Quantifizierung der Schwarmmotilität bakterieller Oberflächen auf Induktorgradientenplatten

Summary

Hier beschreiben wir die Verwendung von Induktorgradientenplatten, um die Motilität des bakteriellen Schwarms zu bewerten und gleichzeitig mehrere Konzentrationsreaktionen zu erhalten.

Abstract

Die bakterielle Schwarmmotilität ist ein häufiger mikrobiologischer Phänotyp, den Bakteriengemeinschaften verwenden, um über halbfeste Oberflächen zu wandern. Bei Untersuchungen der induzierten Schwarmmotilität ist die spezifische Konzentration eines Induktors möglicherweise nicht in der Lage, Ereignisse zu melden, die innerhalb des optimalen Konzentrationsbereichs auftreten, um die gewünschten Reaktionen einer Spezies hervorzurufen. Halbfeste Platten, die mehrere Konzentrationen enthalten, werden üblicherweise verwendet, um die Reaktion innerhalb eines Induktorkonzentrationsbereichs zu untersuchen. Separate halbfeste Platten erhöhen jedoch die Schwankungen der mittleren Viskosität und des Feuchtigkeitsgehalts innerhalb jeder Platte aufgrund der ungleichmäßigen Erstarrungszeit.

Dieses Papier beschreibt eine einstufige Methode zum gleichzeitigen Testen der Motilität des Oberflächenschwärmens auf einer einzelnen Gradientenplatte, wobei die isometrisch angeordneten Testvertiefungen die gleichzeitige Erfassung von Multikonzentrationsreaktionen ermöglichen. In der vorliegenden Arbeit wurden die Oberflächenschwärme von Escherichia coli K12 und Pseudomonas aeruginosa PAO1 als Reaktion auf einen Konzentrationsgradienten von Induktoren wie Resveratrol und Arabinose untersucht. In regelmäßigen Abständen wurden die Schwarmmorphologien mit einem Bildgebungssystem abgebildet, um den gesamten Oberflächenschwarmprozess zu erfassen.

Die quantitative Messung der Schwarmmorphologien wurde mit der ImageJ-Software erfasst und lieferte analysierbare Informationen über das Schwarmgebiet. Dieses Papier stellt eine einfache Gradientenschwarmplattenmethode vor, die qualitative und quantitative Informationen über die Auswirkungen der Induktoren auf die Oberflächenschwärme liefert, die erweitert werden können, um die Auswirkungen anderer Induktoren auf ein breiteres Spektrum beweglicher Bakterienarten zu untersuchen.

Introduction

Die bakterielle Schwarmmotilität bezieht sich auf die kollektive Migration von Bakterienzellen über die Oberfläche einer Substanz. Neben halbfesten Agarplatten, die speziell im Labor hergestellt ^wurden1, wird dieser Phänotyp auch auf einigen weichen Substraten wie tierischem ^Gewebe2, hydratisierten ^{Oberflächen3} und Pflanzenwurzeln ^beobachtet4. Während eine halbfeste Oberfläche als eine der Grundbedingungen für bakterielle Schwärme gilt, benötigen einige Arten auch ein energiereiches Medium, um ihre Schwarmmotilität zu ^{unterstützen5.} Flagellenrotation treibt sowohl Schwimmen als auch Schwärmen Motilität an - Schwimmen beschreibt die einzellige Motilität innerhalb einer flüssigen Umgebung, während Schwärmen die synchrone Bewegung einer mikrobiellen Population über halbfeste Oberflächen ist.

Die Substratviskosität beeinflusst die bakterielle Motilität; Studien an pathogenen Mikroben wie Helicobacter pylori haben gezeigt, dass sich die Motilität des Erregers in Abhängigkeit von der Viskosität der Mucinschicht ändert, die durch die Versauerung der Umwelt im menschlichen Wirt beeinflusst ^wird6. Um diese Umgebungen zu replizieren, beschränken frühere Studien mit einer Agarkonzentration über 0,3% (w / v) die bakterielle Schwimmmotilität, um eine allmähliche Verschiebung in die Oberflächenschwärme zu bewirken. Die Verwendung einer Agarkonzentration über 1% (w/v) verhindert die Schwarmmotilität vieler ^Arten7. Die auf der Oberfläche gebildeten Koloniemuster sind vielfältig, darunter featureless ^mat8, bull's ^eye9, Dendrites10 und ^vortex11.

Obwohl die Relevanz solcher Muster unklar bleibt, scheinen diese Muster von umweltbedingten und chemischen Hinweisen abhängig zu ^sein12. Umwelthinweise decken verschiedene Aspekte ab, einschließlich Temperatur, Salzgehalt, Licht und pH-Wert, während chemische Hinweise das Vorhandensein von mikrobiellen Quorum Sensing-Molekülen, biochemischen Nebenprodukten und Nährstoffen umfassen. Autoinduktor-Quorum-Sensing-Signalmoleküle wie AHL (N-Hexanoyl-L-Homoserinlacton) können das Schwärmen der Oberfläche beeinflussen, indem sie die Produktion von Tensid ^{regulieren13,14.} Resveratrol, eine Phytoalexinverbindung, könnte die Motilität des bakteriellen Schwärmens ^{einschränken15.}

In der vorliegenden Arbeit untersuchen wir die Wirkung von Gradientenkonzentrationen von Resveratrol auf den Wildtyp-Escherichia coli K12-Stamm und untersuchen die Arabinose-induzierbare Schwarmmotilität von technisch hergestellten E. coli K12-YdeH- und Pseudomonas aeruginosa PAO1-YdeH-Arten. Die Produktion des YdeH-Enzyms wird durch Arabinose über den araBAD-Promotor induziert, was zu einer zellulären c-di-GMP-Störung führt und die bakterielle Schwarmmotilität ^{beeinflusst16,17.} Dieses induzierbare Schwarmverhalten wird unter Verwendung von Arabinose-Gradienten-Schwarmplatten mit E. coli K12-YdeH- und P. aeruginosa PAO1-YdeH-Stämmen untersucht.

Die Gradientenschwarmplatten werden durch sukzessives Erstarren von doppellagigem Medium hergestellt (Abbildung 1B). Die untere Schicht besteht aus dem mit dem Induktor hinzugefügten Medium, das auf eine Seite einer abgestützten Petrischale gegossen wird. Nach dem Erstarren der unteren Schicht wird die Petrischale auf eine ebene Oberfläche zurückgeführt, wobei die obere Schicht, die das Medium ohne den Induktor enthält, von der anderen Seite der Platte hinzugefügt wird. Nachdem die Schwarmplatten vollständig verfestigt sind, werden isometrisch angeordnete Haltebrunnen erzeugt, indem Löcher auf die Schwarmplatten nach einem festen Layout gebohrt werden (Abbildung 1C) oder indem die Vertiefungen mit einem 3D-gedruckten Modell der Plattenabdeckung, die Stifte enthält, während des mittleren Aushärtungsprozesses bedruckt werden (Ergänzende Abbildung S1). Ein Gelbildgebungssystem wird verwendet, um die Schwarmmorphologien zu verschiedenen Zeitpunkten zu erfassen (Abbildung 2). Die Analyse des Oberflächenschwärmens mit der ImageJ-Software (Supplemental Figure S2) liefert quantitative Ergebnisse des Oberflächenschwarmprozesses (Abbildung 3).

