Summary
يتم إجراء تجاوز المعدة رو أون Y (RYGB) لعلاج السمنة والسكري. ومع ذلك، فإن الآليات الكامنة وراء فعالية RYGB غير مفهومة تماما، والدراسات محدودة بسبب الصعوبة التقنية التي تؤدي إلى ارتفاع معدل الوفيات في النماذج الحيوانية. توفر هذه المقالة إرشادات حول كيفية تنفيذ RYGB في الفئران ذات معدلات النجاح العالية.
Abstract
عادة ما يتم إجراء تجاوز المعدة رو أون Y (RYGB) لعلاج السمنة الحادة ومرض السكري من النوع 2. ومع ذلك، فإن آلية فقدان الوزن والتغيرات الأيضية ليست مفهومة جيدا. ويعتقد أن عوامل متعددة تلعب دورا، بما في ذلك انخفاض السعرات الحرارية، وانخفاض امتصاص المواد الغذائية، وزيادة الشبع، وإطلاق الهرمونات المعززة للشبع، والتحولات في التمثيل الغذائي حمض الصفراء، والتعديلات في ميكروبيوتا الأمعاء.
ويقدم نموذج RYGB للفئران إطارا مثاليا لدراسة هذه الآليات. وكان العمل السابق على نماذج الفئران معدلات وفيات عالية، تتراوح بين 17 و 52٪، والحد من اعتمادها. نماذج الفئران تثبت المزيد من الاحتياطي الفسيولوجي للتحفيز الجراحي وأسهل من الناحية الفنية لاعتماد لأنها تسمح لاستخدام دباسة الجراحية. ومع ذلك ، فإن أحد التحديات مع دباسات الجراحة هو أنها غالبا ما تترك حقيبة معدية كبيرة لا تمثل RYGB في البشر.
في هذا البروتوكول، نقدم بروتوكول RYGB في الفئران التي تؤدي إلى الحقيبة المعدة الصغيرة باستخدام دباسة الجراحية. باستخدام اثنين من حرائق دباسة التي تزيل forestomach من الجرذ، نحصل على الحقيبة المعدة أصغر مماثلة لتلك التي تتبع RYGB الإنسان نموذجي. التدبيس الجراحي يؤدي أيضا إلى أفضل hemostasis من الانقسام الحاد. بالإضافة إلى ذلك ، لا يحتوي الورم الغابي للجرذ على أي غدد ويجب ألا يغير إزالته فسيولوجيا RYGB.
كان فقدان الوزن والتغيرات الأيضية في فوج RYGB كبيرا مقارنة بفوج الصور ، مع انخفاض كبير في تحمل الجلوكوز في 14 أسبوعا. وعلاوة على ذلك، هذا البروتوكول لديه بقاء ممتاز من 88.9٪ بعد RYGB. يمكن اكتساب المهارات الموصوفة في هذا البروتوكول دون خبرة جراحية دقيقة سابقة. وبمجرد إتقان هذا الإجراء، سيوفر أداة قابلة للاستنساخ لدراسة آليات وآثار RYGB.
Introduction
السمنة ومرض السكري من النوع 2 أصبحت الأوبئة في جميع أنحاء العالم1. على الرغم من أن فقدان الوزن الطبي يمكن أن يحسن مرض السكري في المرضى، فإن المصابين بالسكري الشديد يستفيدون أكثر من جراحة السمنة. وقد أثبتت جراحة لعلاج البدانة أن تكون آمنة وفعالة في فقدان الوزن وتحسين أو علاج مرض السكري من النوع2 2،3، حتى في أولئك الذين يعانون من مرض طويل الأمد4. إجراءات علاج البدانة الأيضية، مثل الذهب القياسية الحالية رو أون Y جراحة المجازة المعدة (RYGB)، تحفز التحسينات السريعة والمستدامة في التوازن الجلوكوز في حين يقلل أيضا من الحاجة إلى أدوية السكري5،6،7.
بعد RYGB، الجلوكوز التوازن التحسن يحدث بسرعة ومستقلة عن فقدان الوزن8. وقد اقترح نظريتين رئيسيتين لشرح التغيرات الأيضية المرتبطة مغفرة مرض السكري التي تحدث بعد الجراحة الأيضية. أولا، تفترض فرضية الهندغوت أنه بعد الالتفافية، تصل تركيزات أعلى من العناصر الغذائية غير المهضومة إلى الأمعاء البعيدة مما يعزز إطلاق هرمونات مثل GLP-1. من ناحية أخرى ، تشير فرضية foregut إلى أن تجاوز الأمعاء القريبة يقلل من إفراز الهرمونات المضادة للانكريتين. كل من هذه الآثار يمكن أن يؤدي إلى تحسين مبكر استقلاب الجلوكوز9.
