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Methodenartikel

Abschätzung der thermischen Schädigung durch robotergebohrte Kraniotomie bei der kranialen Fensterchirurgie bei Mäusen

2.3K Aufrufe

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DOI:

10.3791/64188

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11. November 2022

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* These authors contributed equally

In diesem Artikel

Zusammenfassung

Schädelfenster sind zu einer allgegenwärtig eingesetzten Operationstechnik geworden, um eine intravitale Bildgebung bei transgenen Mäusen zu ermöglichen. Dieses Protokoll beschreibt den Einsatz eines chirurgischen Roboters, der halbautomatische Knochenbohrungen von Schädelfenstern durchführt und dazu beitragen kann, die Variabilität von Chirurg zu Chirurg zu verringern und die Schädigung der thermischen Blut-Hirn-Schranke teilweise zu mildern.

Zusammenfassung

Die Schädelfensterchirurgie ermöglicht die Bildgebung von Hirngewebe bei lebenden Mäusen unter Verwendung von Multiphotonen oder anderen intravitalen Bildgebungsverfahren. Bei der Durchführung einer Kraniotomie von Hand kommt es jedoch häufig zu einer thermischen Schädigung des Hirngewebes, die von Natur aus von Chirurgie zu Operation variiert und von der Technik des einzelnen Chirurgen abhängen kann. Die Implementierung eines chirurgischen Roboters kann die Chirurgie standardisieren und zu einer Verringerung der mit der Operation verbundenen thermischen Schäden führen. In dieser Studie wurden drei Methoden des Roboterbohrens getestet, um thermische Schäden zu bewerten: horizontal, Punkt für Punkt und gepulst Punkt für Punkt. Beim Horizontalbohren wird ein kontinuierliches Bohrschema verwendet, während bei Punkt-für-Punkt-Bohrungen mehrere Löcher gebohrt werden, die das Schädelfenster umfassen. Die gepulste Punkt-für-Punkt-Bohrung fügt ein Bohrschema "2 s an, 2 s aus" hinzu, um eine Abkühlung zwischen den Bohrungen zu ermöglichen. Die Fluoreszenzbildgebung des intravenös injizierten Farbstoffs Evans Blue (EB) misst die Schädigung des Hirngewebes, während ein Thermoelement, das unter der Bohrstelle platziert ist, die thermische Schädigung misst. Die Thermoelementergebnisse deuten auf eine signifikante Abnahme der Temperaturänderung in der gepulsten Punkt-für-Punkt-Gruppe (6,90 °C ± 1,35 °C) im Vergleich zu den horizontalen (16,66 °C ± 2,08 °C) und Punkt-für-Punkt-Gruppen (18,69 °C ± 1,75 °C) hin. In ähnlicher Weise zeigte auch die gepulste Punkt-für-Punkt-Gruppe nach der kranialen Fensterbohrung im Vergleich zur horizontalen Methode eine signifikant geringere EB-Präsenz, was auf eine geringere Schädigung der Blutgefäße im Gehirn hinweist. Daher scheint ein gepulstes Punkt-für-Punkt-Bohrverfahren das optimale Schema zur Reduzierung thermischer Schäden zu sein. Ein Roboterbohrer ist ein nützliches Werkzeug, um das Training und die Variabilität zu minimieren und thermische Schäden zu reduzieren. Mit dem zunehmenden Einsatz von Multiphotonen-Bildgebung in Forschungslaboren ist es wichtig, die Genauigkeit und Reproduzierbarkeit der Ergebnisse zu verbessern. Die hier angesprochenen Methoden werden dazu beitragen, andere darüber zu informieren, wie diese chirurgischen Roboter besser eingesetzt werden können, um das Feld weiter voranzubringen.

Einleitung

Schädelfenster sind in den Neurowissenschaften, der Neurotechnik und der Biologie allgegenwärtig geworden, um eine direkte Visualisierung und Bildgebung des Kortex bei lebenden Tieren zu ermöglichen 1,2,3,4,5,6,7,8,9,10,11 . Die leistungsstarke Kombination aus transgenen Mäusen und Multiphotonen-Bildg....

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Protokoll

Alle Verfahren und Tierpflegepraktiken wurden vom Louis Stokes Cleveland Department of Veterans Affairs Medical Center Institutional Animal Care and Use Committee überprüft, genehmigt und durchgeführt.

1. Einrichtung der Hardware des Operationsroboters

  1. Befolgen Sie vor der Operation das Handbuch und die Anleitung des Operationsroboters (siehe Materialtabelle), um die Hardware und Software einzurichten. Führen Sie die Rahmenkalibrierung wie im Handbuch beschrieben durch. Wenn der Bohrer oder der Rahmen verschoben wird, wird empfohlen, den Bohrer neu zu kalibrieren, um die Genauigkeit zu gewährleist....