Daher schlagen wir eine einfache Methode vor, um die Motilität des Oberflächenschwärmens innerhalb eines Konzentrationsbereichs von Induktoren zu testen. Diese Methode kann verwendet werden, um mehrere Konzentrationsreaktionen anderer Induktoren zu testen, indem der Induktor in das Medium der unteren Schicht gemischt wird, und kann auf andere bewegliche Spezies (z. B. Bacillus subtilis, Salmonella enterica, Proteus mirabilis, Yersinia enterocolitica) angewendet werden. Dieser Ansatz könnte zuverlässige qualitative und quantitative Ergebnisse für das Screening eines einzelnen chemischen Induktors liefern, und separate Platten können verwendet werden, um mehr chemische Induktoren zu bewerten.

Protocol

1. Herstellung von Gradientenschwarmplatten

1. Herstellung von Schwarmmedium
   HINWEIS: Im Diskussionsabschnitt finden Sie einen kurzen Vergleich verschiedener mittlerer Viskositäten. 0,7% (w/v) Agarkonzentration von Schwarmmedium wurde in diesem Protokoll verwendet.
   1. Lysogeny Brühe (LB) Pulver mit Agar in zwei konischen Kolben vorbereiten; Jeder Kolben enthält 2 g Trypton, 2 g Natriumchlorid, 1 g Hefeextrakt und 1,4 g Agar. Fügen Sie doppelt destilliertes Wasser (_ddH2O) hinzu und rühren Sie die Suspension mit einem magnetischen Rührstab um. Stellen Sie die Endlautstärke auf 200 ml ein, indem Sie zusätzliches _ddH2O hinzufügen.
   2. Autoklavieren Sie die Lösung bei 121 °C für 20 min. Verwenden Sie einen luftdurchlässigen Verschluss oder eine Flaschensiegelfolie mit einer Lüftungsöffnung.
      HINWEIS: Agar löst sich auf, wenn es im Autoklaven erhitzt wird.
   3. Wenn die Temperatur auf 65 °C sinkt, mischen Sie die Lösung, um Homogenität zu gewährleisten, und geben Sie das Medium zur kurzfristigen Verwendung in einen 65 °C-Inkubator oder ein Wasserbad.
2. Aufbereitung des Bodenlagen-Schwarmmediums
   HINWEIS: Das Medium der unteren Schicht ist die Mischung aus Schwarmmedium und Induktor-Stammlösungen. Die Formulierung von Induktorgradienten-Schwarmplatten ist in Tabelle 1 dargestellt.
   1. Bereiten Sie eine 100 mM Resveratrol-Stammlösung vor, indem Sie 114,12 mg lyophilisiertes Resveratrolpulver in 5 ml Dimethylsulfoxid (DMSO) auflösen und die Lösung bei -20 °C lagern.
   2. Bereiten Sie eine 20% (w/v) Arabinose-Stammlösung vor, indem Sie 6 g Arabinosepulver in 30 ml _ddH2O auflösen; Warten Sie 10-15 Minuten, damit sich die Arabinose auflösen kann; und lagern Sie die Lösung bei Raumtemperatur.
   3. Entnehmen Sie das Medium aus dem 65 °C Inkubator und legen Sie es bei Raumtemperatur ab; Lassen Sie das Schwarmmedium abkühlen, bis der Erlenmeyerkolben kühl genug ist, um zu halten (~ 50 ° C). Legen Sie das Schwarmmedium nicht für längere Zeit auf Raumtemperatur, da dies zu einer Erstarrung von Agar führt.
   4. Das erforderliche Volumen der Induktor-Stammlösung wird dem Schwarmmedium bei 50 °C beigemessen (Tabelle 1). Verwenden Sie eine Pipette, um die Induktorlösung zu dosieren, anstatt sie zu gießen. Vorsichtig schwenken, um den Induktor mit dem Schwarmmedium zu mischen.
      HINWEIS: Dieser Schritt ist für Induktoren, die nicht autoklaviert werden können. Achten Sie darauf, keine Blasen in das Medium einzuführen.
3. Herstellung von zweilagigen Gradientenschwarmplatten
   HINWEIS: Das Medium der oberen Schicht ist LB-Medium, das 0,7% (w/v) Agar enthält.
   1. Beschriften Sie quadratische 13 x 13 cm große Petrischalen mit Induktornamen und -sorten, und stützen Sie die Schalen über den Rand der Deckel (Abbildung 1B).
   2. Fügen Sie 40 ml warmes Bodenschichtmedium (50 °C) mit einer 50 ml Pipette oder einem 50 ml Zentrifugenröhrchen hinzu.
      HINWEIS: Alternativ ist für 13 x 13 cm quadratische Petrischalen 40 ml Unterschicht und Oberschicht Medium geeignet; für 10 x 10 cm quadratische Petrischale, 25 ml Unterschicht und Oberschicht Medium ist geeignet.
   3. Lassen Sie das Medium der unteren Schicht 1 h lang in einer Laminar-Flow-Haube unbedeckt aushärten. Quadratische Petrischalen nicht stören, während das Medium erstarrt.
      HINWEIS: Während der Aushärtung der unteren Schicht sollte Schwarmmedium, das keine Induktoren enthält, in einem 65 °C Inkubator oder Wasserbad aufbewahrt werden.
   4. Sobald die untere Schicht vollständig erstarrt ist, entfernen Sie die Deckel und legen Sie die quadratischen Petrischalen in eine laminare Flow-Haube.
   5. Fügen Sie 40 ml warmes Medium der oberen Schicht (50 °C) mit einer 50 ml Pipette oder einem 50 ml Zentrifugenröhrchen hinzu.
      HINWEIS: Das Medium der oberen Schicht enthält keine Induktoren.
   6. Aushärten Sie die doppellagigen Platten auf der Tischplatte abgedeckt und ungestört für 1 h. Lagern Sie die vorbereiteten Platten bei 4 °C für bis zu 24 h.
      HINWEIS: Längere Aushärtungszeiten würden den Feuchtigkeitsgehalt reduzieren und die Schwarmmotilität einschränken.

