Methodenartikel

Schneller Nachweis der Virulenz und Typisierung von Helicobacter pylori mit der Quantenpunktmarkierungstechnologie

DOI:

10.3791/67792

⸱

13. Juni 2025

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1Laboratory Medicine, Guangdong Provincial People's Hospital (Guangdong Academy of Medical Sciences), Southern Medical University

* These authors contributed equally

In diesem Artikel

Zusammenfassung

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Unter den zahlreichen diagnostischen Methoden für Helicobacter pylori kann die Quantenpunkt-Immunfluoreszenz Helicobacter pylori schnell typisieren und nachweisen und bietet so eine Grundlage für klinische Behandlungsentscheidungen. Dieser Artikel bietet eine detaillierte Einführung in den Anwendungswert der Quantenpunkttechnologie bei der Typisierung und Detektion von Helicobacter pylori.

Zusammenfassung

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Wir stellen eine Methode vor, die auf der Quantenpunktmarkierungstechnologie basiert, um die Virulenz von Helicobacter pylori schnell nachzuweisen und eine Typisierung durchzuführen, mit dem Ziel, die Grenzen herkömmlicher diagnostischer Methoden zu überwinden und eine Grundlage für eine personalisierte klinische Behandlung zu schaffen. Es wurde ein Kit nach der Doppel-Antigen-Sandwich-Methode entwickelt. Dies erforderte eine Reihe von akribischen Schritten, darunter die Einrichtung von Pufferreaktionssystemen und die Durchführung von Aktivierungs- und Kopplungsprozessen für Antigen-Antikörper-Reaktionen während der Kit-Vorbereitung. Darüber hinaus gab es spezifische Verfahren für die Probenentnahme, -verarbeitung und -tests, um den Infektionsstatus und die Virulenzart von Helicobacter pylori zu bestimmen. Durch die Etablierung von Datenmodellen für verschiedene Ergebnisse (negativ, Typ II und Typ I) konnte die Wirksamkeit der Quantenpunkt-Technologie bei der Typerkennung verifiziert werden. Bei negativen Proben gab es schwache oder keine signifikanten Signalwerte in relevanten Nachweisbereichen. Bei Typ-II-Proben wurde ein spezifisches Muster positiver und negativer Signalwerte für verschiedene Antikörper beobachtet, und bei Typ-I-Proben wurde ein eindeutiger Satz positiver Signalwerte festgestellt, die den Schlüsselantikörpern entsprechen. Darüber hinaus hat seine Anwendung in Studien im Zusammenhang mit chronischer Gastritis und Magenkrebs seinen Wert als Screening-Indikator gezeigt. Die Quantenpunkt-basierte Methode hat Vorteile wie eine verbesserte Sensitivität und Spezifität im Vergleich zu herkömmlichen diagnostischen Methoden. Es steht jedoch auch vor Herausforderungen, wie z. B. möglichen Auswirkungen durch die Lagerzeit der Proben und relativ hohen Kosten. Nichtsdestotrotz wird erwartet, dass es mit kontinuierlichen technologischen Innovationen in Zukunft eine wichtigere Rolle im biomedizinischen Bereich für den Nachweis von Helicobacter pylori und die Diagnose verwandter Krankheiten spielen wird.

Einleitung

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Helicobacter pylori (H. pylori) ist ein gramnegatives Bakterium, das zwischen der Pylorusschleimhaut und der Submukosa des Magenantrums vorkommt 1,2. Im Jahr 1994 stufte es von der Weltgesundheitsorganisation und der Internationalen Agentur für Krebsforschung (WHO/IARC) als krebserregend der Klasse I ein. Je nachdem, ob sie vakuoläre Zytotoxine A (VacA) und Cytotoxin-verwandte Gene A (CagA) exprimieren, werden sie in zwei Typen unterteilt: Typ I H. pylori Infektion virulenter Stamm: virulenter und schädlicher für Patienten. In engem Zusammenhang mit der Inzidenz von Magen- und Zwölffingerdarmgeschwüren und Magenkrebs handelt es sich bei der Typ-II-Infektion von H. pylori um Stämme mit geringer Virulenz und schwacher Pathogenität, die sich im Allgemeinen als leichte Verdauungsstörungen manifestieren 3,4. Forscher haben herausgefunden, dass die Infektionsrate von Typ I höher ist als die von Typ II, wobei die Infektionsraten von Typ I und Typ II 72,4 % bzw. 27,6 % betragen5. Der schnelle Nachweis von H. pylori-Typen, insbesondere die Unterscheidung zwischen Typ I und Typ II, ist entscheidend für die klinische Behandlung und Prävention von Krankheiten.

