Durale Stimulation und periorbitale von Frey-Tests bei Mäusen als präklinisches Modell von Kopfschmerzen

Migräneschmerzen bleiben weltweit ein großes Problem der öffentlichen Gesundheit. Die Weltgesundheitsorganisation stuft sie als die sechsthäufigste Krankheit der Welt ein, die knapp 15% der Erdbevölkerung betrifft¹ und eine erhebliche sozioökonomische Belastung für die Gesellschaft verursacht ^2,3. Die Behandlungsmöglichkeiten und ihre Wirksamkeit waren suboptimal und bieten nur symptomatische Linderung und modifizieren nicht signifikant pathophysiologische Ereignisse, die dem Auftreten von Migräne zugrunde liegen ^4,5. Der Mangel an Behandlungserfolg ist wahrscheinlich darauf zurückzuführen, dass Migräne eine multifaktorielle Störung ist, deren Pathologie kaum verstanden wird und zu einer begrenzten Anzahl von therapeutischen Zielen führt. Migräne ist auch in Tiermodellen vollständig zu erfassen, insbesondere angesichts der Tatsache, dass die Migränediagnose auf der Grundlage verbaler Kommunikation mit Patienten gestellt wird, die ihre Erfahrungen mit Migränemerkmalen wie Aura, Kopfschmerzen, Photophobie und Allodynie beschreiben. Ungeachtet dessen ist es wichtig zu beachten, dass die jüngsten Fortschritte bei der Migränebehandlung derzeit die Behandlung vieler neurologischer Erkrankungen übertreffen, die durch präklinische Modelle gut validiert wurden. Zum Beispiel waren monoklonale Antikörper und kleine Moleküle, die auf Calcitonin-Gen-verwandtes Peptid oder seinen Rezeptor abzielen, sehr erfolgreich bei der Verbesserung der Lebensqualität von Migränepatienten und können möglicherweise das klinische Management von Migräne verändern. Während es Fortschritte beim Verständnis dieser Störung gegeben hat, gibt es noch viel zu klären.

Basierend auf präklinischen Tiermodellen und Humanstudien ist es allgemein anerkannt, dass Migränekopfschmerzen durch eine abweichende Aktivierung von nozizeptiven Fasern in den Hirnhäuten ausgelöst werden, die durch die Trigeminus- und oberen zervikalen Dorsalwurzelganglien 6,7,8,9,10 signalisieren. Trotz dieser Theorie verwenden viele Studien immer noch die systemische Verabreichung von Medikamenten, um die zugrunde liegenden beitragenden Mechanismen bei Migräne zu verstehen. Während die systemische Dosierung von Medikamenten unser Verständnis erheblich gestärkt hat, beurteilen diese Ergebnisse nicht direkt, ob lokale Aktionen innerhalb des Zielgewebes von Interesse eine Rolle bei Migräne spielen. Umgekehrt haben mehrere Studien einen Ansatz zur Stimulierung der Dura verfolgt; Diese Experimente erfordern jedoch eine Kanülenimplantation über eine invasive Kraniotomie und verlängerte Erholungszeiten^11,12. Aufgrund dieser Einschränkungen haben wir einen minimalinvasiven Ansatz entwickelt, um die Dura lokal zu stimulieren, wobei das Fehlen einer Kraniotomie die postoperative Genesung eliminiert und sofortige Tests an wachen Tieren^{ermöglicht 12,13,14}. Diese Injektionen werden unter leichter Isoflurananästhesie durchgeführt und an der Verbindung der sagittalen und lambdoiden Nähte bei Mäusen verabreicht.

Es wurden mehrere Ansätze entwickelt, um nozizeptive Verhaltensreaktionen bei Nagetieren^{zu bewerten 15}. Kutane Allodynie wurde bei etwa 80^% der Migränepatienten^16,17 berichtet und stellt einen potenziellen translationalen Endpunkt für die Anwendung bei Nagetieren dar. In präklinischen Modellen wurde die Anwendung von Von-Frey-Filamenten auf die Plantarregion der Nagetierpfote verwendet, um das Schmerzverhalten in präklinischen Migränemodellen zu beurteilen. Die Haupteinschränkung dieses Ansatzes besteht darin, dass er die Kopfregion nicht testet. Die Gesichtsgrimassenbewertung wurde verwendet, um das Schmerzverhalten bei Nagetieren durch die Analyse von Gesichtsausdrücken nach der Induktion von Schmerzreizen^{zu erfassen 18,19}. Zu den Einschränkungen gehört jedoch, dass nur Reaktionen auf akute Reize und nicht chronische orofaziale Schmerzzustände erfasst werden. Gesichtspflege und verminderte Aufzucht werden auch als Ergebnisse von Verhaltensreaktionen in präklinischen Modellen der Migräne betrachtet^20,21. Zu den Einschränkungen der ersteren gehören Schwierigkeiten bei der Unterscheidung von Schmerzreaktionen von normaler Routinepflege und anderen Empfindungen wie Juckreiz. Im letzteren Fall nimmt das Aufzuchtverhalten nach der Einführung von Nagetieren in neuartigen Umgebungen typischerweise schnell ab. Obwohl jeder dieser Verhaltensendpunkte für das Verständnis verschiedener Mechanismen, die zu Schmerzzuständen beitragen, wertvoll ist, besteht ein kritischer Bedarf an präklinischen Modellen von Schmerzstörungen wie Migräne, um Endpunkte einzubeziehen, die spezifisch cephalische Überempfindlichkeitsreaktionen erfassen. Die Beurteilung der taktilen Überempfindlichkeit der periorbitalen Haut nach duraler Stimulation ist eine Methode, die einen besseren Einblick in Mechanismen geben kann, die zu Migräne beitragen, bei denen sensorische Symptome überwiegend cephalischer Natur sind. Hier beschreiben wir eine Methode zur Verabreichung von Substanzen auf die Mausdura als präklinisches Modell der Migräne. Im Anschluss an die durale Anwendung präsentieren wir auch eine detaillierte Methode zum Testen der periorbitalen taktilen Überempfindlichkeit mit kalibrierten Von-Frey-Filamenten, die in der Dixon-Up-Down-Methode angewendet werden.

Alle Verfahren wurden mit vorheriger Genehmigung des institutionellen Animal Care and Use Committee an der University of Texas in Dallas durchgeführt. ICR (CD-1) (30-35 g) und C57/BL6 (25-30 g) Mäuse im Alter von 6-8 Wochen wurden in dieser Studie verwendet.

1. Dural-Infuser

1. Erstellen Sie die Maus-Infusers / Injektoren, indem Sie eine handelsübliche interne Kanüle und einen Infuser für einseitige Injektionen mit einer nichtmetallischen Quarzglas-Kunststoffkappe modifizieren, die verstellbar ist und in eine 28-G-Führungskanüle mit einem Innendurchmesser (I.D.) von 0,18 mm und einem Außendurchmesser (O.D.) von 0,35 mm eingesetzt wird (Abbildung 1A).
2. Verwenden Sie einen Bremssattel oder ein anderes Messgerät, um die Kappe aus Quarzglas am Infuser auf eine Länge von 0,6 mm einzustellen; Gemessen von der Spitze des Infusers bis zum Rand der Silica-Kunststoffkappe.
   1. Achten Sie darauf, den Infuser beim Einstellen der Kunststoffkappe nicht zu verbiegen oder zu stumpf zu machen.
   2. Für andere Mausstämme, die zuvor nicht für durale Injektionen verwendet wurden, bestimmen Sie die optimale Infusionslänge, indem Sie die Länge auf 0,6 mm einstellen und Pilotinjektionen mit Tinte oder Farbstoff durchführen, wobei Sie die Infusionskörperlänge anpassen, bis beobachtet wird, dass sich der Farbstoff nur in der Dura mater und nicht auf dem Gehirn oder Schädel befindet.
3. Befestigen Sie das lange Ende (oder das Ende, das nicht auf 0,6 mm gemessen wurde) des eingestellten Schlauchs an Kunststoffschläuchen (Pumpenschläuche, 2 Stufen, I.D. 0,19 mm, Länge 406 mm).
   1. Schneiden Sie den Schlauch auf eine Mindestlänge von 8 Zoll, um sicherzustellen, dass genügend Leine vorhanden ist, um ein Volumen von 5 μL aufzunehmen.
   2. Stellen Sie sicher, dass der Schlauch das Metallteil und die Oberseite des Kunststoffstopfens am Infuser bedeckt. Dies verhindert, dass sich Luftblasen in der Leitung ansammeln.
4. Befestigen Sie das andere Ende des Schlauches an einer 10-μL-Glas-Mikrospritze (gasdicht; zementierte Nadel; 21 G mit einem 10-mm-Vorsprung), wobei Sie erneut darauf achten, dass der Metallteil der Spritze fest abgedichtet ist (Abbildung 1A).
5. Sobald die Leitung angeschlossen ist, füllen Sie die Spritze mit 5 μL phosphatgepufferter Kochsalzlösung (PBS), synthetischer Interstitialflüssigkeit (SIF) oder anderen Fahrzeugen der Wahl, um die Bildung von Luftblasen zu verhindern.
   1. Wenn Luftblasen in der Leitung beobachtet werden, überfluten Sie die Leitung mit dem Fahrzeug, bis sich die Blasen aufgelöst haben.
      HINWEIS: Es kann hilfreich sein, die Spritze mit dem Fahrzeug zu füllen, bevor sie an der Leitung befestigt wird, und dann die Flüssigkeit durch die Leitung zu drücken, sobald sie angeschlossen ist.
6. Nachdem die Leitung mit 5 μL des Fahrzeugs verfüllt ist und effizient arbeitet, laden Sie 5 μL des Arzneimittels / der Lösung in die Hamilton-Spritze (Tinte oder Farbstoff kann als Alternative zum Medikament / zur Lösung verwendet werden, wenn Sie diese Technik erlernen oder üben).
   1. Stellen Sie sicher, dass alle Fahrzeuglösungen, die auf die Dura verabreicht werden, bei einem pH-Wert von 7,4 gehalten und auf eine Osmolalität von 310 gemessen werden. Dies reduziert die potenzielle Aktivierung von säureempfindlichen Ionenkanälen und anderen osmosensitiven Kanälen innerhalb der Dura.
7. Das maximale Volumen, das an Mäusen getestet wurde, die kein Austreten in das Gehirn verursachten, beträgt ungefähr 10 μL. Die Verhaltenseffekte nach Injektionen mit diesem Volumen wurden nicht getestet. Aus diesem Grund nur 5 μL der Lösung auf die Dura geben.
   HINWEIS: Diese Beobachtungen basieren auf den Mausstämmen / -alter / -gewichten von 6-8 Wochen alten CD1 / ICR-Mäusen.

2. Durale Injektionen

1. Sobald die Spritze vorbereitet und das Medikament geladen ist, positionieren Sie eine Maus flach auf ihrem Bauch und betäuben Sie sie unter kurzem 3% Isofluran mit einer Sauerstoffflussrate von 0,5-1 l / min über den Nasenkonus.
   1. Nachdem die Maus keinen Quetschreflex mehr anzeigt, passen Sie die Anästhesie an und halten Sie sie bei einem Isofluran von 1,5% aufrecht.
2. Nach der Betäubung sterile opthalmische Salbe auf die Augen auftragen und den Kopf des Tieres rasieren, dann desinfizieren Sie die Haut mit Povidon-Jod und Ethanol. Danach gelangen Sie in eine Position, die einer erfolgreichen Injektion förderlich ist.
3. Verwenden Sie eine Hand, um den Kopf des Tieres zu stabilisieren und halten Sie den Infuser mit der anderen Hand.
4. Sondieren und lokalisieren Sie vorsichtig die Verbindung der sagittalen und lambdoidalen Nähte am Schädel der Maus (Abbildung 1B, C).
   1. Um diese diskrete Verbindung durch die Haut zu lokalisieren, verwenden Sie die topographischen Merkmale des Schädels und untersuchen Sie vorsichtig die allgemeine Position der Verbindung mit dem Infuser.
   2. Überprüfen Sie die Position der Verbindung, indem Sie den Infuser entlang des Schädels neu positionieren und nach der genauen Position suchen.
5. Sobald sich die Naht befindet und der Infuser an Ort und Stelle ist, wackeln Sie den Infuser sehr langsam und sanft hin und her, bis er durch die Haut dringt und in die Verbindung bis zum Kunststoffstopfen fällt.
   HINWEIS: Stellen Sie sicher, dass Sie die gesamte 0,6-mm-Spitze des Infusers in die Verbindung einführen.
6. Um die Genauigkeit zu überprüfen, verwenden Sie Tinte oder Farbstoff als Injektionslösung und euthanasieren und enthaupten Sie die Maus.
   1. Entfernen Sie die Totenkopfkappe, um den Farbstoff in der Dura mater sichtbar zu machen (Abbildung 1C).
      HINWEIS: Farbstoff sollte nicht am Gehirn oder an der Außenseite des Schädels beobachtet werden. Ebenso sollten Mäuse in jedem Experiment post mortem überprüft werden, um die Genauigkeit der Injektion zu überprüfen und sicherzustellen, dass die Integrität der Dura mater unbeschädigt war.
7. Entfernen Sie nach der Injektion die Maus aus der Narkose, warten Sie, bis sie das Bewusstsein wiedererlangt hat, und kehren Sie dann in ihren Käfig zurück oder legen Sie sie in eine Testkammer, um mit den gewünschten Assays zu beginnen.
   HINWEIS: Erlauben Sie der Maus, sich mindestens 30 Minuten lang von der Anästhesie zu erholen, bevor Sie Verhaltensexperimente durchführen.

3. Periorbital von Frey

1. Beginnen Sie die Studie mit einer Kohorte von etwa 16-20 Mäusen.
2. Behandeln Sie am Tag vor der Gewöhnung jede Maus mindestens 5 Minuten lang.
3. Etwa 24 h nach der Handhabung gewöhnen sich die Mäuse an die Prüfraumbedingungen und die von Frey-Prüfapparatur (Abbildung 2A).
   HINWEIS: Die Acrylprüfvorrichtung besteht aus einzelnen Fächern mit Deckeln, die ungefähr 3 Zoll x 3,5 Zoll x 5 Zoll (B x H x T) sind und von Aluminiumständern getragen werden, die über 0,25 in 19 G quadratverzinktem Stahlgewebedraht verbunden sind.
   1. Legen Sie die Mäuse in einen horizontal platzierten weißen 4-Unzen-Pappbecher, der geruchlos ist und kein Polyethylen oder Paraffinwachs enthält.
      HINWEIS: Diese Arten von Tassen werden bevorzugt, da sie bei Einnahme Magen-Darm-Störungen bei den Mäusen reduzieren (Abbildung 2B).
4. Während sich die Tiere in ihren jeweiligen Kammern befinden, legen Sie ein Pellet der normalen Chow-Diät in die einzelne Kammer jeder Maus, um die Tiere zu beruhigen und unnötigen Stress für die Tiere zu vermeiden. Tun Sie dies 3 Tage lang vor einem von Frey-Verhaltenstest.
   1. Stellen Sie sicher, dass jedes Mal, wenn die Mäuse in der Kammer sind, Zugang zu Nahrung besteht.
   2. Nummerieren und weisen Sie jedes Tier dem gleichen Platz im Testrack zu. Legen Sie die Maus jeden Tag des Testzeitraums in dieselbe Tasse, um sicherzustellen, dass sich jedes Tier an seine Testumgebung gewöhnt.
      HINWEIS: Mäuse nagen an den Bechern und zerstören anschließend die Tassen. Sollte dies der Fall sein, ersetzen Sie die Tasse und beschriften Sie sie mit der entsprechenden Mausnummer.
5. Nach den ersten 3 Tagen der Gewöhnung legen Sie die Mäuse in ihre einzelnen Kammern.
   1. Lassen Sie die Tiere sich vor einem von Frey-Test mindestens 1 Stunde lang an den Testraum und die Kammern gewöhnen, damit sich die Mäuse beruhigen können und anschließend leichter zu testen sind.
6. Nachdem Sie sich am Testtag an den Raum gewöhnt haben, entfernen Sie eine Maus, während sie sich noch in ihrer Tasse befindet, aus der jeweiligen Kammer.
   1. Halten Sie die Tasse in der horizontalen Position, so dass die Maus sowohl auf Vorderpfoten als auch auf Hinterpfoten ist, um ihr Gewicht gleichmäßig verteilt zu halten.
      HINWEIS: Eine ungleiche Gewichtsverteilung kann die Reaktionen der Tiere verändern und sogar verhindern, dass Tiere reagieren.
7. Stellen Sie die Tasse mit der Maus drinnen auf den Tisch unter dem Testrack auf dem saugfähigen Pad.
8. Für periorbitale von-Frey-Tests legen Sie das 0,07 g Von-Frey-Filament direkt in die Mitte des Gesichts und zwischen die Augen.
9. Üben Sie genügend Druck auf das Filament aus, damit sich das von Frey-Haar zu einer "C" -förmigen Formation biegt.
   1. Halten Sie den Kontakt mit der Region mindestens 3 s, aber nicht mehr als 5 s aufrecht oder bis die Maus ihren Kopf zieht und mit ihrer Pfote auf das Filament streift.
      HINWEIS: Wenn das Filament während des Tests verrutscht oder mehr als die Spitze des Filaments das Tier berührt, sollten Antworten nicht gezählt werden. Diese Reaktionen können als Reaktion auf den Pinsel erfolgen, der von verschiedenen Mechanorezeptoren aktiviert wird und daher möglicherweise keine genauen Ergebnisse widerspiegelt.
   2. Von Frey Filamente nach der Dixon "up-down" Methode^22,23 auftragen.
      1. Tragen Sie zunächst das von Frey-Filament auf, das ein Gewicht von 0,07 g hat. Das niedrigstmögliche Filament und das am höchsten getestete Filament in dieser Studie sind Filamente mit Gewichten von 0,008 g bzw. 0,6 g.
      2. Verwenden Sie die Filamente mit einem Gewicht von 0,008 g, 0,02 g, 0,04 g, 0,07 g, 0,16 g, 0,4 g und 0,6 g, um diesen Assay durchzuführen.
      3. Wenn bei dieser Methode ein Tier nicht auf das Filament reagiert, wenden Sie das Filament des nächsthöheren Grammgewichts an.
      4. Wenn die Maus auf ein Filament reagiert, betrachten Sie diese Maus als Reaktion auf dieses Filament. Wenn dies der Fall ist, tragen Sie das Filament des nächstniedrigeren Grammgewichts auf.
      5. Wiederholen Sie dieses Muster, bis das Tier 4 Mal nach dem ersten Ansprechen getestet wurde oder festgestellt wird, dass das Tier nicht auf die im Assay getesteten Filamente anspricht.
         HINWEIS: Verzichten Sie auf zusätzlichen Druck, der vom Arm oder Handgelenk ausgeht. Eine Skala kann verwendet werden, um die Anwendung des Filaments zu üben.

4. Prüfung der Ausgangsentnahmeschwellen

1. Stellen Sie vor dem Einschluss in ein Experiment sicher, dass die Mäuse eine Ausgangsentnahmeschwelle zwischen 0,5 und 0,6 g erreichen.
   1. Eine Maus erreicht den Ausgangswert, wenn sie nicht auf ein Filament reagiert, das in der in Schritt 3.9.2.2 genannten Serie getestet wurde (0,07 g, 0,16 g, 0,4 g und 0,6 g).
2. Testen Sie Mäuse täglich, wenn Sie Ausgangsentnahmeschwellen festlegen.
   1. Tests ermöglichen es den Tieren, sich an die Testbedingungen und den Druck der von Frey-Filamente zu gewöhnen.
   2. Wenn die Mäuse nach dem dritten Testtag immer noch extrem überempfindlich sind, warten Sie 1 oder 2 Tage, bevor Sie erneut testen.
      HINWEIS: Zu viel Zeit zwischen den Testtagen kann dazu führen, dass sich das Tier nicht an das Gewicht des Filaments in seiner periorbitalen Region anpasst und somit die angestrebte Entnahmeschwelle nicht erreicht.
3. Testen Sie Mäuse etwa 7 Tage lang, bevor Sie feststellen, welche Tiere die Einschlusskriterien für einen Versuch nicht erfüllen.
   HINWEIS: Ungefähr 70% der Mäuse werden das angestrebte Ausgangsniveau erreichen.
   1. Analysieren Sie vor der duralen Stimulation die Ausgangsdaten, um Maus auszuschließen, die keinen Ausgangswert von 0,5 bis 0,6 Gramm oder höher erreicht hat.
   2. Ordnen Sie nach dem Ausschluss jede verbleibende Maus nach dem Zufallsprinzip einer Testgruppe zu. Erreichen Sie dies, indem Sie aus einer Tasse ziehen oder ein Skript in eine Tabelle schreiben, um Zahlen für eine Gruppe randomisieren zu lassen.

5. Analyse der von Frey Ergebnisse

1. Sobald die Reihe der Antworten erhalten wurde, bestimmen Sie das Delta, den k-Wert, den 50%-Schwellenwert und die Entnahmeschwelle in Gramm gemäß den zuvor veröffentlichten Methoden²⁴.
2. Berechnen Sie die Auszahlungsschwelle mit dieser Formel WT = 10(x*^F+B), wobei WT= Auszahlungsschwelle, F = Pfotenentnahmeschwelle, berechnet nach der Chaplan-Methode und B = lineare Regression von log (Biegekraft) = x*Filamentzahl + B.
3. Zeichnen Sie die Daten entweder als Auszahlungsschwelle von 50 % oder als durchschnittliche Auszahlungsschwelle in Gramm auf.

