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Biology

एक परिचालन बाँझ कीट तकनीक कार्यक्रम में रिलीज के लिए विकिरणित और चिह्नित नर एडीज एजिप्टी मच्छरों को तैयार करना

Published: March 12, 2021 doi: 10.3791/62260
Automatic Translation
1, 1, 1, 1, 1, 2, 2, 1
1US Department of Agriculture, Agricultural Research Service Center for Medical, Agricultural, & Veterinary Entomology, 2Department of Entomology and Nematology, University of Florida

Summary

बाँझ कीट तकनीक (एसआईटी) का उपयोग विशिष्ट, चिकित्सकीय रूप से महत्वपूर्ण मच्छर आबादी को नियंत्रित करने के लिए किया जाता है जो रासायनिक नियंत्रण के लिए प्रतिरोधी हो सकते हैं। यहां, हम एडीज एजिप्टी मच्छर को लक्षित करने वाले एक परिचालन एसआईटी कार्यक्रम में रिलीज के लिए बाँझ नर मच्छरों के बड़े पैमाने पर पालन और तैयारी की एक विधि का वर्णन करते हैं।

Abstract

डेंगू, जीका और चिकनगुनिया जैसे मानव रोगों का नियंत्रण उनके वेक्टर, एडीज एजिप्टी मच्छर के नियंत्रण पर निर्भर करता है, क्योंकि कोई रोकथाम नहीं है। मच्छर वैक्टर का नियंत्रण अपरिपक्व और वयस्क चरणों पर लागू रसायनों पर भरोसा कर सकता है, जो गैर-लक्ष्यों की मृत्यु दर में योगदान कर सकता है और इससे भी महत्वपूर्ण बात यह है कि वेक्टर में कीटनाशक प्रतिरोध हो सकता है। बाँझ कीट तकनीक (एसआईटी) निष्फल वयस्क पुरुषों की रिहाई के माध्यम से कीटों की आबादी को नियंत्रित करने की एक विधि है जो गैर-व्यवहार्य संतान पैदा करने के लिए जंगली मादाओं के साथ संभोग करते हैं। यह पेपर एडीज एजिप्टी मच्छरों के नियंत्रण के लिए एक परिचालन एसआईटी कार्यक्रम में उपयोग के लिए बाँझ पुरुषों के उत्पादन की प्रक्रिया का वर्णन करता है। यहां उल्लिखित कार्यक्रम में उपयोग किए जाने वाले चरण हैं जिनमें एक कॉलोनी का पालन और रखरखाव, नर और मादा प्यूपे को अलग करना, वयस्क पुरुषों को विकिरणित करना और चिह्नित करना और एडीज एजिप्टी पुरुषों को रिलीज साइट पर भेजना शामिल है। इसके अलावा प्रक्रियात्मक चेतावनी, कार्यक्रम सीमाएं और भविष्य के उद्देश्यों पर भी चर्चा की गई है।

Introduction

मनुष्यों में मच्छर जनित रोगजनकों का संचरण दुनिया भर में हर साल बीमारी और मौतों के लाखों मामलों का कारण बनता है। मच्छर जनित बीमारियों, जैसे जीका या डेंगू बुखार के लिए प्रभावी, अनुमोदित टीकों की अनुपस्थिति में, संचरण को कम करने के सबसे प्रभावी तरीकों में से एक रोग-वेक्टर मच्छर आबादी को कम करना है। वेक्सिंगली, मच्छर प्रजातियों की बढ़ती संख्या, पारंपरिक रूप से कीटनाशकों द्वारा लक्षित, कीटनाशक प्रतिरोधके बढ़ते स्तर को प्रदर्शित कर रही है। इसके साथ ही, सरकारी एजेंसियों ने आक्रामक रूप से पहले से अनुमोदित कीटनाशकों को अपंजीकृत या प्रतिबंधित कर दिया है, और कुछ नए, प्रभावी रासायनिक नियंत्रणउपाय विकसित किए जा रहे हैं। मच्छर नियंत्रण के लिए बाधाओं के इस नक्षत्र ने मच्छरों की आबादी को कम करने के लिए वैकल्पिक गैर-रासायनिक तकनीकों की खोज को प्रेरित किया है।

कुछ मच्छर प्रजातियां प्रतिरोध और कीटनाशक पंजीकरण के मुद्दों को नियंत्रित करने के लिए चुनौतियां पेश करती हैं। एडीज एजिप्टी (एल) एक प्रमुख रोग-वेक्टर मच्छर है जिसे अपरिपक्व विकास और वयस्क आराम 4,5 के लिए इस प्रजाति द्वारा शोषित गूढ़ पेरिडोमेस्टिक निवास स्थान के कारण पारंपरिक एकीकृत वेक्टर प्रबंधन के माध्यम से नियंत्रित करना बेहद मुश्किल है। आवासों के आसपास गूढ़ आवास के शोषण से संबंधित चुनौतियों में कीटनाशक स्प्रे तकनीकों के साथ इन स्थानों तक पहुंचने में कठिनाई के साथ-साथ इस प्रजाति के लिए प्रभावी एकीकृत वेक्टर प्रबंधन (आईवीएम) के लिए महत्वपूर्ण गहन निगरानी और नियंत्रण गतिविधियों का संचालन करने के लिए सार्वजनिक स्वास्थ्य वेक्टर नियंत्रण एजेंसियों के लिए निजी संपत्ति तक बार-बार पहुंच के लिए जनता द्वारा स्वीकृति की संभावित कमी शामिल है।

सौभाग्य से, एसआईटी, अन्य अत्यधिक चुनौतीपूर्ण कीट प्रजातियों6 के स्थायी नियंत्रण के लिए सफल साबित हुआ एक दृष्टिकोण, सेंट ऑगस्टीन, फ्लोरिडा (केजेएल, आरएलए, एससीबी अप्रकाशित डेटा) में आधारित प्रयोगों और परिचालन परीक्षणों की एक ग्राउंडब्रेकिंग श्रृंखला में एडीज एजिप्टी समस्या पर लागू किया जा रहा है। एसआईटी को मच्छरों सहित कीट प्रजातियों की एक श्रृंखला पर लागू किया गया है, औरगहराई से 7,8 की समीक्षा की गई है। एसआईटी कॉलोनी में पाले गए पुरुषों की बड़े पैमाने पर रिहाई का लाभ उठाती है, उदाहरण के लिए, आयनकारी विकिरण या रसायनों के संपर्क में आने से महिलाओं की प्राकृतिक आबादी की साथी पसंद को प्रभावित करने के लिए। जंगली मादाओं के साथ संभोग करने वाले निष्फल नर नर युग्मकों द्वारा किए गए नुकसान के कारण अंडे को बना देते हैं, और यदि पर्याप्त संख्या में मौजूद हैं, तो सैद्धांतिक रूप से प्राकृतिक एडीज एजिप्टी आबादी को दुर्घटनाग्रस्त कर सकते हैं।

अटलांटिक तटीय फ्लोरिडा के एक शहरी क्षेत्र में एडीज एजिप्टी की आबादी को कम करने का प्रयास करने के लिए एक एसआईटी कार्यक्रम शुरू किया गया था, जहां इस प्रजाति ने हाल ही में फिर से उपनिवेश किया और जीका, डेंगू या चिकनगुनिया जैसे वायरस के संचरण के लिए सार्वजनिक स्वास्थ्य जोखिम का विस्तार और प्रस्तुत कर रहा है। जंगली मादाओं के साथ संगतता की क्षमता को अधिकतम करने के लिए, कार्यक्रम9 के लिए पुरुषों का उत्पादन करने के लिए लक्ष्य आबादी से जंगली-पकड़े गए एडीज एजिप्टी का उपयोग करके एक नई कॉलोनी स्थापित की गई थी। यह इस परिकल्पना पर आधारित था कि स्थानीय रूप से व्युत्पन्न, कॉलोनी-पाले गए नर स्थानीय जंगली मादाओं के साथ संभोग के लिए स्थानीय जंगली पुरुषों के साथ प्रतिस्पर्धी होने की अधिक संभावना होगी। एसआईटी के प्रभावी होने के लिए, न केवल लक्षित क्षेत्र में बाँझ पुरुषों की भारी संख्या मौजूद होने की आवश्यकता है, बल्कि उन्हें स्थानीय जंगली मादा मच्छरों के साथ प्रभावी ढंग से संभोग और संभोग करने में भी सक्षम होना चाहिए।

रिलीज करने के लिए बाँझ पुरुषों की इष्टतम संख्या (केजेएल, आरएलए, एससीबी अप्रकाशित डेटा) के साथ-साथ विकिरण की इष्टतम खुराक निर्धारित करने के लिए प्रयोगों की एक श्रृंखला आयोजित की गई थी जो जंगली महिलाओं (केजेएल, आरएलए, एससीबी अप्रकाशित डेटा) द्वारा जीवित रहने, व्यवहार या स्वीकृति में हस्तक्षेप किए बिना पुरुषों को बना देगी। ये डेटा इस समूह से संबद्ध प्रकाशनों में आ रहे हैं, लेकिन इनमें से कुछ निष्कर्ष इस प्रोटोकॉल में भी कैप्चर किए गए हैं और कहीं और नए एसआईटी एडीज एजिप्टी नियंत्रण कार्यक्रमों के लिए शुरुआती बिंदु के रूप में इस्तेमाल किया जा सकता है। यह प्रजाति लगातार अपनी सीमा का विस्तार कर रही है, और एसआईटी कार्यक्रम इस आबादी को नियंत्रित करने के लिए लागत प्रभावी, दीर्घकालिक समाधान होने का बहुत वादा करते हैं। इस प्रोटोकॉल का उद्देश्य एक परिचालन सार्वजनिक स्वास्थ्य वेक्टर नियंत्रण कार्यक्रम में स्थानीय एडीज एजिप्टी आबादी के प्राकृतिक प्रजनन चक्रों को बाधित करने के लिए बाहरी क्षेत्रों में व्यवस्थित रिलीज के लिए निष्फल, पुरुष, कॉलोनी-पाले गए एडीज एजिप्टी मच्छरों का उत्पादन करना है।

जबकि ट्रांसजेनिक एडीज एजिप्टी पुरुषों के उत्पादन के लिए इसी तरह के प्रोटोकॉल और वर्कफ़्लो प्रकाशित किए गए हैं और एडीज एसआईटी के लिए उत्पादन वर्कफ़्लो, या वोल्बाचिया-आधारित असंगति कार्यक्रमों को कहीं और प्रकाशित किया गया है, यह प्रोटोकॉल दिखाता है कि एडीज एजिप्टी उत्पादन, नर प्यूपे के पृथक्करण और विकिरण, वयस्क पुरुषों को चिह्नित करने और पैकेजिंग करने और इस कार्यक्रम के लिए रिलीज साइट पर शिपमेंट के लिए मौजूदा प्रोटोकॉल कैसे अनुकूलित किए गएहैं। 10,11,12,13,14,15,16,17,18. एक परिपक्व परिचालन एसआईटी कार्यक्रम में इस प्रोटोकॉल के अंकन घटक की आवश्यकता नहीं हो सकती है; हालांकि, इसे यहां शामिल किया गया है क्योंकि यह एसआईटी कार्यक्रम की स्थापना के शुरुआती वर्षों में प्रभावकारिता की निगरानी करने और पूरी प्रक्रिया की गुणवत्ता को नियंत्रित करने का एक तरीका है। मच्छर नियंत्रण कार्यक्रम आम तौर पर स्थानीय अधिकारियों द्वारा चलाए जाते हैं, इसलिए वे स्थानीय सफलता को अधिकतम करने के लिए आकार और वित्त पोषण आधार से लेकर ट्यूनिंग नियंत्रण रणनीति तक अपने संगठन के कई पहलुओं में व्यापक रूप से भिन्न हो सकते हैं। इस प्रकार, उपलब्ध संसाधनों के साथ संगतता के लिए यहां वर्णित प्रोटोकॉल का मूल्यांकन किया जाना चाहिए।

