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Methodenartikel

Konstruktion eines Lungenadenokarzinom-Xenotransplantatmodells bei Mäusen und Bewertung der Effizienz der XY-Abkochung über den MAPK-Signalweg

588 Ansichten

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DOI:

10.3791/68023

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25. April 2025

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1College of Traditional Chinese Medicine, Changchun University of Chinese Medicine, 2Respiratory Department, First Affiliated Hospital to Changchun University of Chinese Medicine, 3Key Laboratory of Active Substances and Biological Mechanisms of Ginseng Efficacy, Changchun University of Chinese Medicine, 4Jilin Provincial Key Laboratory of Bio-Macromolecules of Chinese Medicine, Ministry of Education, Changchun University of Chinese Medicine, 5Northeast Asia Research Institute of Traditional Chinese Medicine, Changchun University of Chinese Medicine

In diesem Artikel

Zusammenfassung

Diese Studie zeigt, dass die XY-Abkochung therapeutische Wirkungen gegen das Lungenadenokarzinom ausübt, indem sie den MAPK-Signalweg reguliert.

Zusammenfassung

Das Lungenadenokarzinom nimmt weltweit zu, was die Erforschung und Entwicklung wirksamer Behandlungsmethoden erforderlich macht. In den letzten Jahren wurde zunehmend das therapeutische Potenzial der traditionellen chinesischen Medizin bei Lungenadenokarzinomen, wie z.B. dem XiaoYi (XY)-Sud, erkannt. Der Wirkmechanismus der traditionellen chinesischen Medizin bei der Behandlung des Lungenadenokarzinoms wird weiterhin aufgeklärt. In dieser Studie wurden Tiermodelle verwendet, um die therapeutische Wirkung der XY-Abkochung bei der Behandlung des Lungenadenokarzinoms zu untersuchen. Die chemischen Bestandteile der XY-Dekodierung bei Mäusen wurden getrennt und sowohl im positiven als auch im negativen Ionenmodus mittels UHPLC-QE-MS analysiert. Die Ergebnisse wurden dann durch In-vivo-Experimente validiert, die eine verringerte Tumorgröße, verbesserte pathologische Veränderungen und eine erhöhte Apoptose zeigten. