Summary
यहां, हम एक धागे-एम्बोलाइजेशन विधि के माध्यम से बेहतर सगितिटल साइनस (एसएसएस) थ्रोम्बोसिस के एक उपन्यास स्प्राग-डावले (एसडी) चूहा मॉडल स्थापित करते हैं, और मॉडल की स्थिरता और विश्वसनीयता सत्यापित की गई थी।
Abstract
सेरेब्रल वेनस साइनस थ्रोम्बोसिस (सीवीएसटी) की प्राकृतिक शुरुआत में योगदान देने वाले तंत्र ज्यादातर अज्ञात हैं, और विभिन्न प्रकार के बेकाबू कारक रोग के दौरान शामिल होते हैं, जिसके परिणामस्वरूप नैदानिक अनुसंधान में बड़ी सीमाएं होती हैं। इसलिए, स्थिर सीवीएसटी पशु मॉडल की स्थापना जो विभिन्न प्रकार के बेकाबू भ्रामक कारकों को मानकीकृत कर सकती है, ने नैदानिक अनुसंधान में कमियों को दरकिनार करने में मदद की है। हाल के दशकों में, सीवीएसटी पशु मॉडलों की एक किस्म का निर्माण किया गया है, लेकिन इन मॉडलों पर आधारित परिणाम असंगत और अधूरे रहे हैं। इसलिए, सीवीएएसटी के रोगविज्ञानी तंत्र का पता लगाने के लिए, एक उपन्यास और अत्यधिक संगत पशु मॉडल स्थापित करना आवश्यक है, जिसमें सीवीएएसटी के निदान और उपचार के लिए महत्वपूर्ण व्यावहारिक मूल्य और वैज्ञानिक महत्व है। वर्तमान अध्ययन में, एक उपन्यास स्प्राग-डावले (एसडी) बेहतर सगित्तल साइनस (एसएसएस) थ्रोम्बोसिस का चूहा मॉडल थ्रेड-एम्बोलाइजेशन विधि के माध्यम से स्थापित किया गया था, और मॉडल की स्थिरता और विश्वसनीयता सत्यापित की गई थी। इसके अतिरिक्त, हमने सीवीएएसटी के गठन के बाद चूहों में सेरेब्रल वेनस रक्त प्रवाह में परिवर्तनों का मूल्यांकन किया। सामूहिक रूप से, एसडी-चूहा एसएसएस-थ्रोम्बोसिस मॉडल एक उपन्यास सीवीएसटी पशु मॉडल का प्रतिनिधित्व करता है जो आसानी से स्थापित होता है, आघात को कम करता है, अच्छी स्थिरता पैदा करता है, और इस्कीमिक समय और स्थान को सटीक रूप से नियंत्रित करने की अनुमति देता है।
Introduction
सेरेब्रल वेनस साइनस थ्रोम्बोसिस (सीवीएसटी) सेरेब्रल वेनस सिस्टम की एक दुर्लभ बीमारी है जो स्ट्रोक के सभी कारणों का केवल 0.5-1.0% है, लेकिन बच्चों और युवा वयस्कों में अपेक्षाकृत उच्च घटना दरहै 1। शव परीक्षण के दौरान, सीवीएएसटी को 10% सेरेब्रोवैस्कुलर रोगसेहोने वाली मौतों का कारण पाया गया । थ्रोम्बोसिस इंट्राक्रैनियल वेनस सिस्टम के किसी भी हिस्से में हो सकता है। बेहतर सैगिटल साइनस (एसएसएस) सीवीएसटी में सबसे अधिक प्रभावित क्षेत्रों में से एक है और इसमें कई रक्त वाहिकाएं शामिल हो सकती हैं। वेनस साइनस के स्टेनोसिस या ऑक्क्लुस के कारण, इंट्राक्रैनियल वेनस रिटर्न अवरुद्ध हो जाता है, जो अक्सर बढ़े हुए इंट्राक्रैनियल दबाव3के साथ होता है। सीवीएसटी के नैदानिक अभिव्यक्तियां जटिल हैं और समय के साथ भिन्न होती हैं; हालांकि लक्षणों की विशिष्टता की कमी है, सबसे आम लक्षणों में सिरदर्द (77.2%), दौरे (42.7%), और न्यूरोलॉजिकल घाटे (39.9%) शामिल हैं। गंभीर मामलों में, कोमा और यहां तक कि मौतभी 4,5हो सकती है। हाल के वर्षों में, चिकित्सा और स्वास्थ्य मानकों और सार्वजनिक स्वास्थ्य जागरूकता में समग्र सुधार के कारण, संबंधित जोखिम कारकों का अनुपात बदल गया है, आघात और संक्रमण का अनुपात कम हो गया है, और गर्भावस्था, प्यूरपेरियम, मौखिक गर्भ निरोधकों और अन्य कारणों से सीवीएसटी का अनुपात धीरे-धीरे5बढ़ गया है।