Protocol

नोट: यह प्रोटोकॉल एडीज एजिप्टी की हैंडलिंग के लिए विशिष्ट है, लेकिन अन्य मच्छर प्रजातियों के लिए प्रभावी होने के लिए संशोधित किया जा सकता है।

1. एडीज एजिप्टी कॉलोनी का उत्पादन और रखरखाव

  1. वयस्क एडीज एजिप्टी को पालें और अंडे का उत्पादन करें।
    1. एक ऊर्ध्वाधर दीवार पर 0.6 मीटर x 0.6 मीटर x 0.6 मीटर ढहने योग्य, एल्यूमीनियम फ्रेम, 20 x 20 फाइबरग्लास जाल स्क्रीनिंग और एक पहुंच-इन स्टॉकिनेट आस्तीन के साथ बड़ा पालन पिंजरा तैयार करें।
    2. प्रत्येक पालन पिंजरे में एडीज एजिप्टी प्यूपे (1: 1 लिंग अनुपात) के साथ 1900 एमएल प्लास्टिक टब रखें, आस्तीन को बंद रखें, और कप को तब तक छोड़ दें जब तक कि कोई और वयस्क न उभरे (यानी, लगभग 4 दिन)। इस समय, कप को हटा दें, और वयस्क पालन पिंजरों को 28-30 डिग्री सेल्सियस, >50% सापेक्ष आर्द्रता (आरएच), और 12: 12 या 14: 10 प्रकाश: अंधेरे (एल: डी) चक्र पर बनाए रखें।
      नोट: एडीज एजिप्टी प्यूपे का उत्पादन खंड 1.2 में वर्णित है। 1900 एमएल टब में प्यूपे का घनत्व ऐसा होना चाहिए कि सभी प्यूपे के लिए एक साथ हवा के लिए आने के लिए पर्याप्त जगह हो।
    3. प्यूपे को पालन पिंजरों में रखे जाने के चौबीस घंटे बाद, स्पंज बाती के साथ 10% सुक्रोज घोल का एक कंटेनर रखें, और वयस्क मच्छरों को जलयोजन और पोषण के अलग-अलग स्रोत प्रदान करने के लिए प्रत्येक पिंजरे में तार के हुक से शहद में भिगोए गए 10 सेमी x 2 सेमी स्पंज को निलंबित करें। सूखापन या मोल्ड विकास के लिए स्पंज और सुक्रोज कंटेनर की निगरानी करें, और आवश्यकतानुसार फिर से भरें या बदलें।
      नोट: छोटे पालन पिंजरों में ढक्कन में कटआउट के माध्यम से फिट किए गए 10 सेमी x 2 सेमी स्पंज बाती के साथ 120 एमएल प्लास्टिक कप का उपयोग करें और बड़े पिंजरों में 12 सेमी x 8 सेमी स्पंज बाती के साथ 460 एमएल प्लास्टिक कप का उपयोग करें।
    4. अधिकांश वयस्कों के उभरने के 48-72 घंटे बाद प्रत्येक पालन पिंजरे को रक्त भोजन प्रदान करें और उसके बाद हर 2-3 दिनों में अंडे की उपज को अधिकतम करने के लिए रक्त पोषित महिलाओं की उच्च संख्या को बनाए रखें। लैम्बस्किन कंडोम को 50-100 एमएल डिफिब्रिनेटेड गोजातीय रक्त के साथ भरें, और गर्म पानी के स्नान में लगभग 37 डिग्री सेल्सियस तक गर्म करें। फिर, 30-60 मिनट के लिए पिंजरे के अंदर पेपर-लाइन वाले पेट्री डिश पर रखने से पहले कंडोम को थपथपाने और आंशिक रूप से सुखाने के लिए एक कपड़े या पेपर तौलिया का उपयोग करें।
      नोट: उपयोग करने से पहले, स्नेहक या अन्य सब्सट्रेट्स को हटाने के लिए प्रत्येक कंडोम के अंदर और बाहर को 2-3 गुना पानी से धोएं, और छेद की जांच करें। कंडोम को रक्त को धोकर और उन्हें एक कप ठंडे पानी में संग्रहीत करके 3-5 फीडिंग के लिए पुन: उपयोग किया जा सकता है। चूंकि कुछ कॉलोनियों में चींटियों के संक्रमण का अनुभव हो सकता है, इसलिए कंडोम को पहुंच को सीमित करने के लिए निलंबित करने की आवश्यकता हो सकती है।
    5. प्रत्येक रक्त पिलाने के बाद 48-72 घंटे प्रतीक्षा करें, और फिर प्रत्येक वयस्क पालन पिंजरे में एक अंडाकार कप पेश करें। कप की आंतरिक परिधि के साथ फिट किए गए बीज अंकुरण पेपर (ओवीपोजिशन पेपर) की 8-10 सेमी ऊंची x 30 सेमी चौड़ी शीट से सुसज्जित प्लास्टिक 460 एमएल कप में 200 मिलीलीटर फ़िल्टर किए गए प्यूपल पानी (यानी, पानी के लार्वा और प्यूपे को पाला गया था) जोड़कर अंडाकार कप तैयार करें। रोजाना ओवीपोजिशन पेपर की जांच करें, उन्हें हर 2-4 दिनों में बदलें, और अंडे से भरे ओविपोजीशन पेपर को >50% आरएच19 पर 24-48 घंटे के लिए सूखने के लिए छोड़कर सावधानीपूर्वक स्टोर करें।
      नोट: अंडे को अंडे सेने से रोकने के लिए 72 घंटे से अधिक समय तक पालन पिंजरों में अंडाकार कप छोड़ दें।
    6. वयस्क पालन पिंजरों को तोड़ने और नए वयस्क पालन पिंजरों की स्थापना करने से पहले 3-4 सप्ताह तक बनाए रखें।
      1. एक पालन पिंजरे को तोड़ने के लिए, ओविपोजिशन कप को हटा दें और साफ करें, अंडे से भरे अंडाकार पेपर को स्टोर करें, सुक्रोज समाधान कंटेनर और शहद स्पंज को हटा दें और साफ करें, और सभी मच्छरों को मारने के लिए पिंजरे को फ्रीज करें।
      2. सभी मच्छरों के शरीर को हटा दें, और पेपर तौलिए का उपयोग करके पतला साबुन और पानी के साथ प्रत्येक पिंजरे के अंदर और बाहर को अच्छी तरह से साफ करें और स्पंज के साथ पैड को छानें। अगले पालन चक्र में इसका उपयोग करने से पहले साफ पिंजरे को कम से कम 24 घंटे तक सूखने दें।
        नोट: एलर्जी का कारण बनने वाले कणों को हटाने के लिए उच्च दक्षता निस्पंदन के साथ फिट वैक्यूम उपकरण का उपयोग करें। सुक्रोज समाधान कंटेनरों को 3-5 गुना साफ और पुन: उपयोग किया जा सकता है।
  2. अंडे से एडीज एजिप्टी लार्वा का पालन करना
    1. 2200 एमएल नल के पानी में गोजातीय यकृत पाउडर: शराब बनाने वाले के खमीर के 3: 2 अनुपात के 80 ग्राम को मिलाकर लार्वा पोषण घोल का स्टॉक तैयार करें। पल्वराइज्ड मछली का भोजन तैयार करें। एक मसाला ग्राइंडर में मछली के गुच्छे डालें और तब तक पीसें जब तक कि यह एक महीन पाउडर न हो जाए।
      नोट: इस घोल को इस प्रयोगशाला में भूरे रंग के रूप में नामित किया गया है।
    2. चरण 1.1.5 से अंडे से भरे (5,000-10,000 अंडे) अंडाकार कागज का उपयोग करके, अंडाकार रेखा के लंबवत अंडे के पेपर के 3-7 सेमी हिस्से को काटें, और इसे 460 एमएल कंटेनर में रखें जो नल के पानी से आधा भरा हुआ है। कम से कम 1 मिनट के लिए जोर से कवर करें और उत्तेजित करें।
      नोट: भ्रूणीकरण की अनुमति देने के लिए हैचिंग प्रक्रिया शुरू करने से पहले अंडे के कागज को कम से कम 7 दिनों (लेकिन 90 दिनों से अधिक नहीं, जो हैचिंग को कम कर सकता है) के लिए संग्रहीत किया जाना चाहिए। मछली के भोजन में मौजूद बैक्टीरिया और शैवाल तेजी से पानी को डीऑक्सीजेनेट करते हैं, जो लार्वा विकास को ट्रिगर करता है।
    3. चरण 1.2.2 से कंटेनर की पूरी सामग्री को 3 लीटर नल के पानी और 50 मिलीलीटर भूरे घोल के साथ तैयार लार्वा पालन पैन में डालें। पैन को प्रारंभ दिनांक, तनाव जानकारी, प्रति तालिका 1 फीडिंग शेड्यूल के साथ चिह्नित करें, और 28-30 डिग्री सेल्सियस, >50% Rh, और 12:12 या 14:10 L:D पर स्टोर करें चक्र।
      नोट: 3 एल पानी से 50 एमएल भूरे रंग का अनुपात सामग्री की तालिका में उल्लिखित विशेष लार्वा पैन में पानी की गहराई पर आधारित है। विभिन्न आकार के पैन अलग-अलग प्यूपल घनत्व का समर्थन करेंगे और इस प्रकार अलग-अलग मात्रा में पानी और भूरे रंग के घोल की आवश्यकता होती है। तालिका 1 में लार्वा खिलाने की दर एक सीमा के रूप में दी गई है; उपयोग की जाने वाली राशि का चयन पानी की टर्बिडिटी, रंग और गंध जैसे चर का उपयोग करके विकासशील लार्वा के समग्र स्वास्थ्य के अनुभव और निर्धारण पर आधारित है; पानी पर जीवाणु फिल्म की उपस्थिति; जीवित और मृत लार्वा की संख्या या अनुपात; और लार्वा की गतिशीलता। 3 से 6 दिनों में, अपरिपक्व मच्छरों को तालिका 1 के अनुसार मछली का भोजन खिलाएं। पानी जोड़ना, भोजन को कम करना, और परियोजना की आवश्यकता से 2-3 अतिरिक्त पैन स्थापित करना अस्वास्थ्यकर लार्वा पैन का प्रबंधन करने के तरीके हैं।
दिन मात्रा पोषण घोल जोड़ा गया आयतन पानी जोड़ा गया कार्यों
1 50 एमएल (घोल) 3000 mL
2 (भोजन नहीं) (पानी नहीं)
3 1/4 - 1/2 छोटा चम्मच (पल्वराइज्ड मछली का भोजन) 500-1000 एमएल
4 1/2 - 3/4 छोटा चम्मच (पल्वराइज्ड मछली का भोजन) 500-1000 एमएल
5 1/2 - 3/4 छोटा चम्मच (पल्वराइज्ड मछली का भोजन) 500-1000 एमएल
6 1/4 - 1/2 छोटा चम्मच (पल्वराइज्ड मछली का भोजन) 500-1000 एमएल
7 (भोजन नहीं) (पानी नहीं) प्यूपे और लार्वा को तनाव दें