النماذج الحيوانية لديها القدرة على أن تكون أداة قوية لدراسة هذه الآليات. ومع ذلك، فإن أحد الحواجز الرئيسية في استخدام نماذج الفئران أو الفئران هو الصعوبة التقنية في تنفيذ هذه الإجراءات. وقد اعتمدت معظم الدراسات على الماوس أو الفئران نماذج10،11،12. وكانت نماذج الماوس صعبة كما المعدة الماوس صغيرة جدا لاستخدام أجهزة دباسة11، ومعدلات الوفيات مرتفعة بشكل غير مقبول ، تتراوح بين 17 إلى 52 ٪13. في الفئران ، لا تزال بعض البروتوكولات صعبة الأداء من الناحية الفنية بسبب الربط المعقد لأوعية المعدة قبل تقسيم المعدة12،14. نماذج أخرى تقسيم المعدة باستخدام دباسة ولكن ترك الحقيبة الكبيرة لا تتفق مع تشريح الإنسان RYGB آخر11. في هذا النموذج، ونحن نقدم تعليمات مفصلة حول كيفية أداء RYGB باستخدام دباسة الخطية في نموذج الفئران مما أدى إلى الحقيبة المعدة أكثر تمشيا مع ذلك من التشريح البشري. بشكل عام، ارتبط هذا الإجراء بمعدلات البقاء الممتازة والنتائج الأيضية.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
تمت الموافقة على بروتوكولات استخدام الحيوانات من قبل لجنة العلوم الصحية لرعاية الحيوان واستخدامه في جامعة ألبرتا (AUP00003000). انظر الشكل 1 للحصول على رسم تخطيطي يوضح تشريح RYGB.
1. رو أون Y تجاوز المعدة
- إعداد الحيوانات والإعداد المنطوق
- قبل أسبوع واحد من الجراحة، تزويد الفئران بالعلاج بالإماهة الفموية والنظام الغذائي السائل بالإضافة إلى نظامهم الغذائي الصلب والماء لتأقلمهم مع هذا النظام الغذائي الجديد.
- الفئران سريعة مع إمكانية الوصول إلى الماء فقط لمدة 12-18 ساعة قبل الجراحة.
- تأكد من أن الفئران صائمة على منصة سلكية مرتفعة بحيث لا يمكنها استهلاك مواد الفراش.
- حقن الفئران مع البوبرينورفين طويلة تحت الجلد الإفراج المستمر (ريال) بجرعة 1 ملغ / كغ مباشرة قبل الجراحة.
- أوتوكلاف جميع الأدوات الجراحية والمناشف والستائر.
- تنظيف سطح التشغيل، وسادة التدفئة، ومخروط الأنف مخدر مع الإيثانول 70٪.
- إعداد سطح التشغيل مع المجهر التشغيل، وآلة مخدر، واللوازم بطريقة مريحة للجراح التشغيل.
- استخدم وسادة تسخين منظمة بدرجة الحرارة وحدد درجة حرارتها ب 37 درجة مئوية.
- ضع ستارة معقمة أو منشفة فوق وسادة التدفئة.
- ملء أنبوب مخروطي معقم 50 مل مع 0.9٪ المالحة.
- تحريض مخدر وإعداد
- حث التخدير باستخدام 4٪ isoflurane وفقا للبروتوكولات المنشأة سابقا15.
- ممارسة الضغط على القدم الخلفية لجميع الأطراف الأربعة لضمان عدم وجود استجابة للألم.
- تحقق من التخدير الكافي ومعدل التنفس بعد كل 5 دقائق.
- تطبيق مواد التشحيم على كلتا العينين لمنع التجفيف.
- حلق الشعر من البطن.
- تنظيف البطن مع محلول اليود بوفيدوني. السماح للمحلول لتجف، وتغيير إلى قفازات معقمة.
- ستارة الجرذ مع فتحة في الستائر لفضح البطن.
- ضع أدوات، خياطات، مسحات قطنية، ومحقنة 10 مل في مكان يسمح بالوصول السهل أثناء الإجراء.
- متوسط استئصال البطن
- إجراء شق 3 سم في خط الوسط العلوي من البطن باستخدام مشرط، فقط تحت عملية xyphoid كمعلم.
- باستخدام مقص، وتقسيم اللفافة والشميض، مع الحرص على البقاء في منتصف الخط على خط ألبا للحد من النزيف من المستقيم abdominus. إذا كان هناك نزيف، والسيطرة عليه مع الحرارية أو الكهربائي.
