Techniken zur schnellen Probenahme von sechs wichtigen Organen bei erwachsenen Xenopus

Zusammenfassung

Dieser Artikel stellt einen Leitfaden für die Probenahme von sechs wichtigen und unterschiedlichen Organen bei erwachsenen Xenopus vor, auf die schnell und einfach zugegriffen werden kann: Herzventrikel, Leberlappen, Bauchspeicheldrüse, Fettkörper, paarige Nieren und Haut.

Zusammenfassung

Xenopus ist seit über hundert Jahren ein leistungsfähiger Modellorganismus für das Verständnis der Entwicklung und Krankheit von Wirbeltieren. Während die experimentelle Analyse und die Präparierungstechniken des Embryos gut dokumentiert sind, wurden die Beschreibungen der adulten Xenopus-Strukturen und -Organe sowie die Techniken für die Arbeit mit adulten Embryonen nicht aktualisiert, um den Anforderungen moderner Ansätze wie der quantitativen Proteomik und der Einzelzell-Transkriptomik Rechnung zu tragen. Die zelltyp- und genzentrierte Perspektive erfordert einen Kontrast zu Beobachtungen in embryonalen Stadien und in adulten Geweben. Die Organe der Larve erleiden signifikante Veränderungen in ihrer Gesamtstruktur, Morphologie und anatomischen Lage während des Übergangs von der Larve zum Erwachsenen, vor allem während des massiven Metamorphose-Umbaus. Die Etablierung robuster Standards für die Identifizierung und Dissektion von Organen ist von entscheidender Bedeutung, um sicherzustellen, dass die Datensätze, die aus Studien stammen, die in verschiedenen Labors durchgeführt wurden, konsistent sind. Das vorliegende Protokoll identifiziert sechs der Organe im adulten Xenopus und demonstriert Verfahren zur Dissektion und Probenahme des Herzventrikels, der Leber, des Fettkörpers, der Bauchspeicheldrüse, der paarigen Niere und der Haut des adulten Xenopus. Abhängig von den Konservierungsmethoden können die präparierten Organe für die quantitative Proteomik, Einzelzell-/Kern-Transkriptomik, in situ Hybridisierung, Immunhistochemie, Histologie usw. verwendet werden. Dieses Protokoll zielt darauf ab, die Gewebeentnahme zu standardisieren und Untersuchungen der adulten Organsysteme in mehreren Laboren zu erleichtern.

Einleitung

Obwohl die "digitale Dissektion" von adultem Xenopus" verfügbar ist¹, bleibt die replizierbare Organ- und Gewebeentnahme von adultem Xenopus ohne die detaillierte Anleitung, die für andere adulte Modelle (z. B. Mäuse ^2,3,4) verfügbar ist, eine Herausforderung. Dieser Artikel zielt darauf ab, eine klare Anleitung für eine genaue und replizierbare Organprobenahme von adulten Xenopus zu geben, ähnlich wie sie derzeit für ihre Larven verfügbar ist⁵. Der Schwerpunkt liegt auf der einfachen Vervollständigung....

Protokoll

Alle Versuche wurden in Übereinstimmung mit den Regeln und Vorschriften der Harvard Medical School IACUC (Institutional Animal Care and Use Committee) (IS 00001365_3) durchgeführt. Die repräsentativen Ergebnisse sind sowohl für ein perfundiertes als auch für ein nicht durchblutetes reifes Albino-Männchen Xenopus laevis dargestellt.

1. Experimentelle Vorbereitung

HINWEIS: Wenn vor der Probenahme das Perfusionsprotokoll⁸ befolgt wird, fahren Sie mit Schritt 2.2 fort.

1. Stellen Sie sicher, dass die Forschungseinrichtung die in diesem Protokoll beschriebene E....

Ergebnisse

Unter Verwendung von Abbildung 1 bis Abbildung 20 und unter Befolgung aller Schritte dieses Protokolls wurden der Herzventrikel, der linke Leberlappen, die Bauchspeicheldrüse, die linken Fettkörper, die paarigen Nieren und ein Hautlappen innerhalb einer Stunde nach der Euthanasie sauber herausgeschnitten. Innerhalb dieser Zeit werden die Proben gespült und getrimmt, so dass sie erscheinen, wie in Abbildung 21 gezeigt.

Diskussion

Da dieses Protokoll darauf abzielt, die Frische zu maximieren, können einige Proben unerwünschtes Gewebe enthalten. Zum Beispiel werden der Ductus hepatopankreaticus und einige Mesenterien mit der Bauchspeicheldrüse entnommen, und etwas Peritonealgewebe, Nebennieren und Harnleiter werden immer mit den paarigen Nieren entnommen.  Wenn die Frische keine Rolle spielt, kann mit modifizierten Techniken eine genauere Probenahme erreicht werden.

Das Aussehen und die Lage der Organe sind zwischen Gesc.......

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
5x Lupe mit LED-Licht und Stativ	amazon.com	B08QJ6J8P1	Licht darf keine Hitze erzeugen
Einweg-Transferpipetten	VWR	414004-036
Präparierzange mit feiner Spitze	Fisher Scinetific	08-875
Präparierschere scharfer Piont, gerade 6,5"	VWR	76457-374
Präpariertablett	Fisher Scinetific	14-370-284	Styroporplatten sind eine akzeptable Alternative
Euthanasiebehälter	US Plastic	Artikel  2860	alternative undurchsichtige Behälter akzeptabel
Euthanasie-Behälterdeckel	US Plastic	Artikel  3047
Iridektomie-Schere 6"	VWR	470018-938	Irisschere ist eine akzeptable Alternative
MS-222: Syncain (ehemals Tricain)	Pentair AES	TRS1
PBS 1x	Corning	21-040-CV
Natriumbicarbonat, Pulver, USP	Fisher Scientific	18-606-333
Probenzange, gezahnt	VWR	82027-442
T-Pins zum Präparieren	Fisher Scinetific	S99385

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