तालिका 1: एडीज एजिप्टी लार्वा के बड़े पैमाने पर पालन के लिए फीडिंग शेड्यूल।

2. नर एडीज एजिप्टी प्यूपे का पृथक्करण

  1. लार्वा पैन से प्यूपा पर ध्यान केंद्रित करें। एक बार प्यूपे का अनुमानित सीमा अनुपात पहुंचने के बाद, प्रत्येक पैन की सामग्री को छलनी (आकार 20-40) के माध्यम से डालें। 3000 एमएल स्नातक प्लास्टिक बीकर में छलनी से प्यूपे और लार्वा को धोने के लिए नल के पानी की निचोड़ बोतल का उपयोग करें।
    नोट: भीड़भाड़ से बचने के लिए प्रत्येक 3000 एमएल बीकर में केवल 2-3 लार्वा पैन स्थानांतरित किए जाने चाहिए ताकि प्यूपे आराम से सतह तक पहुंच सके। चरण 1.2.3 में उल्लिखित तापमान और प्रकाश की स्थिति के तहत अंडे के हैच के बाद प्यूपा 130-140 घंटे के बीच विकसित होने की उम्मीद है। उसी दिन ध्यान देने योग्य अंडे सेच की उम्मीद करें जिस दिन अंडे सेट किए जाते हैं। पर्यावरणीय परिस्थितियों के आधार पर, लगभग 20-70% लार्वा पके हुए होंगे और 6 दिनों के भीतर छलनी होने के लिए तैयार होंगे। प्यूपे को कई 3000 एमएल बीकर में विभाजित करने से विभाजक में डालने के लिए प्रबंधनीय मात्रा सुनिश्चित होती है।
  2. नर प्यूपे को लार्वा और मादा प्यूपे से अलग करें।
    नोट: यह चरण एक ऑपरेटर या दो ऑपरेटरों द्वारा किया जा सकता है।
    1. नर प्यूपे को अलग करने वाले एकल ऑपरेटर के लिए:
      1. चरण 2.1 में उत्पन्न प्रत्येक 3000 एमएल बीकर की सामग्री को कई 1900 एमएल प्लास्टिक कंटेनरों में विभाजित करें ताकि फैलाव को कम किया जा सके और विभाजक पर बोझ डाला जा सके। विभाजक के आधार पर स्लुइस के नीचे एक कठोर उथले 4000 एमएल संग्रह कंटेनर रखकर प्लेट विभाजक तैयार करें (चित्रा 1)। नल के पानी से लगभग 3/4 भरे दो 3000 एमएल स्नातक प्लास्टिक बीकर भरें।
        नोट: 3000 एमएल प्लास्टिक स्नातक बीकर के विकल्प के रूप में सिंक नली का उपयोग करें। अन्यथा, बीकर को अलगाव प्रक्रिया के दौरान लगातार फिर से भरने की आवश्यकता होगी। प्यूपल विभाजक के संचालन के लिए अतिरिक्त विवरण संदर्भ12,20 में पाया जा सकता है।
      2. कांच की प्लेटों के बीच की जगह के माध्यम से पानी डालें और शीर्ष और निचले घुंडों को घड़ी के अनुसार या काउंटरक्लॉकवाइज समायोजित करें ताकि पानी लगातार बह सके, जबकि साथ ही प्लेटों के आधार से लगभग 1.25 सेमी की ऊंचाई तक खड़े पानी का उत्पादन हो सके। टेप के साथ नीचे की घुंडी की शुरुआती स्थिति को चिह्नित करें। एक बार जब खड़े पानी को समान ऊंचाई और नाली दर के साथ कांच की प्लेटों के आधार पर समान रूप से वितरित किया जाता है, तो प्लेटों के बीच की जगह के माध्यम से प्यूपे और लार्वा के कंटेनरों की सामग्री डालना शुरू करें।
        नोट: छोटे (नर) और बड़े (मादा) प्यूपे के बीच एक स्पष्ट अलगाव मौजूद होना चाहिए; अन्यथा, इस बैच को फ्लश करें, और प्लेटों के बीच की जगह को कम करने के लिए ऊपरी नॉब्स को समायोजित करें।
      3. विभाजक के माध्यम से धीरे-धीरे पानी डालते समय, टेप-चिह्नित प्रारंभिक स्थिति से ~ 1-2 सेमी की दूरी पर एक जोड़ी के रूप में नीचे की घुंडी को लगातार घुमाएं जब तक कि अधिकांश या सभी लार्वा धुल न जाएं और स्लुइस को संग्रह कंटेनर में नीचे खिसका न लें।
        नोट: जैसा कि एक हाथ का उपयोग पानी डालने के लिए किया जा रहा है, दूसरा हाथ प्लेटों को धीरे-धीरे खोलने के लिए एक बार में नॉब्स को घुमाता है, लेकिन समान रूप से और छोटी वेतन वृद्धि में। अधिकांश लार्वा जल्दी से धोए जाते हैं, लेकिन नर प्यूपे के साथ पकड़े गए कुछ लार्वा होंगे। इन स्ट्रैगलर लार्वा को विकिरणित किया जाएगा, लेकिन विकास में पिछड़ जाएगा और प्यूपे के फोकल समूह के साथ वयस्कों के करीब नहीं होगा।
      4. लार्वा को कॉलोनी में वापस फेंक दें या रीसायकल करें, लेकिन किसी भी मामले में, उन्हें संग्रह कंटेनर से हटा दें इससे पहले कि नर प्यूपे विभाजक के माध्यम से धोना शुरू कर दें। पानी के प्रवाह को रोककर प्रक्रिया को रोकें, जबकि स्लुइस के आधार पर संग्रह कंटेनर को # 30 छलनी के माध्यम से डालकर लार्वा से साफ किया जाता है, जिसे एक अलग कंटेनर में वापस धोया जाता है।
        नोट: लार्वा पहले, उसके बाद नर प्यूपे और अंत में मादाओं के माध्यम से प्रवाहित होता है (चित्र 1)।
      5. पानी डालना जारी रखें और नीचे की घुंडी को तब तक घुमाएं जब तक कि नर लार्वा को धोया नहीं जाता और संग्रह कंटेनर में अलग नहीं किया जाता। अगले चरण में नर प्यूपे के स्थानांतरण से पहले संग्रह कंटेनर से लार्वा की जांच करने और निकालने की प्रक्रिया को रोकें।
        नोट: पुरुषों को अलग करने के लिए आवश्यक फ्लश की संख्या पानी डालने की गति और उस गति पर निर्भर करती है जिस पर नॉब्स को घुमाया जाता है। आमतौर पर लार्वा को बाहर निकालने के लिए 2000-2500 एमएल पानी, नर प्यूपे को बाहर निकालने के लिए 1000-1500 एमएल और मादा प्यूपे को बाहर निकालने में 200-400 एमएल की आवश्यकता होती है।
      6. एक सिंक पर # 20 छलनी के माध्यम से संग्रह कंटेनर से नर प्यूपे को बाहर निकालें। एक अलग 1900 एमएल कंटेनर में डालते समय छलनी से नर प्यूपे को वापस धोने के लिए नल के पानी की 1000 एमएल निचोड़ बोतल का उपयोग करें।
      7. एक बार जब सभी नर प्यूपे अलग हो जाते हैं, तो विभाजक के माध्यम से पानी डालना जारी रखें, और मादा प्यूपे के माध्यम से फ्लश करने के लिए निचले घुंडों को समायोजित करें। चरण 2.2.1.6 में वर्णित छलनी प्रक्रिया का उपयोग करके मादाओं को एक अलग कंटेनर में स्थानांतरित करें जब तक कि सभी अपरिपक्व मच्छर विभाजक से बाहर नहीं निकल जाते। मादा प्यूपे को त्याग दें। एक बार बैच संसाधित हो जाने के बाद, नॉब्स को उनके मूल शुरुआती पदों पर वापस करें, और अगले बैच के साथ प्रक्रिया को दोहराएं। एक बार सभी बैच संसाधित हो जाने के बाद, प्लेटों को खुला छोड़ दें ताकि विभाजक सूख सके।
        नोट: इस उपकरण का उपयोग करके कोई सही पृथक्करण नहीं है, जिसके लिए धैर्य और अभ्यास की आवश्यकता होती है। जिद्दी प्यूपे या लार्वा को पानी के भारी प्रवाह के साथ हटाया जा सकता है, लेकिन इस हद तक नहीं कि यह उन्हें किनारों पर धकेल दे, जो भविष्य के जलप्लावन को दूषित कर सकता है।
    2. नर प्यूपे को अलग करने वाले दो ऑपरेटरों के लिए, अनुभाग 2.2.1 को निम्नानुसार संशोधित करें।
      1. पहला ऑपरेटर: विभाजक के माध्यम से पानी डालें, और लार्वा, नर प्यूपे और मादा प्यूपे को अलग करने के लिए नॉब्स को क्रमिक रूप से घुमाएं।
      2. दूसरा ऑपरेटर: एक बार जब प्रत्येक चरण स्लुइस कंटेनर में एकत्र हो जाता है, तो लार्वा, नर प्यूपे और मादा प्यूपे को कई, अलग-अलग स्लुइस संग्रह कंटेनरों में विभाजित करने के लिए स्लुइस कंटेनर की सामग्री को छान लें। यदि सिंक नली उपलब्ध नहीं है तो बड़े बीकर को पानी से भरकर रखें।

Figure 1
चित्र 1: प्यूपल विभाजक जिसमें अपरिपक्व एडीज एजिप्टी का एक बैच होता है। पृथक्करण विभाजक के माध्यम से पानी डालने से शुरू होता है, जबकि नीचे की घुंडी को 1-2 सेमी प्रतिघंटा घुमाते हुए जब तक कि लक्षित सेट, यानी लार्वा, नर प्यूपे, या मादा प्यूपे को उन सेटों से जितना संभव हो उतना अलग नहीं किया जाता है (बाएं छवि)। दाईं छवि लार्वा (सबसे कम बैंड), नर प्यूपे (मध्य बैंड), और मादा प्यूपे (ऊपरी बैंड) के अलगाव को दर्शाती है। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

3. विकिरण के लिए नर एडीज एजिप्टी प्यूपे की तैयारी

  1. नर प्यूपे को प्लास्टिक 60 मिमी पेट्री व्यंजनों में विभाजित करें।
    नोट: आवश्यक पेट्री व्यंजनों की संख्या इस बात पर निर्भर करती है कि विकिरण के लिए कितने नर प्यूपे उपलब्ध हैं: चरण 1.2 से एक लार्वा पालन पैन लगभग 1.5 पेट्री व्यंजन भर देगा। प्यूपे की उम्र 1 से 40 घंटे तक होती है। इस प्रोटोकॉल में, पेट्री डिश के छोटे व्यास गहरे आधे हिस्से को नीचे कहा जाता है, और बड़े व्यास उथले आधे को शीर्ष कहा जाता है।
    1. पेट्री डिश बॉटम के अंदर के व्यास को फिट करने के लिए फिल्टर पेपर की प्रीकट डिस्क तैयार करें। परिवहन और विकिरण प्रक्रिया के दौरान प्यूपी को हाइड्रेटेड रखने के लिए पेट्री व्यंजनों के प्रत्येक तल में एक पानी-नम फ़िल्टर पेपर डिस्क रखें।
    2. प्यूपे को पेट्री व्यंजनों में स्थानांतरित करें। चरण 2.2.1.6 में एकत्र किए गए नर प्यूपे को छलनी के साथ छान लें और प्यूपे को 1000 एमएल स्नातक बीकर में जितना संभव हो उतना कम पानी के साथ धो लें। पेट्री व्यंजनों में प्यूपे को सावधानीपूर्वक डालें जब तक कि प्रत्येक फ़िल्टर पेपर डिस्क समान रूप से प्यूपे की एक परत के साथ कवर न हो जाए (चित्रा 2 ए - सी)। डालने की सुविधा के लिए एक पंक्ति में एक मेज के किनारे पर पेट्री व्यंजनों को व्यवस्थित करें।
      नोट: प्यूपे को तनाव देने का एक विकल्प प्लास्टिक 3 एमएल पाश्चर पिपेट की नोक को प्यूपे को समायोजित करने के लिए पर्याप्त व्यास तक स्निप करना है। चरण 2.2.1.6 में उत्पादित कंटेनर से प्यूपे को सीधे फ़िल्टर पेपर डिस्क पर स्थानांतरित करने के लिए पिपेट का उपयोग करें ताकि प्रत्येक पेट्री डिश में प्यूपे की एक एकल, बारीकी से पैक की गई परत हो। यह केवल छोटे बैचों के लिए व्यावहारिक है।
    3. सेक्सिंग स्टेप (3.2) और परिवहन के दौरान प्यूपल आंदोलन को रोकने के लिए पेट्री डिश के तल से खड़े पानी को हटाने के लिए एक अपरिवर्तित 3 एमएल पाश्चर पिपेट का उपयोग करें।

