Hier wird ein Protokoll vorgestellt, das zeigt, dass die Bazi Bushen Kapsel (BZBS) den RANKL/OPG-Signalweg im ovariektomierten Nagetiermodell durch ihre östrogenähnliche Wirkung regulieren kann.
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Methodenartikel
Hier wird ein Protokoll vorgestellt, das zeigt, dass die Bazi Bushen Kapsel (BZBS) den RANKL/OPG-Signalweg im ovariektomierten Nagetiermodell durch ihre östrogenähnliche Wirkung regulieren kann.
Ziel dieser Studie ist es, die östrogenähnliche Wirkung der Bazi Bushen Kapsel (BZBS), einer chinesischen pflanzlichen Verbindung, bei ovariektomierten Mäusen zu zeigen. Weibliche Sprague-Dawley-Ratten (SD) wurden nach dem Zufallsprinzip in sechs Gruppen eingeteilt: eine scheinoperierte Gruppe, eine Modellgruppe (OVX), eine Progynova-Gruppe und BZBS-Gruppen (1, 2 und 4 d/kg/d). Eine Ovariektomie wurde bei allen Ratten durchgeführt, mit Ausnahme derjenigen in der scheinoperierten Gruppe. Nach 4-monatiger BZBS-Behandlung wurden Mikro-Computertomographie (Mikro-CT), Hämatoxylin- und Eosin-Färbung (H&E), Immunhistochemie und ELISA-Nachweis (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay) durchgeführt. Infolgedessen zeigten Ratten, die mit BZBS behandelt wurden, im Vergleich zur OVX-Gruppe eine erhöhte Anzahl und Fläche von trabekulären Knochen- und Knochenmarkzellen und eine verringerte Anzahl von Fettzellen. Das Knochenvolumen, die Trabekelzahl und die Trabekeldicke der rechten Tibia nahmen in den Medikationsgruppen zu und der Trabekelraum verringerte sich. Die 17β-Östradiol- und Serumkalziumspiegel in den Medikationsgruppen waren erhöht, aber die Spiegel von Serumphosphor, Sclerostin, β-CTX und TRACP-5b waren erniedrigt. In den Medikationsgruppen waren die RANKL- und Sclerostin-Spiegel gesenkt, während der Osteoprotegerin-Spiegel (OPG) erhöht war. Zusammenfassend lässt sich sagen, dass dieses Protokoll die therapeutischen Wirkungen und potenziellen molekularen Mechanismen chinesischer pflanzlicher Verbindungen bei ovariektomierten Ratten mit einer Vielzahl von Techniken systematisch bewertete.
Postmenopausale Osteoporose (PMOP) ist eine Erkrankung des Skelettsystems, die durch eine unzureichende Eierstockfunktion, vermindertes Östrogen und eine erhöhte Osteoklastenaktivität 1 verursacht wirdund durch eine geringe Knochenmasse, eine mikroarchitektonische Degeneration des Knochengewebes und eine Schädigung der Knochentrabekel gekennzeichnet ist. PMOP neigt zu Frakturen und kann schwerwiegende Auswirkungen auf die Lebensqualität der Patienten haben. Weltweit sind etwa 200 Millionen Menschen von Osteoporose betroffen2; Etwa 40 % der postmenopausalen Frauen leiden an Osteoporose
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Die Tierversuche wurden vom Ausschuss für Tierversuche und Ethik des Hebei Yiling Medical Research Institute genehmigt (Zulassungsnummer: N2020150). Die 36 weiblichen Sprague-Dawley (SD) Ratten (3 Monate alt, 180-200 g schwer) (siehe Materialtabelle) wurden im neuen Arzneimittelbewertungszentrum des Hebei Yiling Medical Research Institute mit normalem Futter und sauberem Wasser gefüttert und 12 Stunden pro Tag in Räumen mit kontrollierten Temperaturen (20-26 °C) und relativer Luftfeuchtigkeit (40%-70%) künstlichem Licht ausgesetzt.