- تعبئة المعدة
- باستخدام مسحتين من القطن الرطب، تشريح بصراحة المرفقات المعدة.
- عند مواجهة الالتصاقات الكثيفة، استخدم الكي الحراري لتقسيم مرفقات المعدة بعناية لتجنب الكي في المعدة. تقسيم حاد في الرباط بين المعدة وفص الكبد التبعي للحد من خطر تمزق الكبد مع تعبئة المعدة.
- للأوعية الدموية الكبيرة، وخاصة في شرايين المعدة قصيرة، ligate باستخدام خياطة البولي بروبلين 6-0.
- إنشاء نافذة على الجانب الأيمن من المريء ولكن قريبة من الشريان المعدة الأيسر. تأكد من أن مسحة القطن يمكن أن تصل إلى هذه المنطقة الخلفي. يتم تعبئة المعدة بشكل كاف عندما يمكن أن تكون خارجية خارج البطن.
- تحديد وتقسيم جيجونوم
- تحديد الرباط تريتز باتباع jejunum وكيلا حتى مراقبة ذلك هو التعلق بالميسوكولون العرضي.
- قياس 7 سم distally، وتحديد موقع بين الأوعية mesenteric، وتقسيم الأمعاء مع مقص صغير. تجنب بقع باير عند تقسيم الأمعاء. الحرص على تقسيم الأمعاء فقط وليس السينتارية.
- ضع اسفنجة نظيفة ومحلول ملحي قبل تقسيم الأمعاء لتقليل التلوث.
- تحقق من وجود سفينة عبور صغيرة في السينتاري على حدود الأمعاء الدقيقة وتقسيم هذا مع الكي لتجنب النزيف.
- الاستمرار في تقسيم mesentery 1 سم نحو قاعدة mesenteric.
- تحديد jejunum القريبة والقاصية. ضع الوجنوم القريب تحت شاش مبلل على يمين الجرذ والوجنوم القاصي على يسار الجرذ.
- تدبيس المعدة
- أدخل دباسة قطع خطية مقاس 45 مم مع ارتفاع أساسي 3.5 مم عبر الخط الأبيض ل forestomach لإنشاء جراب أصغر. انتظر لمدة 10 ق قبل اطلاق دباسة.
- ضع الضغط باستخدام الشاش على الخطوط الأساسية لمدة دقيقة واحدة لضمان hemostasis. إذا لم يتحقق hemostasis مع الضغط وحده ، والنزيف على طول الخط الأساسي هو oversewn باستخدام الرقم البولي بروبلين 6-0 من ثمانية خياطة.
- تنفيذ النار الأساسية الثانية عبر المعدة في النافذة التي تم إنشاؤها سابقا. انتظر لمدة 10 ق قبل اطلاق دباسة. يتم عقد الضغط على طول الخط الأساسي لضمان hemostasis، وقد تكون هناك حاجة إلى الإفراط في الوتد.
- استئصال المعدة والأمعاء
- إجراء استئصال المعدة مباشرة بعد تدبيس المعدة. التأخير في هذا يمكن أن يسبب تثبيط المعدة والطموح كما المعدة متقطعة بعد الأساسية المعدة الثانية.
- باستخدام مشرط 11 شفرة، إنشاء استئصال المعدة في الحقيبة البعيدة. التعبير عن محتويات المعدة من خلال استئصال المعدة. وهذا أمر مهم لمنع تثبيط المعدة والطموح. إطالة هذا استئصال المعدة باستخدام مقص صغير إلى ما يقرب من 5 ملم. يرصد استئصال المعدة كبيرة بما يكفي لطرف مسحة القطن فقط لتناسب من خلال.
- تعبئة نهاية الجانم المتاخمة لاستئصال المعدة ومكان بحيث لا الملتوية mesentery.
- أثناء خياطة الحشرات، تأكد من أن الأمعاء تبقى رطبة من خلال تغطيتها بالشاش المنقوع بالمحلول الملحي وإعادة تطبيق المالحة بانتظام.
- باستخدام 6-0 البولي ديوكسيناني أو البولي بروبلين خياطة، وضع خياطة البقاء على هامش أدنى من التخدير والتراجع بلطف باستخدام مبكرة. ربط مع ثلاثة عقدة.
- ضع خياطة البقاء على الهامش المتفوق للتأق وتراجع بلطف باستخدام المفاجئة. تعادل مع ستة عقدة.
- خياطة الجانب الأمامي من التخدير بطريقة مستمرة ، مع لدغات 1 مم واسعة و 1 ملم بعيدا بعناية لتجنب اتخاذ المؤخر.