Chronische Gastritis, die durch eine H. pylori-Infektion verursacht wird, kann bei infizierten Patienten zu schweren Erkrankungen des Verdauungssystems führen, wie z. B. atrophische Gastritis, Magengeschwüre, Magenadenokarzinom und Mukosa-assoziiertes lymphatisches Gewebe (MALT)-Lymphom 6,7,8. Die Global Burden of Disease Study 2014 prognostiziert, dass ab 2010 jedes Jahr etwa 3,5 Todesfälle pro 100.000 Menschen durch Magengeschwüre verursacht werdenwerden 9. Forschungsberichte ergaben, dass im Jahr 2018 weltweit fast 800.000 neue Fälle von Magenkrebs mit einer H. pylori-Infektion in Verbindung standen10. In den letzten Jahren haben Studien ergeben, dass eine H. pylori-Infektion auch eng mit neurologischen Erkrankungen, Herz-Kreislauf-Erkrankungen, Diabetes usw. zusammenhängt. Die H. pylori-Infektion ist zu einem globalen Problem der öffentlichen Gesundheit geworden. Daher ist der genaue Nachweis einer H. pylori-Infektion wichtig für die Erkennung verwandter Krankheiten. Die Behandlung ist von entscheidender Bedeutung, da der genaue Nachweis von H. pylori zu einem Forschungsschwerpunkt wird.

Da die Infektionsrate von H. pylori in China hoch ist, ist ein rechtzeitiger und genauer Nachweis einer H. pylori-Infektion hilfreich für die Früherkennung und Behandlung und hat eine positive Bedeutung für die Prävention und Behandlung von Magenkrebs. Es gibt verschiedene Methoden zum Nachweis einer H. pylori-Infektion, darunter invasive Methoden wie der Urease-Schnelltest (RUT), die Färbemikroskopie von Gewebeschnitten der Magenschleimhaut, die Endoskopie und der C13- oder C14-Harnstoff-Atemtest. (UBT), H. pylori-Stuhlantigentest (SAT) und andere nicht-invasive Methoden 11,12,13. Diese Nachweismethoden haben gewisse Einschränkungen. Zum Beispiel kann die histologische Untersuchung aufgrund der Qualität und Größe der Biopsieprobe, die an der Biopsiestelle ausgewählt wurde, falsch negative Ergebnisse liefern; Der Atemtest kann durch die kürzliche Einnahme von Antibiotika oder Protonenpumpenhemmern (PPI) und den Einfluss verschiedener Einflussfaktoren beeinflusst werden 11,14,15. Angesichts der Einschränkungen traditioneller Methoden, wie z.B. zeitaufwändiger und unzureichender Sensitivität und Spezifität, hat die Entwicklung von Schnelldiagnosemethoden auf Basis der Quantenpunkt-Immunfluoreszenz (QD-IF) ein großes Anwendungspotenzial im Bereich der Bioassays gezeigt16,17. Bei der QD-IF-Analyse werden Quantenpunkt-Fluoreszenzsonden eingesetzt, um eine spezifische Detektion molekularer Ziele durch spezifische Bindung an molekulare Ziele zu erreichen18,19.

