Summary
在这里，我们介绍了智能高通量抗菌药敏检测/噬菌体筛选系统的原理、结构和说明。以中国山东省家禽中分离的 沙门氏菌 为例，说明了其应用。计算Lar指数，并全面讨论其在评估抗菌素耐药性方面的意义。
Abstract
为了提高耐药菌药敏试验（AST）和噬菌体高通量筛选的效率，降低检测成本，根据AST标准和临床与实验室标准协会（CLSI）制定的耐药性断点（R），开发了一种智能高通量AST/噬菌体筛选系统，包括96点阵接种器、图像采集转换器和相应的软件。采用智能高通量AST/噬菌体筛选系统，对山东省家禽中分离的1500株 沙门氏 菌菌株的AST和最小抑菌浓度（MIC）分布（R/8-8R）进行统计。Lar指数，即“较少的抗生素，较少的耐药性和残留，直到很少的抗生素”，是通过计算每个MIC的加权平均值并除以R得到的。与使用耐药性流行率来表征高度耐药菌株的抗菌素耐药性 （AMR） 程度相比，这种方法提高了准确性。对于AMR高的 沙门氏 菌菌株，利用该系统从噬菌体文库中高效筛选裂解噬菌体，并计算分析裂解谱图。结果表明，智能高通量AST/噬菌体筛选系统具有可操作性、准确性、高效、成本低廉、易于维护等特点。该系统与山东省兽用抗菌素耐药性监测系统相结合，适用于与AMR相关的科学研究和临床检测。
Introduction
随着抗菌药物被广泛用于预防细菌性传染病，抗菌素耐药性（AMR）已成为全球公共卫生问题1。抗击抗微生物药物耐药性是目前监测流行病病原体抗微生物药物耐药性以及敏感抗菌剂和溶菌噬菌体的协同治疗的主要任务2。
体外 抗菌药物敏感性试验 （AST） 是监测治疗和检测 AMR 水平的主要方法。它是抗菌药理学的重要组成部分，也是临床用药的重要基础。美国临床和实验室标准协会（CLSI）和欧洲药敏试验委员会（EUCAST）制定和修订了AST的国际标准，并不断修改和补充AST方法和断点，以确定某种“生物体-抗菌剂”组合的MIC为敏感（S）、耐药（R）或中间（I）3，4.
从 1980 年代到 1990 年代，自动微量肉汤稀释仪器迅速发展并应用于临床实践，例如 Alfred 60AST、VITEK System、FISTM 和 Cobasbact5、6、7。然而，这些仪器价格昂贵，需要高成本的耗材，并且它们的检测范围是为临床患者用药设计的5,6,7。由于这些原因，它们不适合兽医临床检查和大量高耐药菌株的检测。本研究开发了一种智能高通量AST/噬菌体筛选系统，包括96点基质接种器（图1）、图像采集转换器（图2）和相应的软件8，通过琼脂稀释法对一批细菌菌株同时对多种抗菌剂进行AST。此外，该系统还用于检测和分析噬菌体对抗菌耐药菌的裂解模式9，并从噬菌体库中高效筛选裂解噬菌体。该系统被发现高效、经济且易于操作。
图 1：96 点阵接种器的结构图。 1：接种针板;2：移动运营商;3：种子块;4：孵育板;5：底座;6：操作手柄;7：限位销。请点击这里查看此图的较大版本.
图2：图像采集转换器的结构图。 1：外壳;2：显示屏;3：图像采集室;4：检测板底座;5：出入库检测板;6：控制板;7：图像采集转换装置;8：光源;9：图像扫描仪。请点击这里查看此图的较大版本.