फिलहाल सीवीईएसटी की रोगाणुजनकता अभी भी अच्छी तरह समझ में नहीं आ रही है। गहराई में CVST का पता लगाने के लिए, आगे रोगविज्ञानी अनुसंधान की जरूरत है । हालांकि, इन अनुसंधान विधियों के अधिकांश आक्रामक और इसलिए चिकित्सकीय लागू करने के लिए मुश्किल हैं । नैदानिक अनुसंधान की कई सीमाओं के कारण, पशु मॉडल बुनियादी और अनुवाद अनुसंधान के मामले में अपूरणीय लाभ है ।
सीवीएसटी का कारण जटिल है, क्योंकि इसकी प्रारंभिक शुरुआत अक्सर अपरिचित होती है और थ्रोम्बस गठन का स्थान अत्यधिक परिवर्तनशील होता है। सौभाग्य से, पशु मॉडल इन कारकों का बेहतर नियंत्रण प्राप्त कर सकते हैं। पिछले कुछ दशकों में, सीवीएसटी पशु मॉडल की एक किस्म स्थापित की गई है, और प्रत्येक मॉडल के अपने नुकसान हैं। विभिन्न उत्पादन विधियों के अनुसार, उन्हें लगभग निम्नलिखित श्रेणियों में विभाजित किया जा सकता है: सरल एसएसएस-लिगेशन मॉडल6,7; एसएसएस आंतरिक इंजेक्शन-त्वरक मॉडल8; फेरिक-क्लोराइड-प्रेरित एसएसएस थ्रोम्बोसिस मॉडल9; फोटोकेमिकल-प्रेरित एसएस थ्रोम्बोसिस मॉडल10; और स्व-निर्मित एम्बोलिज्म-ऑक्क्क्यूज़न एसएसएस मॉडल11। हालांकि, इनमें से ज्यादातर मॉडल जानवर के सेरेब्रल कॉर्टेक्स को आक्रामक नुकसान को दरकिनार करने में असमर्थ हैं और इस्कीमिक समय और स्थान को सही ढंग से नियंत्रित करने में सक्षम नहीं हैं। कुछ मॉडलों में, थ्रोम्बस अनायास फिर से करा सकते हैं; अन्य मॉडलों में, एसएसएस स्थायी रूप से ओक्लेड हो जाता है। इसके अलावा, जटिल संचालन और/या गंभीर चोटों इन मॉडलों में बाद के रोगविज्ञानी निष्कर्षों को प्रभावित कर सकते हैं ।
वर्तमान अध्ययन में, एक थ्रेड प्लग को स्प्राग-डावले (एसडी) चूहों के एसएसएस में सफलतापूर्वक एक सीवीएसटी मॉडल स्थापित करने के लिए डाला गया था जो क्षति को कम करता है, सटीक नियंत्रणीयता को सक्षम करता है, और अच्छी स्थिरता प्रदान करता है। इसके अतिरिक्त, छोटे-पशु चुंबकीय अनुनाद इमेजिंग (एमआरआई) और लेजर-स्पेक्टल रक्त-प्रवाह इमेजिंग को मॉडल की प्रभावशीलता को सत्यापित करने के लिए संयुक्त किया गया था। हमने अपने मॉडल की स्थापना से पहले और बाद में मस्तिष्क रक्त प्रवाह में परिवर्तनों का मूल्यांकन किया, साथ ही हमारे मॉडल की स्थिरता का मूल्यांकन किया, सीएसवीएसटी की घटना, विकास और संबंधित रोगविज्ञानी तंत्र की खोज करने वाले आगे के अध्ययनों की नींव रखी।
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Protocol
पशु विषयों से जुड़ी प्रक्रियाओं को वेनझोउ मेडिकल यूनिवर्सिटी की मेडिकल नॉर्म्स एंड एथिक्स कमेटी द्वारा मंजूरी दी गई है और यह प्रयोगशाला जानवरों के उपयोग और देखभाल पर चीन के कानून के अनुसार है ।
1. थ्रेड प्लग, एसडी चूहों और प्रयोगात्मक उपकरणों की तैयारी
- थ्रेड प्लग के मुख्य शरीर के रूप में 0.28 मिमी व्यास के साथ एक नायलॉन धागे का उपयोग करें।
नोट: नायलॉन धागे की कोमलता और कठोरता मध्यम होनी चाहिए। - नायलॉन धागे के एक छोर को सिलिकॉन सामग्री के साथ कवर करें। थ्रेड प्लग के सिलिकॉन भाग की लंबाई लगभग 1.2 सेमी है, और व्यास लगभग 1.2 मिमी है। सिर का अंत पतला होता है, और सिलिकॉन हिस्सा बेलनाकार होता है। एक और 5-7 सेमी आरक्षित करें। नायलॉन धागा दबाना आसान है और ऑपरेशन के बाद विशिष्ट जरूरतों के अनुसार काटा जा सकता है।