Quantenpunkte sind Halbleiter-Nanopartikel mit einem Radius, der kleiner oder nahe dem Bohr-Exzitonenradius liegt, in der Regel 1 bis 10 nm. Quantenpunkte werden als Fluoreszenzsonden verwendet. Fluoreszenzsignale werden durch Anregung von Quantenpunkten erzeugt, und quantitative Daten werden durch Messung des Geräts gewonnen. Zu seinen Vorteilen gehören ein breites Spektrum an Anregungswellenlängen, schmale Emissionswellenlängen, einstellbare Fluoreszenzgröße, hohe Empfindlichkeit, gute optische Stabilität, lange Fluoreszenzlebensdauer, große Stokes-Verschiebung und hohe Quantenfluoreszenzeffizienz. Quantenpunkte überwinden die Mängel anderer Marker, wie z. B. kurze Lumineszenzzeit, präzise Umgebungsanforderungen, schlechte Wiederholbarkeit, schlechte Stabilität (z. B. Fluoreszenzfarbstoffe), Enzyminaktivierung und geringe Empfindlichkeit. Der Quantenpunkt-Fluoreszenz-Immunoassay kombiniert die Vorteile des Quantenpunkt-Fluoreszenz-Immunoassays und des Biomarker-Fluoreszenz-Immunoassays und bietet die Vorteile der Einfachheit, Schnelligkeit, hohen Spezifität und hohen Sensitivität20,21.

Herkömmliche Diagnoseinstrumente für den Nachweis von H. pylori, einschließlich Bakterienkultur, Harnstoff-Atemtest und serologische Tests, haben ihre eigenen Grenzen. Die Bakterienkultur ist zeitaufwändig und erfordert strenge Laborbedingungen, was aufgrund der anspruchsvollen Wachstumsanforderungen von H. pylori oft zu einer relativ geringen Sensitivität führt. Der Harnstoff-Atemtest kann unter bestimmten Umständen falsch-negative Ergebnisse liefern, wie z. B. bei kürzlichem Einsatz von Antibiotika oder Protonenpumpenhemmern 22,23,24. Serologische Tests können in einigen Fällen nur die vergangene Exposition und nicht den aktuellen Infektionsstatus anzeigen, und es fehlt die Fähigkeit, zwischen verschiedenen Virulenztypen des Erregers zu unterscheiden.

Im Gegensatz dazu hat sich die Quantenpunkt-Immunfluoreszenz-Technologie (QD-IF) als vielversprechende Alternative herausgestellt. QD-IF kombiniert die hervorragenden optischen Eigenschaften von Quantenpunkten, wie z.B. hohe Fluoreszenzintensität, enge Emissionsspektren und gute Photostabilität, mit der Spezifität immunologischer Reaktionen. Dies ermöglicht einen schnellen und sensitiven Nachweis von H. pylori-Antigenen oder Antikörpern in biologischen Proben. Darüber hinaus hat es den einzigartigen Vorteil, dass es in der Lage ist, gleichzeitig den Virulenztyp des infizierenden Stammes zu identifizieren, was mit herkömmlichen Methoden nur schwer erreicht werden kann. Indem sie diese Lücke im Diagnoseprozess schließt, birgt die QD-IF-Technologie ein großes Potenzial, die Art und Weise, wie wir H . pylori-Infektionen diagnostizieren und behandeln, zu revolutionieren und personalisiertere und effektivere medizinische Eingriffe zu ermöglichen.

Insgesamt besteht ein dringender klinischer Bedarf an einer nicht-invasiven, effektiven Diagnosemethode, die die H. pylori-Infektion und ihre Virulenztypen (Typ I und Typ II) gleichzeitig nachweisen kann. Dieser Artikel zielt darauf ab, die QD-IF-Methode zu verwenden, um das Vorhandensein einer H. pylori-Infektion in Gewebeproben zu bewerten und eine schnelle und genaue Methode zum Nachweis von H. pylori-Infektionstypen zu entwickeln. Der schnelle Nachweis einer H. pylori-Infektion und ihrer Virulenztypen ist von großer Bedeutung für die Präzisionsmedizin, die Verbesserung der Behandlungseffekte, die Verringerung des Risikos verwandter Krankheiten und die Vorbeugung von Magenkrebs. Es bietet eine wissenschaftlich-theoretische Grundlage für das klinische Personal, um genaue Methoden zum Nachweis von H. pylori-Infektionen auszuwählen.

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Protokoll

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Diese Studie (KY2025-191-01) wurde in Übereinstimmung mit den Richtlinien der Ethikkommission für Humanforschung des Volkskrankenhauses der Provinz Guangdong (Guangdong Academy of Medical Sciences) der Southern Medical University durchgeführt. Dieser Artikel entspricht dem Antrag auf Befreiung von der Einwilligungserklärung.