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Protocol
本研究中使用的 沙门氏菌菌 株是在获得中国山东省农业科学院畜牧兽医研究所生物安全委员会的批准后从中国山东家禽中采集的。
1. 智能高通量AST系统的应用8
- 接种物制备
- 将质量控制微生物 大肠杆 菌和93种 沙门氏菌 菌株在37°C下在Mueller-Hinton琼脂（MHA）平板上检测AST16-18小时3。
- 根据CLSI标准3中规定的方法制备每种菌株的接种物以匹配0.5McFarland浊度标准品，然后稀释10倍。
- 将 200 μL 无菌生理盐水放入 96 孔板的水平第 1 孔 （A1） 中作为阴性对照，将两个质控生物悬浮液分别放入水平第 2 和第 3孔（A2 和 A3）中作为阳性对照和质量控制。将每种测试染色剂的 200 μL 稀释接种悬浮液加入 96 孔种子块中的相应 93 孔中。
- 抗菌琼脂平板的制备
- 根据Lar指数的计算范围（从0.125R到8R）设置不同抗菌剂的浓度范围。浓度范围从质量控制范围或0.0625R（以较低范围为准）到8R。
注：如果不计算Lar指数，可根据AST的需要设置抗生素浓度范围。 - 根据CLSI标准3中规定的琼脂稀释方法，从合适的储备液浓度开始，对抗生素溶液执行log2加倍稀释方案。
- 对含有 18 mL Mueller-Hinton 琼脂培养基的 50 mL 玻璃瓶进行灭菌。将2 mL适当稀释的抗菌溶液加入冷却至45-50°C的18 mL熔融培养基中，充分混合，然后倒入生物安全柜中的板中。
- 让琼脂在室温（RT）下凝固，在孵育平板的盖子下留出间隙，并在接种前吹干琼脂表面。
- 在孵育板的反面标记抗菌剂的类型和浓度。将每种抗菌剂的多个孵育板按 log2 倍稀释顺序排列在堆栈中。
- 准备两个无药物琼脂平板作为每种抗菌剂的对照。
- 根据Lar指数的计算范围（从0.125R到8R）设置不同抗菌剂的浓度范围。浓度范围从质量控制范围或0.0625R（以较低范围为准）到8R。
- 96点阵接种仪的接种步骤
- 将高压灭菌的接种针板安装在生物安全柜中96点基质接种器的支架上。
- 将制备的种子块与测试菌株和琼脂孵育板放在移动载体上，两个板的定位角度相同。
- 推动移动载体，使种子块位于接种针板的正下方。
- 按下操作手柄，向下移动接种针板，将96针对准种子块96孔中的接种物。
- 用控制松开操作手柄，然后在弹簧的作用下复位接种针板。
- 按压操作手柄 2-3 次，充分搅拌每个接种物并浸泡。推动并移动载板，使孵育板位于接种针板的正下方。
- 按下操作手柄，将接种针板向下移动，停止1-2秒，使接种针与培养板表面充分接触。
- 松开操作手柄。这样就完成了一次接种。更换另一个孵育的平板并继续循环，直到一组抗菌琼脂平板完成。
- 更换另一个接种针板和种子块，接种另一组供试菌株。循环直到所有接种完成。
注意：首先接种对照琼脂平板（无抗菌剂），然后按药物浓度从低到高的顺序接种平板，最后接种第二个对照琼脂平板，以确保没有污染或抗菌剂残留。接种体积取决于每个引脚的自然沉积体积约为 2 μL。
- 孵育抗菌琼脂平板
- 在室温下孵育接种的抗菌琼脂平板，直到接种斑点中的水分被吸收到琼脂中。
- 倒置平板并在37°C下为测试菌株孵育16-20小时，以确保不受抑制的细菌形成菌落。
- 图像采集和数据统计
- 双击 96点阵AST图像采集系统 打开程序。
- 单击任务栏中的 “测试信息 ”。点击新建， 新建 测试任务，根据提示填写信息，包括代号、名称、来源、菌株、菌株数、抗生素、梯度等。
- 单击“ 数据收集”>“照片>测试 ”项以选择创建的新任务。单击 “抗生素 ”以选择抗生素的名称，然后单击“ 梯度 ”以选择该抗生素的初始浓度。
- 单击 “连接 ”以连接图像采集转换器。
- 将相应的孵育板放在检测板底座上，缺失角度在右前方进行定向，然后推入图像采集转换器。
- 单击 “集合 ”以获取图像。抗生素梯度将自动跳转到下一个梯度。依次放置下一个培养皿，然后继续单击 “收集 ”，直到收集完该抗生素的培养皿。
- 单击 “抗生素”，然后选择下一组孵育板。单击“ 渐 变”以选择起始渐变，然后继续进行下一轮图像收集。
- 完成所有收集后，单击 “提交”。该程序将自动识别图像中每个接种点格式化的白色像素数，确定是否有菌落形成并将图像转换为MIC值。
- 单击 “查询 ”以获取针对测试抗生素的菌株的所有 MIC 结果。