- بمجرد أن تصل الغرزة إلى خياطة البقاء السفلية ، اربط هذه مع ستة عقد إضافية.
- مرة واحدة في الجانب الأمامي كاملة، والوجه الأمعاء والمعدة أكثر وتمرير خياطة البقاء أدنى من خلال عيب المساريقي. إعادة تطبيق المفاجئة وتراجع دون المستوى الأدنى.
- بالنسبة للجانب الخلفي من التناضح ، توقف السماكة الكاملة 6-0 خياطة ، وعرضها 1 مم ، وتباعدت 1 مم ، مع الحرص على تجنب أخذ المؤخر. هذه مرتبطة بستة عقد لكل منها
ملاحظة: يتم خياطة الجانب الأمامي من التناضح بطريقة مستمرة بينما يتم الجانب الخلفي بطريقة متقطعة. وهذا يمنع التضيق المحتمل أو تضيق المرتبطة إغلاق محيط مستمر. - تحقق من التسرب عن طريق دفع محتويات مضيئة بلطف عبر الحشرات. إذا كانت هناك مناطق مع تسرب، وتعزيز بعناية لهم مع الغرز توقف. الحرص على تجنب اتخاذ backwall عند تعزيز مع الغرز اضافية.
- استئصال جيجونوجيجونوستوم
- من استئصال المعدة، قياس 20 سم distally.
- إنشاء jejunotomy على الجانب antimesenteric باستخدام مشرط 11 شفرة. تجنب إجراء استئصال الوجون على بقع باير.
- تمديد هذا jejunotomy باستخدام مقص صغير، بحيث يكون نفس حجم الطرف biliopancreatic. تأكد من أن مسحة القطن تناسبها فقط في الداخل.
- ضع الطرف biliopancreatic بحيث لا يوجد التواء من mesentery.
- إجراء التخدير على نحو مماثل لاستئصال المعدة مع 6-0 خياطة البقاء على الجانبين متفوقة وأقل شأنا. يتم تنفيذ الجانب الأمامي مع الغرز المستمرة في حين يتم تنفيذ الجانب الخلفي مع الغرز توقف.
- تأكد من أن الأمعاء تبقى رطبة مع المالحة خلال هذا التخدير.
- تحقق من وجود تسرب عن طريق دفع محتويات مضيئة بلطف من خلال الحشرات. إذا كانت هناك مناطق مع تسرب، وتعزيزها مع الغرز توقف.
- إعادة وضع الأمعاء والمعدة
- تأكد من عدم وجود التواء في الحقيبة أو بقايا المعدة أو الكبد. تأكد من أن الفص الأيسر من الكبد هو الأمامي إلى المعدة وليس محاصرا وراء الحقيبة لأن هذا يمكن أن يسبب نقص التروية الكبد ضاغط.
- وضع الأمعاء في البطن في وضعها الطبيعي بحيث لا يوجد التواء.
- إغلاق البطن
- إغلاق اللفافة مع 3-0 polyglactin بطريقة مستمرة. 3-0 بوليدوكسانون يمكن أيضا أن تستخدم.
- أغلقي البشرة بالحرير 2-0 بطريقة مستمرة.
- ظهور مخدر
- تقليل ايزوفلوران إلى الصفر ولكن الاستمرار في الأكسجين التكميلي.
- إدارة مخدر موضعي ككتلة دفقة إلى الشق.
- إعطاء 10 مل من الدكستروز تحت الجلد 5٪ في المالحة العادية (D5NS) في الأنسجة تحت الجلد خلف الرقبة.
- ضع طوق جرذ إليزابيث قبل أن يستيقظ الجرذ تماما. الحرص على تناسبها بشكل مريح ولكن ليس ضيق جدا للتسبب في عدم الراحة.
ملاحظة: يتم الاحتفاظ طوق حتى اليوم 5 لمنع تأليه الجرح.
2. جراحة الشام
ملاحظة: يتم إجراء جراحة الشام مماثلة لRYGB، ومع ذلك، لا يتم إجراء anastomoses.
- يتم إنشاء استئصال المعدة ثم مغلقة مع 6-0 البولي ديوكسيناني أو خيوط البولي بروبلين.
- يتم إنشاء jejunotomy 7 سم القاصي إلى أربطة تريتز ومن ثم مغلقة مع 6-0 البولي ديوكسيناني أو خيوط البولي بروبلين.
3. الرعاية بعد الجراحة
- الرعاية بعد الجراحة
- فئران المنزل بشكل فردي والاحتفاظ بها على منصات الأسلاك التي أثيرت حتى يتم إعادة إدخال المواد الغذائية الصلبة لمنع استهلاك الفراش وعرقلة مضيئة.