- ऑपरेशन से पहले 3 मिनट के लिए थ्रेड प्लग को सोखने के लिए 75% इथेनॉल का उपयोग करें और प्लगिंग से पहले सामान्य नमकीन के साथ किसी भी अवशिष्ट इथेनॉल को कुल्ला करें।
- 280 और 320 ग्राम के बीच वजनी 12 पुरुष एसडी चूहों का चयन करें, और बेतरतीब ढंग से उन्हें एक नकली समूह और प्रयोगात्मक समूह (एन = 6 प्रति समूह) में विभाजित करें। पर्यावरण अनुकूलन के एक सप्ताह के बाद, 12 घंटे के लिए चूहों को तेज करें और ऑपरेशन से पहले उन्हें 4 घंटे के लिए पानी से वंचित करें।
- प्रयोग के लिए आवश्यक निम्नलिखित प्रयोगात्मक उपकरण तैयार करें: एक छोटा जानवर संज्ञाहरण मशीन, एक मस्तिष्क स्टीरियोटैक्सिक उपकरण, एक विच्छेदन माइक्रोस्कोप, एक उच्च गति खोपड़ी ड्रिल, कैंची, चिमटी, संवहनी संदंश, एक सुई धारक, एक सुई धागा, एक 2 मिलील सिरिंज, एक लेजर-स्पेक्टल रक्त बहने वाली इमेजिंग सिस्टम, और एक छोटे जानवर एमआरआई स्कैनर।
2. थ्रेड एम्बोलाइजेशन के माध्यम से एसडी-रैट एसएसएस-एम्बोलाइजेशन मॉडल का निर्माण
- एसडी चूहे को एनेस्थीसिया-इंडक्शन बॉक्स में रखें और संज्ञाहरण को प्रेरित करने के लिए 4% आइसोफ्लुनाणे देने के लिए एक छोटे-जानवर एनेस्थेटिक मशीन का उपयोग करें। इसके बाद, इस बात की पुष्टि करने के लिए संदंश का उपयोग करें कि एसडी चूहे के पिछले अंग और पैर की उंगलियों मध्यम चुटकी का जवाब नहीं देते हैं।
- ब्रेन स्टीरियोटैक्सिक डिवाइस पर प्रवण स्थिति में स् ड रट् ड टॉप हेयर को जल्दी ठीक करें। 1.5-2.0% आइसोफ्लाणे (0.5 एल/मिनट की गति से) के साथ संज्ञाहरण बनाए रखें, और 40-60 सांस/मिनट पर श्वसन दर को स्थिर करें । 37±0.2 डिग्री सेल्सियस पर एक हीटिंग पैड के माध्यम से चूहे के शरीर के तापमान को स्थिर करें।
- एनेस्थीसिया के दौरान कॉर्निया को सूखने से बचाने के लिए स्टीरियोटैक्सिक फ्रेम पर चूहे को रखने के बाद बाँझ नेत्र नेत्र स्नेहक लगाएं।
- 75% इथेनॉल के साथ तीन बार बारी-बारी से 5% पोविडोन आयोडीन के साथ चूहे के सिर के शीर्ष पर सतह को स्टरलाइज करें। सिर के बीच में त्वचा का चीरा (2.0-सेमी लंबा) बनाएं, और फिर खोपड़ी को पूरी तरह से बेनकाब करने के लिए शीर्ष प्रावरणी और पेरिओस्टियम को ध्यान से छील दें।
- पूर्वकाल फॉन्टेनले, पीछे फॉन्टेनसेल, कोरोनल सीवन, सगिटल सीवन, और हेरिंगबोन सीवन की स्थिति की पुष्टि करें।
- कोरोनल सीवन और हेरिंगबोन सीवन के बीच के क्षेत्र का उपयोग रक्त प्रवाह अवलोकन क्षेत्र के रूप में करें। लेजर-स्पेक्टल रक्त-प्रवाह इमेजिंग के दौरान खोपड़ी को अवलोकन को प्रभावित करने से रोकने के लिए, अवलोकन क्षेत्र में खोपड़ी को तब तक पतला करें जब तक कि रक्त वाहिकाएं स्पष्ट रूप से दिखाई न दें। पतली खोपड़ी का आकार लगभग 1.0 सेमी × 1.0 सेमी होना चाहिए। यह चरण और निम्नलिखित सभी विच्छेदन माइक्रोस्कोप के तहत किए जाते हैं।
- खोपड़ी पीसने के दौरान, सेरेब्रल कॉर्टेक्स को उच्च तापमान जलने से बचने के लिए ड्रिल को बार-बार कुल्ला करने के लिए सामान्य तापमान खारा का उपयोग करें।
