Hier demonstrieren wir mehrere In-vivo-Tests (Flash Visual Evoked Potential, Muster-Elektroretinogramm und optische Kohärenztomographie) an Ziegen- und Rhesusaffen, um die Struktur und Funktion des Sehnervs und seiner Neuronen zu verstehen.
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Methodenartikel
Im lebenden Organismus Methoden zur Beurteilung der Funktion und Struktur retinaler Ganglienzellen und Sehnerven bei Großtieren
* These authors contributed equally
In diesem Artikel
Zusammenfassung
Zusammenfassung
Der Sehnerv sammelt Axonsignale von den retinalen Ganglienzellen und überträgt visuelle Signale an das Gehirn. Große Tiermodelle der Sehnervenverletzung sind aufgrund ihrer engeren Ähnlichkeit mit Menschen in Größe und Anatomie unerlässlich, um neuartige therapeutische Strategien von Nagetiermodellen auf die klinische Anwendung zu übertragen. Hier beschreiben wir einige In-vivo-Methoden zur Bewertung der Funktion und Struktur der retinalen Ganglienzellen (RGCs) und des Sehnervs (ON) bei großen Tieren, einschließlich des visuell evozierten Potentials (VEP), des Musterelektroretinogramms (PERG) und der optischen Kohärenztomographie (OCT). In dieser Studie wurden sowohl Ziegen als auch nichtmenschliche Primaten eingesetzt. Durch die schrittweise Präsentation dieser In-vivo-Methoden hoffen wir, die experimentelle Reproduzierbarkeit zwischen verschiedenen Labors zu erhöhen und die Verwendung von Großtiermodellen optischer Neuropathien zu erleichtern.
Einleitung
Der Sehnerv (ON), der aus Axonen der retinalen Ganglienzellen (RGC) besteht, überträgt visuelle Signale von der Netzhaut an das Gehirn. ON-Erkrankungen wie Glaukom, traumatische oder ischämische Optikusneuropathie verursachten häufig eine irreversible ON/ RGC-Degeneration und einen verheerenden Sehverlust. Obwohl es derzeit viele Durchbrüche bei der ON-Regeneration und dem RGC-Schutz in Nagetiermodellen gibt1,2,3,4,5,6, blieben die klinischen Behandlungen für die meisten ON-Erkrankungen im letzten halben Jahrhundert im Wesentlichen gleich mit unbefriedigendem ....
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Protokoll
Die Experimente wurden streng in Übereinstimmung mit den ARRIVE-Richtlinien und dem Leitfaden der National Institutes of Health für die Pflege und Verwendung von Labortieren durchgeführt und entsprechen den Protokollen, die vom Institutional Animal Care and Use Committee der Wenzhou Medical University (WMU) und des Joinn Laboratory (Suzhou) genehmigt wurden. Die männlichen Saanenziegen im Alter von 4 bis 6 Monaten mit einem Gewicht von 19-23 kg wurden in der Tierhaltung der WMU untergebracht. Die männlichen Rhesusmakaken im Alter von 5 bis 6 Jahren mit einem Gewicht von 5-7 kg wurden in der Tierhaltung Joinn untergebracht. Alle Tiere wurden in einem klimatisierten Rau....
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Ergebnisse
Abbildung 1A zeigt repräsentative Ergebnisse von FVEP bei Ziegen. Obwohl die Wellenformen bei gleicher Blitzintensität eine relative Ähnlichkeit aufweisen, empfehlen wir dennoch, die Wellenformen zweimal zu untersuchen. Elektromagnetische Wellen, die von elektronischen Geräten erzeugt werden, stören die gesammelten elektrischen Signale, was zu einem hohen Grundlinienrauschen und einer schlechten Wiederholbarkeit der Wellenform führt. Daher wird empfohlen, sicherzustellen, dass während der el.......
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Diskussion
In dieser Studie stellen wir ein Protokoll von VEP, PERG und OCT bei Ziegen und Rhesusaffen vor. Diese In-vivo-Methoden können in großen Tiermodellen verschiedener Optikusneuropathien wie Glaukom, ischämische oder traumatische Optikusneuropathie und Optikusneuritis9 angewendet werden.