ملاحظة: يتم استئناف النظام الغذائي بعد العملية الجراحية تدريجيا كما وذمة في استئصال المعدة يمكن أن يسبب انسداد مع الاستئناف المبكر للنظام الغذائي الصلب. - فحص القدمين يوميا في حين أن الفئران على منصات الأسلاك التي أثيرت لأي تغييرات الجلد.
- إبقاء الفئران على الماء والتغذية العلاج بالإماهة عن طريق الفم لأول 72 ساعة.
- إدارة 10 مل من D5NS كل 12 ساعة لأول 72 ساعة.
- إعطاء تحت الجلد قصيرة المفعول البوبرينورفين في 0.01 ملغم /كغ إذا الفئران ويبدو أن في الألم. يستخدم مقياس الجرذ غريماس لتقييم الألم16.
- في اليوم الثالث بعد الجراحة، أضف النظام الغذائي السائل للقوارض. الاستمرار في توفير المياه والعلاج بالإماهة الفموية.
- في اليوم الخامس بعد الجراحة، أعد تشغيل النظام الغذائي الغني بالدهون. الاستمرار في توفير المياه والنظام الغذائي السائل. أزل الطوق الإليزابيثي
- في اليوم التالي للجراحة 7، توقف عن تناول الطعام السائل.
- إزالة خياطة الجلد في يوم ما بعد الجراحة 10-14.
- فئران المنزل بشكل فردي والاحتفاظ بها على منصات الأسلاك التي أثيرت حتى يتم إعادة إدخال المواد الغذائية الصلبة لمنع استهلاك الفراش وعرقلة مضيئة.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
الحيوانات والسكن
36 ذكور الفئران Wistar كان يسكن في أزواج وأطعمت 60٪ القوارض العقيمة عالية الدهون النظام الغذائي ابتداء من ستة أسابيع من العمر (الشكل 2). في 16 أسابيع من العمر، خضعوا لجراحة RYGB أو صورية. بعد الأسبوع الأول بعد الجراحة، استؤنفت الفئران على نظام غذائي عالي الدهون. نصف الفئران قتلوا رميا بالرصاص في 2 أسابيع بعد العملية والنصف الآخر قتل رحيم في 14 أسابيع بعد الجراحة.
وفيات
وبشكل عام، نجا 33 (91.7٪) خضعت جميع الفئران التي تمر بالقتل الرحيم المبكر للنخر من قبل طبيب بيطري. جرذان قتلا رميا بالرصاص خلال 24 ساعة وكان واحد RYGB التهاب الرئوي الطموح وفأر واحد صورية كان dehiscence fascial مع الأمعاء غير قابلة للخلاص. آخر RYGB الفئران قتل رحيم في غضون أسبوعين بسبب تسرب anastomotic من استئصال المعدة. عموما، نجا 88.9٪ من الفئران RYGB لدراسة نقطة النهاية.
وزن الجسم
الفئران التي تخضع لRYGB كان لها وزن أقل بعد الجراحة من الفئران الصورية. ويبين الشكل 3 الأوزان المطلقة للفئران بعد الجراحة بينما يوضح الشكل 4 تغير الوزن المئوي بعد العملية الجراحية الذي كان مهما إحصائيا في جميع النقاط الزمنية بعد الجراحة. في 14 أسبوعا، كان الفئران الذين لديهم RYGB متوسط تغيير الوزن نسبة مئوية من 6.4٪ في حين أن الفئران مع جراحة صورية كان 23.7٪ (ع = 0.0001).
اختبار تحمل الجلوكوز داخل الصفاق
لم يكن صيام السكر في الدم مختلفا بشكل كبير بين أي من الأفواج. ومع ذلك ، كانت المنطقة تحت المنحنى أقل بكثير في RYGB مقارنة بالشمس في 13 أسبوعا (18.1 مقابل 23.8 ملليمول / لتر ، p = 0.046 ، الشكل 5) ولكنها كانت هي نفسها بالنسبة ل RYGB مقابل الصور في أسبوع واحد (20.8 مقابل 23.3 ملليمول ساعة / لتر ، p = 0.68).