注：智能高通量AST系统适用于测定大批量细菌菌株的MIC。测试过程，包括准备、接种、孵育和结果读取，需要 3 天。抗生素种类和MIC检测范围可根据各自需要设置，主要耗材可重复使用。
- Lar指数的计算
- 使用以下公式准确确定 Lar 指数： ，其中：
MICi：最低抑菌浓度。
从 MIC-3 到 MIC3 的 MIC 分布范围表示以 R 为中心的连续两倍浓度：0.125R、0.25R、0.5R、R、2R、4R 和 8R。
是 2i，i 的范围是 -3 到 3。
R：CLSI标准化的细菌对抗菌剂耐药性的断点。
f：MIC频率分布。
注：一般 Lar 指数是所有 Lar 指数的算术平均值。计算 Lar 索引后，将最终值四舍五入到小数点后两位有效数字。
- 使用以下公式准确确定 Lar 指数： ，其中：
是 2i，i 的范围是 -3 到 3。2. 智能高通量噬菌体筛选系统9
- 制备噬菌体种子块和含有细菌的双层培养板。
- 使用双层琼脂法10 或液体培养法11 制备不同的噬菌体。以 1 x 104-5 pfu/mL 的滴度稀释至合适的平行浓度，并将 200 μL 噬菌体接种物加入 96 孔种子块中。
- 用细菌（10 mL 底部琼脂培养基 [琼脂 12 g/L] 和 6 mL 上半琼脂培养基 [6 g/L] 和 100 μL 细菌 [0.5 McFarland]）制作双层平板进行测试。
- 为要测试的每种菌株制作双层孵育板。在双层板的盖子下留出一个间隙，然后吹干生物安全柜中的琼脂表面。
- 筛选试验
- 将制备好的噬菌体种子块和双层板放在96点基质接种器的移动载体上，并将所有噬菌体接种物转移到半琼脂表面。继续循环，直到所有测试菌株完成。
- 让接种的双层板保持在室温下，直到接种点中的水分完全吸收到半琼脂中。
- 倒置平板并在合适的条件下为测试菌株孵育4-6小时，以确保形成清晰的裂解点。
- 分析数据
- 通过图像采集转换器获取并保存每个双层板的实验结果的图像（步骤1.5.4-1.5.6）。
- 根据获得的图像，将不同形状斑点的数量和形态记录到电子表格中，并计算不同种类噬菌体的各自比例。
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Representative Results
遵循智能高通量AST系统的方案，以中国山东家禽 沙门氏菌 为例说明其应用。
沙 门氏菌 菌株在含有氨苄青霉素（R为32μg/ mL）的琼脂平板上生长，浓度为2至256μg/ mL，由图像采集转换器确定，如图 3所示。水平1号 井A1为阴性对照，未显示菌落生长;A2和A3为CLSI标准化的质控范围（2-8 μg/mL）为质控菌株，MIC为4 μg/mL（用2 μg/mL氨苄青霉素在琼脂平板上形成菌落，但未在4 μg/mL的琼脂平板上形成菌落）。 沙门氏菌 菌株在A4中的MIC为64 μg/mL，而A5的MIC为16 μg/mL。软件自动计算93种 沙门氏菌 菌株对氨苄青霉素的MIC分布。
图3： 沙门氏菌 在一系列氨苄青霉素培养板上的形态 。 8 水平：A-H，12 垂直：1-12。 请点击这里查看此图的较大版本.
采用高通量AST系统检测山东省动物 沙门氏菌菌 株的抗微生物药物耐药性。MIC数据已上传到Varms （http://www.varms.cn/）12的数据库。统计结果如表1所示。共测试了10种抗菌剂，针对300-1,500种 沙门氏菌菌 株，显示了该系统的高通量优势。
根据CLSI标准的抗性断点，将抗性率（R%）计算为被测菌株中MIC≥R菌株的百分比（表1）。氨苄西林、环丙沙星、阿莫西林-克拉维酸的R%值均高于50%，多西环素、氟非尼考、头孢噻肟、恩诺沙星的R%值均为30%-50%，庆大霉素、阿米卡星、美罗培南的R%值均小于30%。美罗培南未用于工业饲养的动物，R%为7%。
R%表示MIC高于R的细菌菌株比例，而MIC分布表示每种MIC的菌株数量，以更准确地描述 沙门氏菌 的整体AMR。例如，氨苄西林的R%为73%，MIC≥256 μg/mL浓缩的最大样品数（916株），说明 沙门氏菌 对氨苄西林的耐药性相当严重。
表1：山东省动物 沙门氏菌 MIC分布、R%和Lar指数值。 粗体字体对应的MIC是抗菌剂的R值。 请按此下载此表格。
为了均匀性和可比性，以每种药物的 R 为中心，向前和向后延伸 3 个梯度。根据7个梯度的MIC分布，Lar指数由以下公式计算：
.