- ब्रेग्मा क्षेत्र के एसएसएस का पर्दाफाश करने के लिए ब्रेग्मा में केंद्रित 6.0 मिमी x 4.0 मिमी हड्डी खिड़की के भीतर खोपड़ी को पीसने के लिए एक उच्च गति ड्रिल का उपयोग करें।
- पीसने के दौरान खोपड़ी को ठंडा करने के लिए सामान्य नमकीन का इस्तेमाल करें। जब खोपड़ी पतली हो जाती है, तो एसएसएस को फाड़ने से बचने के लिए शेष हड्डी के टुकड़ों को ध्यान से हटाने के लिए चिमटी का उपयोग करें।
- एक उपयुक्त थ्रेड प्लग चुनें, प्लग पॉइंट के रूप में एसएसएस ब्रेग्मा पॉइंट का उपयोग करें, ध्यान से इसे 2 एमएल सिरिंज सुई के साथ पंचर करें, और जल्दी से थ्रेड प्लग हेड को प्लग पॉइंट में डालें।
- इस समय, थ्रेड-प्लग हेड और एसएसएस के अंत के बीच का कोण लगभग 30-45 डिग्री होना चाहिए; फिर थ्रेड प्लग और एसएसएस के अंत के बीच कोण को 0-10 डिग्री तक समायोजित करें, और धीरे-धीरे एसएसएस को केंद्र में डालें जब तक कि सिर साइनस संगम के पीछे के किनारे तक न पहुंच जाए। इसके बाद पूंछ के अतिरिक्त हिस्से को काट लें।
नोट: एसएसएस पंचर होने पर तेजी से रक्तस्राव हो सकता है। यदि थ्रेड प्लग के अंत को एक समय में प्लग पॉइंट में जल्दी से नहीं डाला जा सकता है, तो प्लग पॉइंट को ध्यान से बेनकाब करने के लिए धीरे-धीरे फिसलने के दौरान प्लग पॉइंट को धीरे-धीरे दबाने के लिए एक छोटी धुंध या कपास की गेंद का उपयोग करें, और फिर जल्दी से तार बोल्ट के अंत को एसएसएस में डालें। थ्रेड प्लग डालने के बाद, यदि प्लग पॉइंट पर रक्तस्राव होता है, तो रक्तस्राव को रोकने के लिए जिलेटिन स्पंज जैसी हीमोस्टेटिक सामग्रियों का उपयोग किया जा सकता है।
- इस समय, थ्रेड-प्लग हेड और एसएसएस के अंत के बीच का कोण लगभग 30-45 डिग्री होना चाहिए; फिर थ्रेड प्लग और एसएसएस के अंत के बीच कोण को 0-10 डिग्री तक समायोजित करें, और धीरे-धीरे एसएसएस को केंद्र में डालें जब तक कि सिर साइनस संगम के पीछे के किनारे तक न पहुंच जाए। इसके बाद पूंछ के अतिरिक्त हिस्से को काट लें।
3. एसडी चूहों के मस्तिष्क की सतह पर रक्त प्रवाह का पता लगाना
- रक्त प्रवाह अवलोकन क्षेत्र को समान रूप से रोशन करने के लिए लेजर प्रकाश स्रोत का उपयोग करें। परावर्तित प्रकाश एक कैमरे द्वारा एकत्र किया जाता है और विश्लेषण के लिए एक कंप्यूटर को प्रेषित किया जाता है। लेजर-स्पेक्टल रक्त-प्रवाह इमेजिंग सिस्टम के लिए निम्नलिखित पैरामीटर सेटिंग्स का उपयोग करें: तरंगदैर्ध्य: λ = 785 एनएम; और छवि जोखिम समय: टी = 10 एमएस।
- लेजर-स्पेक्टल रक्त-प्रवाह इमेजिंग सिस्टम के दृश्य के क्षेत्र में एसडी-चूहा रक्त-प्रवाह अवलोकन क्षेत्र को केंद्र और 2 मिनट के लिए मस्तिष्क की सतह पर रक्त प्रवाह की निरंतर निगरानी का संचालन करता है। प्रत्येक एसडी चूहे के लिए एम्बोलाइजेशन से पहले और बाद में रक्त प्रवाह डेटा एकत्र करें और संसाधित करें, और मनाए गए क्षेत्र के लेजर-स्पेक्टल रक्त-प्रवाह मानचित्र प्राप्त करें।
- हड्डी के मलबे और अवशेषों को धोने के लिए सामान्य नमकीन के साथ संचालित क्षेत्र को बार-बार कुल्ला। त्वचा को सीवन करें (0# धागा) और इओडोफोर के साथ कीटाणुरहित करें।
- शरीर के तापमान को तब तक बनाए रखें जब तक चूहा सर्जरी के बाद जागता है और फिर भोजन और पानी के साथ एक पिंजरे में घर विज्ञापन लिबिटमप्रदान करता है। नकली समूह को प्लग नहीं किया जा सकता है ।