الشكل 1: رو أون Y تشريح تجاوز المعدة يرجى الضغط هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
الشكل 2: الوزن المطلق قبل الجراحة على النظام الغذائي الغني بالدهون; RYGB، رو أون Y تجاوز المعدة يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
الشكل 3: الوزن المطلق بعد العملية الجراحية على النظام الغذائي الغني بالدهون; RYGB، رو أون Y تجاوز المعدة يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
الشكل 4: تغير الوزن بعد العملية الجراحية على النظام الغذائي الغني بالدهون; RYGB، رو أون Y تجاوز المعدة يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
الشكل 5:اختبار تحمل الجلوكوز داخل الصفاق في تجاوز المعدة مقابل الشام في 13 أسبوعا. RYGB، رو أون Y تجاوز المعدة يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
RYGB ينطوي على إنشاء الحقيبة المعدة الصغيرة (أقل من 30 مل)، وخلق طرف biliopancreatic وطرف رو(الشكل 1). في البشر ، يكون الطرف البليوبنكرياتيكي عادة 30 إلى 50 سم وينقل إفرازات من بقايا المعدة والكبد والبنكرياس. عادة ما يكون طول طرف رو من 75 إلى 150 سم وهو القناة الرئيسية للطعام المبتلع. القناة المشتركة هي الأمعاء الدقيقة المتبقية البعيدة إلى حيث ينضم الطرفان وهو المكان الذي تحدث فيه غالبية الهضم والامتصاص ، حيث تختلط إنزيمات البنكرياس والصفراء مع الطعام المبتلع17.
آلية فقدان الوزن في RYGB متعدد الوسائط. الحقيبة المعدة الصغيرة يقلل من تناول الطعام من خلال تقييد الميكانيكية. نتائج الالتفافية في مكون سوء الامتصاص وجزء كبير من الأمعاء الدقيقة لا يمتص السعرات الحرارية والمواد المغذية. في الآونة الأخيرة، أظهرت الدراسات أن هرمونات الأمعاء تلعب دورا هاما في فقدان الوزن بعد RYGB كذلك. هذه هي في المقام الأول من خلال غريلين, الببتيد-YY, المرارة (CCK), وGLP-1 مسارات هرمون18.
نماذج الفئران توفر طريقة قوية لدراسة الآليات وراء كل من الوزن والآثار الأيضية من RYGB. في هذه الورقة، نقدم بروتوكول RYGB الذي يحتوي على معدل وفيات منخفض مع فقدان الوزن الكبير والآثار الأيضية. وبمجرد أن أصبح المشغل على دراية بهذه التقنية، استغرق الإجراء حوالي 90 دقيقة لإجراء. ويمكن أيضا تعديل البروتوكول مع أطوال أطول biliopancreatic ورو أطرافهم لزيادة فقدان الوزن والتأثير الأيضي المحتمل. وعلاوة على ذلك، فمن الناحية الفنية أكثر جدوى من النماذج الأخرى لأنها تسمح باستخدام دباسة الجراحية لتحقيق hemostasis وتقليل الوقت المنطوق. النماذج التي تعتمد على انقسام حاد في المعدة دون تدبيس غالبا ما يؤدي إلى ارتفاع معدل الوفيات بسبب فقدان الدم كبيرة. كانت المهارات التقنية المطلوبة لإجراء العملية سهلة نسبيا ، وتمكن المتعلمون من إجراء العملية بشكل مريح بعد ما يقرب من خمسة إلى عشرة إجراءات عدم استرداد.
واحدة من الخطوات الحاسمة لهذا البروتوكول هو الحد من فقدان الدم أثناء تعبئة المعدة. الاستخدام الدقيق للكي الحراري جنبا إلى جنب مع ربط خياطة الأوعية أمر مهم. من المهم أيضا إجراء نصف محيط الانستوموسات على الأقل بطريقة متقطعة. وهذا يمنع التشدد المفرط في anastomoses. وعلاوة على ذلك، فإن التحقق من وجود تسرب أمر بالغ الأهمية لأن هذه يمكن أن تؤدي إلى الإنتان والموت. قبل إغلاق البطن ، من الضروري أن يتم وضع الفص الأيسر للكبد في وضعه الطبيعي الأمامي وأنه لا يوجد دوران في الأمعاء أو المعدة لأن هذا يمكن أن يؤدي إلى نقص التروية الحشوي.