Figure 2
चित्र 2: विकिरण के लिए पेट्री व्यंजनों में प्यूपे को स्थानांतरित करना। (A) छलनी प्यूपे को डाला जाता है और 1000 एमएल प्लास्टिक बीकर में वापस धोया जाता है। (बी) पेट्री व्यंजनों में डालने की सुविधा के लिए बीकर में न्यूनतम पानी बनाए रखा जाता है। (सी) पेट्री व्यंजन ों को प्यूपे की एक परत में डालने की सुविधा के लिए सतह के किनारे पर पंक्तिबद्ध किया जाता है। (डी) प्यूपे से भरे पेट्री व्यंजनों को विकिरण सुविधा में वितरण के लिए ढेर और सुरक्षित किया जाता है। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

  1. मादाओं के साथ संदूषण की जांच के लिए प्यूपे का सेक्स करें। विच्छेदन दायरे के तहत, पुरुष लिंग का संकेत देने वाले बड़े आकार के जननांग लोब (चित्रा 3) के लिए उदर सतह की जांच करने के लिए प्रत्येक प्यूपा को घुमाने के लिए जांच का उपयोग करें। प्यूपे को कम या छोटे जननांग लोब के साथ हटा दें और त्याग दें जो महिलाओं को इंगित करते हैं और सही गिनती बनाए रखने के लिए समान संख्या में पुरुष प्यूपे से प्रतिस्थापित करते हैं।
    नोट: एक परिचालन कार्यक्रम में, मच्छरों की बड़ी संख्या के कारण यह कदम व्यावहारिक नहीं है, और तथ्य यह है कि विकिरण के बाद पृथक्करण, स्थानांतरण, विकिरण और पिंजरों को तैयार करना सभी सीमित समय के साथ एक दिन में किया जाता है। चुनिंदा पेट्री व्यंजनों से एक नमूने की गुणवत्ता की जांच की जा सकती है, खासकर एसआईटी कार्यक्रम के विकास के शुरुआती चरणों में।

Figure 3
चित्र 3: जननांग लोब का उपयोग करके प्यूपे का सेक्स करना। (ए) महिला () और पुरुष () एडीज एजिप्टी प्यूपे के वेंट्रल और (♀ ♂ बी) पार्श्व दृश्य, जननांग लोब के साथ यौन द्विरूपता दिखाने के लिए संकेत दिया गया है। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

  1. पेट्री व्यंजनों के शीर्ष के साथ तल को कवर करें, और प्रयोगशाला टेप के साथ सुरक्षित करें। विकिरण कक्ष में फिट होने के लिए ढेर में लोचदार बैंड के साथ टेप किए गए पेट्री व्यंजनों को बंडल करें, और लेबल किए गए 3.8 एल रीसीलेबल बैग (चित्रा 2 डी) के अंदर सील करें। प्यूपे को >1 घंटे तक खुला न रहने दें।

4. नर एडीज एजिप्टी प्यूपे का विकिरण

  1. फिल्मों के 1 सेमी2 वर्गों को काटकर और प्रत्येक वर्ग को अपने व्यक्तिगत लिफाफे में रखकर उसी लॉट से डोसिमेट्री फिल्म तैयार करें।
    नोट: प्रत्येक दिन उपयोग की जाने वाली सभी फिल्म एक ही समय में काट दी जाती है। यह भंडारण द्वारा प्रेरित भिन्नता की छोटी मात्रा को कम करता है। प्रत्येक स्टैक के लिए आवश्यक वर्गों की संख्या 1 + (पेट्री व्यंजनों की संख्या) है।
  2. विकिरण सुविधा में लेने के लिए एक किट तैयार करें, जिसमें एक प्रयोगशाला टाइमर, प्रयोगशाला टेप, स्थायी मार्कर, डोसिमेट्री फिल्म के तैयार लिफाफे, डोसिमेट्री बैज और प्रमुख जानकारी का ट्रैक रखने के लिए चेकलिस्ट के साथ एक प्रयोगशाला नोट शीट शामिल होनी चाहिए (चित्रा 4)।

Figure 4
चित्रा 4: प्रयोगशाला पुस्तक रूपरेखा-आईआर शीट एक खुराक प्रतिक्रिया सेट के लिए पूरी हुई। लाल रंग में उल्लिखित पाठ बॉक्स (लाल तीर द्वारा चिह्नित) विभिन्न अनुभागों पर उपयोगी नोट्स इंगित करते हैं और महत्वपूर्ण जानकारी को दोहराते हैं। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

  1. प्यूपे को विकिरण सुविधा में ले जाएं। इन्सुलेटेड कंटेनरों में चरण 3.3 से नर प्यूपे के पेट्री व्यंजन रखें और परिवहन के दौरान सीधे सूरज की रोशनी और एयर कंडीशनिंग के साथ स्टोर करें।
  2. विकिरण पर विकिरण के लिए पेट्री व्यंजनों के ढेर तैयार करें। प्रत्येक डिश के बीच और स्टैक के शीर्ष और नीचे केंद्रित एक डोसिमेट्री फिल्म लिफाफे के साथ विकिरण कक्ष में फिट होने के लिए पेट्री व्यंजनों की उचित संख्या को ढेर करें। रिसाव को रोकने और कक्ष में स्टैक के प्लेसमेंट की सुविधा के लिए प्रयोगशाला टेप के साथ लिफाफे और पूरे ढेर को सुरक्षित करें।
  3. नर प्यूपे के पेट्री व्यंजनों को विकिरणित करें। विशिष्ट विकिरण इकाई 21 के पिछले खुराक-मानचित्रण के आधार पर एक्सपोजर के इष्टतम शंकु के लिए सही ऊंचाई पर स्थिति के लिए कक्ष में कठोर धातु जाल पर पेट्रीव्यंजनों का ढेर रखें। विकिरणक पर टर्नटेबल को सक्रिय करें और विकिरणित करें, साथ ही साथ प्रयोगशाला टाइमर शुरू करें। वांछित खुराक को पूरा करने के लिए उपयुक्त अंतराल के लिए विकिरणित करें (उदाहरण तालिका 2 में दिखाए गए हैं)।
    नोट: यह प्रोटोकॉल एक सीज़ियम -137 इरेडिएटर ( सामग्री की तालिका देखें) और 50 GY की लक्ष्य खुराक पर आधारित है। क्योंकि सीएस -137 समय के साथ क्षय हो जाता है, खुराक दर को हर साल एलानिन डोसीमीटर का उपयोग करके खुराक-प्रतिक्रिया श्रृंखला करके समायोजित किया जाता है, जो लगभग 10% विकिरणित नमूनों में नियमित डोसिमेट्री और एलानिन के लिए रेडियोक्रोमिक फिल्म के साथ पूरक होता है। 8.8 Gy / min की वर्तमान खुराक दर को देखते हुए, 50 Gy की लक्ष्य खुराक प्राप्त करने के लिए 5 मिनट, 41 s एक्सपोज़र की आवश्यकता होती है। नियमित फिल्म डोसिमेट्री चरण 4.7 में वर्णित के रूप में होती है। एलानिन पेलेट डोसिमेट्री या तो टेक्सास ए एंड एम विश्वविद्यालय में नेशनल सेंटर फॉर इलेक्ट्रॉन बीम रिसर्च या गैथर्सबर्ग, एमडी, यूएसए में नेशनल इंस्टीट्यूट ऑफ स्टैंडर्ड एंड टेक्नोलॉजी में किया जाता है।
खुराक (Gy) समय (8.8 Gy / min पर आधारित)
0 ना
10 1 मिनट 8 सेकंड
30 3 मिनट 24 सेकंड
50 5 मिनट 41 सेकंड
65 7 मिनट 23 सेकंड
85 9 मिनट 39 सेकंड
100 11 मिनट 22 सेकंड
110 12 मिनट 30 सेकंड

तालिका 2: सीज़ियम -137 इरेडिएटर के लिए उदाहरण खुराक समय।

  1. एक बार निर्धारित समय बीत जाने के बाद, पेट्री व्यंजनों को इरेडिएटर से हटा दें, और सावधानीपूर्वक स्टैक को ध्वस्त करें। स्टैक में तारीख और स्थान के साथ सभी पेट्री व्यंजन और फिल्म लिफाफे लेबल करें। लिफाफे को सील करें और डोसिमेट्री के लिए स्टोर करें। मुख्य प्रयोगशाला में वापस परिवहन के लिए पेट्री व्यंजनों को इन्सुलेटेड कंटेनर में फिर से पैक करें।
    नोट: रिकॉर्ड करें कि क्या वयस्क विकिरण के दौरान उभरे हैं और प्रभावित पेट्री डिश को चिह्नित करते हैं ताकि वयस्क (ओं) बच न सकें जब प्यूपे को पालन पिंजरों में सेट किया जाता है (चरण 5.2)।
  2. लगभग 24 घंटे बाद फिल्म को मापकर डोसिमेट्री फिल्म के साथ विकिरण खुराक की पुष्टि करें। डोसिमेट्री रीडर को सक्रिय करें और इसे कमरे के तापमान के बराबर होने दें। पाठक के साथ आपूर्ति की गई फोर्सप्स का उपयोग करके फिल्म को लोड करें और विकिरणित फिल्म के साथ-साथ उसी बैच से अनिरेडेड खाली फिल्म को पढ़ने के लिए निर्माता के निर्देशों का पालन करें। रीडिंग के बीच कोई फिल्म नहीं होने वाले पाठक को शून्य करें, और डेटा रिकॉर्ड करें जैसा कि चित्रा 5 में दिखाए गए उदाहरण डेटा शीट में दिखाया गया है।
    नोट: यह प्रोटोकॉल ND0.5 और ND1.0 QA फ़िल्टर सेट मानकों पर आधारित है। ऑपरेटर के सामने मैट साइड के साथ फिल्म को मापना महत्वपूर्ण है।

Figure 5
चित्रा 5: डोसिमेट्री डेटा शीट उदाहरण डेटा के साथ आबाद है। कॉलम शीर्षक ऑपरेटर को बाद के विश्लेषण के लिए प्रमुख डेटा कैप्चर करने के लिए प्रेरित करते हैं। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

5. वयस्कों में विकिरणित नर एडीज एजिप्टी प्यूपे का पालन

  1. छोटे प्लास्टिक 30 सेमी x 30 सेमी x 30 सेमी पालन पिंजरों को साफ करें और तैयार करें ताकि वे मुख्य प्रयोगशाला में लौटने पर विकिरणित प्यूपे के लिए तैयार हों। विकिरणित नर प्यूपे के प्रत्येक 2 पेट्री व्यंजनों के लिए, 1 पालन पिंजरा तैयार करें। चरण 1.1.3 में वर्णित अनुसार, प्रत्येक पालन पिंजरे को आधे भरे प्लास्टिक कप के साथ स्टॉक करें जिसमें 460 एमएल नल का पानी और एक 10% सुक्रोज समाधान कंटेनर हो।
  2. विकिरण सुविधा से लौटने के बाद विकिरणित प्यूपे को तुरंत तैयार पालन पिंजरों में स्थानांतरित करें। प्रत्येक पालन पिंजरे में प्लास्टिक कप में 460 एमएल पानी में प्रत्येक पेट्री डिश से प्यूपे को सावधानीपूर्वक धोने के लिए पानी की एक निचोड़ बोतल का उपयोग करें। 24 घंटे के बाद, कप को पोषण स्रोत वाले नए, साफ पालन पिंजरों में स्थानांतरित करें, और वयस्क, नर विकिरणित एडीज एजिप्टी के शेष उत्सर्जन की प्रतीक्षा करें।
    नोट: यदि विकिरण प्रक्रिया के दौरान प्यूपे उभरा है, तो उड़ान भरने वालों के साथ पेट्री व्यंजन को एक खाली पिंजरे में खोलें, और फिर चरण 5.2 के साथ जारी रखें। इस पिंजरे में एकत्र किए गए नरों को त्याग दें। प्यूपे को 24 घंटे के बाद नए पालन पिंजरों में स्थानांतरित कर दिया जाता है क्योंकि नर एक ही समूह की महिलाओं से पहले उभरते हैं और उद्भव के दिनों को अलग करने से महिला संदूषण की घटनाओं को कम किया जा सकता है और पुरुषों की सटीक उम्र बढ़ने को सुनिश्चित किया जा सकता है।

