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Methodenartikel

HPLC gekoppelt mit chemischem Fingerabdruck zur Multimustererkennung zur Identifizierung der Authentizität von Clematidis armandii caulis

2.2K Aufrufe

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DOI:

10.3791/64690

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11. November 2022

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* These authors contributed equally

In diesem Artikel

Zusammenfassung

Hier stellen wir ein Protokoll zur Etablierung der Hochleistungsflüssigkeitschromatographie (HPLC) in Verbindung mit der Multimustererkennung des chemischen Fingerabdrucks vor, das eine neue Strategie zur effektiven Identifizierung der echten Sorten von Clematidis Armandii Caulis und seiner Verfälschungsmittel bietet.

Zusammenfassung

Eine Methode zur Identifizierung chinesischer Arzneimittel und ihrer verwandten Verfälschungsmittel wurde am Beispiel von Clematidis Armandii Caulis (Chuanmutong, einer universell verwendeten traditionellen chinesischen Medizin) entwickelt. Zehn Chargen echter Chuanmutong-Sorten und fünf Chargen verwandter Verfälschungsmittel wurden analysiert und verglichen, basierend auf den Fingerabdrücken der Hochleistungsflüssigkeitschromatographie (HPLC) in Kombination mit Chemometrie, einschließlich Clusteranalyse (CA), Hauptkomponentenanalyse (PCA) und orthogonaler partieller Diskriminierungsanalyse der kleinsten Quadrate (OPLS-DA). Zusätzlich wurde der Gehalt an β-Sitosterol bestimmt. Der chemische Kontrollfingerabdruck von Chuanmutong wurde ermittelt und 12 gemeinsame Spitzen identifiziert. Die Ähnlichkeit zwischen dem Fingerabdruck von 10 Chargen echter Chuanmutong-Sorten und dem Kontrollfingerabdruck betrug 0,910-0,989, während die Ähnlichkeit von fünf Chargen von Verfälschungsmitteln nur 0,133-0,720 betrug. Basierend auf den gemeinsamen Peaks im Chromatogramm wurden 15 Probenchargen von PCA in drei Gehaltsstufen eingeteilt und von CA in vier Kategorien aggregiert, wodurch eine klare Unterscheidung zwischen authentischem Chuanmutong und Verfälschungsmitteln von Chuanmutong erreicht wurde. Darüber hinaus wurden sieben differentielle Komponenten, die authentisches Chuanmutong und Verfälschungsmittel von Chuanmutong effektiv identifizieren können, durch OPLS-DA gefunden. Der β-Sitosterin-Gehalt von 10 Chargen echter Chuanmutong-Sorten betrug 97,53-161,56 μg/g, während der β-Sitosterin-Gehalt der fünf Chargen von Verfälschungsmitteln stark variierte, darunter der β-Sitosterin-Gehalt von Clematis peterae Hand.-Mazz. und Clematis gouriana Roxb. Var. finetii Rehd. et Wils. war deutlich niedriger als die authentischen Sorten von Chuanmutong. Der Inhalt der HPLC-Indexkomponente und die in dieser Studie etablierte Methode zur Erkennung chemischer Fingerabdrücke mit mehreren Mustern bieten eine neue Strategie zur effektiven Identifizierung authentischer chinesischer Arzneimittel und verwandter Verfälschungsmittel.

Einleitung

Chuanmutong, trockener Caulis von Clematis armandii Franch. oder Clematis montana Buch.-Ham., ist eine traditionelle chinesische Medizin, die häufig in den Kliniken 1,2,3 verwendet wird. Es wird zur Behandlung von Harnproblemen, Ödemen, Wunden an Zunge und Mund, verminderter Milchsekretion, Gelenksteifigkeit und Muskelschmerzen durch feuchte Hitze verwendet4. Chuanmutong wurde schon immer aus wilden Sorten gewonnen, die hauptsächlich im Südwesten Chinas verbreitet sind, insbesondere in Sichuan, wo die beste Qualität zu finden ist

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Protokoll

1. Methoden zur Detektion chemischer Fingerabdrücke

  1. Chromatographische Bedingungen
    1. Bereiten Sie die mobile Phase Acetonitril (A)/Wasser (B) vor. Stellen Sie in der HPLC-Software ein Gradientenprogramm wie folgt ein: 0-20 min, 3%A-10%A; 20-25 min, 10%A-13%A; 25-65 min, 13%A-25%A; 65-75 min, 25%A-40%A; 75-76 min, 40%A-3%A; 76-85 min, 3%A-3%A.
    2. Halten Sie die Durchflussrate der mobilen Phase bei 1,0 ml/min.
    3. Die chromatographische Trennung wird auf einer C18-Säule (250 mm x 4,6 mm, 5 μm) bei 30 °C durchgeführt.
    4. Stellen Sie das Injektionsvolumen auf 10 μL ein.
    5. Detektieren Sie die Proben bei einer ....

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Ergebnisse

Chromatographischer Fingerabdruck von Chuanmutong und Ähnlichkeitsanalyse (SA)
Die RSD-Werte der relativen Retentionszeit von Präzision, Wiederholbarkeit und Stabilität lagen unter 0,46%, 1,65% bzw. 0,53%; die RSD-Werte der relativen Spitzenfläche lagen unter 4,23%, 3,56% bzw. 3,96%. Wie in den Abbildungen 1A,B gezeigt, gab es 12 verschiedene gemeinsame Peaks (von Peak 1 bis Peak 12) in den HPLC-Fingerabdrücken in den 10 authentischen Chuanmutong-Proben. .......

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Diskussion

Die Probenentnahme für die Forschung ist der erste wichtige Schritt zum Aufbau einer Multimustererkennung zur Identifizierung der Authentizität chinesischer Arzneimittel. Durch Marktforschung fanden wir heraus, dass Sichuan Ya'an, Liangshan und Leshan die Hauptproduktionsgebiete für wilde Ressourcen von Chuanmutong sind. Die verwandten Sorten derselben Gattung haben auch die gleiche geographische Verbreitung 6,20; CC, DC, DE, XS und SMT werden oft als Chuangmuton.......

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Offenlegungen

Die Autoren haben nichts offenzulegen.

Danksagungen

Diese Arbeit wurde vom Projekt der Sichuan Traditional Chinese Medicine Administration (Nr. 2020JC0088, Nr. 2021MS203) unterstützt.

....

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Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien
NameUnternehmenKatalognummerKommentare
EssigsäureZhiyuan Chemical Reagent Co., Ltd., Tianjin, China2017381038
AcetonitrilSigma-Aldrich  Trading Co., Ltd., Shanghai, ChinaWXBD5243V
β-SitosterolMeisai Biological Technology Co., Ltd., Chongqing, China20210201
  C18 SäuleYuexu Material Technology Co., Ltd., Shanghai, ChinaWelch Ultimate LP
ChuanmutongGuoqiang Chinese Herbal Pieces Co., Ltd., Sichuan, China 19020103CMT-1
ChuanmutongHongya Wawushan Pharmaceutical Co., Ltd., Sichuan, China 200701CMT-2
ChuanmutongHongpu Pharmaceutical Co., Ltd., Sichuan, China 200701CMT-3
ChuanmutongHongpu Pharmaceutical Co., Ltd., Sichuan, China 200901CMT-4
ChuanmutongXinrentai Pharmaceutical Co., Ltd., Sichuan, China 210701CMT-5
ChuanmutongHaobo Pharmaceutical Co., Ltd., Sichuan, China 210401CMT-6
ChuanmutongXinrentai Pharmaceutical Co., Ltd., Sichuan, China 200901CMT-7
ChuanmutongWusheng Pharmaceutical Group Co., Ltd., Sichuan, China 201201CMT-8
ChuanmutongLimin Chinesische Kräuterstücke Co., Ltd., Sichuan, China 201001CMT-9
ChuanmutongYuhetang Pharmaceutical Co., Ltd., Sichuan, China210501CMT-10
Clematis argentilucida (Levl. et Vant.) W. T. WangMadzi Bridge, Sanlang Township, Tianquan County, Sichuan, China -CC
Clematis apiifolia var. obtusidentata Rehd. et Wils.Heilin Village, Qiliping Township, Hongya County, Sichuan, China -DC
Clematis peterae Hand.-Mazz.Huangmu Village, Huangmu Township, Hanyuan County, Sichuan, China -DE
Clematis gouriana Roxb. Var. finetii Rehd. et WilsMixedang Mountain, Huangwan Township, Emei County, Sichuan, China -XS
Clematis finetiana Levl. et Vaniot.Wannian Village, Gemeinde Huangwan, Kreis Emei, Sichuan, China -SMT
Elektronische WaageHaozhuang Hengping Scientific Instrument Co., Ltd., Shanghai,   China FA1204
ErgosterolMeisai Biological Technology Co., Ltd., Chongqing, China20210201
EthanolKelon Chemical Co., Ltd., Chengdu, China2021112602
EthylacetatZhiyuan Chemical Reagent Co., Ltd., Tianjin, China2017042043
AmeisensäureKelon Chemical Co., Ltd., Chengdu, China2016062901
HochleistungsflüssigkeitschromatographieAgilent, USA.1260
IBM SPSS Statistics Version 26.0International Business Machines Corporation,USA-Methanol
Sigma-Aldrich  Trading Co., Ltd., Shanghai, ChinaWXBD6409V
MethanolKelon Chemical Co., Ltd., Chengdu, China202010302
n-ButylalkoholZhiyuan Chemical Reagent Co., Ltd., Tianjin, China2020071047
PetroletherZhiyuan Chemical Reagent Co., Ltd., Tianjin, China2020090125
PhosphorsäureComeo Chemical Reagent Co., Ltd., Tianjin, China20200110
SESCF-TCM Version 2012National Pharmacopoeia Commission,China-http://114.247.108.158:8888/login
StigmasterolMeisai Biological Technology Co., Ltd., Chongqing, China20210201
TrichlormethanSinopharm Group Chemical Reagent Co., Ltd., Shanghai, ChinaSIMCA-Version
14.1.0.2047Umetrics,Schweden-https://www.sartorius.com/en/products/process-analytical-technology/data-analytics-software/mvda-software/simca/simca-free-trial-download
ReinstwassermaschineYoupu Ultrapure Technology Co., Ltd., Sichuan, ChinaUPH-II-10T
UltraschallreinigerKunshan Hechuang Ultrasound Instrument Co., Ltd., Jiangsu, ChinaKH3200E
20200214 Umetrics

Referenzen

  1. Chen, C. R. Chinese Medicine Specimen Picture Book. , Shanghai World Book Company. Shanghai. 116(1935).
  2. Xiong, J., et al. Lignans from the stems of Clematis armandii ("Chuan-Mu-Tong") and their anti-neuroinflammatory activities. Journal of ....

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Nachdrucke und Genehmigungen

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