- डेटा संग्रह पूरा होने के बाद, पोस्ट-प्रोसेसिंग करें।
- लेजर-स्पेक्टल रक्त-प्रवाह इमेजिंग सिस्टम सॉफ्टवेयर द्वारा प्रदान किए गए उपकरणों के माध्यम से ब्याज (आरओआई) के क्षेत्र का पूरा चयन। प्राप्त मूल्य आरओआई में औसत रक्त-प्रवाह मूल्य हैं, और एम्बोलाइजेशन से पहले और बाद में स्थानीय मस्तिष्क-रक्त-प्रवाह मूल्य हैं। आधार रेखा मूल्य के रूप में एम्बोलाइजेशन से पहले रक्त प्रवाह मूल्य का उपयोग करें।
- चार आरओआई का चयन करें और प्रत्येक आरओआई में सेरेब्रल रक्त प्रवाह में सापेक्ष परिवर्तन को मापें, जो बेसलाइन मूल्य से प्रतिशत परिवर्तन के रूप में व्यक्त किया गया है।
4. छोटे जानवरों एमआरआई पर धागे की स्थिति का पता लगाने
- एमआरआई इमेजिंग सिस्टम के लिए निम्नलिखित टी 2-भारित इमेजिंग (टी2WI) मापदंडों का उपयोग करें: इको का समय (TE) = 33 एमएस, दोहराने का समय (टीआर) = 3000 एमएस, उमंग की संख्या (NEX) = 4, स्लाइस = 28, स्लाइस मोटाई = 0.8 मिमी, मैट्रिक्स आकार = 256 *256 मिमी 2,फ्लिप कोण = 80 डिग्री, देखने के क्षेत्र (FOV) = 30 *30 मिमी 2,स्कैन समय = 6 मिनट 24 एस; चुंबकीय अनुनाद एंजियोग्राफी (एमआरए) पैरामीटर इस प्रकार निर्धारित किए गए थे: ते = 4.4 एमएस, टीआर = 12 एमएस, नेक्स = 4, स्लाइस = 80, स्लाइस मोटाई = 0.4 मिमी, मैट्रिक्स आकार = 256*256मिमी 2,फ्लिप एंगल = 80 डिग्री, FOV = 30*30 मिमी 2,स्कैन समय = 16 मिनट 23 सेकंड 40 एमएस।
- एमआरआई स्कैनिंग टेबल पर जानवर को ठीक करें, स्कैनिंग की स्थिति बनाकर मस्तिष्क की स्थिति को कैलिब्रेट करें, और स्थिति की पुष्टि करने के बाद टी2डब्ल्यूआई और एमआरए अनुक्रम स्कैनिंग करें।
- पता लगाने के दौरान पशु संज्ञाहरण मशीन के माध्यम से निरंतर संज्ञाहरण का उपयोग करें। फिर, अत्यधिक पेंटोबार्बिटल के इंट्रापेरिटोनियल इंजेक्शन द्वारा एसडी चूहों को इच्छामृत्यु दें।
- छवि अधिग्रहण और पोस्ट-प्रोसेसिंग: छवि डेटा एकत्र करने के बाद, एसएसएस में थ्रेड प्लग की स्थिति को अधिक स्पष्ट रूप से देखने के लिए, चूहे के मस्तिष्क की टी2WI छवि प्रदर्शित करने के लिए छद्म रंग वृद्धि विधि का उपयोग करें।
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Representative Results
सीवन विधि के माध्यम से एसडी-चूहा एसएसएस-थ्रोम्बोसिस मॉडल स्थापित करने के लिए, सीवन को पहले से तैयार किया जाना चाहिए(चित्रा 1 ए),और प्रयोग के लिए आवश्यक उपकरण(चित्रा 1 बी)तैयार किया जाना चाहिए। ऑपरेशन की नाजुक प्रकृति के कारण, मॉडल की तैयारी को विच्छेदन माइक्रोस्कोप के तहत पूरा करने की आवश्यकता है। मुख्य चरण चित्रा 2में दिखाए गए हैं । मॉडल के रक्त प्रवाह अवलोकन के विशिष्ट विवरणों के विवरण की सुविधा के लिए, चित्र 3बी रक्त प्रवाह अवलोकन क्षेत्र, हड्डी खिड़की, और प्लग बिंदु को चिह्नित करता है, और एसएसएस(चित्रा 3 सी)में डाले गए थ्रेड प्लग की स्थिति को भी दर्शाता है। मॉडल की तैयारी पूरी होने के बाद, एसडी चूहों(चित्रा 4A,बी)के मस्तिष्क की सतह पर रक्त प्रवाह का पता लगाने के लिए लेजर-स्पेक्टल रक्त प्रवाह इमेजिंग का उपयोग किया जाता है। चित्रा 4C से पता चलता है कि एसएसएस और पुल नसों (BVs) में रक्त प्रवाह काफी मध्य मस्तिष्क धमनी (एमसीए) और केशिकाओं (CAPs) में उन लोगों के साथ तुलना में कम हो गए थे । इसके बाद, छोटे-पशु एमआरआई का उपयोग क्षैतिज स्थिति(चित्रा 5 ए),सैजिटल स्थिति(चित्रा 5B)और कोरोनल स्थिति(चित्रा 5C)से एसएसएस में थ्रेड प्लग की स्थिति का पता लगाने के लिए किया जाता है। छवियों से पता चलता है कि थ्रेड प्लग जगह में है, जो एसएसएस के एम्बोलाइजेशन की पुष्टि करता है।
