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Methodenartikel

Östrogenähnliche Wirkung der Bazi-Bushen-Kapsel bei ovariektomierten Ratten

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DOI:

10.3791/64884

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7. April 2023

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In diesem Artikel

Zusammenfassung

Hier wird ein Protokoll vorgestellt, das zeigt, dass die Bazi Bushen Kapsel (BZBS) den RANKL/OPG-Signalweg im ovariektomierten Nagetiermodell durch ihre östrogenähnliche Wirkung regulieren kann.

Zusammenfassung

Ziel dieser Studie ist es, die östrogenähnliche Wirkung der Bazi Bushen Kapsel (BZBS), einer chinesischen pflanzlichen Verbindung, bei ovariektomierten Mäusen zu zeigen. Weibliche Sprague-Dawley-Ratten (SD) wurden nach dem Zufallsprinzip in sechs Gruppen eingeteilt: eine scheinoperierte Gruppe, eine Modellgruppe (OVX), eine Progynova-Gruppe und BZBS-Gruppen (1, 2 und 4 d/kg/d). Eine Ovariektomie wurde bei allen Ratten durchgeführt, mit Ausnahme derjenigen in der scheinoperierten Gruppe. Nach 4-monatiger BZBS-Behandlung wurden Mikro-Computertomographie (Mikro-CT), Hämatoxylin- und Eosin-Färbung (H&E), Immunhistochemie und ELISA-Nachweis (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay) durchgeführt. Infolgedessen zeigten Ratten, die mit BZBS behandelt wurden, im Vergleich zur OVX-Gruppe eine erhöhte Anzahl und Fläche von trabekulären Knochen- und Knochenmarkzellen und eine verringerte Anzahl von Fettzellen. Das Knochenvolumen, die Trabekelzahl und die Trabekeldicke der rechten Tibia nahmen in den Medikationsgruppen zu und der Trabekelraum verringerte sich. Die 17β-Östradiol- und Serumkalziumspiegel in den Medikationsgruppen waren erhöht, aber die Spiegel von Serumphosphor, Sclerostin, β-CTX und TRACP-5b waren erniedrigt. In den Medikationsgruppen waren die RANKL- und Sclerostin-Spiegel gesenkt, während der Osteoprotegerin-Spiegel (OPG) erhöht war. Zusammenfassend lässt sich sagen, dass dieses Protokoll die therapeutischen Wirkungen und potenziellen molekularen Mechanismen chinesischer pflanzlicher Verbindungen bei ovariektomierten Ratten mit einer Vielzahl von Techniken systematisch bewertete.

Einleitung

Postmenopausale Osteoporose (PMOP) ist eine Erkrankung des Skelettsystems, die durch eine unzureichende Eierstockfunktion, vermindertes Östrogen und eine erhöhte Osteoklastenaktivität 1 verursacht wirdund durch eine geringe Knochenmasse, eine mikroarchitektonische Degeneration des Knochengewebes und eine Schädigung der Knochentrabekel gekennzeichnet ist. PMOP neigt zu Frakturen und kann schwerwiegende Auswirkungen auf die Lebensqualität der Patienten haben. Weltweit sind etwa 200 Millionen Menschen von Osteoporose betroffen2; Etwa 40 % der postmenopausalen Frauen leiden an Osteoporose

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Protokoll

Die Tierversuche wurden vom Ausschuss für Tierversuche und Ethik des Hebei Yiling Medical Research Institute genehmigt (Zulassungsnummer: N2020150). Die 36 weiblichen Sprague-Dawley (SD) Ratten (3 Monate alt, 180-200 g schwer) (siehe Materialtabelle) wurden im neuen Arzneimittelbewertungszentrum des Hebei Yiling Medical Research Institute mit normalem Futter und sauberem Wasser gefüttert und 12 Stunden pro Tag in Räumen mit kontrollierten Temperaturen (20-26 °C) und relativer Luftfeuchtigkeit (40%-70%) künstlichem Licht ausgesetzt.