6. विकिरणित वयस्क एडीज एजिप्टी पुरुषों को चिह्नित करना और वजन करना

नोट: प्रोटोकॉल का यह खंड मानता है कि दो लोग कार्यों का संचालन कर रहे हैं; 1 व्यक्ति के लिए, 6.4 देखें।

Figure 6
चित्रा 6: रिलीज कंटेनरों में चिह्नित, विकिरणित, नर एडीज एजिप्टी पैकिंग। (ए) मास्किंग टेप, स्टेपल और गर्म गोंद के साथ कार्डस्टॉक सिलेंडर के किनारे में काटे गए एक छेद पर बंधे स्टॉकिनेट को दिखाने वाला कंटेनर जारी करें। बेज़ल साइड में एक मास्किंग टेप लेबल बैकिंग के साथ है। बेज़ल कसकर खींचे गए टुल जाल कवर को बनाए रख रहा है; एक लोचदार बैंड (दिखाई नहीं दे रहा है) भी बेज़ल के नीचे टुले को पकड़ रहा है। (बी) एक छोटे कार्डस्टॉक कप में गुलाबी डाई में गिरने की प्रक्रिया में एनेस्थेटाइज्ड पुरुषों का बैच। (सी) इंसुलेटेड शिपिंग कंटेनर के अंदर चार रिलीज कंटेनर। ध्यान दें कि स्टॉकिनेट आस्तीन शिपिंग कंटेनर के बीच में उन्मुख हैं, पैकिंग सामग्री रिलीज कंटेनरों के चारों ओर छिपी हुई है, और पोषण और जलयोजन स्रोत प्रत्येक रिलीज कंटेनर के शीर्ष पर एक उल्टे पेट्री डिश बॉटम द्वारा कवर किए गए हैं जो क्रॉस इलास्टिक बैंड और टेप के बिट्स द्वारा तेजी से आयोजित किए जाते हैं। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

  1. कार्डस्टॉक रिलीज कंटेनर तैयार करें।
    1. एक ढक्कन, बेलनाकार 3.9 एल कार्डस्टॉक कंटेनर के किनारे में नीचे से 1.5-3.0 सेमी पर एक 11.5 सेमी व्यास का छेद काटें ताकि छेद ढक्कन द्वारा कवर न किया जाए (चित्रा 6 ए)।
    2. स्टॉकिनेट की 40-50 सेमी लंबाई काटें, और 6.1.1 में काटे गए 11.5 सेमी छेद के अंदर इसके एक छोर को स्टेपल करें। खोले गए एक मानक कार्यालय स्टेपलर का उपयोग करें ताकि स्टेपल को स्टॉकिनेट और कार्डस्टॉक के माध्यम से कंटेनर के अंदर से और एक उपयुक्त कार्य सतह में मजबूर किया जा सके जैसे कि हार्ड एक्सट्रूडेड पॉलीस्टाइनिन फोम का एक ब्लॉक। स्टॉकिनेट को छेद की परिधि में कसकर सुरक्षित करने के लिए फ्लैट-हेड स्क्रूड्राइवर का उपयोग करके स्टेपल को क्रैम्प करें और खराबी को रोकने के लिए क्रॉम्प्ड साइड पर मास्किंग टेप बांधें। सिलेंडर के अंदर स्टॉकिनेट के किनारे को गर्म गोंद के साथ कार्डस्टॉक पर सील करें और भागने के छेद के लिए पूरी असेंबली को क्रॉस-चेक करें।
    3. ढक्कन से आंतरिक डिस्क को हटाकर एक रिटेनिंग बेजल बनाएं और वयस्क नर एडीज एजिप्टी मच्छरों को बनाए रखने के लिए पर्याप्त रूप से नायलॉन ट्यूल जाल के 33 सेमी x 33 सेमी वर्ग को काटें। सिलेंडर के खुले छोर पर जाल रखें और बेज़ल को जाल के ऊपर फिट करें ताकि इसे बिना किसी अंतराल के रखा जा सके। जाल को नीचे की ओर खींचें ताकि यह खुले छोर पर सिखाए गए जाल को बनाने के लिए बेज़ल के नीचे फैल जाए और रबर बैंड के साथ सिलेंडर के खिलाफ उभरे हुए जाल को कसकर सील कर दे।
    4. लेबलिंग टेप के 8 सेमी टुकड़े के साथ कवर किए गए बेज़ल के किनारे मास्किंग टेप का 10 सेमी टुकड़ा रखें ताकि लेबलिंग टेप को बेज़ल को फाड़े बिना आसानी से बदला जा सके।
      नोट: रिलीज कंटेनर टिकाऊ हैं और उचित हैंडलिंग के साथ >10x पुन: उपयोग किया जा सकता है। चिह्नित, विकिरणित, वयस्क, नर मच्छरों के प्रत्येक नए बैच को पेश करने से पहले, जांचें कि स्टॉकिनेट कंटेनर से सुरक्षित रूप से जुड़ा हुआ है, और यदि आवश्यक हो तो तुरंत मरम्मत करें।
  2. वजन और अंकन स्टेशन तैयार करें।
    1. 240 एमएल कार्डस्टॉक कंटेनर में लगभग 50 मिलीग्राम मार्किंग डाई डालें, और डाई को कंटेनर की आंतरिक सतहों के आसपास समान रूप से पाउडर के कोट के रूप में फैलाएं। अतिरिक्त डाई को त्यागने के लिए धीरे से टैप करें। रंगों को अलग रखने के लिए कई रंगों के लिए स्पष्ट रूप से लेबल किए गए कप का उपयोग करें।
    2. 0.0001 ग्राम इलेक्ट्रॉनिक बैलेंस पर 100-500 ग्राम वजन वाली नाव है; एक डेटा प्रपत्र बनाएँ (तालिका 3); और 431.8 मिमी x 711.2 मिमी कार्य सतह बनाने के लिए 215.9 मिमी x 355.6 मिमी कॉपी पेपर की चार शीटों को एक साथ टेप करें।
रिलीज़ कंटेनर मच्छरों का वजन पिंजरे की संख्या बैच में महिलाएं पुरुषों की संख्या रिलीज़ कंटेनर कुल द्रव्यमान
गुलाबी I 0.024 D1 #1 25 गुलाबी I 2.03
गुलाबी I 2.007 D1 #1 7 गुलाबी II 1.99
गुलाबी II 1.990 D1 #1 गुलाबी III 2.03
गुलाबी III 0.026 D1 #3 25
गुलाबी III 2.000 D1 #3 18