चित्रा 1। धागे एम्बोलिज्म और प्रायोगिक स्थितियों की तस्वीर। (A)स्व-निर्मित धागा एम्बोलिज्म की छवि (क: धागा-एम्बोलिज्म सिर, बी: थ्रेड-एम्बोलिज्म शरीर)। स्केल बार = 5 मिमी(बी)इस प्रयोग के लिए आवश्यक मुख्य उपकरण। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।
चित्रा 2। एसडी-चूहा एसएसएस-थ्रोम्बोसिस मॉडल के मुख्य चरण। (क)सफल संज्ञाहरण को सत्यापित करने के लिए संदंश के साथ एसडी चूहे के पिछले अंगों के पैरों को दबाएं। (ख)एसडी चूहे को स्टीरियोटैक्सिक डिवाइस पर ठीक करें और सिर के शीर्ष पर सतह को स्टरलाइज करें। (ग)त्वचा को काटें। (घ)शीर्ष प्रावरणी और पेरिओस्टियम से छील, और पूरी तरह से खोपड़ी का पर्दाफाश । (ई)प्रेक्षण क्षेत्र और हड्डी की खिड़की की खोपड़ी को तब तक ड्रिल और पॉलिश करें जब तक कि रक्त वाहिकाएं स्पष्ट रूप से दिखाई न दें। (च)एसएसएस फाड़ने से बचने के लिए संदंश के साथ हड्डी की खिड़की पर हड्डी के टुकड़ों को सावधानी से हटा दें। (जी)एक उपयुक्त थ्रेड प्लग का चयन करें। (ज)प्लग पॉइंट को छेदने के लिए सिरिंज सुई का उपयोग करें और थ्रेड प्लग को जल्दी डालें। (I)थ्रेड प्लग और एसएसएस के बीच कोण को समायोजित करें। (जम्मू)सीवन को धीरे-धीरे डालें। (K)जब तक टिप साइनस संगम के पीछे के किनारे तक पहुंचता है। (L)सीवन खोपड़ी । कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।
चित्रा 3। एसडी चूहों का अवलोकन और संचालन। (ए)एसडी चूहों की शीर्ष खोपड़ी के शारीरिक स्थलों को एसएसएस (ए: ब्रेग्मा, बी: पीछे ब्रेग्मा) के स्थान को सुविधाजनक बनाने के लिए प्रदर्शित किया गया था। (ख)लाल गोल-आयताकार क्षेत्र रक्त प्रवाह अवलोकन क्षेत्र है, और नीले गोल आयताकार क्षेत्र हड्डी खिड़की है । लाल परिपत्र क्षेत्र प्लग बिंदु है, और तीर बेहतर धनु साइनस की ओर इशारा करता है। (ग)प्लग प्वाइंट (ब्लू एरो) से एसएसएस में डाले गए प्लग की स्थिति। सफेद तीर प्लग के शरीर की ओर इशारा करता है, जबकि लाल तीर थ्रेड हेड की ओर इशारा करता है। स्केल बार = 2 मिमी. कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।
चित्रा 4। थ्रेड-एम्बोलिज्म प्रविष्टि से पहले और बाद में रक्त प्रवाह की तुलना। एम्बोलाइजेशन के बाद एसडी चूहों(ए)के सेरेब्रल ब्लड फ्लो की लेजर-स्पेक्टल ब्लड-फ्लो इमेजिंग। दाईं ओर नीला-से-लाल स्तंभ छोटे से बड़े तक रक्त प्रवाह मूल्यों की सीमा का प्रतिनिधित्व करता है। (ए)में, चयनित आरओआई को चिह्नित किया गया है (ए: एसएसएस, बी: बीवी, सी: एमसीए, डी: कैप)। (ग)सापेक्ष मस्तिष्क रक्त प्रवाह (सीबीएफ) का एक बार ग्राफ दिखाया गया है । विचरण के एक तरह से विश्लेषण से पता चला कि एसएसएस और बीवी (# पी <0.001 बनाम एमसीए और कैप; * पी <0.001 बनाम एमसीए और कैप) में रक्त प्रवाह में काफी कमी आई है । स्केल बार = 1 मिमी. कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।
चित्रा 5। एमआरआई सत्यापन परिणाम। छोटे-पशु एमआरआई क्षैतिज(ए),सगिटल(बी),और कोरोनल(सी)पदों से एसएसएस में थ्रेड प्लग (काले तीर द्वारा दिखाए गए) की स्थिति को दर्शाता है। स्केल बार = 2 मिमी. कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।
| सीवीस्ट पशु मॉडल | सीमाओं |
| सरल एसएसएस-लिगेशन मॉडल | सेरेब्रल कॉर्टेक्स क्षति, स्थायी रूप से ऑक्सीलेड |
| एसएसएस आंतरिक इंजेक्शन-त्वरक मॉडल | सेरेब्रल कॉर्टेक्स क्षति, अनायास पुनः तैयार करें, इस्कीमिक समय और स्थान गलत |
| फेरिक-क्लोराइड-प्रेरित एसएसएस थ्रोम्बोसिस मॉडल | सेरेब्रल कॉर्टेक्स क्षति, अनायास पुनः कृतीय |
| फोटोकेमिकल-प्रेरित एसएस थ्रोम्बोसिस मॉडल | सेरेब्रल कॉर्टेक्स क्षति, अनायास पुनः कृतीय |
| स्व-निर्मित एम्बोलिज्म-ऑक्क्लुसेशन मॉडल | सेरेब्रल कॉर्टेक्स क्षति, स्थायी रूप से ऑक्सीलेड, जटिल संचालन |
तालिका 1: सीवीएसटी पशु मॉडल के नुकसान।
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Discussion
इस अध्ययन में एसडी चूहों के एसएसएस में सेल्फ मेड थ्रेड प्लग डालकर एक नए प्रकार का सीवीएसटी मॉडल सफलतापूर्वक स्थापित किया गया। इसके अतिरिक्त, लेजर-स्पेक्टल रक्त प्रवाह इमेजिंग और छोटे-पशु एमआरआई को इस्कीमिक समय और स्थान को मानकीकृत करने के लिए एम्बोलाइजेशन से पहले और बाद में एसडी चूहों के मस्तिष्क की सतह पर रक्त प्रवाह में परिवर्तन की निगरानी के लिए संयुक्त किया गया था।
1 9 8 9 में, लोंगा एट अल ने चूहों की बाहरी कैरोटिड धमनी में एक स्व-निर्मित नायलॉन सीवन को प्रतिगामी रूप सेडालनेके द्वारा एक रिवर्सिबल एमसीए ऑक्क्लुसेशन मॉडल बनाया। इस मॉडल की स्थिरता में सुधार करने के लिए, कई बेहतर तरीकों के बाद से13शुरू किया गया है । यह एमसीए ऑक्सीकरण मॉडल सटीक इस्कीमिक समय और स्थान को सक्षम बनाता है, फिर सेकैनालाइज करना आसान है, और14, 15सेरेब्रल धमनी स्ट्रोक की जांच करने वाले बुनियादी अनुसंधान में व्यापक रूप से उपयोग किया गया है। वर्तमान अध्ययन में, एमसीएओ मॉडल के डिजाइन पर निर्माण, एसएसएस प्रारंभिक स्थिति के केंद्र में एक स्व-निर्मित थ्रेड प्लग डालकर एक उपन्यास सीएसवीएसटी मॉडल स्थापित किया गया था।
सीवीटी के रोगजनक तंत्र को स्पष्ट करने के लिए, विभिन्न प्रकार के पशु मॉडल स्थापित किए गए हैं और उन्हें लागू किया गया है(तालिका 1)। सरल एसएसएस-लिगेशन मॉडल जानवर के सेरेब्रल कॉर्टेक्स6,7को नुकसान से नहीं बचा सकता है। फेरिक-क्लोराइड-प्रेरित एसएसएस-थ्रोम्बोसिस मॉडल भी अनिवार्य रूप से फेरिक क्लोराइड9की विषाक्तता के कारण जानवर के सेरेब्रल कॉर्टेक्स को नुकसान पहुंचाता है। एक वैकल्पिक मॉडल के रूप में, सेरेब्रल कॉर्टेक्स के संपर्क से बचने के लिए एसएसएस में एक थ्रेड प्लग डाला जा सकता है, जो किसी भी कॉर्टिकल क्षति को कम करने में मदद कर सकता है। एसएसएस आंतरिक-इंजेक्शन-एक्सीलरेटर मॉडल8पुनर्नैनीकरण की संभावना के साथ थ्रोम्बोसिस को प्रेरित करने के लिए एक फोटोकेमिकल विधि का उपयोग करता है; यह मॉडल एक निश्चित स्थान पर विश्वसनीय एम्बोलाइजेशन को प्रेरित करने के लिए एक स्व-निर्मित नायलॉन-थ्रेड प्लग