PVEP ist stabiler und empfindlicher als FVEP17; es kann jedoch nicht in Ziege9 ausgelöst werden. Daher wird FVEP bei Ziegen und PVE.......
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Offenlegungen
Die Autoren haben keine Interessenkonflikte offenzulegen.
Danksagungen
Diese Studie wurde durch die folgenden Zuschüsse finanziert: National Key R&D Program of China (2021YFA1101200); Medizinisches Forschungsprojekt von Wenzhou (Y20170188), National Key R&D Program of China (2016YFC1101200); Nationale Naturwissenschaftliche Stiftung Chinas (81770926;81800842); Wichtiges F&E-Programm der Provinz Zhejiang (2018C03G2090634); und Key R&D Program des Wenzhou Eye Hospital (YNZD1201902). Der Sponsor oder die Förderorganisation hatte keine Rolle bei der Gestaltung oder Durchführung dieser Forschung.
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Materialien
| Name | Unternehmen | Katalognummer | Kommentare |
|---|---|---|---|
| 47,6 x 26,8 cm große Monitore | DELL Inc. | E2216HV | Die visuellen Reize der Kontrastumkehr schwarz-weiß Schachbrettmuster wurden auf Bildschirmen |
| 6,0 mm Trachealtubus | Henan Tuoren Medical Device Co., Ltd | PVC 6.0 | sicherstellen die |
| Atemwege Alligator Clip | |||
| Atropin | Guangdong Jieyang Longyang Animal Pharmaceutical Co., Ltd. | reduzieren die Bronchialsekretion und schützen das Herz vor der Aktivierung des Vagusnervs | |
| Carbomer Eye Gel | Fabrik GmbH Tochtergesellschaft von Bausch & Lomb | Befeuchten Sie die Hornhaut und stabilisieren Sie die Aufzeichnungselektroden | |
| ERG-Jet Aufzeichnungselektroden | Roland Consult Stasche& Finger GmbH | 2300 La Chaux-De-Fonds | ERG Aufzeichnung |
| Augenspekulum | Shanghai Jinzhong Medical Device Co., Ltd | ZYD020 | offene Lidfissur |
| Heidelberg Spectralis OCT System | Heidelberg Engineering | OCT System | |
| Bildgebung | https://www.heidelbergengineering.com/media/e-learning/Totara-US/files/pdf-tutorials/2238-003_Spectralis-Training-Guide.pdf) | ||
| Isofluran | RWD Life Science Co., Ltd | R510-22 | Isofluran-Anästhesie |
| männliche Saanen-Ziegen | Caimu Livestock Company, Land (Hangzhou, China) | Die männlichen Saanen-Ziegen im Alter von 4 bis 6 Monaten mit einem Gewicht von 19– 23 kg | |
| Nadelelektrode | Roland Consult Stasche& Finger GmbH | U51-426-G-D | Verwendung für FVEP-Erdungselektrode und PERR-Referenzelektroden |
| peripherer Venenkatheter intravenös | BD Shanghai Medical Device Co., Ltd | 383019 | intravenöser Zugang für Atropin und Propofol |
| Propofol | Xian Lipont Enterprise Union Management Co., Ltd. | Induktion der Isofluran-Anästhesie bei Ziegen | |
| Tropicamid Phenylephrin Augentropfen | SANTEN OY, Japan | 5% Tropicamid und 5% Phenylephrin Hydrochlorid | |
| visuelle Elektrophysiologie Gerät | Gotec Co., Ltd | GT-2008V-III | Verwendung für FVEP & Verifizierter |
| Xylazin | Huamu Tiergesundheitsprodukte Co., Ltd. | Xylazin-Anästhesie: Intramuskuläre Injektion von Xylazin 3 mg/kg | |
| Zoletil50 | Virbac | induziert Isofluran-Anästhesie bei Affen |
Referenzen
- Benowitz, L., Yin, Y. Rewiring the injured CNS: lessons from the optic nerve. Experimental Neurology. 209 (2), 389-398 (2008).
- Park, K. K., et al. Promoting axon regeneration in the adult CNS by modulation of the PTEN/mTOR pathway. Science. ....
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Nachdrucke und Genehmigungen