तालिका 3: स्टेशन डेटा तालिका का वजन।

  1. फ्लोरोसेंट वर्णक के साथ वयस्क विकिरणित पुरुषों के बैचों को चिह्नित करें।
    1. प्रत्येक पालन पिंजरे से वयस्क मच्छरों (2.5-3.5 दिन पुराने) को एस्पिरेटर शीशियों में स्थानांतरित करें। चरण 5.2 से पालन पिंजरे से पोषण स्रोतों को हटा दें और पूरे पिंजरे को 5-7 मिनट के लिए एक बड़े सीओ2 कक्ष में रखें, जो मच्छरों को हटाने के लिए कंटेनर के किनारों को खटखटाते हैं जो पालन पिंजरे से चिपके हो सकते हैं। एक्सपोजर का समय बीत जाने के बाद, पालन पिंजरे को कक्ष से हटा दें, और सभी वयस्क मच्छरों को प्लास्टिक आकांक्षा शीशियों की एक श्रृंखला में डालें।
      नोट: 99.5-100% सीओ2 का प्रशासन एक टैंक से होता है जिसमें एक नियामक, पीतल बार्ब और सिलिकॉन ट्यूबिंग होती है जो 6 एल / मिनट की प्रवाह दर पर कक्ष में चैनल होती है। पालन पिंजरे को साफ करने के लिए आवश्यक शीशियों की संख्या इस बात पर निर्भर करती है कि पिंजरे में कितने मच्छर हैं और ऑपरेटर की दक्षता, लेकिन आमतौर पर प्रति पिंजरे 3-5 शीशियों की आवश्यकता होती है। एक एस्पिरेटर चुनें जिसमें बैचों में वयस्क मच्छरों के प्रबंधन की सुविधा के लिए छोटी त्वरित-परिवर्तन शीशियां हों, उदाहरण के लिए, एक 60 एमएल पॉलीस्टाइनिन इकट्ठा करने वाली शीशी का उपयोग करके एक छोर पर 20 x 20 जाल एल्यूमीनियम स्क्रीन के साथ सील किया गया और दूसरे पर एक स्पष्ट एसीटेट फ्लैप वाल्व। मच्छरों पर तनाव को कम करने और प्रोटोकॉल को वापस लेने योग्य रखने के लिए मच्छरों को शीशियों में स्थानांतरित करने के समय को कम करने की आकांक्षा से पहले पूरे पिंजरे को एनेस्थेटाइज किया जाता है।
    2. प्रत्येक पालन पिंजरे से सभी वयस्क मच्छरों को सेक्स द्वारा क्रमबद्ध करें।
      1. चरण 6.3.1 से सीओ2 तक पहली शीशी को 4 मिनट के लिए एक छोटे कक्ष में उजागर करें, और फिर धीरे से एनेस्थेटाइज्ड मच्छरों को बाहर निकालें, उन्हें चरण 6.2.2 में तैयार सफेद कागज की सतह पर फैलाएं।
      2. एक नई खाली शीशी को एस्पिरेटर में लोड करें, और काम की सतह से सभी पुरुषों को सावधानीपूर्वक एस्पिरेट करें, और इस शीशी को वजन स्टेशन (चरण 6.3.3.) तक पहुंचाएं। पीछे छूटी हुई किसी भी मादा को टैली करें, और उन्हें एक अलग शीशी में डालें और किसी भी कुचले हुए पुरुषों के साथ त्याग दें।
      3. 6.3.1 से शेष शीशियों के साथ इस प्रक्रिया को दोहराएं, लेकिन सेक्स-सॉर्टिंग प्रक्रिया में कुछ बिंदु पर, केवल 25 पुरुषों के साथ एक अलग शीशी उत्पन्न करें जिसे वजन स्टेशन पर भी पारित किया जाता है। चरण 6.3.2 दोहराएँ। प्रत्येक पालन पिंजरे के लिए।
        नोट: सेक्सिंग, वजन और अंकन के लिए विकिरणित वयस्क पुरुषों को संसाधित करते समय, प्रत्येक बैच में महिलाओं की संख्या का ट्रैक रखें, जो समस्या निवारण और प्यूपल सेक्स सॉर्टिंग और पूरी प्रक्रिया के गुणवत्ता आश्वासन के लिए महत्वपूर्ण डेटा हैं। यदि महिलाओं की संख्या अपेक्षा से अधिक है, तो एक दूसरे व्यक्ति को महिलाओं को निकालना चाहिए जबकि मुख्य ऑपरेटर पुरुषों को उत्तेजित करता है। प्रति मच्छर औसत वजन की गणना करने के लिए प्रत्येक पालन पिंजरे से 25 पुरुषों के नमूने का वजन करना महत्वपूर्ण है, जिसका उपयोग प्रोटोकॉल के अंत में जारी चिह्नित विकिरणित पुरुषों की संख्या का अनुमान लगाने के लिए किया जाएगा।
    3. वयस्क नर मच्छरों के बैचों का वजन और डाई।
      1. वजन स्टेशन पर, सेक्सिंग स्टेशन (खंड 6.3.2) से वयस्क नर मच्छरों की पहली शीशी को 2 मिनट के लिए एक छोटे सीओ 2 कक्ष में रखें, और चरण6.2.2 में तैयार की गई टार्ड वजन वाली नाव में मच्छरों को सावधानीपूर्वक हिलाएं। मच्छरों के वजन को रिकॉर्ड करें और मच्छरों को 6.2.1 में तैयार डाई कप में डालें।
      2. धीरे-धीरे कप को 1 पूर्ण रोटेशन घड़ी और प्रतिघड़ी के अनुसार झुकाएं और घुमाएं ताकि मच्छर कप की आंतरिक सतहों पर पाउडर कोटिंग से संपर्क करें और सभी को डाई (चित्रा 6 बी) के साथ हल्के से धूल दी जाए। चिह्नित मच्छरों को एक वजन वाली नाव में डालें।
      3. अगले चरण पर जल्दी से आगे बढ़ें ताकि मच्छर ठीक न हों और भाग न जाएं। इस चरण को तब तक दोहराएँ जब तक कि अनुभाग 6.3.2 से सभी शीशियों को संसाधित नहीं किया जाता है।
        नोट: धारा 6.3.2 में प्रत्येक पालन पिंजरे के लिए उत्पन्न 25 पुरुषों की अलग-अलग शीशी से पुरुषों का वजन दर्ज किया जाता है और उस पिंजरे से प्रति पुरुष औसत वजन की गणना करने के लिए उपयोग किया जाता है।
    4. चिह्नित विकिरणित वयस्क पुरुषों के साथ रिलीज कंटेनर लोड करें। खंड 6.3.3 के अंत से एनेस्थेटाइज्ड, चिह्नित, विकिरणित, नर मच्छरों से युक्त वजन वाली नाव को थोड़ा मोड़ें। एक चैनल बनाने के लिए, और फिर पुरुषों को रिलीज कंटेनर में स्थानांतरित करने के लिए स्टॉकिनेट आस्तीन के माध्यम से इस चैनल को निर्देशित करें। मच्छरों को जोड़ना जारी रखें जब तक कि लगभग 2.0 ग्राम या 1500-3000 नर मच्छर रिलीज कंटेनर में न हों और स्टॉकिनेट आस्तीन को बंद कर दें। डाई रंग, कंटेनर संख्या और मच्छरों के कुल वजन के साथ रिलीज कंटेनर के बेजल पर लेबलिंग टेप को चिह्नित करें, और इन डेटा को चरण 6.2.2 से फॉर्म में कॉपी करें।
      नोट: किसी भी जीवन स्तर पर मच्छरों को संभालना तनाव को प्रेरित करता है और जीवित रहने या शक्ति को कम कर सकता है। इस प्रोटोकॉल में वर्णित एनेस्थेटाइजेशन की श्रृंखला मच्छरों को प्रभावित कर सकती है; हालांकि, प्रत्येक चरण में गैर-एनेस्थेटाइज्ड मच्छरों को आगे बढ़ाने और एस्पिरेट करने के प्रयास अधिक तनाव और एक अस्थिर प्रोटोकॉल को प्रेरित करेंगे। प्रत्येक रिलीज कंटेनर में मच्छरों के कुल वजन को धारा 6.3.3 में उत्पन्न प्रति नर मच्छर औसत वजन से विभाजित करें ताकि उस रिलीज कंटेनर में पुरुषों की संख्या का अनुमान लगाया जा सके; प्रत्येक रिलीज कंटेनर में 2 ग्राम से अधिक नर नहीं होना चाहिए, जो लगभग 1 बड़े पालन पिंजरे के बराबर है।
  2. एकल ऑपरेटर के लिए अंकन प्रोटोकॉल में संशोधन
    1. पहले सभी बड़े पिंजरों के लिए सेक्स छंटाई का संचालन करें। प्रत्येक बड़े पिंजरे को 4-5 मिनट के लिए सीओ2 में उजागर करें और सभी मच्छरों को 4-5 शीशियों में डालें। प्रत्येक शीशी को2-3 मिनट के लिए सीओ 2 में उजागर करें, सभी मच्छरों को सफेद कागज की सतह पर रखें, मादाओं को हटा दें और टैली करें, और पुरुषों को उनकी बड़ी आबादी वाले पिंजरे में वापस कर दें।
    2. वजन और अंकन
      1. चरण 6.4.1 में उत्पादित पहले नर होल्डिंग पिंजरे से शुरू करें: पोषण स्रोत को हटा दें और 5-7 मिनट के लिए एक बड़े सीओ2 कक्ष में पुरुषों को एनेस्थेटाइज करें। एनेस्थेटाइज्ड पुरुषों को अलग-अलग शीशियों में समान रूप से एस्पिरेटेड करें। प्रत्येक होल्डिंग पिंजरे के साथ इस चरण को उस क्रम में दोहराएं जिस क्रम में वे उत्पादित किए गए थे।
        नोट: प्रति होल्डिंग पिंजरे में लगभग 2-3 भीड़ वाली शीशियों का उत्पादन किया जाएगा। पुरुष होल्डिंग पिंजरों को उनके द्वारा उत्पादित क्रम में संसाधित करना पुरुषों के प्रत्येक पिंजरे के लिए वसूली समय को अधिकतम करता है।
      2. चरण 6.4.2.1 में उत्पादित पहली शीशी को एनेस्थेटाइज करें। एक छोटे सीओ 2 कक्ष में1-2 मिनट के लिए। सफेद कागज की सतह पर मच्छरों की एक छोटी संख्या डालें, 25 नर मच्छरों को एक नई शीशी में डालें, और उस पिंजरे के लिए प्रति पुरुष औसत वजन निर्धारित करने के लिए 6.3.2 में प्रक्रिया करें। किसी भी अतिरिक्त नर को स्रोत शीशी पर वापस करें, या बाद में संसाधित होने के लिए एक नई अलग शीशी में एस्पिरेटेड करें; चरण 6.3 के बाकी हिस्सों में वर्णित पहली शीशी में बाकी पुरुषों के लिए रिलीज कंटेनरों में वजन, अंकन और हस्तांतरण के साथ आगे बढ़ें। चरण 6.4.2.2 दोहराएँ। चरण 6.4.2.1 में उत्पादित शेष शीशियों के लिए (25 पुरुषों को एक अलग शीशी में अलग करने के अलावा)। जिस क्रम में उनका उत्पादन किया गया था, और फिर 6.4.1 में उत्पादित अगले सेक्स-क्रमबद्ध पालन पिंजरे पर जाएं।
        नोट: एक व्यक्ति के साथ वर्कफ़्लो धीमे होते हैं, और कुछ नर मच्छरों को कई बार एनेस्थेटाइज्ड करने की आवश्यकता होगी। लगातार मादा मच्छरों की तलाश करें और उन्हें हटाएं।

7. चिह्नित, विकिरणित, वयस्क पुरुष एडीज एजिप्टी के पैकिंग और शिपिंग रिलीज कंटेनर

  1. शिपमेंट के लिए रिलीज कंटेनर तैयार करें। एक बार जब एक रिलीज कंटेनर चिह्नित पुरुषों से भर जाता है, तो जाल ढक्कन पर 10% सुक्रोज घोल के साथ 4 कपास की गेंदों को रखें और पूरे कंटेनर के चारों ओर फैले दो रबर बैंड द्वारा आयोजित पेट्री डिश के उल्टे तल के साथ कवर करें और एक क्रॉस बनाने के लिए पेट्री डिश के ऊपर। उल्टे पेट्री डिश के शीर्ष पर उन्हें रखने के लिए दो रबर बैंड के एक्स पर मास्किंग टेप का एक टुकड़ा रखें।
    नोट: सुनिश्चित करें कि 10% सुक्रोज समाधान के साथ कपास की गेंदें टपकने के बिंदु तक संतृप्त नहीं हैं, जो कंटेनर को नुकसान पहुंचाएगी और मच्छरों को फंसाएगी और मार देगी।
  2. पैक कार्डस्टॉक रिलीज कंटेनरों को एक एक्सट्रूडेड पॉलीस्टाइनिन फोम शिपिंग कूलर में पैक करें। कूलर ढक्कन के माध्यम से 4 वेंटिलेशन छेद करें और चींटियों को बाहर रखने और बचे मच्छरों को रखने के लिए कपास के साथ छिद्रित करें। 4 रिलीज कंटेनरों को शिपिंग कूलर में केंद्र के सामने प्रत्येक कंटेनर के स्टॉकिनेट के साथ सीधा रखें (चित्रा 6 सी)। उन्हें स्थिर करने के लिए प्रत्येक कंटेनर के बीच और केंद्र में टक बबल लपेटें। शिपिंग कूलर में बाकी जगह को एयर तकिए के साथ भरें या पहली परत के शीर्ष पर सीधे 4 रिलीज कंटेनरों की दूसरी परत को ढेर करें और इसी तरह एयर तकिए के साथ स्थिर करें।
    नोट: रिलीज कंटेनरों को हिलाए जाने पर स्थानांतरित नहीं करने के लिए पर्याप्त रूप से स्थिर किया जाना चाहिए। पैकेज के अंदर का तापमान परिवेश है।
  3. डिलीवरी के लिए शिपिंग कूलर तैयार करें। हवादार ढक्कन के साथ शिपिंग कूलर को सील करें, और कार्डबोर्ड ओवरपैक में रखें, टेप बंद करें, और रिलीज स्थान पर रात भर एक्सप्रेस के माध्यम से जहाज करें।

Representative Results

सतर्क और पर्याप्त मच्छर पालन में कॉलोनी पिंजरों में पुरुषों और महिलाओं की अच्छी तरह से संतुलित उपलब्धता, ताजा सुक्रोज समाधान और शहद का रखरखाव, और लगातार उच्च गुणवत्ता वाले रक्त भोजन शामिल हैं। ये स्थितियां एसआईटी लार्वा पालन पैन में उपयोग के लिए इष्टतम घनी पैक अंडे की चादरें प्रदान करेंगी। सूखे अंडे की चादरों का उचित भंडारण और उपयोग, जैसे कि सबसे पुराने से नए तक उपयोग की सुविधा के लिए व्यवस्थित लेबलिंग, सभी पैन में समान हैचिंग का समर्थन करेगा। अंडे सेने से पहले सभी लार्वा पालन पैन को पानी से भरने से उस समय को कम किया जा सकता है जिसके लिए अंडे की चादरें हैच कंटेनर में होती हैं और स्वस्थ विकास को बढ़ावा देती हैं। लार्वा पैन के रखरखाव के लिए कॉलोनी कर्मियों द्वारा सावधानीपूर्वक संलग्नता की आवश्यकता होती है क्योंकि कुछ पैन को विकास चरणों और पर्यावरणीय चर के आधार पर कम या ज्यादा भोजन या अतिरिक्त पानी की आवश्यकता हो सकती है। यदि प्यूपल सेक्स सेपरेशन के निर्धारित दिन तक विकास के चरण के साथ समस्याएं हैं, तो प्रक्रिया में पहले या बाद में समायोजन किया जाना चाहिए जैसे कि पहले या बाद में सेचिंग, भोजन को समायोजित करना, या इनक्यूबेटर तापमान को बदलना।

