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Methodenartikel

Klinische Mikrofluidik-Chip-Plattform zur Isolierung vielseitig zirkulierender Tumorzellen

2.3K Aufrufe

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DOI:

10.3791/64674

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13. Oktober 2023

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In diesem Artikel

Zusammenfassung

Der klinische Mikrofluidik-Chip ist eine wichtige biomedizinische Analysetechnik, die die Vorverarbeitung klinischer Patientenblutproben vereinfacht und zirkulierende Tumorzellen (CTCs) in situ auf dem Chip immunfluoreszent färbt, was den schnellen Nachweis und die Identifizierung eines einzelnen CTC ermöglicht.

Zusammenfassung

Zirkulierende Tumorzellen (CTCs) sind für die Krebsprognose, -diagnose und -therapie von Bedeutung. Die CTC-Zählung ist für die Bestimmung der Patientenerkrankung von entscheidender Bedeutung, da CTCs selten und heterogen sind. CTCs lösen sich vom Primärtumor, gelangen in den Blutkreislauf und wachsen möglicherweise an entfernten Stellen, wodurch der Tumor metastasiert wird. Da CTCs ähnliche Informationen wie der Primärtumor enthalten, kann die CTC-Isolierung und die anschließende Charakterisierung bei der Überwachung und Diagnose von Krebs von entscheidender Bedeutung sein. Die Enumeration, Affinitätsmodifikation und klinische Immunfluoreszenzfärbung seltener CTCs sind leistungsfähige Methoden für die CTC-Isolierung, da sie die notwendigen Elemente mit hoher Sensitivität liefern. Mikrofluidische Chips bieten eine Flüssigbiopsiemethode, die für die Patienten schmerzfrei ist. In dieser Arbeit stellen wir eine Liste von Protokollen für klinische mikrofluidische Chips vor, eine vielseitige CTC-Isolierungsplattform, die eine Reihe von Funktionalitäten und Diensten enthält, die für die CTC-Trennung, -Analyse und -Frühdiagnose erforderlich sind, und so die biomolekulare Analyse und Krebsbehandlung erleichtern. Das Programm umfasst die Zählung seltener Tumorzellen, die klinische Vorverarbeitung des Patientenblutes, einschließlich der Lyse roter Blutkörperchen, sowie die Isolierung und Erkennung von CTCs in situ auf mikrofluidischen Chips. Das Programm ermöglicht die präzise Zählung von Tumorzellen oder CTCs. Darüber hinaus enthält das Programm ein Tool, das die CTC-Isolierung mit vielseitigen mikrofluidischen Chips und die Immunfluoreszenzidentifikation in situ auf den Chips umfasst, gefolgt von einer biomolekularen Analyse.

Einleitung

Zirkulierende Tumorzellen (CTCs) sind für die Krebsprognose, -diagnose und -therapie von Bedeutung. Die CTC-Zählung ist von entscheidender Bedeutung, da CTCs selten und heterogen sind. Die Enumeration, Affinitätsmodifikation und klinische Immunfluoreszenzfärbung seltener CTCs sind leistungsfähige Techniken für die CTC-Isolierung, da sie die notwendigen Elemente mit hoher Sensitivität bieten1. Die seltene Anzahl von Tumorzellen, die mit normalem Blut vermischt sind, ahmt echtes Patientenblut sehr gut nach, da 2-3 ml echtes Patientenblut nur 1-10 CTCs enthalten. Um ein kritisches experimentelles Problem zu lösen, anstatt eine große Anzahl von Tum....

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Protokoll

Die Blutproben der Patienten wurden vom Longhua Hospital geliefert, das der Shanghai Medical University angegliedert ist.Das Protokoll folgt den Richtlinien der Ethikkommission für Humanforschung des Dritten Krankenhauses der Universität Peking. Die Patienten erhielten eine Einverständniserklärung für die Verwendung der Proben zu Forschungszwecken.

1. Pre-Experiment zur Überprüfung der Einfangeffizienz mit kultivierten Tumorzellen

  1. Kultivierung der Tumorzellen MCF-7, MDA-MB-231 und HeLa zur Bestimmung der Einfangeffizienz. Verdünnen Sie die Tumorzellsuspension, zählen Sie die Anzahl der Tumorzellen und wiederholen ....

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Ergebnisse

Das gesamte Setup besteht aus einer Spritzenpumpe, einer Spritze und einem Mikrofluidik-Chip. Die Zellsuspension in der Spritze wird mit der Spritzenpumpe verbunden, und die Zellsuspension wird in den Mikrofluidik-Chip eingeführt, um die Zellen einzufangen. Die Erfassungseffizienz für alle verwendeten Mikrofluidik-Chips lag bei etwa 90 % oder mehr. Für den Wellenchip haben wir Mikrostrukturen mit unterschiedlichen Lücken entworfen. Die kleinen Lücken werden verwendet, um die CTCs zu erfassen, und die großen Lücken werden.......

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Diskussion

Die Prognose und Früherkennung von Krebserkrankungen haben einen signifikanten Einfluss auf die Krebsbehandlung1. Die CTC-Isolierung mit mikrofluidischen Chips ermöglicht eine Flüssigbiopsie ohne Invasion. CTCs sind jedoch extrem selten und heterogen im Blut1, was die Isolierung von CTCs erschwert. CTCs haben ähnliche Eigenschaften wie die ursprünglichen Tumorquellen, aus denen sie stammen. Somit spielen CTCs eine wichtige Rolle bei der Krebsmetastasierung.......

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Offenlegungen

Die Autoren haben nichts zu verraten.

Danksagungen

Diese Forschungsarbeit wurde unterstützt von der Anhui Natural Science Foundation of China (1908085MF197, 1908085QB66), der National Natural Science Foundation of China (21904003), dem Scientific Research Project der Tianjin Education Commission (2018KJ154), dem Provincial Natural Science Research Program of Higher Education Institutions of Anhui Province (KJ2020A0239) und dem Shanghai Key Laboratory of Multidimensional Information Processing, East China Key Laboratory of Multidimensional Information Verarbeitung, East China Normal University (MIP20221).

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Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien
NameUnternehmenKatalognummerKommentare
Calcein AMBIOTIUM80011
kalibrierte MikrokapillarpipettenSigma-AldrichP0799
CD45-PEBD Biosciences560975
CK-FITCBD Biosciences347653monoklonaler Cytokeratin-Antikörper
DMEMHyCloneSH30081,05
fötales Rinderserum (FBS)GIBCO, USA26140
Hoechst 33342Molekulare Sonden, Solarbio Corp., ChinaC0031
Penicillin-StreptomycinYing Zuverlässige Biotechnologie, China
Lyse roter Blutkörperchen (RBCL)Solarbio, PekingR1010

Referenzen

  1. Chen, H., et al. Highly-sensitive capture of circulating tumor cells using micro-ellipse filters. Scientific Reports. 7 (1), 610(2017).
  2. World Health Organization Cancer report. , Available from: https://www.who.int/news-room/fact-sheets/detail/cancer (2022).
  3. Pantel, K., Brakenhoff, R. H., Brandt, B.

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Nachdrucke und Genehmigungen

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