Method Article

Generierung eines Hakenischämie-Reperfusionsmodells unter Verwendung eines dreitägigen Kükenembryo

DOI:

10.3791/63288

⸱

February 19th, 2022

 ,  ,  ,  ,  , 
1Laboratory for Stem Cell and Restorative Neurology, Department of Biotechnology, Era’s Lucknow Medical College Hospital, Era University, 2Era University, 3Department of Stem Cell Biology and Regenerative Medicine, Era University

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Dieses Papier beschreibt die Ischämie-Reperfusion (I / R) -Modellierung in einem 3-tägigen Kükenembryo unter Verwendung eines angepassten Spinalnadelhakens, um die I / R-Entwicklung und -Behandlung besser zu verstehen. Dieses Modell ist einfach, schnell und kostengünstig.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Ischämie und Reperfusionsstörungen (I / R) wie Myokardinfarkt, Schlaganfall und periphere Gefäßerkrankungen sind einige der Hauptursachen für Krankheit und Tod. Derzeit stehen viele in vitro und in vivo Modelle zur Verfügung, um den I/R-Mechanismus in Krankheiten oder geschädigtem Gewebe zu untersuchen. Bisher wurde jedoch kein in ovo I / R-Modell berichtet, das ein besseres Verständnis der I / R-Mechanismen und ein schnelleres Drogenscreening ermöglichen würde. Dieses Papier beschreibt die I / R-Modellierung unter Verwendung eines an die Wirbelsäulennadel angepassten Hakens in einem 3-tägigen Kükenembryo, um die I / R-Entwicklungs- und Behandlungsmechanismen zu verstehen. Unser Modell kann verwendet werden, um Anomalien auf DNA-, RNA- und Proteinebene zu untersuchen. Diese Methode ist einfach, schnell und kostengünstig. Das aktuelle Modell kann unabhängig oder in Verbindung mit bestehenden in vitro und in vivo I/R-Modellen verwendet werden.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Ischämie-Reperfusion Gewebeverletzung wurde mit einer Reihe von Pathologien in Verbindung gebracht, darunter Herzinfarkte, ischämischer Schlaganfall, Trauma und periphere Gefäßerkrankungen1,2,3,4,5. Dies ist in erster Linie auf das Fehlen eines umfassenden Verständnisses des Krankheitsverlaufs und das Fehlen eines effektiven Forschungsmodells zurückzuführen. Eine ischämische Verletzung tritt auf, wenn die Blutversorgung eines bestimmten Bereichs des Gewebes unterbrochen wird. Infolgedessen nekrotisiert isch....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Das Institutional Animal Ethical Committee am Lucknow Medical College and Hospital von Era gab eine schriftliche Verzichtserklärung heraus, in der es heißt, dass für die Durchführung dieser Experimente in Übereinstimmung mit dem Committee for the Purpose of Control and Supervision of Animals (CPCSEA) keine formelle Genehmigung erforderlich ist. Es wurden jedoch Standardarbeitsanweisungen befolgt, um das Potenzial für embryonalen Stress zu minimieren.

1. Puffervorbereitung (Tabelle 1)

  1. Vorbereiten der Lösung von Ringer
    1. Zur Herstellung der Ringer-Lösung werden 0,72 g NaCl (123 mM), 0,017 g CaCl2 (1....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Die Doppler Blood Flow Imaging-Technik wurde verwendet, um die Wirksamkeit unseres Modells zu bewerten. Kurz gesagt, wir haben die Daten aus der Kontrollgruppe mit den Daten aus der RVA-Gruppe verglichen, um den Erfolg unserer Kreation zu bestimmen. Abbildung 4A zeigt einen typischen Fluss, der mit dem Kontrolltier assoziiert ist, während Abbildung 4B die Ergebnisse einer RVA darstellt. Die Numerische 1-8 stellt die verschiedenen Ereignisse dar, die mit E/A-Phas.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Ziel der Ischämie-Reperfusionsforschung ist es, therapeutische Strategien zu entwickeln, die den Zelltod verhindern und die Genesung fördern29,30. Um die aktuellen Einschränkungen in der I/R-Forschung zu überwinden, haben wir ein Hook I/R-Kükenembryomodell entwickelt, um ein zuverlässiges und reproduzierbares I/R-Modell zu erstellen. Unseres Wissens nach ist unser Modell das erste I / R-Modell, das jemals in einem 3-tägigen Kükenembryo für routinemäßige I / R-Exp.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Die Autoren erklären keine gegensätzlichen Interessen.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Wir möchten Hari Shankar für seine kritischen Beiträge während der Videografie und des Schnitts, Herrn Baqer Hussain für voice-over, Herrn Asghar Rizvi für den Videoschnitt, Herrn Mohammad Haider für Videodrehs, Herrn Mohammad Danish Siddiqui für die Unterstützung während der Experimente danken.