1. Tierversuch

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Ergebnisse

Die Knochenmikrostruktur der Tibia wurde mittels Mikro-CT untersucht
Die Behandlung von ovariektomierten Ratten mit BZBS reduzierte signifikant die OVX-induzierten trabekulären Strukturveränderungen. Wie in den rekonstruierten Mikro-CT-Bildern der rechten Tibia (Abbildung 1A,B) gezeigt, zeigte der trabekuläre Knochen in der OVX-Gruppe im Vergleich zur SHA-Gruppe eine signifikante Abnahme von BMD (Abbildung 1C), BV/TV (

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Diskussion

Nach der Ovariektomie sank der Östrogenspiegel aufgrund der kontinuierlichen Reduzierung des spongiösen Knochens und des erhöhten Knochenumsatzes stark ab. Im Wesentlichen kann eine verminderte Östrogensekretion nach der Menopause zu einem signifikanten Knochenverlust führen18, der bei ovariektomierten Ratten zu einem Ca2+-Verlust führt19,20. Es wurde berichtet, dass die Einnahme von Östrogen di.......

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Offenlegungen

Die Autoren haben nichts offenzulegen.

Danksagungen

Diese Arbeit wurde unterstützt durch das Strategic Consulting Project der Chinese Academy of Engineering: Strategic research on anti-aging effect of Traditional Chinese Medicine (Förderkennzeichen: 2022-XY-45), die Naturwissenschaftliche Stiftung der Provinz Hebei in China (Förderkennzeichen: 2022106065), das W & T Program von Hebei, China (Förderkennzeichen: 22372502D) und das High-level S & T Innovation and Entrepreneurship Talent Project von Shijiazhuang, Hebei, China (Fördernummer: 07202203).

....

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Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien
NameUnternehmenKatalognummerKommentare
10% neutrales gepuffertes FormalinProteintech Group, Inc.23408-1AP-100
17-Beta-Östradiol-ELISA-KitsProteintech Group, Inc.21933-1-AP
3%H2O2ShanDong LIRCON Medical Technology Incorporated Company20221027
Anti-Osteoprotegerin-AntikörperAbcamab203061
Bazibushen KapselnShijiazhuang Yiling Pharmaceutical Co., Ltd.
Biotin Ziege Anti-Kaninchen IgGAbcamab207995
Calcium-Assay-KitsNanjing Jiancheng Bioengineering InstituteC004-2-1
DiaminobenzidinZSGB-BIOZLI-9018
Estradiolvalerat TablettenBayer AG156A
Gene 1580R ZentrifugeGENE Co. Ltd. 
Image-Pro PlusMedia CyberneticsIPP 6.0
Leica DM6000B Mikroskop (vollautomatisches aufrechtes Mikroskopsystem)Leica361715
Normal Goat Serum Blocking SolutionVector LaboratoriesS-1000-20
Phosphat-Assay-KitsNanjing Jiancheng Bioengineering InstituteC006-1-1
Phosphatgepufferte KochsalzlösungServicebio, Wuhan, ChinaCR10201M
Quantum GX2 microCT-BildgebungssystemPerkinElmerCLS149276
RANKL polyklonaler Kaninchen-AntikörperElabscience Biotechnology Co. Ltd.E-EL-R3032-96T
Ratte SOST (Sclerostin) ELISA-KitElabscience Biotechnology Co., Ltd.E-EL-R1405c-96T
Ratte TRACP-5b (Tartratresistente saure Phosphatase 5b) ELISA-KitAbcamab108667
Ratte β-CTx (Beta Crosslaps) ELISA-KitElabscience Biotechnology Co., Ltd.E-EL-R0939c-96T
Sclerostin Kaninchen polyklonaler AntikörperBeijing Vital River Laboratory Animal Technology Co., Ltd.SCXK(JING)2016-0006
DiascannerHamamatsu Photonics K.K.Nano Zoomer-SQ
Sprague Dawley weibliche RattenBeijing Vital River Laboratory Animal Technology Co., Ltd.ZLI-9381
XB2103001GZ422515090077

Referenzen

  1. Zhai, X., et al. Muscone ameliorates ovariectomy-induced bone loss and receptor activator of nuclear factor-κb ligand-induced osteoclastogenesis by suppressing TNF receptor-associated factor 6-mediated signaling pathways. Frontiers in Pharmacology. 11, 348(2020).
  2. Wang, S., et al.

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Nachdrucke und Genehmigungen

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