الرعاية بعد الجراحة أمر حيوي لهذا البروتوكول. مطلوب منصات الأسلاك التي أثيرت خلال فترات الصيام وبعد العملية الجراحية على حد سواء كما استهلاك المواد الصلبة يؤدي إلى عوائق أنستوموتيك. من المهم للغاية توفير السوائل تحت الجلد حيث قد لا تتسامح الفئران مع السوائل الفموية في الفترة اللاحقة للجراحة مباشرة. يجب أن تتكيف الفئران مع العلاج بالإماهة الفموية والنظام الغذائي السائل حيث قد تتجنب الفئران الوجبات الغذائية الجديدة بسبب الارتباطات مع الألم بعد الجراحة. يساهم هذا البروتوكول الغذائي في فقدان الوزن بشكل كبير في الفترة ما بعد الجراحة مباشرة في كل من الأفواج RYGB والخدع ، واستغرق استرداد الوزن في المجموعة الصورية حوالي خمسة أسابيع. ومع ذلك، فإن الالتزام الصارم بهذا البروتوكول بعد الجراحة أمر حيوي للحد من المراضة والوفيات بعد RYGB. بالإضافة إلى ذلك، من المهم إجراء فحص متكرر للفئران باستخدام مقياس الجرذ غريماس للكشف عن المراضة. في دراستنا، طور أحد الفئران تسربا أنستوموتيك متأخرا تم اكتشافه بسرعة باستخدام هذا النطاق وسمح بالقتل الرحيم المبكر للحد من المعاناة.
واحدة من مزايا هذه الطريقة هي أنها تؤدي إلى حقيبة أصغر من خلال استخدام دباسات جراحية للحد من نزيف المعدة. عندما حاولنا تقسيم المعدة بشكل حاد دون دباسة ، فإنه يؤدي إلى نزيف مفرط ومعدل وفيات أعلى بكثير. ومع ذلك ، فإن هذا يؤدي أيضا إلى إزالة forestomach ، وهذا قد يؤدي إلى تغييرات فسيولوجية تختلف عن تلك التي RYGB الإنسان. ومع ذلك ، فإن forestomach فريد من نوعه للقوارض ولا يحتوي على غدد ، ولا ينبغي أن يسبب أي تغييرات في هرمونات الأمعاء.
القيد الأكثر أهمية لهذه الطريقة هو أنه يتطلب اثنين من إعادة تحميل دباسة الجراحية لكل فأر، والتي يمكن أن تكون مكلفة. ومع ذلك، فإن نتائج البقاء الممتازة قد تقلل التكلفة من خلال طلب فئران أقل للدراسة، مما يؤدي إلى استخدام أفضل لمرافق تربية الحيوانات والمعدات الجراحية وموظفي البحوث.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
قدمت Ethicon اثنين من دباسات القطع الخطية مقاس 45 مم ، وإعادة تحميل دباسة متعددة مقاس 3.5 مم ، وغرز بولي بروبلين 6-0. ليس لدى المؤلفين أي تضارب آخر في المصالح للإعلان عنه.
Acknowledgments
تم تمويل هذه الدراسة من قبل الجمعية الأمريكية لبحوث جراحة التمثيل الغذائي والسمنة. قدمت Ethicon بسخاء الغرز ، والدبابيس ، ومقاطع. تم تمويل أبحاث الدكتوراه للمؤلف الرئيسي من قبل برنامج المحققين السريريين في جامعة ألبرتا وزمالة ألبرتا للابتكار السريري. ونود أيضا أن نشكر ميشيل تران على توضيحها الطبي لتشريح RYGB.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 2-0 Silk Sutures | Ethicon | K533 | |
| 3-0 Vicryl Sutures | Ethicon | J219H | |
| 4% Isoflurane | N/A | N/A | |
| 5% Dextrose and 0.9% Sodium Chloride Solution - 1000 mL | Baxter | 2B1064 | |
| 50 mL Conical Centrifuge Tubes | Fisher Scientific | 14-432-22 | |
| 6-0 Prolene Sutures | Ethicon | 8805H | |
| Anesthetic Machine | N/A | N/A | |
| Animal Hair Shaver | N/A | N/A | |
| Betadine Solution | N/A | N/A | |
| Castrojievo Needle Holder with lock 14 cm (smooth curved) | World Precision Instruments | 503258 | |
| ECHELON FLEX Articulating Endoscopic Linear Cutter | Ethicon | EC45A | |
| Economy Tweezers #4 | World Precision Instruments | 501978 | |
| ENDOPATH ETS Articulating Linear Cutter 45mm Reloads | Ethicon | 6R45B | |
| Far Infrared Warming Pad Controller with warming pad (15.2 cm W x 20.3 cm L), pad temperature probe, and 10 disposable, non-sterile sleeve protectors | Kent Scientific | RT-0515 | |
| Large Rat Elizabethan Collar | Kent Scientific | EC404VL-10 | |
| Liquid Diet Feeding Tube (150 mL) | Bio-Serv | 9007 | |
| Liquid Diet Feeding Tube Holder (short adjustable) | Bio-Serv | 9015 | |
| Micro Mosquito Forceps | World Precision Instruments | 500452 | |
| Micro Scissors | World Precision Instruments | 503365 | |
| Mouse Diet, High Fat Fat Calories (60%), Soft Pellets | Bio-Serv | S3282 | |
| No. 11 Blade and Scalpel Handle | N/A | N/A | |
| OPMI Vario Surgical Microscope | ZEISS | S88 | |
| Raised Floor Grid | Tecniplast | GM500150 Raised Floor Grid | |
| Rodent Liquid Diet, Lieber-DeCarli '82, Control, 4 Liters/Bag | Bio-Serv | F1259 | |
| Sodium Chloride Irrigation 0.9% Solution - 500 mL | Baxter | JF7633 | |
| Sterile Cotton Swabs | N/A | N/A | |
| Sterile Drape | N/A | N/A | |
| Sterile Towel | N/A | N/A | |
| Thermal Cautery Unit | World Precision Instruments | 501293 |
References
- World Health Organization. Obesity and Overweight. , Available from: http://www.who.int/news-room/fact-sheets/detail/obesity-and-overweight (2018).
