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Aktuelle Techniken und Modelle zur Bewertung der Entwicklungstoxizität von Umweltschadstoffen

DOI:

10.3791/64981

March 3rd, 2023

In This Article

Abstract

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DISKUTIERTE ARTIKEL:

Ding, J. et al. Verwendung von Alizarinrot-Färbung zum Nachweis von chemisch induziertem Knochenverlust bei Zebrafischlarven. Zeitschrift für visualisierte Experimente. (178), e63251 (2021).

Huang, Y. et al. Verwendung von Immunfluoreszenz zum Nachweis von PM2,5-induzierten DNA-Schäden in Zebrafischembryonenherzen. Zeitschrift für visualisierte Experimente. (168), e62021 (2021).

Jiang, Q. X., Xu, X. H., DeWitt, J. C., Zheng, Y. X. Verwendung von Hühnerembryonen als leistungsfähiges Werkzeug zur Beurteilung von Entwicklungskardiotoxizitäten. Zeitschrift für visualisierte Experimente. (169), e62189 (2021).

Song, Y., Li, R., Li, L., Ouyang, F., Männer, X. Bewertung der Wirkung von Pestiziden auf die Larven der Solitärbienen. Zeitschrift für visualisierte Experimente. (176), e62946 (2021).

Discussion

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In der Entwicklungsphase sind Tiere sehr anfällig für die Auswirkungen von Umweltverschmutzungen. Es hat sich gezeigt, dass die Exposition gegenüber Chemikalien in kritischen Schwangerschaftsphasen zu angeborenen Missbildungen und spontanen Fehlgeburten führt. Daher wäre das Verständnis der Wirkungsweise potenzieller Giftstoffe bei der Vorbeugung oder Behandlung von Spontanaborten oder angeborenen Krankheiten, die durch Umweltschadstoffe verursacht werden, von Vorteil. Aufgrund der Komplexität, des Aufwands und der übermäßigen Kosten, die mit diesen Experimenten verbunden sind, ist es jedoch schwierig, die Mechanismen zu untersuchen, die der Entwicklungstoxizität von Umweltchemikalien mit herkömmlichen Tiermodellen zugrunde liegen. In dieser Methodensammlung haben Autoren aus verschiedenen Forschungsbereichen neuartige Techniken und alternative Modelle eingesetzt, um die Entwicklungstoxizität von Umweltchemikalien zu untersuchen.

Es ist bekannt, dass das Herz eines der frühesten Organe ist, das während der Embryogenese gebildet wird, und dieses Organ ist besonders anfällig für Umwelteinflüsse. Forschungsschätzungen zeigen, dass angeborene Herzfehler für etwa ein Drittel aller bekannten Geburtsfehler verantwortlich sind und die Hauptursache für die Säuglingssterblichkeit sind1. Leider sind traditionelle Tiermodelle entweder zu aufwendig oder unempfindlich, um entwicklungstoxische Effekte im Herzen zu erkennen. Zwei Arbeiten aus dieser Methodensammlung untersuchen die nachteiligen Auswirkungen von Feinstaub in der Umgebung (PM2,5), per- und polyfluorierten Alkylsubstanzen (PFAS), Dieselabgasen (DE) und Nanomaterialien auf die Herzentwicklung anhand von Zebrafisch- und Hühnerembryonen 2,3. Unter Verwendung der Prinzipien der Immunfluoreszenz-Assay-Technik werden 8-Hydroxy-2'-Deoxygenase (8-OHdG), ein Marker für oxidative DNA-Schäden, und H2AX, ein empfindlicher Marker für DNA-Doppelstrangbrüche, im Herzen von Zebrafischembryonen nach Exposition gegenüber extrahierbarem organischem Material (EOM) von PM2,52 konsistent nachgewiesen. In ähnlicher Weise werden auch DNA-Schäden an Kardiomyozyten und die Dicke der rechtsventrikulären Wand in isoliertem Herzgewebe unter Verwendung der gleichen Immunfluoreszenz- und histochemischen Techniken eindeutig nachgewiesen3.

Das Zebrafischmodell kann auch zur Untersuchung der Skelettmorphogenese verwendet werden. Es wurde weithin berichtet, dass die Exposition gegenüber Blei dazu führt, dass sich diese Chemikalie in den gesamten Entwicklungsstadien im Skelett ansammelt, was zu Knochenschäden führt. Ding et al. verwendeten Alizarin Rot, um die Knochenstrukturen zu markieren und zeigten, dass die Bleiexposition die Knochenmineralisierung in Zebrafischlarven signifikant verringerte, was darauf hindeutet, dass die Bleiexposition ein Risikofaktor für Knochenverlust während der Skelettentwicklung ist4.