इस प्रोटोकॉल में पालन प्रक्रिया समय पर सभी अंडों को प्यूपे में विकसित करने के लिए प्रस्तुत नहीं करती है जिसे विकिरणित किया जा सकता है और नियंत्रण उद्देश्यों के लिए उपयोग किया जा सकता है। कॉलोनी में पाले जाने वाले मच्छरों में से 20 से 50% के बीच अभी भी लार्वा होंगे जब तक प्यूपे को अलग करने की आवश्यकता होती है। हालांकि, इन लार्वा को बर्बाद नहीं किया जाता है, लेकिन अतिरिक्त प्यूपे को प्रस्तुत करने के लिए 24 घंटे के लिए परिपक्व होने की अनुमति दी जाती है जिसे पिछले दिन के अलगाव से मादा प्यूपे के साथ जोड़ा जा सकता है और कॉलोनी पिंजरों में वापस पुनर्नवीनीकरण किया जा सकता है। कॉलोनी के पिंजरों में, प्यूपे को वयस्कों में परिपक्व होने, संभोग करने, रक्त पिलाने और अंडे का उत्पादन करने की अनुमति दी जाएगी जो एसआईटी परियोजना को बनाए रखते हैं।

प्यूपे को अलग करना, पेट्री व्यंजनों में प्यूपे डालना, विकिरण, और विकिरण के बाद वयस्क होल्डिंग पिंजरों में प्लेसमेंट एक दिन में होना चाहिए; इसलिए, सभी चरणों को आराम से संसाधित करने के लिए पर्याप्त समय आवंटित किया जाना चाहिए। अंकन प्रक्रिया से पहले रिलीज कंटेनरों की असेंबली और तैयारी की जानी चाहिए। जब शिपिंग बॉक्स रिलीज साइट से वापस कर दिए जाते हैं, तो रिलीज कंटेनरों का निरीक्षण किया जाना चाहिए और उनके अगले उपयोग के लिए तैयार किया जाना चाहिए। गीली कपास की गेंदों को फेंकना, गीले रिलीज कंटेनरों को बाहर निकालना, पेट्री व्यंजनों को साफ करना, जाल को बदलना, और कंटेनर से लोचदार बैंड को हटाना, जबकि उपयोग में नहीं है, रिलीज कंटेनरों के जीवन को बहुत लंबा कर देगा।

कोविड-19 वायरल महामारी की दुनिया भर में वास्तविकता को देखते हुए, यह प्रोटोकॉल जो आमतौर पर एक बहु-व्यक्ति ऑपरेशन होता है, को प्रत्येक चरण के लिए प्रयोगशाला में अकेले काम करने वाले एक व्यक्ति द्वारा वापस लेने योग्य बनाने के लिए संशोधित किया गया है। प्रक्रिया में जो कदम एक-व्यक्ति परिदृश्य से सबसे अधिक बाधित होते हैं, वे लिंग, अंकन, वजन और कॉलोनी-पालन रखरखाव चरण हैं। एक व्यक्ति द्वारा सेक्स द्वारा प्यूपे को अलग करना पर्याप्त होना चाहिए यदि विभिन्न कमरों में एक साथ कई विभाजक काम कर रहे हैं। महामारी की स्थिति में जहां कार्यस्थल में सोशल डिस्टेंसिंग होता है, सेक्सिंग से पैकिंग तक के चरणों को पूरा करने के लिए कई स्टेशनों को सुसज्जित करने की आवश्यकता होती है। ऑपरेटर की गति के आधार पर, एक व्यक्ति को 15,000 मच्छरों को सेक्स करने में ~ 4 घंटे लगते हैं और फिर उन्हें चिह्नित करने, वजन करने और पैकेज करने में 1-2 घंटे लगते हैं। एक दो-व्यक्ति परिदृश्य उस समय को कम कर देता है जिसके दौरान मच्छरों को चिह्नित करने के लिए एनेस्थेटाइज किया जाता है और समग्र कार्य समय को कम करता है। फिर भी, दो-व्यक्ति परिदृश्य में भी, मच्छरों को बेहोश करने के दौरान सीमित कार्य समय के कारण प्रति रिलीज पिंजरे में मच्छरों के पूरे 2.0 ग्राम को आवंटित करना चुनौतीपूर्ण हो सकता है। यद्यपि लार्वा और वयस्क पालन सामग्री की सफाई और तैयारी की प्रक्रिया बेहद समय लेने वाली और श्रम-गहन है, इसे इस तरह विभाजित किया जा सकता है कि व्यक्तिगत ऑपरेटर महामारी के दौरान स्वतंत्र रूप से और सुरक्षित रूप से काम कर सकें।

वयस्क, चिह्नित, विकिरणित एडीज एजिप्टी पुरुषों को रिहा करना इस प्रोटोकॉल के दायरे से बाहर है लेकिन यहां संक्षेप में प्रस्तुत किया गया है। चिह्नित, विकिरणित, नर मच्छरों को छोड़ने की प्रक्रिया वजन (और इस प्रकार, बाँझ पुरुषों की अनुमानित संख्या) के आधार पर रिलीज कंटेनरों के एक समान रिलीज वितरण का निर्धारण करके शुरू होती है, जैसा कि तालिका 3 में बताया गया है। शिपमेंट को वेक्टर नियंत्रण जिले में वितरित करने के बाद, बक्से खोले जाते हैं, और रिलीज कंटेनरों की मृत्यु दर या स्थिति के साथ किसी भी मुद्दे के लिए रिलीज कंटेनरों का मूल्यांकन किया जाता है। रिलीज कंटेनरों में मच्छरों को उपचार क्षेत्र में परिवहन से पहले 1-2 घंटे के लिए परिवेश के तापमान और आर्द्रता के अनुकूल होने की अनुमति दी जाती है। एडीज एजिप्टी की जंगली आबादी के गर्म स्थानों के लिए गहन निगरानी के बाद उपचार क्षेत्र में रिलीज साइटों की पहचान की जाती है। रिलीज का समय, आवृत्ति और घनत्व प्रजातियों के बायोनॉमिक्स के साथ-साथ मौसम विज्ञान, सार्वजनिक समर्थन और प्रयोगशाला-पालन क्षमताओं द्वारा संतुलित है।

चूंकि विशिष्ट रिलीज कंटेनरों को विशेष रिलीज साइटों से मिलान किया जाता है, इसलिए शीर्ष पर जाल काटकर रिलीज कंटेनर खोलने से पहले लेबल को क्रॉस-चेक किया जाना चाहिए, जिससे ऑपरेटर को जाल को विकृत करने की अनुमति मिलती है ताकि पुरुषों का एक हिस्सा बच सके। इस आंशिक रिलीज विधि को कंटेनर के लिए प्रत्येक असाइन किए गए रिलीज बिंदु पर दोहराया जाता है जब तक कि सभी स्वतंत्र रूप से उड़ने वाले पुरुषों को रिहा नहीं किया जाता है। इस प्रक्रिया को तब तक प्रत्येक रिलीज़ कंटेनर के लिए उनके संबंधित असाइन किए गए रिलीज़ स्थान पर दोहराया जाता है जब तक कि सभी कंटेनर संसाधित नहीं हो जाते हैं। वैकल्पिक रूप से, मच्छरों को छोड़ने के बाद, कोई भी मृत या अक्षम मच्छर जो स्वतंत्र रूप से नहीं छोड़ते थे, उन्हें पेट्री व्यंजनों में एकत्र किया जा सकता है और जारी अनुमानित संख्या को सही करने के लिए हाथ से गिना या तौला जा सकता है। एसआईटी ऑपरेशन की प्रभावकारिता का आकलन करने के लिए लक्षित क्षेत्र में और संभवतः गैर-हस्तक्षेप नियंत्रण साइटों में जंगली एडीज एजिप्टी के वयस्क, अंडे और अपरिपक्व चरणों की चल रही और व्यापक निगरानी आयोजित की जाती है।

Discussion

विकिरण का उपयोग करने वाले एसआईटी की विशेषता वाले एक नियंत्रण कार्यक्रम की शुरुआत के लिए एडीज एजिप्टी के स्थानीय तनाव की स्थापना की आवश्यकता होती है। यह कदम महत्वपूर्ण है और एसआईटी को वास्तव में समान नियंत्रण प्रौद्योगिकियों से खुद को अलग करने की अनुमति दे सकता है। मच्छर के स्थानीय तनाव से परियोजना विकसित करके, उत्पन्न पुरुषों में संभवतः ऐसे व्यवहार होंगे जो उन्हें पर्यावरणीय परिवर्तनों और संकेतों के अनुकूल होने और आसपास के क्षेत्र में जंगली मादाओं का पता लगाने और उनके साथ संभोग करने की अनुमति देते हैं। इसके अलावा, विकिरणित स्थानीय पुरुषों की रिहाई आनुवंशिक रूप से संशोधित मच्छरों के गैर-स्थानीय तनाव की रिहाई की तुलना में नकारात्मक सार्वजनिक राय उत्पन्न नहीं कर सकती है, उदाहरण के लिए, स्थानीय मच्छरों की आबादी में नए एलील पेश कर सकती है।

मच्छरों की विशाल मात्रा को पालने के लिए पर्याप्त संसाधनों का उपयोग करना केवल नियंत्रण उद्देश्यों के लिए उनमें से लगभग आधे का उपयोग करने में सक्षम होना एडीज एजिप्टी एसआईटी कार्यक्रम की एक सीमा है। लार्वा की परिपक्वता को अधिक परिभाषित समय सीमा में संघनित करने के लिए पालन प्रोटोकॉल में परिशोधन किया जाना चाहिए जब प्यूपे तैयार हो जाएगा। यह अलगाव के इष्टतम समय पर अधिक प्यूपे एकत्र करने की अनुमति देगा। हालांकि, प्रक्रिया के लिए अतिरिक्त प्यूपे से अधिक मादाओं के प्यूपेटिंग का खतरा बढ़ जाता है जब प्यूपे एकत्र किए जाते हैं और इसलिए मादाओं के पुरुषों के साथ पेट्री व्यंजनों में समाप्त होने और संभवतः जारी होने की संभावना बढ़ जाती है। यद्यपि वयस्कों में विकिरणित मादा एडीज एजिप्टी प्यूपे में जीवनकाल, रक्तनालय व्यवहार और अंडाकार व्यवहार कम हो जाता है, लेकिन विकिरणित पुरुषोंके साथ संयोग से महिलाओं को रिहा करना एक अच्छी रणनीति नहीं है। इसलिए, अनजाने में पुरुषों के साथ अलग, विकिरणित, चिह्नित और जारी की गई महिलाओं की संख्या को कम करना प्राथमिकता बनी रहनी चाहिए।

एसआईटी कार्यक्रम की सफलता अंततः कॉलोनी-पाले गए, विकिरणित पुरुषों द्वारा सफल साथी प्रतियोगिता पर निर्भर करती है। पुरुष प्रतिस्पर्धा को संरक्षित करना खुराक के व्यापक प्रयोगात्मक रूप से व्युत्पन्न चयन और आबादी में बाँझ: जंगली पुरुषों के अनुमानित अनुपात को अधिकतम करने पर निर्भर करता है। खुराक चयन कई प्रमुख कारकों द्वारा निर्धारित किया जाता है जिसमें दीर्घायु, प्रजनन क्षमता, प्रजनन क्षमता और प्यूपल मृत्यु दर शामिल है। यह देखा गया है कि नर मच्छर एक एसिम्प्टोटिक प्रजनन वक्र प्रदर्शित करेंगे जो विकिरण बढ़ने के साथ शून्य तक पहुंचता है (केजेएल, आरएलए, एससीबी अप्रकाशित डेटा)। इसके साथ ही, नर मच्छर की दीर्घायु और गतिविधि का स्तर तेजी से कम हो जाता है क्योंकि विकिरण खुराक बढ़ती है (केजेएल, आरएलए, एससीबी अप्रकाशित डेटा)। इसलिए, पुरुषों में 99.9% बाँझपन पैदा करने वाली खुराक की पहचान करने के बजाय, उत्तरजीवीता का समर्थन करते समय कम बाँझपन प्रतिशत पर ध्यान केंद्रित करना बेहतर है। एक बार एक खुराक सीमा की पहचान हो जाने के बाद जो गैर-विकिरणित पुरुषों से विकिरणित पुरुषों की दीर्घायु या प्यूपल मृत्यु दर को अलग नहीं करता है, प्रजनन क्षमता पर अतिरिक्त आकलन एक खुराक की पहचान करने के लिए आयोजित किया जाना चाहिए जो पुरुषों को अत्यधिक बाँझ, फिर भी प्रतिस्पर्धी बनाता है।