HINWEIS: Diese Studie zielt darauf ab, die Quantenpunkttechnologie zu verwenden, um ein Kit für die Diagnose zu entwerfen und zu entwickeln, ob die Blutspezies der Teilnehmer Antikörper gegen Helicobacter pylori Urease (Urease), Vakuoläre Zytotoxin A (VacA)-Antikörper und Cytotoxin-verwandte Gen A (CagA)-Toxin-Antikörper enthalten, um festzustellen, ob H. pylori infiziert ist und ob es sich bei dem infizierten Stamm um Typ I oder Typ II handelt. Dieses entworfene Kit verwendet eine Doppelantigen-Sandwich-Methode zur Messung von Helicobacter pylori Urease-Antikörpern, CagA-Antikörpern und VacA-Antikörpern. Wenn die Testprobe, die die Zielsubstanz enthält, in das Probenpad gegeben wird, fließt sie über einen Siphon durch das Quantenpad und die Membran und bildet einen Festphasen-Antigen-Antikörper-Komplex. Nach der Aufklärung werden die Detektionslinie bzw. die Masse vom Analysator ausgelesen. Der Signalwert der Kontrolllinie wird verwendet, um den negativen und positiven Status des Urase-Antikörpers, des CagA-Antikörpers und des VacA-Antikörpers auf der Grundlage der T/C-Signalwerte jedes der drei Antikörper zu bestimmen. Das Entwurfsdiagramm ist in Abbildung 1 dargestellt.

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Abbildung 1: Schematische Darstellung der Typtestkarte von H. pylori . Die Abbildung zeigt den Aufbau und die Zusammensetzung der Testkarte. Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.

1. Vorbereitung des Kits

  1. Etablierung eines QDs-2-(n-Morphin)-Ethansulfonsäure (MES)-Pufferreaktionssystems
    1. Äquilibrieren Sie die ursprüngliche QD-Lösung auf Raumtemperatur (RT). Aspirieren Sie dann 1000 μl und fügen Sie ein gleiches Volumen von 2x MES-Lösung hinzu (die Endkonzentration von MES betrug 10 mmol/L).
    2. Mischen, schütteln und 30 s bis 3 min beschallen.
  2. Aktivierung
    1. Geben Sie 20 mg/ml 1-Ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimid (EDC)/ N-Hydroxysuccinimid (NHS) in das QDs-MES-Puffersystem im Verhältnis 10:1. Mischen, schütteln und 3 Minuten beschallen.
    2. Die vorbereitete Lösung für 15 min in ein 37 °C heißes Wasserbad geben und 20 min bei 13.000 × g zentrifugieren.
    3. Entfernen Sie den Überstand aus der zentrifugierten Lösung und lösen Sie ihn mit 1x MES-Lösung wieder auf. Blasen Sie die Lösung wiederholt mit einer Pipette auf, schütteln Sie sie, um sie gleichmäßig zu vermischen, und beschallen Sie sie 3 Minuten lang.
    4. Die obige Lösung für 15 min in ein 37 °C heißes Wasserbad geben und 20 min bei 13.000 × g zentrifugieren.
  3. Kupplung
    1. Geben Sie 0,03 mg Urease-Antigen, CagA-Antigen, VacA-Antigen und Ziegen-Anti-Maus-IgG zu 1000 μl der Aktivierungslösung, pipettieren Sie die Spitze wiederholt, schütteln Sie sie und beschallen Sie sie 3 Minuten lang.
    2. Die obige Lösung in ein 37 °C warmes Wasserbad geben und 3 h lang reagieren.
  4. Verschluss und Lagerung
    1. 100 μl Blockierungslösung zugeben (Ergänzende Tabelle 1) und 1 h inkubieren.
    2. Zentrifugieren Sie die verstopfte Lösung bei 13.000 × g für 15 min.
    3. Entfernen Sie den Überstand aus der zentrifugierten Lösung, fügen Sie 750 μl Rekonstitutionslösung hinzu (Ergänzende Tabelle 1), pipettieren Sie wiederholt, schütteln Sie sie und beschallen Sie sie 5 Minuten lang, dann lagern Sie sie bei 4 °C.