- Courcoulas, A. P., et al. Three-year outcomes of bariatric surgery vs lifestyle intervention for type 2 diabetes mellitus treatment. JAMA Surgery. 15213 (10), 1-9 (2015).
- Ardestani, A., Rhoads, D., Tavakkoli, A. Insulin cessation and diabetes remission after bariatric surgery in adults with insulin-treated type 2 diabetes. Diabetes Care. 38 (4), 659-664 (2015).
- Casella, G., et al. Ten-year duration of type 2 diabetes as prognostic factor for remission after sleeve gastrectomy. Surgery for Obesity and Related Diseases. 7 (6), 697-702 (2011).
- Panunzi, S., De Gaetano, A., Carnicelli, A., Mingrone, G. Predictors of remission of diabetes mellitus in severely obese individuals undergoing bariatric surgery. Annals of Surgery. 261 (3), 459-467 (2015).
- Edelman, S., et al. Control of type 2 diabetes after 1 year of laparoscopic adjustable gastric banding in the helping evaluate reduction in obesity (HERO) study. Diabetes, Obesity and Metabolism. 16 (10), 1009-1015 (2014).
- Mingrone, G., et al. Metabolic surgery versus conventional medical therapy in patients with type 2 diabetes: 10-year follow-up of an open-label, single-centre, randomised controlled trial. The Lancet. 397 (10271), 293-304 (2021).
- Thaler, J. P., Cummings, D. E. Minireview: Hormonal and metabolic mechanisms of diabetes remission after gastrointestinal surgery. Endocrinology. 150 (6), 2518-2525 (2009).
- Mingrone, G., Castagneto-Gissey, L. Mechanisms of early improvement / resolution of type 2 diabetes after bariatric surgery. Diabetes and Metabolism. 35 (6), 518-523 (2009).
- Arapis, K., et al. Remodeling of the residual gastric mucosa after Roux-en-Y gastric bypass or vertical sleeve gastrectomy in diet-induced obese rats. PloS One. 10 (3), 012414 (2015).
- Bruinsma, B. G., Uygun, K., Yarmush, M. L., Saeidi, N. Surgical models of Roux-en-Y gastric bypass surgery and sleeve gastrectomy in rats and mice. Nature Protocols. 10 (3), 495-507 (2015).
- Bueter, M., et al. Roux-en-Y gastric bypass operation in rats protocol. Journal of visualized experiments : JoVE. (64), (2012).
- Stevenson, M., Lee, J., Lau, R. G., Brathwaite, C. E. M., Ragolia, L. Surgical mouse models of vertical sleeve gastrectomy and Roux-en Y gastric bypass: a Review. Obesity Surgery. , (2019).
- Hao, Z., et al. Reprogramming of defended body weight after Roux-En-Y gastric bypass surgery in diet-induced obese mice. Obesity. 24 (3), 654-660 (2016).
- McErlane, S. Adult rodent anesthesia SOP. UBC Animal Care Guidelines. , Available from: https://animalcare.ubc.ca/sites/default/files/documents/ACC-01-2017_Anesthesia.pdf (2017).
- Sotocinal, S. G., et al. The Rat Grimace Scale: a partially automated method for quantifying pain in the laboratory rat via facial expressions. Molecular pain. , 1-10 (2011).
- Elder, K. A., Wolfe, B. M. Bariatric surgery: A review of procedures and outcomes. Gastroenterology. 132 (6), 2253-2271 (2007).
- Lim, R. B. Bariatric procedures for the management of severe obesity: Descriptions. UpToDate. , Available from: https://www.uptodate.com/ (2017).
