Bewertung eines zuverlässigen Biomarkers in einem Stuhlligatur- und Punktions-induzierten Mausmodell der Sepsis

Zusammenfassung

Dieses Protokoll stellt die operativen Details der Stuhlligatur und -punktion (CLP) in einem Mausmodell der Sepsis dar. CLP ist eine der am weitesten verbreiteten Techniken, um ein Tiermodell für Sepsis zu erstellen. Daher ist ein standardisiertes CLP-Protokoll erforderlich, um zuverlässige Forschungsergebnisse zu erzielen.

Zusammenfassung

Sepsis ist eine schwere lebensbedrohliche und sich schnell entwickelnde Krankheit, die jährlich weltweit Millionen von Todesfällen verursacht. Forscher haben enorme Anstrengungen unternommen, um die Pathophysiologie der Sepsis anhand verschiedener Tiermodelle aufzuklären. Das Mausmodell der durch Cekalligatur und Punktion induzierten Sepsis (CLP) ist in Laboratorien weit verbreitet. Die drei technischen Aspekte, die den Schweregrad und die Replizierbarkeit des CLP-Modells beeinflussen, sind der Prozentsatz des gebundenen Blinddarms, die Größe der für die Stuhlpunktion verwendeten Nadel und das Volumen des in die Bauchhöhle gepressten Kots. Die schnelle und spezifische Diagnose einer Sepsis ist ein entscheidender Faktor, der das Ergebnis beeinflusst. Der Goldstandard für die Sepsis-Diagnose ist die mikrobielle Kultur; Dieser Prozess ist jedoch zeitaufwendig und manchmal ungenau. Der Nachweis von Sepsis-spezifischen Biomarkern ist schnell, aber die vorhandenen Biomarker sind aufgrund einer kurzen Halbwertszeit, Nicht-Spezifität und unzureichender Sensitivität unbefriedigend. Daher besteht ein dringender Bedarf an einem zuverlässigen Biomarker für Sepsis in den frühen Stadien. Frühere Publikationen deuten darauf hin, dass exzessive neutrophile extrazelluläre Fallen (NETs) bei Sepsis auftreten. Citrulliniertes Histon H3 (CitH3) als NET-Komponente ist sowohl bei septischen Tieren als auch bei Patienten erhöht, und das Vorhandensein von CitH3 ist ein zuverlässiger diagnostischer Biomarker für Sepsis. Die vorliegende Studie zielte darauf ab, ein standardisiertes Mausmodell der CLP-induzierten Sepsis zu beschreiben und einen zuverlässigen Blutbiomarker für Sepsis zu etablieren. Unsere Arbeit kann in Zukunft zur frühzeitigen und genauen Diagnose einer Sepsis beitragen.

Einleitung

Sepsis ist definiert als lebensbedrohliche Organfunktionsstörung, die durch eine fehlregulierte Wirtsreaktion auf Infektion^{verursacht wird 1}, und septischer Schock ist die häufigste Todesursache in schweren Fällen von Sepsis². Sepsis und septischer Schock verursachen jedes Jahr weltweit Millionen von Todesfällen³. Der Schlüssel zur Verbesserung des Ergebnisses von Patienten mit Sepsis ist die sofortige Einleitung von Behandlungen wie Antibiotika⁴. Die Goldstandardmethode für die Diagnose von Sepsis ist die mikrobielle Kultur; Die mikrobielle Kultur ist jedoch zeitaufwendig ....

Protokoll

Alle Tierversuche wurden in Übereinstimmung mit den Richtlinien durchgeführt, die vom Animal Review Committee am Xiangya Hospital und der Central South University (Nr. 202103149) genehmigt wurden.

1. Vorbereitung

1. Wählen Sie männliche C57BL / 6J-Mäuse aus (Gewicht: 20-25 g; Alter: 8-12 Wochen) und halten Sie 3 Tage lang unter, bevor Sie irgendwelche Eingriffe durchführen.
2. Wiegen Sie die Maus.
3. Betäuben Sie die Maus mit 1,5% Isofluran durch Einatmen und kneifen Sie die Zehen, um die Tiefe der Anästhesie zu überprüfen.
4. Fixieren Sie die Maus auf dem Heizkissen. Tragen Sie die Enthaarungscr....

Ergebnisse

Wie in Abbildung 2A gezeigt, wurde in der Scheingruppe kein CitH3 durch Western Blotting nachgewiesen. Die Serumkonzentration von CitH3 stieg nach CLP signifikant an, und dieser Anstieg wurde durch die Hemmung der NET-Bildung durch die Verabreichung von YW3-56, einem pAVK-Inhibitor¹⁰, blockiert. Abbildung 2B zeigt die SerumCitH3-Konzentrationen, die durch ELISA bestimmt wurden. 24 h nach CLP war die Serumkonzentration von CitH3 i.......

Diskussion

CLP führt Krankheitserreger in den Bauch ein, um ein präklinisches Modell der Sepsis zu erstellen. Bei der Durchführung von CLP ist es wichtig, sterile Bedingungen zu verwenden, um die Interferenz exogener Bakterien zu beseitigen und genaue Dosierungen von Anästhetika zu verwenden¹⁶. Die drei technischen Aspekte von CLP, die den Schweregrad und die Replizierbarkeit des Sepsismodells beeinflussen, sind der Prozentsatz des gebundenen Blinddarms, die Größe der Nadel, die für die Stuhlpunktion verwend.......

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
21G Nadel
3,3',5,5'-Tetramethylbenzidin	Forschung & Forschung D Systems Inc	DY999
monoklonaler Anti-CitH3-Antikörper	selbst entwickelter
polyklonaler Anti-CitH3-Antikörper	Abcam	ab5103
Anti-Kaninchen-Sekundärantikörper	Jackson ImmunoResearch	111-035-003
C57BL/6 Mäuse	Xiangya School of Medicine, Central South University
Cl-Amidin	Sigma Aldrich	SML2250
Enthaarungscreme
Dnase I	Sigma Aldrich	11284932001
Isofluran	Sigma-Aldrich	26675-46-7
Ketoprofen	Sigma Aldrich	PHR1375
Seidennähte (4-0 & 6-0)
chirurgische Instrumente& nbsp;
YW3-56	GLPBIO	GC48263

Labor