2. Wachstum von E. coli K12 und P. aeruginosa PAO1

1. Bereiten Sie 500 ml LB-Medium vor, indem Sie 5 g Trypton, 5 g NaCl und 2,5 g Hefeextrakt in _ddH2O geben und die Lösung auf 500 ml auffüllen. Autoklavieren Sie die Lösung im Flüssigkeitszyklus für 20 min bei 121 °C und lagern Sie sie bei 4 °C.
2. Bereiten Sie 100 ml 1,5% (w/v) LB-Agar-Medium vor, indem Sie 1 g Trypton, 1 g NaCl, 0,5 g Hefeextrakt und 1,5 g Agar in _ddH2O geben und die Lösung auf 100 ml auffüllen. Autoklavieren Sie die Lösung im Flüssigkeitszyklus für 20 min bei 121 °C. Überführen Sie das Medium in ein 50 °C warmes Wasserbad, um eine Verfestigung des Agars zu verhindern.
3. Wenn der LB-Agar-Mediumkolben angenehm zu halten ist, fügen Sie 20 ml LB-Agar-Medium in eine Petrischale (10 cm Durchmesser) mit einer 25-ml-Pipette hinzu. Lassen Sie die Platte über Nacht bei Raumtemperatur stehen und lagern Sie die LB-Agarplatte bei 4 °C.
4. Nehmen Sie Bestandskulturen auf, die bei -80 °C gelagert werden, streifen E. coli K12, E. coli K12-YdeH, P. aeruginosa PAO1 und P. aeruginosa PAO1-YdeH Stämme auf LB-Agar Petrischalen unter Verwendung von Einweg-Impfschleifen. Brüten Sie die Petrischalen über Nacht auf den Kopf bei 37 ° C um.
5. Wählen Sie einzelne Kolonien für verschiedene Stämme aus den Petrischalen aus, impfen Sie jede Kolonie in 5 ml LB-Medium und inkubieren Sie die Kultur bei 37 ° C in einem Labororbitalschüttler, der auf 220 U / min eingestellt ist.
6. Wenn die Kulturdichte _OD600nm ~ 1.0 erreicht, entfernen Sie die Kultur aus dem Shaker und legen Sie sie bei Raumtemperatur auf. Passen Sie die Kulturdichte auf _OD600nm = 1.0 an, wie in Schritt 3.2.1 beschrieben.

3. Impfung und Inkubation von Gradientenschwarmplatten

1. Vorbereitung von Impfbrunnen
   HINWEIS: 3D-Druckabdeckungsmodelle, die in der Lage sind, Vertiefungen zu erzeugen, die durch einen Standardabstand getrennt sind, können anstelle der unten beschriebenen Methode verwendet werden (Ergänzende Abbildung S1).
   1. Markieren Sie die Bohrlochpositionen auf A4-Papier in Abbildung 1C. Stellen Sie drei Testkonzentrationen in einer quadratischen Petrischale mit zwei oder drei Repliken ein.
   2. Legen Sie das markierte A4-Papier unter eine erstarrte Verlaufsplatte. Schieben Sie die breitere Seite einer 100-μL-Pipettenspitze an der markierten Position in die halbfeste mittlere Oberfläche. Drücken Sie die Pipettenspitze, bis sie den Boden des oberen Schichtmediums erreicht.
   3. Wenn die Spitze den Boden berührt, üben Sie keine vertikale Kraft auf die Spitze aus. Drehen Sie die Spitze vorsichtig, um den Inhalt des zylindrischen Brunnens zu isolieren.
   4. Bewegen Sie die Pipettenspitzen horizontal in einem sehr kleinen Abstand, um den Luftstrom in den schmalen Platz zu ermöglichen. Drücken Sie die Spitze mit dem Zeigefinger, um den Gasfluss in der Spitze zu blockieren, während Sie die Pipette mit Daumen und Mittelfinger halten.
   5. Ziehen Sie die Spitze vertikal heraus und halten Sie den Brunneninhalt in der Spitze, während Sie ihn herausziehen.
      HINWEIS: Wenn der Brunneninhalt verrutscht, üben Sie etwas mehr Druck mit dem Zeigefinger aus, um die Spitze vollständig zu versiegeln.
   6. Wiederholen Sie die Schritte 3.1.2 bis 3.1.5 an jeder markierten Position. Decken Sie die Schwarmplatte vor der Impfung ab.
2. Gradientenplattenimpfung und Inkubation
   1. Passen Sie die Wachstumskulturdichte über Nacht auf _OD600nm = 1,0 an.
   2. Pipette 80 μL der Übernachtwachstumskultur in jedes Bohrloch. Verschütten Sie die Bakterienkultur nicht außerhalb der Brunnen.
   3. Wickeln Sie die Platten mit Siegelfolie ein. Für die Langzeitbeobachtung (3-5 Tage) wickeln Sie die Platten mit sterilem Laborgummiband ein.
      HINWEIS: Es ist weniger wahrscheinlich, dass Gummiband bricht.
   4. Legen Sie ein mit _ddH2O gefülltes Becherglas in den Inkubator, um die Feuchtigkeit im Inkubator aufrechtzuerhalten. Inkubieren Sie die Gradientenschwarmplatten bei 37 °C.
      HINWEIS: Bebrüten Sie die Schwarmplatten nicht kopfüber; Dies führt dazu, dass die Bakterienkultur aus den Brunnen austritt.
   5. Stellen Sie die Schwarmplatte unmittelbar nach der Impfung ab und notieren Sie dies als 0 h Zeitpunkt.

