Dieses Video-und Protokoll zu demonstrieren, wie man ein Glas überdachten kranialen Fenster in Nagetieren zu implantieren. Diese Zubereitungen können bei chronischen in vivo Zwei-Photonen-Imaging des Neokortex über Zeitskalen von Monaten verwendet werden. Es kann auch für andere Arten der Bildgebung, darunter optische Eigensicherheit Signal Bildgebung verwendet werden.
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Methodenartikel
Ein Kraniotomie Chirurgie Verfahren für chronische Brain Imaging
In diesem Artikel
Zusammenfassung
Zusammenfassung
Bildgebende Verfahren gewinnen zunehmend an Bedeutung in der Studie Gehirnfunktion. Unter ihnen hat Zwei-Photonen-Laser-Scanning-Mikroskopie als eine äußerst nützliche Methode, weil damit das Studium der lebenden intakten Gehirn ermöglicht. Bei entsprechender Vorbereitung, ermöglicht diese Technik die Beobachtung der gleichen kortikalen Bereich chronisch, von Minuten bis zu Monaten. In diesem Video zeigen wir eine Vorbereitung für chronische in-vivo-Bildgebung des Gehirns mittels Zwei-Photonen-Mikroskopie. Diese Technik wurde ursprünglich Pionierarbeit von Dr. Karel Svoboda, der jetzt ein Howard Hughes Medical Institute Investigator an Janelia Farm. Die Vorbereitungen wie das hier gezeigte können für die Bildgebung des Neokortex Struktur (z. B. dendritischen und axonalen Dynamik), verwendet werden, um neuronale Aktivität Datensatz mit Calcium-sensitiven Farbstoffen, zu Bild kortikalen Durchblutung Dynamik, oder intrinsische optische Bildgebung. Deep Imaging des Neocortex ist mit optimalen kranialen Fenster Operationen möglich. Unter dem meisten sterilen Bedingungen möglich, Infektionen zu vermeiden, zusammen mit mit äußerster Vorsicht, nicht zu beschädigen die Dura mater während der Operation wird in erfolgreiche und dauerhafte Glas überdachten kranialen Fenster führen.
Protokoll
- Anesthetize Mäuse mit Isofluran (4% für die Induktion, 1.5-2% für Chirurgie) mit IACUC genehmigten Verfahren. Es ist wichtig, dass Schwanz und / oder Zehen drückt verwendet werden, um sicherzustellen, das Tier vollständig betäubt.
- Mit einem Nagetier Trimmer, rasieren die Haare aus dem Nacken bis zu den Augen.
- Platzieren Sie die Maus in einem stereotaktischen Rahmen, über eine Operation Wasser re-zirkulierende Decke. Für eine sichere Befestigung des Kopfes mit Ohr Bars.
- Bewerben Augensalbe, um das Tier das Auge vor dem Austrocknen zu verhindern.
- Verwalten, subkutan, Dexamethason (0,2 mg / Kg) und Carprofen (5 mg / kg) zu verhindern, Schwellung ....
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Diskussion
Wie wir in der Video-und in den ergänzenden Angaben, die kraniale Fenster Vorbereitung, mit dem Einsatz von Zwei-Photonen-Mikroskopie in Kombination gezeigt haben, ist ein sehr mächtiges Werkzeug, um in vivo die Struktur und Funktion des Neokortex zu studieren. Die Technik erfordert hartes Training, um sich mit der Anatomie und der feine chirurgische Eingriffe und Fähigkeiten, die diese Vorbereitung erfordert. Nur makellose Operationen können für chronische Bildgebung verwendet werden. Wenn die Dura stark oder durchbohrt manipuliert wird, s.......
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Materialien
Titanium Bars sind maßgeschneiderte
Referenzen
- Svoboda, K., Denk, W., Kleinfeld, D., Tank, D. W. In vivo dendritic calcium dynamics in neocortical pyramidal neurons. Nature. 85, 161-165 (1997).
- Lendvai, B., Stern, E. A., Chen, B., Svoboda, K. Experience-dependent plasticity of dendritic spines in the developing....
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Nachdrucke und Genehmigungen