2. Vorbereitung der beschichteten Platten

  1. Vorbereitung von Quantenpads
    1. Verdünnen Sie den mit Quantenpunkten markierten H. pylori-Antigenkomplex 1: 5 mit Quantenpunkt-Verdünnungspuffer, um die erforderliche Menge entsprechend der Chargenproduktion herzustellen.
    2. Nehmen Sie das Quantenpad und sprühen Sie mit einem Filmsprüher eine bestimmte Menge des mit Quantenpunkten markierten H. pylori-Antigenkomplexes gleichmäßig auf das Pad und trocknen Sie es 30 Minuten lang bei 37 °C.
  2. Vorbereitung der Membran
    1. Verwenden Sie den Druckpuffer, um die Beschichtungsmaterialien für die Kontrolllinie und die Testlinie zu verdünnen und die erforderliche Menge entsprechend dem Chargenproduktionsvolumen vorzubereiten.
    2. Kleben Sie die Nitrozellulosemembran auf die Polyvinylchlorid (PVC)-Platte, verwenden Sie ein Filmkratz-Goldsprühgerät, um die Materialien der Qualitätskontrolllinie und der Testlinie gleichmäßig auf der Membran zu beschichten, und trocknen Sie sie 24 Stunden lang bei 57 °C.

3. Montage

  1. Kleben Sie die Quanten- und Probenpads nacheinander auf die folienbeschichtete PVC-Platte.

4. In Streifen schneiden

  1. Schneide die zusammengesetzte große Platte mit einem Streifenschneider in Teststreifen.

5. Innenverpackung

  1. Vervollständigen Sie die Verpackung gemäß den Anforderungen an die Zusammensetzung des Kits.
    HINWEIS: Das Kit besteht aus folgenden Komponenten: (i) Testkarte: Es besteht aus einer Teststreifenhülle und einem Teststreifen. Der Teststreifen besteht aus einer PVC-Platte, einem Probenpad, einem Quantenpad (ein mit Quantenpunkten markierter Antigenkomplex; der Komplex enthält Urease-Antigen, CagA-Antigen, VacA-Antigen und Maus-IgG), einer Nitrozellulosemembran (der Nachweisbereich ist mit VacA-Antigen, CagA-Antigen und Urease-Antigen (rekombinantes Antigen eukaryotische Expression) fixiert, und der Qualitätskontrollbereich ist mit Ziegen-Anti-Maus-IgG (Ziegen-Poly-Antikörper)) beschichtet), und saugfähigem Papier. Unterschiedliche Verpackungsspezifikationen haben unterschiedliche Mengen an Testkarten. Für das Reagenz einer Person ist eine Testkarte erforderlich. (ii) SD-Karte: 1 Stück/Karton. Komponenten der Testkarte und der Secure Digital (SD)-Karte aus verschiedenen Chargen von Testkits dürfen nicht vermischt werden.

6. Probenverarbeitung

HINWEIS: Informationen zur Probenentnahme finden Sie in den Betriebsverfahren des National Clinical Laboratory.

  1. Sammeln Sie Blut in einem Trenngelröhrchen. Achten Sie darauf, Hämolyse zu vermeiden.
  2. Testen Sie die getrennte Serumprobe innerhalb von 4 h bei Raumtemperatur (RT). Wenn die Probe nicht rechtzeitig getestet werden kann, ist die Probe 3 Tage lang bei 2-8 °C zu lagern. Für eine langfristige (innerhalb von 1 Jahr) versiegeln und unter -20 °C lagern.
  3. Stellen Sie die Proben wieder auf RT zurück und mischen Sie sie vor der Verwendung gründlich.
    HINWEIS: Gefrorene und aufgetaute Proben müssen vor der Verwendung vollständig aufgetaut werden, und die Anzahl der Gefrier-Auftau-Zyklen sollte fünf nicht überschreiten. Wiederholtes Einfrieren von Proben kann zu einer Verschlechterung des Analyten führen und sollte vermieden werden. Schwere Chylus- und Hämolyseproben beeinflussen den Test ebenfalls und sollten vermieden werden.