4. Abbildung von Bakterienoberflächenschwärmen

1. Nehmen Sie die Schwarmplatten alle 12 Stunden nacheinander aus dem Inkubator, halten Sie die Platte horizontal und legen Sie sie in das Gelbildgebungssystem (siehe Materialtabelle).
   HINWEIS: Hinterlassen Sie keine Fingerabdrücke auf der Oberfläche von Platten; Halten Sie die Seite der Schwarmplatte mit sauberen Handschuhen fest.
2. Wählen Sie den Gelbildgebungsmodus ; die Schwarmplatte weißem Licht aussetzen; und passen Sie die Brennweite an, um die klarste Sicht auf Schwärme zu erhalten.
   HINWEIS: Verwenden Sie die gleiche Brennweite für alle Platten in einer bestimmten Charge.
3. Verbessern Sie die Helligkeit der Schwärme für eine klare Beobachtung, indem Sie die Belichtungszeit auf 300 ms einstellen. Passen Sie den Schwellenwert an, um Störungen durch das Hintergrundlicht zu minimieren.
   HINWEIS: Der Schwellenwert wird auf der Bedienoberfläche des Gelbildgebungssystems angepasst. Erhöhen Sie die Werte auf der linken Seite, um Störungen durch Hintergrundlicht zu minimieren. Verringern Sie die Werte auf der rechten Seite, um die Helligkeit der Schwärme zu erhöhen. In diesem Protokoll liegt die Region normalerweise zwischen 6.000 und 50.000.
4. Speichern Sie die Bilddatei zur weiteren Analyse. Notieren Sie die Abbildungszeit, den Induktortyp, die Verlaufsorientierung und die Dehnungen in einer .txt Datei .

5. Quantifizieren Sie die Schwarmfläche mit der ImageJ-Software

1. Importieren Sie die mit dem Gelbildgebungssystem aufgenommene Bilddatei.
2. Legen Sie die Skalierungsleiste mit der ImageJ-Software fest und wenden Sie sie auf alle Bilder an.
   1. Erstellen Sie ein Liniensegment, das die Länge der Platine markiert, indem Sie auf das Linienwerkzeug klicken.
   2. Klicken Sie auf | analysieren Skalierung festlegen, um das Fenster Skalierung festlegen zu öffnen.
   3. Geben Sie die tatsächliche Länge in das Feld Bekannte Entfernung und Längeneinheit ein.
      HINWEIS: Da in dieser Arbeit 13 x 13 cm quadratische Petrischalen verwendet wurden, ist die tatsächliche Länge "130" und die Längeneinheit ist "mm".
   4. Aktivieren Sie das Kontrollkästchen Global .
   5. Fügen Sie eine Maßstabsleiste ein, indem Sie auf | analysieren klicken Tools | Skalierungsleiste, geben Sie Breite in mm, Höhe in Pixel, Schriftgröße ein, und wählen Sie im Dropdown-Menü Farbe, Hintergrund und Position aus. Alternativ können Sie Fetter Text, Text ausblenden, Serifenschrift und Überlagerung auswählen, indem Sie die Kontrollkästchen aktivieren.
      HINWEIS: Die Auswahl dieser Parameter wird vom Benutzer und den Eigenschaften der Bilder bestimmt. In diesem Protokoll wurde die Breite in mm auf 25, die Höhe in Pixeln auf 20, die Schriftgröße auf 80 festgelegt, und die Skalierungsleiste wurde in der unteren rechten Ecke platziert, indem Sie Position | Unten rechts. Andere Parameter können vom Benutzer ausgewählt werden.
3. Klicken Sie auf | verarbeiten Schatten zur Verbesserung der Schärfe des Bildes, insbesondere der Begrenzungen (Ergänzende Abbildung S2A). Klicken Sie auf | Prozess Batch zum Verarbeiten von Bildern.
   HINWEIS: Der Zweck dieses Schritts besteht darin, eine genauere Grenzziehung zu ermöglichen.
   1. Verarbeiten Sie ein Bild als Referenz, indem Sie auf | verarbeiten klicken Schatten | Süden.
   2. Klicken Sie auf | Prozess Batch-| Makro, um das Fenster Stapelverarbeitung zu öffnen. Suchen Sie nach den folgenden Befehlen, die im Fenster angezeigt werden:
      run("Süd");
      run("Speichern");
      close();
   3. Geben Sie die Ordneradresse der Originalbilder und die Adresse der Ausgabedatei ein, indem Sie im Fenster Stapelverarbeitung auf Verarbeiten klicken.
      HINWEIS: Es wird empfohlen, Bilder mit Schatten in einen anderen Ordner zu exportieren und eine Kopie der Originalbilder aufzubewahren.
4. Verwenden Sie das Zauberstabwerkzeug (Tracing), um Schwärme einzeln auszuwählen und die Toleranz anzupassen (Doppelklick auf Wand (Tracing), bis die erzeugte Linie korrekt zur Schwarmgrenze passt (Ergänzende Abbildung S2B).
   HINWEIS: Klicken Sie zunächst auf das Zauberstab-Werkzeug (Ablaufverfolgung) und wählen Sie einen Schwarm auf einem Bild aus. Wenn die Berandungen nicht korrekt dargestellt wurden, doppelklicken Sie auf das Stab-Werkzeug (Ablaufverfolgung), um die Fenster des Stab-Werkzeugs zu öffnen, in denen die Toleranz angepasst werden kann.
5. Klicken Sie auf | analysieren Maßnahme , um den Flächenwert zu exportieren.
6. Wiederholen Sie die Schritte 5.1.1-5.1.5, bis alle Schwärme gemessen sind, speichern Sie die Ergebnisse zur weiteren Analyse in einer .csv Datei.