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Ergebnisse

Thermische Auswertung
Das Potenzial für thermische Schäden wurde bewertet, indem die Temperaturänderung gegenüber der Basislinie aufgrund von Bohrungen mit horizontalen (Abbildung 2A), Punkt-für-Punkt- (Abbildung 2B) und gepulsten Punkt-für-Punkt-Methoden (Abbildung 2C) gemessen wurde. Abbildung 2D zeigt den Versuchsaufbau zur Gewinnung thermischer Daten. Für die thermische Auswertun.......

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Diskussion

Die Verwendung von EB-Farbstoff und Bildgebung ist einfach, schnell und nützlich, um Gefäßschäden im Gehirn für neue Methoden und Techniken zu bewerten. Unabhängig davon, ob ein chirurgischer Roboter verwendet wird oder um die Bestätigung von Methoden, die derzeit im Labor durchgeführt werden, ist es wichtig, chirurgische Methoden zu validieren, um die Auswirkungen experimenteller Behandlungen im Vergleich zu chirurgischen Auswirkungen zu isolieren und das Tierwohl zu verbessern. Ein Thermoelement-Setup ist auch nützlich.......

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Offenlegungen

Die Autoren haben keine Interessenkonflikte zu melden. Die Inhalte repräsentieren nicht die Ansichten des US-Ministeriums für Veteranenangelegenheiten, der National Institutes of Health oder der Regierung der Vereinigten Staaten.

Danksagungen

Diese Studie wurde zum Teil durch die Merit Review Awards GRANT12418820 (Capadona) und GRANTI01RX003420 (Shoffstall/Capadona) sowie den Research Career Scientist Award # GRANT12635707 (Capadona) des United States (US) Department of Veterans Affairs Rehabilitation Research and Development Service unterstützt. Darüber hinaus wurde diese Arbeit teilweise auch vom National Institute of Health, dem National Institute of Neurological Disorders and Stroke GRANT12635723 (Capadona) und dem National Institute for Biomedical Imaging and Bioengineering, T32EB004314, (Capadona/Kirsch) unterstützt. Dieses Material basiert auf Arbeiten, die durch das Graduiertenforschungsstipendium ....

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Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien
NameUnternehmenKatalognummerKommentare
1x Phosphatgepufferte Kochsalzlösung
Typ: Reagenz
VWRMRGF-6235für Evans Blue Verdünnung
Aura Software
Typ: Werkzeug
Spectral Instruments ImagingOpen-Access-Bildgebungssoftware für Lumina-Bildgebungssysteme
Buprenorphin
Typ: Medikament
aus Tierhaltung
Hartmetallbohrer, 0,6 mm (Roboterbohrer)
Typ: Werkzeug
Stoelting58640-1
Carprofen
Typ: Arzneimittel
aus der Tierhaltung
Cefazolin
Typ: Arzneimittel
aus der Tierhaltung
Evans Blue Farbstoff
Typ: Reagenz
Millipore SigmaE2129Rekonstituiert in 1x phosphatgepufferter Kochsalzlösung
Isofluran
Typ: Medikament
Bezogen aus der Tierhaltung
IVIS Lumina II
Typ: Werkzeug
Perkin ElmerCLS136334IVIS Lumina III derzeit anstelle von Lumina II auf dem Markt
Jenco Linearisierendes Thermometer
Typ: Werkzeug
Jenco765JFFür die Einrichtung von Thermoelementen
Ketamin
Typ: Medikament Bezogen
von der Tierhaltung
LivingImage
Typ: Werkzeug
Perkin ElmerSoftware für IVIS Lumina III
Marcain
Typ: Medikament
aus der Tierhaltung
Neurostar Software
Typ: Werkzeug
StoeltingKommt mit dem Kauf eines chirurgischen Roboters
Physiosuite mit MausSTAT® Pulsoximeter & Herzfrequenzmesser
Typ: Tool
Kent ScientificPS-03Zur Überwachung der Vitalwerte
PrismPlus Mäuse
Typ: Tier
Jackson Labortory031478, RRID:IMSR_JAX:031478, männlich, ~8 Monate altdie Studie verwendete Tiere
Stoelting Drill und Injektionsroboter für motorisierte stereotaktische Instrumente
Typ: Tool
Stoelting58640Hauptroboterbohrer mit stereotaktischem Rahmen
Thermoelement
Typ: Werkzeug
TC Direct206-557Für die Einrichtung von Thermoelementen
USB-6008 Multifunktions-I/O DAQ
Typ: Werkzeug
National InstrumentsUSB-6008Für die Einrichtung von Thermoelementen
Xylazin
Typ: Arzneimittel
aus Tierhaltung
Für

Referenzen

  1. Kilic, K., et al. Chronic cranial windows for long term multimodal neurovascular imaging in mice. Frontiers in Physiology. 11, 612678(2020).
  2. Goldey, G. J., et al. Removable cranial windows for long-term imaging in awake mice. Nature Prot....

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Nachdrucke und Genehmigungen

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