7. Ablauf der Prüfung

  1. Nehmen Sie das Reagenzienkit und die Qualitätskontrollmaterialien heraus, um sie auf RT zu bringen.
  2. Probenvorbereitung: Die Vollblutproben bei 1467 g für 10 min zentrifugieren.
  3. Stellen Sie sicher, dass die Chargennummer der SD-Karte mit der des Reagenzien-Kits übereinstimmt. Legen Sie die SD-Karte zur automatischen Kalibrierung in das Gerät ein.
  4. Schalten Sie das Gerät und den Bediencomputer ein. Starten Sie die angegebene Software und wählen Sie das Testmodul aus. Wählen Sie Initialisierungseinstellungen , um das Gerät zu initialisieren und auf den erfolgreichen Abschluss zu warten.
  5. Greifen Sie auf den Reagenzienbereich des Geräts zu und entfernen Sie den Steckplatz für die Testkarte. Öffnen Sie das Reagenzienkit und wählen Sie die gewünschte Anzahl an Testkarten aus.
  6. Öffnen Sie die Folienbeutel der Testkarten und legen Sie diese entsprechend der angegebenen Ausrichtung in den Schlitz. Setzen Sie den Kartensteckplatz wieder in den Reagenzbereich des Instruments ein.
  7. Prüfung der Qualitätskontrolle (QC)
    1. Wählen Sie im Testmodul die Option Manuelle Eingabe aus. Klicken Sie auf Informationseingabe und geben Sie die spezifischen QC-Materialinformationen ein. Klicken Sie auf Generieren. Legen Sie die QC-Materialien in das dafür vorgesehene Probenrack, um die richtige Reihenfolge und Ausrichtung zu gewährleisten.
    2. Klicken Sie auf Test starten , um den QC-Test zu starten. Die Probennadel des Geräts saugt 80 μl der Probe ab und gibt sie vertikal in die Probenvertiefung ab. Das Gerät beginnt nach der Probenabgabe automatisch mit der Zeitmessung. Nach 15 Minuten führt das Gerät die Erkennung durch, liest die Messwerte ab und gibt die Ergebnisse aus.
  8. Beispieltests: Wählen Sie im Testmodul Bidirektionales LIS aus. Legen Sie die zu testenden Proben in das dafür vorgesehene Probenrack, wobei Sie auf die richtige Reihenfolge und Ausrichtung achten sollten. Klicken Sie auf Test starten. Das Gerät saugt auf ähnliche Weise 80 μl Probe von jeder Probe ab und verarbeitet sie identisch mit dem QC-Prozess.
  9. Entfernen Sie nach Abschluss der Tests die gebrauchten Testkarten aus dem Gerät und entsorgen Sie sie als medizinischen Abfall.

8. Qualitätskontrolle

  1. H. pylori-negativ : Prüfen und stellen Sie sicher, dass die Ergebnisse der negativen Referenzprodukte von Helicobacter pylori , nämlich Urease-Antikörper, CagA-Antikörper und VacA-Antikörper, alle negativ sind.
  2. H. pylori Typ II-Infektion : Überprüfen und stellen Sie sicher, dass das Referenzprodukt Helicobacter pylori Typ II, d. h. der Urease-Antikörper, positiv ist und die Ergebnisse des CagA-Antikörpers und des VacA-Antikörpers alle negativ sind.
  3. H. pylori Typ I-Infektion : Überprüfen und stellen Sie sicher, dass das Referenzprodukt Helicobacter pylori Typ I, d. h. der Urease-Antikörper, der CagA-Antikörper und/oder der VacA-Antikörper positiv ist.