Results

Der Arbeitsablauf, bestehend aus der Vorbereitung von Gradientenschwarmplatten, Impfung und Inkubation, ist in Abbildung 1B dargestellt. Um Gradientenschwimmplatten zu erzeugen, wird das Medium der unteren Schicht bei ~4,3° von der horizontalen Ebene in abgestützte Schalen gegossen (Ergänzende Abbildung S3), gefolgt von dem Gießen des oberen Schichtmediums, nachdem die untere Schicht vollständig erstarrt ist. Die Zusammensetzung des zweischichtigen Mediums ist in Tab...

Discussion

Die Untersuchung der bakteriellen Schwarmmotilität auf halbfesten Gradientenplatten kann eine herausfordernde Aufgabe sein18,19,20, da sie mehrere Faktoren wie Substratviskosität^, Feuchtigkeit und mittlere Komponenten umfasst. Unter diesen Faktoren spielt die Agarkonzentration eine entscheidende Rolle bei der Bestimmung der mikrobiellen Rückkehr zur Schwimm- oder Schwarmmotilität. Wenn die Agarkonzentration von 0,3% (w/v) auf 1...

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Agar	Sigma-Aldrich	V900500	500 g
Ampicillin	Solarbio	A8180	25 g, > 85% (GC)
Zentrifugenröhrchen	Corning	430790	15 mL
Kryo-Fläschchen	Corning	430488	2 mL
Dimethylsulfoxid (DMSO)	Aladdin	D103272	AR, > 99% (GC)
L(+)-Arabinose	Aladdin	A106195	98% (GC), 500 g
Petrischalen	Bkman	B-SLPYM90-15	Petrischalen aus Kunststoff, rund, 90 mm x 15 mm
Resveratrol	Aladdin	R107315	99% (GC), 25 g
Natriumchlorid	Macklin	S805275	AR, 99,5% (GC), 500 g
Quadratische Petrischalen	Bkman	B-SLPYM130F	Petrischalen aus Kunststoff, quadratisch, 13 mm x 13 mm
Trypton	Thermo Scientific Oxoid	LP0042	500 g
Hefeextrakt	Thermo Scientific Oxoid	LP0021	500 g
Ausrüstungen
Biochemischer Inkubator	Blue pard	LRH-70
Tanon 5200Multi-Imaging-System	Tanon	5200CE
Thermostatisches Wasser Badewanne	Jinghong	DK-S28