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
(-80°; C) GefrierschrankHaier,China-1,5
ml ZentrifugenröhrchenTARSONS, Indien500010X
100mm Petrischale (steril)Tarsons, Indien460050
18G Nadel (18G&mal; 1.5 (1.25&fach; 38mm)Ramsons, Indien13990
1mL SpritzeDISPO VAN-26G
Nadel (26G&mal; 1/2 (10.45x13mm)DISPO VAN, indien30722D
37° C Eierbrutkasten mit einstellbarer prozentualer LuftfeuchtigkeitGentek, IndienGL-100
37°; C Labor-InkubatorSCIENCE TECH, IndienCB 101-14
3-Methyladenin (3-MA)Sigma Aldrich, USAM9281
3mL WeidepipetteTARSONS, Indien940050
50mL BecherTARSONS,Indien-5mL
SpritzeDISPO VAN, IndienIP53
70% EthanolMerck Millipore, Vereinigte Staaten64-17-5
Klebeband/CellobandSunrise,Indien-Ambra1
PrimerApplied Biosystems, Foster City, USAHs00387943_m1
Anti-Maus IgGCell Signaling Technology, USA7076S
IgGJackson Immuno Research Laboratories, USA711-035-152
Atg7R& D Systems, USAMAB6608
Atg7 PrimerApplied Biosystems, Foster City, USAHs00893766_m1
AutoklavenbeutelTarsons, Indien550022
AutoklavenmaschineLokal hergestellt, Lucknow,
Proteintech, USA66665-1-Ig
Beta ActinImmunoTag, USAITT07018
RinderserumalbuminHimedia, Mumbai, IndienTC194
CalciumchloridHimedia, Mumbai, IndienGRM534
CatalaseImmunoTag, USAITT5155
ReinigungstücherKimberly-Clark, Indien370080
Gespaltene Caspase3ImmunoTag, USAITT07022
Di-Natrium Hydrogenphosphat-HeptahydratHimedia, Mumbai, IndienGRM39611
Doppler-BlutdurchflussmesserMoors Instrument, Vereinigtes KönigreichmoorVMS-LDF1
Eierregal-
Eierregal-
GAPDHImmunoTag, USAM1000110
GAPDH PrimerApplied Biosystems, Foster City, USA
Glycine Himedia, Mumbai, IndienMB013
NierentablettHOSPITO-LC3A
/BZellsignaltechnologie, USA4108S
MethanolRankem Laboratories, Mumbai, IndienM0252
MikromanipulatorNarishige, JapanM-152
N-Acetyl-L-cystein (NAC)Sigma Aldrich, USAA7250
NaringeninSigma Aldrich, USA67604-48-2
NF-kβThermo Fisher Scientific, USA51-0500
NLRP3ImmunoTag, USAITT07438
NasenzangeLokal hergestellt, Lucknow,Indien-Augenzange
Stoelting, Deutschland52106-40
AugenirisTufft Chirurgische Instrumente, Jaipur, IndienHard Age Vannas Mikroschere abgewinkelt 8CM / 3 1/8"
OHP MarkierungsstiftCamlin,
ImmunoTag, USAITT08329
Spitze Schere mit scharfen KantenStoelting, Deutschland52132-11
KaliumchloridHimedia, Mumbai, IndienMB043
Kaliumphosphat monobasische wasserfreieHimedia, Mumbai, IndienMB050
ProteasehemmerAbcam, Vereinigte StaatenAb65621
SOD-1ImmunoTag, USAITT4364
NatriumchloridFisher Scientific, Mumbai, Indien27605
NatriumdodecylsulfatHimedia, Mumbai, IndienGRM886
Spinalnadel 25GA; 3,50 Zoll (90,51 x 90 mm)Ramson, IndienGS-2029
Stereo-Zoom-OperationsmikroskopOlympus, JapanSZ2-STU3
SpritzenvertreiberBIOHAZARD882210
ZahnzangeStoelting, Deutschland52102-30
Tris BaseG Biosciences, Vereinigte StaatenRC1217
Tris Hydrochloric AcidHimedia, Mumbai, IndienMB030
Tween 20G Biosciences, Vereinigte StaatenRC1227
Weißes Leghorn Huhn 0-Tage-Eier--
Z-Val-Ala-Asp(OMe)-FMKMP Biomedicals, LLC, USAFK009
Anti-Kaninchen Indien-Beclin-1 Hs02758991_g1 India-ORP-150

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Fauzia, E., et al. Chick Embryo: A Preclinical Model for Understanding Ischemia-Reperfusion Mechanism. Frontiers in Pharmacology. 21 (9), 1034(2018).
  2. Eltzschig, H. K., Eckle, T. Ischemia and reperfusion--from mechanism to translation. Nature Med....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Ischemia ReperfusionChick Embryo ModelIn Ovo ModelHook Ischemia ModelDoppler Blood FlowRight Vitelline ArteryWestern BlottingAutophagy MarkersInflammatory CytokinesApoptosis Pathways

Related Articles