Diese Injektionsmethode wird verwendet, um Stimuli auf die Dura von Mäusen zu verabreichen, so dass nachfolgende Verhaltenstests auftreten können. Der häufigste mit diesem Modell gemessene Verhaltensoutput ist die kutane Gesichtsüberempfindlichkeit, die mit von Frey 12,13,14 beurteilt wurde. Hier zeigen wir, wie dieses Modell verwendet werden kann, um mögliche geschlechtsspezifische Beiträge zur Migränepathologie zu bewerten (Abbildung 3).

Dieses Verfahren wurde verwendet, um die Auswirkungen von duralem Prolaktin (PRL) auf die mechanisch evozierte Überempfindlichkeit des Gesichtszu untersuchen 14 (Abbildung 3). Die Ergebnisse dieser Studie zeigten, dass weibliche ICR-Mäuse signifikant reduzierte Gesichtsentzugsschwellen als Reaktion auf 5 μg durales Prolaktin zeigen (Abbildung 3A). Eine zehnfach niedrigere Dosis von 0,5 μg Prolaktin (PRL) zeigte ebenfalls ähnliche Reaktionen wie eine hohe PRL-Dosis (Abbildung 3B).

Es wurde auch gezeigt, dass diese Injektionen spontane schmerzbedingte Verhaltensweisen hervorrufen, die über Grimassen beurteilt werden. Dural 0,5 μg PRL verursachten signifikante Grimassen bei weiblichen Mäusen (Abbildung 3C), was eine klare Rolle für durale PRL bei weiblichen migräneähnlichen Verhaltensweisen zeigt. Wir haben vor allen Tests mit von Frey-Filamenten Grimassenanalysen durchgeführt.

Abbildung 1: Duraler Infuser und Injektionsplatzierung . (A) Die Injektoren/Infuser bestehen aus einer modifizierten Kanüle, die auf die Länge von ~0,5 mm- 0,65 mm eingestellt und an einer Nadel befestigt ist, die über einen Tygonschlauch auf einer gasdichten 10-μL-Spritze zementiert ist. (B) Luftaufnahme der markierten Position der Injektionsstelle auf dem Kopf der Maus. (C) (Linkes Feld) Diagramm der Stelle der duralen Injektion. Die Platzierung der Injektion erfolgt an der Verbindung der Lambdoid- und Sagittalnähte an etwa 4,8 mm posteriore zu Bregma . (Mittlere Tafel) Postmortale Luftaufnahme eines Mausschädels nach duraler Injektion von 5 μL blauem Injektionsfarbstoff. (Rechtes Feld) Trennung der Maus-Schädeldecke vom Gehirn. Es gab kein beobachtbares Austreten von blauem Injektionsfarbstoff im Gehirn. Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung zu sehen.

Abbildung 2: von Frey Prüfkammern. (A) von Frey Prüfkammer, bestehend aus 3,5 Zoll x 3,5 in einzelnen Acrylkammern mit Deckeln auf einem Drahtgeflechtgestell. Diese sind über Spalten von 10 Kammern verbunden, die in 2 Reihen organisiert sind. (B) Beispiel von Mäusen in ihren einzelnen Tassen, die in den von Frey-Testkammern untergebracht sind. Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung zu sehen.

Abbildung 3: Durale Anwendung von Prolaktin induziert Verhaltensreaktionen bei Mäusen. Mechanische Entzugsschwellen wurden nach der duralen Anwendung von PRL (5 μg oder 0,5 μg) bei weiblichen Mäusen bewertet. (A) Anwendung von 5 μg PRL (n = 7 PRL, n = 6 Vehikel) induzierter Gesichtsüberempfindlichkeit im Vergleich zum Vehikel. (B) Anwendung von 0,5 μg PRL (n = 5 PRL, n = 4 Vehikel) induzierte lang anhaltende Gesichtsüberempfindlichkeit. (C) Die Grimasse wurde auch bei denselben Mäusen beurteilt, die zu jedem Zeitpunkt mit 0,5 μg PRL behandelt wurden. Diese Mäuse wiesen im Vergleich zu den mit dem Fahrzeug behandelten Mäusen signifikant höhere Grimassenwerte auf. Statistik: Zwei-Wege-ANOVA gefolgt von Bonferroni Mehrfachvergleich Post-hoc-Analyse. Die Daten werden als Mittel ± REM dargestellt. *p < 0,05, ****p < 0,0001. Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung zu sehen.

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