Diese Arbeit zielt darauf ab, das Artemia salina lethality Bioassay-Verfahren, das auch als Solegarnelen-Letalitätstest bezeichnet wird, zu bewerten und zu überprüfen. Diese einfache und kostengünstige Methode gibt Aufschluss über die allgemeine Toxizität (die als vorläufige Toxizitätsbewertung betrachtet wird) von Proben, nämlich Naturstoffen.
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Methodenartikel
Letalität Bioassay mit Artemia salina L.
* These authors contributed equally
In diesem Artikel
Zusammenfassung
Zusammenfassung
Naturprodukte werden seit der Antike zur Herstellung von Medikamenten verwendet. Heutzutage gibt es viele Chemotherapeutika, die aus natürlichen Quellen gewonnen und gegen eine Vielzahl von Krankheiten eingesetzt werden. Leider zeigen die meisten dieser Verbindungen oft systemische Toxizität und Nebenwirkungen. Um die Verträglichkeit ausgewählter potentiell bioaktiver Proben besser beurteilen zu können, werden in der Regel Salzgarnelen (Artemia salina) als Modell in Letalitätsstudien verwendet. Der A. salina-Test basiert auf der Fähigkeit der untersuchten bioaktiven Verbindungen, die Mikrokrebstiere in ihrem Larvenstadium (Nauplien) abzutöten. Diese Methode stellt einen geeigneten Ausgangspunkt für Zytotoxizitätsstudien sowie für das allgemeine Toxizitätsscreening von synthetischen, halbsynthetischen und natürlichen Produkten dar. Es kann als einfacher, schneller und kostengünstiger Assay angesehen werden, verglichen mit vielen anderen Assays (In-vitro-Zellen oder Hefestämme, Zebrafische, Nagetiere), die im Allgemeinen für die oben genannten Zwecke geeignet sind. Darüber hinaus kann es auch ohne spezielle Schulung problemlos durchgeführt werden. Insgesamt stellt der A. salina-Assay ein nützliches Werkzeug für die vorläufige Toxizitätsbewertung ausgewählter Verbindungen und die biogesteuerte Fraktionierung von Naturstoffextrakten dar.
Einleitung
Naturstoffe aus Pflanzen, Tieren oder Mikroorganismen sind im Laufe der Jahre aufgrund ihres vielfältigen biologischen und pharmakologischen Wirkungsspektrums ein wachsendes Interesse an der Entwicklung neuer bioaktiver Moleküle 1. Die damit verbundenen Nebenwirkungen, die Arzneimittelresistenz oder die unzureichende Spezifität der Wirkstoffe, insbesondere wenn sie als Krebsmedikamente eingesetzt werden, stellen jedoch die Hauptfaktoren dar, die zu einer unwirksamen Behandlung führen können 1,2.
In den letzten Jahrzehnten wurden mehrere pflanzliche Zytostatik....
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Protokoll
1. Vorbereitung der Ausrüstung
- Erwerben Sie handelsübliche Schlupfausrüstung. Wählen Sie einen geeigneten Ort für die Aufstellung der Schraffurausrüstung aus (Abbildung 2A). Legen Sie den trichterförmigen Behälter in die schwarze Halterung (im Set enthalten) und drehen Sie den Trichter in eine geeignete Richtung, um die Füllstandsmarkierung und den Wasserhahn zu sehen.
- Um handgefertigte Migrationsausrüstung herzustellen, schneiden Sie den Deckel von zwei 0,5-Liter-Plastikflaschen (5,8 cm Durchmesser) ab, um eine Endhöhe von 12 cm zu erhalten. Schaffen Sie ein Loch von 1,5 cm Durchmesser auf einer Seite....
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Ergebnisse
Die allgemeine Toxizität einiger Naturstoffe, die kürzlich von unserer Gruppe untersucht wurden, wurde durch den Sole-Garnelen-Letalitäts-Bioassay bewertet. Vier Auszüge (Pa- P. ambigerus; Pb- P. barbatus; Pc- P. cylindraceus; und Pe- P. ecklonii) aus der Gattung Plectranthus , die für ihre antioxidative Wirkung bekannt sind (unveröffentlichte Ergebnisse), wurden getestet. Zusätzlich werden zwei natürliche Verbindungen (1 und 2), die aus Plectranthus spp. gewonnen wer.......
