und Gonadotropin-Inputs¹^,²^,³^,⁴. Um physiologische Prozesse im Eierstock besser zu verstehen, kann die Gewebekultur als In-vitro-Modell verwendet werden, wodurch eine kontrollierte Umgebung für die Durchführung von Experimenten ....