इसके साथ ही, आबादी में नर मच्छरों की संख्या की तुलना जारी किए गए विकिरणित पुरुषों से करना महत्वपूर्ण है। यह लक्ष्य रिलीज क्षेत्र में और उसके आसपास के विभिन्न स्थानों से पुरुषों को एक ही स्थान से बार-बार और एसआईटी कार्यक्रम की शुरुआत से पहले, दौरान और बाद में एकत्र करके पूरा किया जा सकता है। जंगली नर मच्छरों और छोड़े गए मच्छरों के अनुपात का आकलन करने के लिए एक निशान, रिलीज, पुनः प्राप्ति अध्ययन किया जाना चाहिए। एक निशान, रिलीज, पुनः प्राप्ति अध्ययन एक विशिष्ट बिंदु से चिह्नित मच्छरों की एक ज्ञात संख्या की रिहाई और बाद में प्रारंभिक रिलीज बिंदु के आसपास निकटता में बिंदुओं पर उनके पुन: कब्जा करने पर निर्भर करता है। रिलीज बिंदु से दूरी पर पुनः प्राप्त पुरुषों और जंगली पुरुषों की संख्या की तुलना करके, क्षेत्र में पुरुषों की सामान्य जंगली आबादी का अनुमान लगाना संभव है ताकि बाँझ पुरुषों के प्रतिस्पर्धी अनुपातको जारी किया जा सके। बाँझ: जंगली पुरुषों के अनुपात को अधिकतम करना अधिक बाँझ पुरुषों को छोड़कर और / या स्रोत में कमी, अपरिपक्व नियंत्रण या वयस्कनाशी उपचार जैसे शास्त्रीय नियंत्रण साधनों द्वारा जंगली आबादी को कम करके प्राप्त किया जा सकता है।

बाँझ पुरुष रिलीज की प्रभावशीलता को मापने के लिए, वयस्क संग्रह की तुलना गैर-हस्तक्षेप क्षेत्र के खिलाफ कालानुक्रमिक रूप से की जा सकती है। चूंकि बाँझ पुरुषों को रिहा कर दिया जाता है और एक क्षेत्र में एकत्र किए गए पुरुषों और महिलाओं की संख्या एक तुलनीय गैर-हस्तक्षेप क्षेत्र के संबंध में कम हो जाती है, तो यह अनुमान लगाया जा सकता है कि यह जारी बाँझ पुरुषों के कारण है जो स्थानीय उपजाऊ पुरुषों को सफलतापूर्वक चुनौती देते हैं। यह प्रभाव हस्तक्षेप और गैर-हस्तक्षेप साइटों दोनों में तैनात अंडाकार जाल कप में भी देखा जा सकता है। हस्तक्षेप स्थल में अंडे अभी भी उत्पादित किए जा सकते हैं, लेकिन यदि गैर-हस्तक्षेप स्थल की तुलना में कम हैच है, तो यह अनुमान लगाया जा सकता है कि वे बाँझ पुरुषों के साथ संभोग करने वाली मादाओं के कारण निषेचित नहीं हैं। हस्तक्षेप स्थल 8,24 में महिलाओं के प्रतिस्थापन न होने के कारण अनफर्टिलाइज्ड अंडों की अधिक से अधिक अंडाकार स्थिति अंततः कम हो सकती है।

एसआईटी प्रौद्योगिकी और कार्यक्रमों की भविष्य की दिशाएं स्वाभाविक रूप से अतिरिक्त चिकित्सकीय रूप से महत्वपूर्ण मच्छर प्रजातियों में विस्तारित होती हैं। उदाहरण के लिए, एडीज एजिप्टी और एडीज एल्बोपिक्टस के बहुत समान बायोनॉमिक्स को देखते हुए, इस तकनीक को एडीज एल्बोपिक्टस को नियंत्रित करने के लिए आसानी से अनुकूलित किया जा सकता है। रुचि की अन्य रोग वेक्टर मच्छर प्रजातियों में क्यूलेक्स क्विनक्वेफेसियाटस, क्यूलेक्स टार्सलिस और विभिन्न एनोफिलीज प्रजातियां शामिल हैं। इस तकनीक की प्रभावकारिता में सुधार एक निश्चित समय में उत्पादित नर प्यूपे की क्षमता को बढ़ाने पर निर्भर करता है, जिसे आनुवंशिक हेरफेर या कृत्रिम चयन के माध्यम से प्राप्त किया जा सकता है, और पुरुष प्रतिस्पर्धा में सुधार किया जा सकता है, जिसे पौरुष, प्रजनन क्षमता या दीर्घायु में वृद्धि करके प्राप्त किया जा सकता है।

आखिरकार, एसआईटी कार्यक्रम मच्छरों को नियंत्रित करने के लिए चांदी की गोली नहीं हैं। वे इसके बजाय अन्य नियंत्रण तकनीकों के एक सूट में एक उपकरण हैं, जैसे कि आईवीएम कार्यक्रम, जो तकनीकों के बीच कमजोरियों के लिए क्रॉस-क्षतिपूर्ति करते हैं। उदाहरण के लिए, जबकि रासायनिक नियंत्रण तेजी से और सस्ता नियंत्रण प्रदान करता है, यह प्रतिरोध और गैर-लक्ष्य मृत्यु दर के विकास को भी बढ़ावा देता है; और जबकि एसआईटी प्रजाति-विशिष्ट है और प्रतिरोध उत्पन्न करने की संभावना नहीं है, एसआईटी पुरुषों को वेक्टर नियंत्रण जिले के बाहर से आप्रवासी आबादी को नियंत्रित करने के लिए हमेशा के लिए उत्पादित और जारी किया जाना चाहिए।

Disclosures

सभी लेखकों ने हितों के टकराव की घोषणा नहीं की है।

Acknowledgments

हम डॉ. आर.डी. को धन्यवाद देते हैं। फ्लोरिडा के सेंट ऑगस्टीन के अनास्तासिया मच्छर नियंत्रण जिले के झू, सी बिब्स, डब्ल्यू क्वाल्स और वी आर्यप्रेमा, एसआईटी कार्यक्रम विकसित करने और बाँझ नर एडीज एजिप्टी की प्रभावी परिचालन रिलीज पर विशेषज्ञ अंतर्दृष्टि के लिए। इस शोध को यूएसडीए-एआरएस और फ्लोरिडा डिपार्टमेंट ऑफ एग्रीकल्चर एंड कंज्यूमर सर्विसेज (एफडीएसीएस) द्वारा समर्थित किया गया था। इस प्रकाशन में व्यापार नामों या वाणिज्यिक उत्पादों का उल्लेख केवल विशिष्ट जानकारी प्रदान करने के उद्देश्य से है और यूएसडीए या एफडीएसीएस द्वारा सिफारिश या समर्थन का अर्थ नहीं है।

Materials

Name Company Catalog Number Comments
1-1/8" wrench (1" (1 inch) = 2.54 cm) Craftsman CMMT44707
1/2 pint cardstock cup (1/2 pint = 236.5 mL) Science Supplies WLE corp 1/2 pint
1/4" tubing - tygon Hudson Extrusions LLDPE1/8 X 1/4 BLK to attach to CO2 gas regulator
1/8" brass barb w/ MIP connection B&K BHB-85NLB to attach to CO2 gas regulator
1000 mL graduated plastic beakers with handle Thermo Scientific 1223-1000
3000 mL graduated plastic beakers with handle Thermo Scientific 1223-3000
Adult large cage Bioquip 1450D
Aspirator vials Bioquip 2809V
Bovine liver powder MP Biomedicals 290039601
Brewers yeast MP Biomericals 02903312-CF
CO2 regulator Randor 64003038
CO2 tank (20# canister) Praxair CDBEVCARB20
Collection basin Treasure Gurus KI-ENAMELBOWL for separator
Cotton balls - large Fisher Scientific 22-456-883
Deli cups w/lids - 470 mL Pactiv DELItainer PCTYSD2516
Deli cups w/lids - 1900 mL Berry Global T60764
DoseReader 4 ND0.5 and ND1.0 QA Filter Set standards
Dosimetry film Far West Technology, Inc.
Filter paper Millipore AP10045S0
Flashlight aspirator Bioquip 2809D
Forceps - fine featherweight Bioquip 4748 or 4750 featherweight
GAFchromic radiochromic film
Gammator M Radiation Machinery Corporation, Parsippany, NJ Cesium-137 irradiator
Hand held mechanical aspirator Clarke Mosquito 13500
Lambskin condoms Trojan Naturalamb
Large CO2 chamber Sterilite Walmart # 568789514
Larval rearing pans Blue Ridge Thermoforming  01-FG-400-3N-ABS Dimensions: 22.375 x 17.5 x 3 (inches)
Magnets - 20# pull Master magnetics MHHH20BX
Marking dye Dayglo ECO-11 Aurora Pink
Marking dye Dayglo ECO-17 Saturn Yellow
Mesh Falk T301
Pasture pipettes Thermo Scientific 02-708-006
Petri dishes - large VWR International 25384-090 CS
Petri dishes - small (60 mm x 15 mm) Fisher Brand FB0875713A
Pupa separator J.W. Hock 1512
Red rubber hose Welch 331040-5
Release containers Science Supplies WLE corp 1 gallon
Rubber bands - cross #19 Alliance ALL37196
Rubber bands - latitude #64 Skillcraft NSN0589974
Scale Ohaus H-4737
Seed germination paper - Heavy stock 76# Anchor Paper #76
Shipping coolers- 16 x 13 x 12.5" MrBoxonline.com Husky Foam Cooler kit
Sieve #20 Advantech 20BS8F
Sieve #30 Advantech 30BS8F
Small cage - Bug Dorm MegaView Bug Dorm-1
Small CO2 chamber Mainstays Walmart # 562922221
Souffle cup lid SOLO 41165277456
Souffle cups - 4 oz (1 oz = 29.6 mL) SOLO 41165024104
Sponge ocelo MMM7274FD
Squeeze bottle Dynalon 3UUP6
Stereoscope Meiji Techno EMZ-5
Stockinette BSN Medical 30-1006
Styrofoam extruded polystyrene foam
Tropical fish flake food Tetra 4.52 pound
Vaccum chamber - desiccator BelArt T9FB892757
Weigh boats Globe Scientific 3621

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References

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जीव विज्ञान अंक 169 एडीज एजिप्टी जैविक नियंत्रण एकीकृत वेक्टर प्रबंधन मार्क-रिलीज़-पुनः प्राप्ति कीटनाशक विकल्प प्रतिरोध प्रबंधन बाँझ कीट तकनीक (एसआईटी)
एक परिचालन बाँझ कीट तकनीक कार्यक्रम में रिलीज के लिए विकिरणित और चिह्नित नर <em>एडीज एजिप्टी</em> मच्छरों को तैयार करना
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Moreno, B. J., Aldridge, R. L.,… More

Moreno, B. J., Aldridge, R. L., Britch, S. C., Bayer, B. E., Kline, J., Hahn, D. A., Chen, C., Linthicum, K. J. Preparing Irradiated and Marked Male Aedes aegypti Mosquitoes for Release in an Operational Sterile Insect Technique Program. J. Vis. Exp. (169), e62260, doi:10.3791/62260 (2021).

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