Ein modifiziertes transkranielles Modell für den Verschluss der mittleren Hirnarterie zur Untersuchung von Schlaganfallergebnissen bei gealterten Mäusen

Zusammenfassung

Dieses Protokoll demonstriert ein einzigartiges Mausschlagmodell mit einem mittelgroßen Infarkt und einer ausgezeichneten Überlebensrate. Dieses Modell ermöglicht es präklinischen Schlaganfallforschern, die Dauer der Ischämie zu verlängern, gealterte Mäuse zu verwenden und langfristige funktionelle Ergebnisse zu bewerten.

Zusammenfassung

In der experimentellen Schlaganfallforschung wird der Verschluss der mittleren Hirnarterie (MCAO) mit einem intraluminalen Filament häufig verwendet, um einen ischämischen Schlaganfall bei Mäusen zu modellieren. Das Filament-MCAO-Modell zeigt typischerweise einen massiven Hirninfarkt bei C57Bl/6-Mäusen, der manchmal Hirngewebe in dem Gebiet umfasst, das von der hinteren Hirnarterie versorgt wird, was weitgehend auf eine hohe Inzidenz von posteriore kommunizierenden Arterienatresie zurückzuführen ist. Dieses Phänomen wird als ein wesentlicher Faktor für die hohe Mortalitätsrate angesehen, die bei C57Bl/6-Mäusen während der langfristigen Schlaganfallerholung nach Filament-MCAO beobachtet wurde. Daher nutzen viele Studien zu chronischen Schlaganfällen distale MCAO-Modelle. Diese Modelle erzeugen jedoch in der Regel nur einen Infarkt im Bereich der Großhirnrinde, so dass die Beurteilung neurologischer Defizite nach einem Schlaganfall eine Herausforderung darstellen könnte. In dieser Studie wurde ein modifiziertes transkranielles MCAO-Modell etabliert, bei dem das MCA am Rumpf entweder dauerhaft oder vorübergehend über ein kleines Schädelfenster teilweise verschlossen ist. Da die Okklusionsstelle relativ nahe am Ursprung des MCA liegt, erzeugt dieses Modell Hirnschäden sowohl im Kortex als auch im Striatum. Eine umfangreiche Charakterisierung dieses Modells hat eine hervorragende Langzeitüberlebensrate, auch bei gealterten Mäusen, sowie leicht nachweisbare neurologische Defizite gezeigt. Daher stellt das hier beschriebene MCAO-Mausmodell ein wertvolles Werkzeug für die experimentelle Schlaganfallforschung dar.

Einleitung

Fast 800.000 Menschen erleiden in den USA jedes Jahr einen Schlaganfall, und die meisten dieser Schlaganfälle sind ischämischer Natur¹. Die rechtzeitige Wiederherstellung des zerebralen Blutflusses mit einem Gewebeplasminogenaktivator (tPA) und/oder einer Thrombektomie ist derzeit die wirksamste Behandlung für Schlaganfallpatienten. Die vollständige Wiederherstellung neurologischer Funktionen auf lange Sicht ist jedoch selten ^2,3. Daher ist die Suche nach neuartigen Schlaganfalltherapien, die auf eine funktionelle Verbesserung abzielen, ein intensives Forschungsgebiet, das klinisch rele....

Protokoll

Alle in dieser Arbeit beschriebenen Verfahren werden in Übereinstimmung mit den NIH-Richtlinien für die Pflege und Verwendung von Tieren in der Forschung durchgeführt, und das Protokoll wurde vom Duke Institute Animal Care and Use Committee (IACUC) genehmigt. Junge (8-10 Wochen alt) und ältere (22 Monate alte) männliche C57Bl/6-Mäuse wurden für die vorliegende Studie verwendet. Eine Übersicht über dieses Protokoll ist in Abbildung 1 dargestellt.

1. Chirurgische Vorbereitung

1. Untersuchen Sie die Maus auf grobe Anomalien und Verhaltensdefizite.
   HINWEIS: Vor der Operation ist es wichti....

Ergebnisse

Mit einem direkten Blick unter dem Operationsmikroskop kann visuell bestätigt werden, dass der MCA-Blutfluss während der Ischämie blockiert ist. Unsere vorherige Studie zeigte eine >80%ige Verringerung des Blutflusses im ischämischen Bereich mit einem Laser-Doppler-Monitor⁶. Um Veränderungen des Blutflusses nach MCAO zu bestimmen, kann LSCI verwendet werden, um den ischämischen Insult und die Reperfusion weiter zu bestätigen (Abbildung 1). In A.......

Diskussion

Das erste transkranielle MCA-Okklusionsmodell wurde 1981 bei Ratten etabliert ^11,12 und¹⁹⁸⁹ durch das MCAO-Modell ohne Kraniektomie ersetzt⁴. Der initiale transkranielle MCA-Verschluss hatte ein weites Operationsfeld, so dass der gesamte Jochbogen entfernt und die Muskulatur seitlich gezogen wurde. Das lokale Gewebe war nach der Operation geschwollen, was zu Stress und einer verringerten Nahrungsaufnahme für die Tiere führte. In unserem mo.......

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
0,25 % Bupivacain	Hospira	NDC 0409-1159-18
0,9 % Natriumchlorid	ICU Medical	NDC 0990-7983-03
2,3,5-Triphenyltetrazoliumchlorid (TTC)	Sigma oder ein verfügbarer Anbieter
20 G IV Katheter	BD	381534	20 GA 1,6 IN
30 G Nadel	BD	305106
4-0 Seidennaht	Look	SP116	Schwarz geflochtene Seide
8-0 Naht mit Nadel	Ethilon	2822G
Alkoholtupfer	BD	326895
Anästhesie-Induktionsbox	Jeder geeignete Anbieter		Pexiglass Fabrikat
Elektrische Schleifmaschine	JSDA	JD 700
Hochtemperatur-Kauterschleifenspitze	Bovie	AA03
Isofluran	Covetrus	NDC 11695-6777-2
Laser-Doppler-Perfusionsmonitor	Moor Instruments	moorVMS-LDF1
Gleitmittel Augensalbe	Bausch + Lomb	339081
Maus Rektumsonde	Physitemp	RET-3
Distickstoffmonoxid	Airgas	UN1070
Otoskop	Welchallyn	728	2,5 mm Spekulum Otoskop diente als Laryngoskop zur Visualisierung von Stimmbändern bei Mäusen
Sauerstoff	Airgas	UN1072
Povidon-Jod	CVS	955338
Recovery Box	Brinsea	TLC eco
Rimadyl (Carprofen)	Zoetis	6100701	Injizierbares 50 mg/ml
Nagetierbeatmungsgerät	Kent Scientific	Nagetier Jr.
Temperaturregler	Physitemp	TCAT-2DF
Dreifach antibioric & schmerzlindernd	CVS	NDC 59770-823-56
Vaporizer	RWD	R583S