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Methodenartikel

Herstellung von Naringenin-Lösung für die In-vivo-Anwendung

3K Aufrufe

DOI:

10.3791/62736

10. August 2021

In diesem Artikel

Zusammenfassung

Hier stellt das Protokoll die Herstellung von Naringeninlösung für die intraperitoneale In-vivo-Verabreichung vor. Naringenin ist vollständig in einer Mischung aus Dimethylsulfoxid, Tween 80 und Kochsalzlösung gelöst. Die antidiabetischen osteoporotischen Wirkungen von Naringenin wurden durch Blutzuckertests, Tartrat-resistente saure Phosphatase-Färbung und enzymgebundenen Immunassay beurteilt.

Zusammenfassung

Die Herstellung einer zusammengesetzten (phytochemischen) Lösung ist ein übersehener, aber kritischer Schritt vor ihrer Anwendung in Studien wie dem Arzneimittelscreening. Die vollständige Solubilisierung der Verbindung ist für ihre sichere Verwendung und relativ stabile Ergebnisse notwendig. Hier wird ein Protokoll zur Herstellung von Naringeninlösung und deren intraperitonealer Verabreichung in einem fettreichen Diät- und Streptozotocin (STZ)-induzierten diabetischen Modell als Beispiel demonstriert. Eine kleine Menge Naringenin (3,52-6,69 mg) wurde verwendet, um seine Solubilisierung in Lösungsmitteln zu testen, einschließlich Ethanol, Dimethylsulfoxid (DMSO) und DMSO plus Tween 80, rekonstituiert in physiologischer Kochsalzlösung (PS). Die vollständige Solubilisierung der Verbindung wird durch Beobachtung der Farbe der Lösung, des Vorhandenseins von Ausfällen nach dem Zentrifugieren (2000 x g für 30 s) oder durch Stehen der Lösung für 2 h bei Raumtemperatur (RT) bestimmt. Nach Erhalt einer stabilen Verbindung/phytochemischen Lösung kann die endgültige Konzentration/Menge der für In-vivo-Studien erforderlichen Verbindung in einer reinen Lösungsmittel-Stammlösung (kein PS) hergestellt und dann wie gewünscht mit PS verdünnt/gemischt werden. Die antidiabetische osteoporotische Wirkung von Naringenin bei Mäusen (intraperitoneale Verabreichung bei 20 mg/kg Körpergewicht, 2 mg/ml) wurde durch Messung von Blutzucker, Knochenmasse (Mikro-CT) und Knochenresorptionsrate (TRAP-Färbung und ELISA) beurteilt. Forscher, die nach detaillierten organischen / phytochemischen Lösungspräparaten suchen, werden von dieser Technik profitieren.

Einleitung

Mit zunehmenden Studien über die Verwendung von phytochemischen Verbindungen für das Arzneimittelscreening sind Ansätze zur Herstellung phytochemischer Lösungen zur Bewertung ihrer optimalen Wirkungen beachtenswert. Viele Aspekte wie die Auflösungsmethodik, Dosierung und Konzentration sind bei der Herstellung der Verbindung1 zu berücksichtigen.

Lösungsmittelbasierte Auflösung wird häufig für die Herstellung organischer Verbindungen verwendet1. Zu den üblicherweise verwendeten Lösungsmitteln gehören Wasser, Öl, Dimethylsulfoxid (DMSO), Methanol, Ethanol, Ameisensäure, Tween, Glycerin usw.

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Protokoll

Die beschriebenen Untersuchungen entsprachen den Richtlinien für die Pflege und Verwendung von Labortieren des National Research Council und wurden vom Shanghai University of Traditional Chinese Medicine Animal Care and Use Committee genehmigt. Bei der Durchführung der Experimente sind Laborkittel, Einweg-Nitrilhandschuhe und Schutzbrillen aus Sicherheitsgründen erforderlich.

1. Herstellung von Lösungsmitteln und Abschätzung von Naringenin, das für die In-vivo-Anwendung erforderlich ist

  1. Die folgenden Lösungsmittel werden hergestellt: Tween-80 (Endkonzentrationsbereich: 0,5%-1%), DMSO, Glycerin (Endkonzentrationsbereich: 1....

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Ergebnisse

Es wurde festgestellt, dass das Körpergewicht der fettreichen, mit Diät gefütterten und STZ-induzierten diabetischen Mäuse im Vergleich zu den Kontrollgruppen 0-8 Wochen nach der STZ-Behandlung abnahm. Der Gewichtsverlust von Naringenin-behandelten Mäusen war im Vergleich zu den unbehandelten Mäusen (STZ-Gruppe) in Woche 4 signifikant. Die Kontroll- und STZ-Gruppen wurden mit dem gleichen PS-Volumen verabreicht (Tabelle 1). Der Blutzuckerspiegel bei diabetischen Mäusen stieg innerhalb von 1 Monat nach ST.......