Pestizide sind bekannt für ihre hohe Persistenz in der Umwelt. Der allgegenwärtige Einsatz von Pestiziden ist ein Risikofaktor für die Häufigkeit und Vielfalt von Bestäukern, die eine wesentliche Rolle für die Ökosystemleistungen der modernen globalen Landwirtschaft spielen. Song et al. stellten eine neuartige Immersionsmethode vor, um die toxischen Wirkungen von Chlorpyrifos, einem sehr beliebten Pestizid, auf die Larven der Solitärbiene Osmia excavata5 zu untersuchen. Sie identifizierten den LD50-Wert für Chlorpyrifos anhand der Larven von O. excavata und fanden heraus, dass die Chlorpyrifos-Exposition die Eklosionsrate dosisabhängig signifikant reduzierte.

Das Adverse Outcome Pathway (AOP)-Framework, das molekulare Ursachen hervorhebt und die Verwendung alternativer Testmodelle erleichtert6, ist ein entscheidender Bestandteil von Toxicology in the 21st Century (Tox21)6. Nach Leist et al. stellt AOP eine Verbindung zwischen einem molekular initiierenden Ereignis (MIE) und einem unerwünschten unerwünschten Ergebnis (AO) durch Schlüsselereignisse (KE) her, wie es durch Schlüsselereignisbeziehungen (KER) definiert ist7. Auf diese Weise kann der AOP-Rahmen die Übersetzung molekularer und mechanistischer Daten aus Tierversuchen in Endpunkte für die Verwendung in Sicherheitsbewertungen erleichtern6. Die Artikel in dieser Methodensammlung bieten eine leistungsfähige Reihe von Techniken und Modellen zur Untersuchung der molekularen Mechanismen, durch die Umweltschadstoffe verschiedene Entwicklungstoxizitäten verursachen. Wir hoffen, dass diese Sammlung bei der Risikobewertung von Umweltschadstoffen von großem Nutzen sein wird.

Disclosures

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Die kommerzielle Verwertung der Forschung des Autors ist durch eine Patentanmeldung (CN111024935A) gedeckt.

Acknowledgements

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Die Forschungsarbeit im Labor des korrespondierenden Autors wird von der National Nature Science Foundation of China (Fördernummern: 81972999, 81870239 und 82171689) und der Priority Academic Program Development of Jiangsu Higher Education Institutions finanziert.

References

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  1. Changing landscape of congenital heart disease. Circulation Research. 120 (6), 908-922 (2017).">Bouma, B. J., Mulder, B. J. Changing landscape of congenital heart disease. Circulation Research. 120 (6), 908-922 (2017).
  2. Using immunofluorescence to detect PM2.5-induced DNA damage in zebrafish embryo hearts. Journal of Visualized Experiments. (168), e62021(2021).">Huang, Y., et al. Using immunofluorescence to detect PM2.5-induced DNA damage in zebrafish embryo hearts. Journal of Visualized Experiments. (168), e62021(2021).
  3. Using chicken embryo as a powerful tool in assessment of developmental cardiotoxicities. Journal of Visualized Experiments. (169), e62189(2021).">Jiang, Q. X., et al. Using chicken embryo as a powerful tool in assessment of developmental cardiotoxicities. Journal of Visualized Experiments. (169), e62189(2021).
  4. Using Alizarin Red staining to detect chemically induced bone loss in zebrafish larvae. Journal of Visualized Experiments. (178), e63251(2021).">Ding, J., et al. Using Alizarin Red staining to detect chemically induced bone loss in zebrafish larvae. Journal of Visualized Experiments. (178), e63251(2021).
  5. Evaluating the effect of pesticides on the larvae of the solitary bees. Journal of Visualized Experiments. (176), e62946(2021).">Song, Y., et al. Evaluating the effect of pesticides on the larvae of the solitary bees. Journal of Visualized Experiments. (176), e62946(2021).
  6. The adverse outcome pathway: A multifaceted framework supporting 21(st) century toxicology. Current Opinion in Toxicology. 9, 1-7 (2018).">Ankley, G. T., Edwards, S. W. The adverse outcome pathway: A multifaceted framework supporting 21(st) century toxicology. Current Opinion in Toxicology. 9, 1-7 (2018).
  7. Adverse outcome pathways: Opportunities, limitations and open questions. Archives of Toxicology. 91 (11), 3477-3505 (2017).">Leist, M., et al. Adverse outcome pathways: Opportunities, limitations and open questions. Archives of Toxicology. 91 (11), 3477-3505 (2017).

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Developmental ToxicityEnvironmental PollutantsAlizarin Red StainingBone LossZebrafish LarvaePM2 5DNA DamageChicken EmbryoDevelopmental CardiotoxicitiesSolitary BeesPesticide EffectImmunofluorescenceJournal Of Visualized Experiments

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