以氨苄青霉素为例，R值为32 μg/mL，样品数为1,414，拉尔 = （4/32） x （245/1414） + （8/32） × （16/1414） + （16/32） × （117/1414） + （32/32） × （27/1414） + （64/32） × （36/1414） + （128/32） × （57/1414） + （25666） /32） × （916/1414） = 2-3 × （245/1414） + 2-2 × （16/1414） + 2-1 × （117/1414） + 20 × （27/1414） + 21 × （36/1414） + 2 2 × （57/1414） +2 3× （916/1414） = 5.48。根据该公式计算其他抗菌剂的Lar指数，如表1所示。
Lar指数的意义在于准确指示AMR的严重程度。以环丙沙星和阿莫西林-克拉维酸为例，它们的R%值相近，分别为68%和65%，但Lar指数差异显著，分别为4.57和1.76。 表1中高MIC值的分布清楚地说明了其原因，其中71.3%的环丙沙星耐药菌株分布在8R（32 μg/mL）中，而阿莫西林-克拉维酸耐药菌株的MICs主要集中在R和2R上，8R的比例较低（8.69%）。因此，环丙沙星的Lar指数高于阿莫西林-克拉维酸，说明高度耐环丙沙星菌株的比例高于阿莫西林-克拉维酸耐药菌株。Lar指数是比耐药率更准确的AMR程度指标。
根据Lar指数的公式，如果所有菌株对某种药物的MICs均为R，则Lar指数为1;如果所有菌株的MICs均为2R，则Lar指数为2。因此，除边缘浓度外，Lar指数显示综合MIC与相应R值之间存在多重关系。采用Lar指数评估AMR程度，AMR越高，优势越明显。为了均匀性和可比性，Lar指数的计算范围为7个MIC，前后3个梯度以R值为中心，通过对不同抗菌剂、菌株数和MIC分布进行积分得到加权平均值。因此，Lar指数的取值范围为0.125-8。Lar 越接近 0.125，AMR 越低，越接近 8，AMR 越高。然而，在边缘浓度下，Lar和R之间没有成正比关系。当抗菌剂和Lar指数的计算范围明确后，将一般Lar归一化为直观的综合值，用于直接比较和评价不同细菌、使用者、年份、地区等不同条件下AMR的程度和变化趋势。
遵循智能噬菌体筛选系统的方案，以96个沙门氏菌噬菌体裂解AMR沙门氏菌菌株为例，分析噬菌体裂解模式。
通过96点基质接种器将96个噬菌体转移到含有 沙门氏菌 的双层板中。形成斑点的形态如图 4所示。主要有四种类型（但不限于四种）：透明圆斑（●）、斑块聚集（
）、浑浊溶解斑（）和无溶解斑
（○）。
图 4：双层琼脂平板上沙门氏菌斑点的形态。 图1和图2：96个噬菌体在不同沙门氏菌菌株上产生的模式。 “●”圆形透明斑点，“”斑块收集，“”浑浊的溶血点，“○”无溶解斑点） 请点击这里查看此图的较大版本.