9. Ergebnisanalyse

  1. Typ-II-Infektion mit schwachen oder nicht-toxischen Stämmen: Wenn der Urease-Antikörper-Messwert positiv und die CagA-Antikörper- und VacA-Antikörper-Messwerte negativ sind, interpretieren Sie dies als Infektion mit einem schwachen oder nicht toxischen H. pylori-Stamm .
  2. Typ-I-Infektion mit hochpathogenen toxinproduzierenden Stämmen: Wenn der Urease-Antikörper-Messwert positiv ist und entweder der CagA-Antikörper- oder der VacA-Antikörper-Messwert positiv ist oder beide positiv sind, interpretieren Sie dies als Infektion mit einem hochpathogenen H. pylori-Toxin-produzierenden Stamm.
  3. Negativ: Wenn die Messwerte des Urease-Antikörpers, des CagA-Antikörpers und des VacA-Antikörpers alle negativ sind, interpretieren Sie dies als keine Infektion mit H. pylori-Stämmen .
  4. Ungültig: Wenn das Gerät das Ergebnis als ungültig einstuft, prüfen Sie, ob es falsch funktioniert oder das Reagenzienkit ausgefallen ist, und wiederholen Sie das Verfahren.

10. Kalibrierung des Fluoreszenzanalysators

  1. Schalten Sie zuerst den Analysator ein und lassen Sie ihn etwa 15 Minuten lang aufwärmen, um seine Leistung zu stabilisieren. Setzen Sie dann den vom Hersteller bereitgestellten Kalibrierstandard in den Probenhalter ein.
  2. Greifen Sie anschließend auf die Kalibrierungsfunktion auf der Benutzeroberfläche des Analysators zu und starten Sie den Vorgang. Der Analysator erkennt automatisch die Fluoreszenz des Standards und passt seine internen Parameter entsprechend an die voreingestellten Referenzwerte an.
  3. Entfernen Sie danach den Kalibrierstandard und setzen Sie eine leere Probe ein, um zu überprüfen, ob die Messwerte innerhalb des akzeptablen Bereichs liegen.
  4. Die regelmäßige Wiederholung dieser Schritte gemäß dem empfohlenen Zeitplan trägt dazu bei, die Genauigkeit des Analysators für zuverlässige Messungen zu erhalten.

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Ergebnisse

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Abbildung 2 zeigt das Funktionsprinzip des Quantenpunkt-Fluoreszenz-Immunanalysators. Es besteht hauptsächlich aus einer Anregungslichtquelle, einer Empfangslichtquelle, einem photoelektrischen Umwandlungsschaltungsmodul, einer Signalverarbeitungsschaltung, einer AD-Wertumwandlungsschaltung und einem Signalverarbeitungsberechnungsmodul; Die Anregungslichtquelle erzeugt Fluoreszenzmarker. Es absorbiert monochromatisches Licht mit einer ähnlichen Wellenlänge, und das monochromatische Licht sch...

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Diskussion

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Die derzeitigen diagnostischen Verfahren für Helicobacter pylori werden hauptsächlich in zwei Kategorien unterteilt: invasiv und nicht-invasiv26. Methoden wie der Urease-Schnelltest (RUT), die Histologie, die Molekularbiologie und die Bakterienkultur haben Einschränkungen in Bezug auf Invasivität, Sensitivität, Spezifität, Zeitbeschränkungen, Kosten, Geräteanforderungen, Probenhandhabung und Echtzeitüberwachung. Häufiger sind schnelle In-vitro-Diagnos...

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Offenlegungen

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Die Autoren erklären, dass keine Interessenkonflikte bestehen.

Danksagungen

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Diese Forschung wurde durch das Projekt des Guangdong Provincial Basic and Applied Basic Research Fund (Fördernummer: 2021A1515220022, 2022A1515220023) finanziert.

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Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien
NameUnternehmenKatalognummerKommentare
1-(3-Dimethylaminopropyl)-3-ethylcarbodiimidhydrochlorid (EDC)Sigma25952-53-85 g/Flasche
2-(n-Morphin)-Ethansulfonsäure (MES)Sigma145224-94-8100 g/Flasche
ZentrifugeSigma3K15
Fluoreszenz-ImmunanalysatorGuangzhou Labsim Biotech Co.,LtdGuangdong Registrierungsnummer für Medizinprodukte
Helicobacter pylori Typisierungstestkit Chongqing iSIA BIO-Technology Co., LtdNationale Registrierung als Medizinprodukt Nr. 20203400330QDs Immunfluoreszenzmethode
Natriumsalz von N-Hydroxythiosuccinimid (NHS)Sigma106627-54-71 g/Flasche
Provinz 2017221743

Referenzen

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