का उपयोग करता है। स्वयं निर्मित एम्बोलिज्म-ऑक्क्लुज़न मॉडल में उपयोग किए जाने वाले एम्बोलिज्म को स्थापित करना मुश्किल है, जो संवहनी एंडोथेलियल कोशिकाओं को नुकसान पहुंचाता है और11को पुनः कैंसर नहीं किया जा सकता है। इस मॉडल में इस्तेमाल होने वाला सेल्फ मेड थ्रेड प्लग नायलॉन थ्रेड और सिलिका जेल से बना है। इन सामग्रियों में एक लचीली बनावट और अपेक्षाकृत चिकनी सतह होती है, जो मॉडलिंग प्रक्रिया के दौरान सेरेब्रल कॉर्टेक्स और एसएसएस एंडोथेलियल कोशिकाओं को सामग्री के कारण होने वाले नुकसान को कम करती है। एसडी चूहों में एसएसएस के व्यास में व्यक्तिगत अंतर हैं। इस पैरामीटर के प्रभाव से इंकार करने के लिए, थ्रेड प्लग का विनिर्देश एसएसएस के कई मापों और किसी के ऑपरेटिंग अनुभव से प्राप्त डेटा के आधार पर निर्धारित किया जाता है। इसके अलावा, प्लग को बाहर निकालने के बाद ऐसी चोट आसानी से ठीक हो जाती है, जो बाद में एसएसएस पुनर्नैनीकरण के लिए संभावना प्रदान करती है।
इस वर्तमान अध्ययन ने सफलतापूर्वक एक उपन्यास सीवीएएसटी मॉडल की स्थापना की जिसने क्षति को कम किया, सटीक नियंत्रणीयता को सक्षम किया, और अच्छी स्थिरता प्राप्त की। इसके अतिरिक्त, छोटे पशु एमआरआई और लेजर-स्पेक्टल रक्त-प्रवाह इमेजिंग को मॉडल की स्थिरता को सत्यापित करने और एम्बोलाइजेशन से पहले और बाद में मस्तिष्क रक्त का मूल्यांकन करने के लिए संयुक्त किया गया था। एक साथ लिया, वर्तमान निष्कर्षों और प्रोटोकॉल आगे की घटना, विकास, और CVST के संबंधित रोगविज्ञान तंत्र की खोज के अध्ययन के लिए एक नींव प्रदान करते हैं ।
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Disclosures
लेखकों की घोषणा है कि वे कोई प्रतिस्पर्धी वित्तीय हितों की है ।
Acknowledgments
इस अध्ययन को उच्च स्तरीय प्रतिभाओं के लिए ग्रांट साइंटिफिक रिसर्च फाउंडेशन, फुजियान यूनिवर्सिटी ऑफ ट्रेडिशनल चाइनीज मेडिसिन (X2019002-प्रतिभाओं) द्वारा समर्थित किया गया था ।
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 2 mL syringe | Becton,Dickinson and Company | 301940 | |
| brain stereotaxic instrument | Shenzhen RWD Life Technology Co., Ltd | 68025 | |
| dissecting microscope | Wuhan SIM Opto-technology Co. | SIM BFI-HR PRO | |
| high-speed skull drill | Shenzhen RWD Life Technology Co., Ltd | 78046 | |
| laser-speckle blood-flow imaging system | Wuhan SIM Opto-technology Co. | SIM BFI-HR PRO | |
| needle holder | Shenzhen RWD Life Technology Co., Ltd | F31022-12 | |
| needle thread | Shenzhen RWD Life Technology Co., Ltd | F33303-08 | |
| scissors | Shenzhen RWD Life Technology Co., Ltd | S13029-14 | |
| silica gel | Heraeus Kulzer | 302785 | |
| small animal anesthesia machine | Shenzhen RWD Life Technology Co., Ltd | R540 | |
| small-animal MRI | Bruker Medical GmbH | Biospec 94/30 USR | |
| tweezers | Shenzhen RWD Life Technology Co., Ltd | F11029-11 | |
| vascular forceps | Shenzhen RWD Life Technology Co., Ltd | F22003-09 |
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