1. Tierversuch
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Die Knochenmikrostruktur der Tibia wurde mittels Mikro-CT untersucht
Die Behandlung von ovariektomierten Ratten mit BZBS reduzierte signifikant die OVX-induzierten trabekulären Strukturveränderungen. Wie in den rekonstruierten Mikro-CT-Bildern der rechten Tibia (Abbildung 1A,B) gezeigt, zeigte der trabekuläre Knochen in der OVX-Gruppe im Vergleich zur SHA-Gruppe eine signifikante Abnahme von BMD (Abbildung 1C), BV/TV (
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Nach der Ovariektomie sank der Östrogenspiegel aufgrund der kontinuierlichen Reduzierung des spongiösen Knochens und des erhöhten Knochenumsatzes stark ab. Im Wesentlichen kann eine verminderte Östrogensekretion nach der Menopause zu einem signifikanten Knochenverlust führen18, der bei ovariektomierten Ratten zu einem Ca2+-Verlust führt19,20. Es wurde berichtet, dass die Einnahme von Östrogen di.......
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Die Autoren haben nichts offenzulegen.
Diese Arbeit wurde unterstützt durch das Strategic Consulting Project der Chinese Academy of Engineering: Strategic research on anti-aging effect of Traditional Chinese Medicine (Förderkennzeichen: 2022-XY-45), die Naturwissenschaftliche Stiftung der Provinz Hebei in China (Förderkennzeichen: 2022106065), das W & T Program von Hebei, China (Förderkennzeichen: 22372502D) und das High-level S & T Innovation and Entrepreneurship Talent Project von Shijiazhuang, Hebei, China (Fördernummer: 07202203).
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| Name | Unternehmen | Katalognummer | Kommentare |
|---|---|---|---|
| 10% neutrales gepuffertes Formalin | Proteintech Group, Inc. | 23408-1AP-100 | |
| 17-Beta-Östradiol-ELISA-Kits | Proteintech Group, Inc. | 21933-1-AP | |
| 3%H2O2 | ShanDong LIRCON Medical Technology Incorporated Company | 20221027 | |
| Anti-Osteoprotegerin-Antikörper | Abcam | ab203061 | |
| Bazibushen Kapseln | Shijiazhuang Yiling Pharmaceutical Co., Ltd. | ||
| Biotin Ziege Anti-Kaninchen IgG | Abcam | ab207995 | |
| Calcium-Assay-Kits | Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute | C004-2-1 | |
| Diaminobenzidin | ZSGB-BIO | ZLI-9018 | |
| Estradiolvalerat Tabletten | Bayer AG | 156A | |
| Gene 1580R Zentrifuge | GENE Co. Ltd. | ||
| Image-Pro Plus | Media Cybernetics | IPP 6.0 | |
| Leica DM6000B Mikroskop (vollautomatisches aufrechtes Mikroskopsystem) | Leica | 361715 | |
| Normal Goat Serum Blocking Solution | Vector Laboratories | S-1000-20 | |
| Phosphat-Assay-Kits | Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute | C006-1-1 | |
| Phosphatgepufferte Kochsalzlösung | Servicebio, Wuhan, China | CR10201M | |
| Quantum GX2 microCT-Bildgebungssystem | PerkinElmer | CLS149276 | |
| RANKL polyklonaler Kaninchen-Antikörper | Elabscience Biotechnology Co. Ltd. | E-EL-R3032-96T | |
| Ratte SOST (Sclerostin) ELISA-Kit | Elabscience Biotechnology Co., Ltd. | E-EL-R1405c-96T | |
| Ratte TRACP-5b (Tartratresistente saure Phosphatase 5b) ELISA-Kit | Abcam | ab108667 | |
| Ratte β-CTx (Beta Crosslaps) ELISA-Kit | Elabscience Biotechnology Co., Ltd. | E-EL-R0939c-96T | |
| Sclerostin Kaninchen polyklonaler Antikörper | Beijing Vital River Laboratory Animal Technology Co., Ltd. | SCXK(JING)2016-0006 | |
| Diascanner | Hamamatsu Photonics K.K. | Nano Zoomer-SQ | |
| Sprague Dawley weibliche Ratten | Beijing Vital River Laboratory Animal Technology Co., Ltd. | ZLI-9381 |
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