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Diskussion

Die Herstellung der phytochemischen Lösung ist die Grundlage für ihre Anwendung in vivo. In diesem Protokoll wurde die Herstellung von Naringeninlösung unter Verwendung verschiedener Lösungsmittel wie Ethanol, DMSO, Tween 80 und 0,9% PS demonstriert. Die Lösung im vollständig gelösten Zustand muss weiter überwacht werden, indem sie für einige längere Stunden bei Raumtemperatur bleibt und dann gefiltert wird, bevor sie in vivo verwendet wird.

Die Lösungsmittelbestimmung ist ei.......

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Offenlegungen

Die Autoren haben nichts offenzulegen.

Danksagungen

Diese Arbeit wurde von der National Natural Science Foundation of China (81973607 und 81573992) unterstützt.

....

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Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien
NameUnternehmenKatalognummerKommentare
1,5 mL  MikroröhrchenCorning Science (Wujiang) Co.23218392Warmhalteflüssigkeit
Automatischer DörrautomatLeica Microsystems (Shanghai) Co.LEICA ASP 300SDörrproben
Blutzucker-TeststreifenJohnson & Johnson (China) Medical Equipment Co.
ZentrifugeMIULABMinutenzentrifugeZentrifugallösung
DehydratorLeica Microsystems (Shanghai) Trading Co.LEICA  ASP300SDehydrierung
DMSOSangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd.E918BA0041Co-Solvent
ELISA Assay KitElabscience Biotechnology Co., LtdMaus COL1 (Kollagen Typ I) ELISA Kit: E-EL-M0325c
Maus  CTX I ELISA Kit: E-EL-M0366c
Maus PICP ELISA Kit: E-EL-M0231c
Maus PINP ELISA Kit: E-EL-M0233c
Ethanol absolutesSinopharm Chemisches Reagenz Co., Ltd10009218Co-Lösungsmittel
EthylenglykolmonoethyletherSangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd.A501118-0500TRAP Färbung
Ethylendiamintetraessigsäure (EDTA)Sinopharm Chemical ReagenzCo., Ltd10009617Entkalkungsfilter
Merck Millpore LTD.Millex-GP, 0,22 &Mikro; mFilterlösung
EissäureSinopharm Chemisches Reagenz Co., Ltd10000218TRAP Färbung
GlukosemessgerätJohnson & Ltd Johnson (China) Medical Equipment Co.One Touch Ultra VueSeriennummer: COJJG8GW
GrinderShanghai Jingxin Experimentelle TechnologieTissuelyser-24
HämatoxylinNanjing Jiancheng Bioengineering InstituteD005TRAP Färbung
InsulinspritzeShanghai Kantaray Medical Devices Co.0,33 mm x 13 mm, RW LBIntraperitoneale Injektion
L-(+) WeinsäureSinopharm Chemical ReagentCo., Ltd100220008TRAP Färbemikroskop
OLYMPUSsz61Beobachtungsmikrotom
Leica Microsystems (Shanghai) Trading Co.LEICA RM 2135Sektion
Mini-ZentrifugeHangzzhou Miu Instruments Co., Ltd.  Mini-6KCZentrifuge
Naphthol AS-BI PhosphatSIGMA-ALDRICHBCBS3419TRAP Färbung
NaringeninJiangsu Yongjian Pharmaceutical Co., Ltd102764Solute
Paraffin EinbettstationLeica Microsystems (Shanghai) Co.LEICA  EG 1150 H, LEICA  EG 1150 CEinbettung & Proben
Pararosanilin BaseBBI Life SciencesE112BA0045TRAP Färbung
Pipetteneppendorf2– 20 & Mikro; L, 100– 1000 &Mikro; L, 20– 200 & Mikro; L  Transferre Liquid
Plate ReaderBioTek Instruments USA, Inc.BioTek CYTATION 3 Imaging ReaderELISA
HarzShanghai Yyang Instrument Co., Ltd.Neutraler BalsamTRAP Färbesalzlösung
(0,9 PS)Baxter Healthcare (Shanghai) Co.,LtdA6E1323Lösungsmittel
Natriumacetat wasserfreiSinopharm Chemisches ReagenzCo., LtdMerck-1.06268.0250 | 250gTRAP Färbemittel
NatriumnitritSinopharm Chemisches ReagenzCo., Ltd10020018TRAP Färbemittel
Tween-80Sangon Biotech (Shanghai ) Co., GmbH.E819BA0006Emulgator
ZirkonoxidperlenShanghaijingxin Experimental Technology11079125z 454gMahlen
4130392

Referenzen

  1. Stoye, D. Solvents. Ullmann's Encyclopedia of Industrial Chemistry. , Wiley Online Library. (2000).
  2. Bouchard, D., et al. Optimization of the solvent-based dissolution method to sample volatile organic compound vapors for compound-specific iso....

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Nachdrucke und Genehmigungen

Tags

Phytochemische Pr parationintraperitoneale Injektionfettreiche Ern hrungStreptozotocin ModellBlutzuckenmessungKnochenmasseanalyseTRAP F rbungKnochenresorption