在双层平板上，不同宿主细菌上不同噬菌体的裂解点在形态上存在差异10。“圆形透明裂解点”是由噬菌体产生的，噬菌体可以可靠地杀死平板上的宿主，但可能会也可能不会成功复制，代价是该宿主。在这种情况下，需要进一步稀释以最终确定类型。“牌匾集合”是由真正的牌匾形成的。每个单独的裂解区显然都是由单个感染中心产生的，这表明噬菌体的复制是以牺牲平板上的细菌为代价的。“浑浊的裂解点”是由噬菌体引起的，该噬菌体不能可靠地杀死平板上的宿主，并且可能会也可能不会成功复制，而代价是该宿主。在这种情况下，存在不止一种可能性，因此需要根据进一步的研究兴趣进行确认。“无溶解点”表示非溶解性。
此外，使用该系统进行初步测试基本上可以确定菌株和噬菌体是否重复。如果选择不同的 沙门氏菌 种类，并且两个噬菌体的模式相同，则表明噬菌体可能是重复的。如果选择非重复噬菌体来感染来自临床来源的未知沙门氏菌物种，并且噬菌体模式相同，则表明 沙门氏 菌菌株可能是同一 菌 株。此外，重复的数量和比例具有流行病学调查的参考值。
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Discussion
琼脂稀释法已经得到广泛应用。高通量AST系统的原理是琼脂稀释法。该协议中的关键步骤之一是一次准确高通量转移 96 个接种物，该转移连续多次进行。为了完成这一关键步骤，96点阵接种器的引脚均匀且非常光滑。每个引脚的自然沉积体积约为 2 μL，在琼脂培养基表面聚集成小液滴，迅速吸收到琼脂中，不会流动或飞溅以造成交叉污染。第二个关键步骤是对大型AST数据进行统计处理。在高通量接种的情况下，需要确定测试数据，工作量巨大。智能图像采集转换器和配套软件产生的智能分析和统计结果是该问题的完美解决方案。AST 结果会自动直接上传到 Varms 数据库。提高了结果解释的效率和准确性，减少了人为因素造成的误差13。
第三个关键步骤是提出AMR的Lar指数。目前，国际上尚无抗微生物药物耐药性综合评价指标。根据文献，Laxminarayan 和 Klugman 描述了耐药指数 （DRI） 来衡量抗生素有效性的变化14,15。它结合了耐药率和处方的相对频率，但无法表征抗微生物药物耐药性的程度并评估高耐药水平的变化。药物有效性指数（DEI）16是另一个源自DRI的指数，具有与DRI相同的缺点。因此，提出了Lar指数，该指数由三个步骤组成：（1）根据各自的R值对细菌菌株的MIC进行归一化，消除了AST标准品R值不同导致的抗菌剂差异;（2）根据MIC分布，计算加权平均值，比抗性率更准确地反映AMR程度;（3）多种抗菌药物的Lar指数的算术平均值，即一般Lar，可以反映AMR的综合情况，为不同水平AMR的评估和比较提供了便利。
这些设备的硬件设计合理，操作简单，各部件运行平稳。没有干扰问题或故障。配套软件的设计符合AST和噬菌体筛选的个性化需求，操作简单。一台仪器配备4-5盒接种针，用于批量细菌转移的多种适用场景。该仪器的核心部件是接种针板和不锈钢制成的针，适应多种环境，能够高压灭菌、拆卸和更换。接种针被设计为以任何方式组合。
由于滥用抗生素导致耐药病原体的流行，因此必须建立抗微生物药物耐药性监测系统。自2008年以来，山东省农业科学院畜牧兽医研究所公共卫生团队先后在山东省开展了动物抗微生物药物耐药性监测1 2、13、17。由于兽医耐药性水平高，监测量大，有必要有效检测病原体的中等收入来源，以规范抗菌剂的使用。但AST相关仪器价格昂贵，且操作成本和耗材成本高，不适合范围广泛的大型养殖场。因此，智能高通量AST系统的发展及其应用的规范化，有利于促进AMR监测技术健全体系的建立。根据前人研究12,13，智能高通量AST系统取得了良好的重复性和稳定性，符合CLSI标准，并应用于AST和动物临床致病菌的分析。截至目前，已累计超过20000种流行毒株的综合抗微生物药物耐药性数据12。对于监测过程中发现的耐药菌，该系统还可用于裂解噬菌体的快速高通量筛选，配合抗菌剂降低AMR。96点阵接种仪和图像采集转换器在噬菌体裂解筛选中的应用是一种扩展功能，该领域以前没有其他仪器应用过。
智能高通量AST/噬菌体筛选系统将AST与裂解噬菌体相结合，实现AMR监测、控制和降低。同时，更直观、简洁地利用Lar指数评价各种因素和新型抗菌技术对降低AMR的贡献。
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Disclosures
刘玉清等已申请96点阵孕育器及图像采集转换器及其应用的中国专利（专利号ZL 201610942866.3，专利号ZL 201910968255.X）。
Acknowledgments
本工作得到国家重点研发专项（2019YFA0904003）资助;山东省现代农业产业体系（SDAIT-011-09）;国际合作平台优化项目（CXGC2023G15）;山东省农业科学院农业科技创新项目重大创新任务（CXGC2023G03）.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 96 well culture plate | Beijing lanjieke Technology Co., Ltd | 11510 | |
| 96-dot matrix AST image acquisition system | Institute of Animal Science and Veterinary Medicine, Shandong Academy of Agricultural Sciences | In-house software copyright | |
| 96-dot matrix inoculator | Institute of Animal Science and Veterinary Medicine, Shandong Academy of Agricultural Sciences | N/A | Patented product |
| Agar | Qingdao hi tech Industrial Park Haibo Biotechnology Co., Ltd | HB8274-1 | |
| Amikacin | Shanghai McLean Biochemical Technology Co., Ltd | A857053 | |
| Amoxicillin | Shanghai McLean Biochemical Technology Co., Ltd | A822839 | |
| Ampicillin | Shanghai McLean Biochemical Technology Co., Ltd | A830931 | |
| Analytical balance | Sartorius | BSA224S | |
| Automated calculation software for Lar index of AMR | Institute of Animal Science and Veterinary Medicine, Shandong Academy of Agricultural Sciences | In-house software copyright | |