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Diskussion
In den letzten Jahren hat die wissenschaftliche Gemeinschaft ihre Aufmerksamkeit auf alternative Modelle für Toxizitätsscreenings gelenkt21. Neben dem Bioassay A. salina lethality werden in der Regel andere Methoden zur Bewertung der Probenverträglichkeit durchgeführt und umfassen Wirbeltier-Bioassays (z. B. Nagetiere), Wirbellose (wie Zebrafische), In-vitro-Methoden mit Hefestämmen oder -zellen und In-silico-Methoden 22,23,24,25
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Offenlegungen
Die Autoren erklären keine Interessenkonflikte, weder finanziell noch anderweitig.
Danksagungen
In Erinnerung an Professor Amilcar Roberto.
Diese Arbeit wurde von der Fundação para a Ciência e a Tecnologia (FCT, Portugal) im Rahmen der Projekte UIDB/04567/2020 und UIDP/04567/2020 finanziell unterstützt, die CBIOS und dem Promotionsstipendium SFRH/BD/137671/2018 (Vera Isca) zugeschrieben wurden.
....Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.
Materialien
| Name | Unternehmen | Katalognummer | Kommentare |
|---|---|---|---|
| 24-Well-Platten | Thermo Fisher Scientific, Dänemark | 174899 | Thermo Scientific Nunc Up Cell 24 multidish |
| Aluminiumfolie | Albal-Kann | im Supermarkt | |
| gekauft werden Artemio Set | JBL GmbH and Co. KG, D-67141, Neuhofen Deutschland | 61066000 | Kann im Zoofachhandel gekauft |
| werden Binokularmikroskop | Ceti, Belgien | 1700.0000 | Flexum-24AED, 220-240 V, 50 Hz |
| Flaschen | - | - | 0,5 L Durchmesser: 5,8 cm; Höhe: 12 cm |
| Salinengarnelenzysten | JBL GmbH and Co. KG, D-67141, Neuhofen | Deutschland 3090700 | im Zoofachhandel gekauft |
| werden Salin Garnelensalz | JBL GmbH and Co. KG, D-67141, Neuhofen Deutschland | 3090600 | Kann im Zoofachhandel gekauft |
| werden Dimethylsulfoxid (DMSO) | VWR Chemikalien | CAS: 67-68-5 | 99% Reinheit |
| Abnehmbare Spitzen | Diamond | F171500 | Volumenbereich: 100 - 1000 & Mikro; L |
| Eppendorf Mikroröhrchen | MARKE | 7,80,546 | Mikroröhrchen, PP, 2 mL, BIO-CERT PCR-QUALITÄT |
| Erlenmeyerkolben | VWR Chemikalien | 4,47,109 | Volumen: 100 mL |
| Glasbecher | Normax | 3.2111654N | Volumen: 1000 mL |
| Handschuhe | Guantes Luna | GLSP3-GraphPad | |
| Prism | GraphPad Software, San Diego, CA, USA-GraphPad | Prism Version 5.00 für Windows, www.graphpad.com, abgerufen am 5. Februar 2021; kommerziell statistisch Analysesoftware | |
| Hausgemacht A. salina Grower | - | - | Hausgemacht: zwei Plastikflaschen, die durch einen Schlauch verbunden |
| Heißkleber | Parkside | PHP500E3 | 230 V, 50 Hz, 25 W |
| Inkubator | Heidolph Instruments, Dänemark | - | Ein Heidolph Unimax 1010 Gerät und ein Heidolph Inkubator 1006 |
| Light | Roblan | SKYC3008FE14 | LED Glühbirne |
| Mikropipetten | VWR Chemikalien | 613-5265 | Volumenbereich: 100 - 1000 µ L |
| Kaliumdichromat (K2Cr2O7) | VWR-Chemikalien | CAS: 7778-50-9 | 99% |
| Reinheit Pumpe ProAir a50 | JBL GmbH and Co. KG, D-67141, Neuhofen Deutschland | - | Im Artemio Set+1 Kit enthalten |
| Gummischlauch | - | 1,3 cm Außen- und 0,9 cm Innendurchmesser | |
| Rührstab | VWR Chemikalien | 441-0147< | img alt="Gleichung 1" src="/files/ftp_upload/64472/64472eq02.jpg" style="margin: auto; "/> 6 mm, 250 mm |
| Termometer | VWR Chemikalien | 620-0821 | 0 - 100 ° C |
Referenzen
- Ntungwe, N. E., et al. Artemia species: An important tool to screen general toxicity samples. Current Pharmaceutical Design. 26 (24), 2892-2908 (2020).
- Cragg, G. M., Newman, D. J. Natural products: A continuing sour....
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Nachdrucke und Genehmigungen