| Bacteria Salmonella strains | Institute of Animal Science and Veterinary Medicine, Shandong Academy of Agricultural Sciences | N/A | Animal origin |
| Bacterial resistance Lar index certification management system V1.0 | Institute of Animal Science and Veterinary Medicine, Shandong Academy of Agricultural Sciences | In-house software copyright | |
| Ceftiofur | Shanghai McLean Biochemical Technology Co., Ltd | C873619 | |
| Ciprofloxacin | Shanghai McLean Biochemical Technology Co., Ltd | C824343 | |
| Clavulanic acid | Shanghai McLean Biochemical Technology Co., Ltd | C824181 | |
| Clean worktable | Suzhou purification equipment Co., Ltd | SW-CJ-2D | |
| Colistin sulfate | Shanghai McLean Biochemical Technology Co., Ltd | C805491 | |
| Culture plate | Institute of Animal Science and Veterinary Medicine, Shandong Academy of Agricultural Sciences | N/A | Patented product |
| Doxycycline | Shanghai McLean Biochemical Technology Co., Ltd | D832390 | |
| Enrofloxacin | Shanghai McLean Biochemical Technology Co., Ltd | E809130 | |
| Filter 0.22 μm | Millipore | SLGP033RB | |
| Florfenicol | Shanghai McLean Biochemical Technology Co., Ltd | F809685 | |
| Gentamicin | Shanghai McLean Biochemical Technology Co., Ltd | G810322 | |
| Glass bottle 50 mL | Xuzhou Qianxing Glass Technology Co., Ltd | QX-7 | |
| High-throughput resistance detection system V1.0 | Institute of Animal Science and Veterinary Medicine, Shandong Academy of Agricultural Sciences | In-house software copyright | |
| Image acquisition converter | Institute of Animal Science and Veterinary Medicine, Shandong Academy of Agricultural Sciences | N/A | Patented product |
| Meropenem | Shanghai McLean Biochemical Technology Co., Ltd | M861173 | |
| Mueller-Hinton agar | Qingdao hi tech Industrial Park Haibo Biotechnology Co., Ltd | HB6232 | |
| Petri dish 60 mm x 15 mm | Qingdao Jindian biochemical equipment Co., Ltd | 16021-1 | |
| Petri dish 90 mm x 15 mm | Qingdao Jindian biochemical equipment Co., Ltd | 16001-1 | |
| Salmonella phages | Institute of Animal Science and Veterinary Medicine, Shandong Academy of Agricultural Sciences | N/A | |
| Shaker incubator | Shanghai Minquan Instrument Co., Ltd | MQD-S2R | |
| Turbidimeter | Shanghai XingBai Biotechnology Co., Ltd | F-TC2015 | |
| Varms base type library system V1.0 | Institute of Animal Science and Veterinary Medicine, Shandong Academy of Agricultural Sciences | In-house software copyright | |
| Vertical high-pressure steam sterilizer | Shanghai Shen'an medical instrument factory | LDZX-75L | |
| Veterinary pathogen resistance testing management system | Institute of Animal Science and Veterinary Medicine, Shandong Academy of Agricultural Sciences | In-house software copyright | |
| Veterinary resistance cloud monitoring and phage control platform V1.0 | Institute of Animal Science and Veterinary Medicine, Shandong Academy of Agricultural Sciences | In-house software copyright |
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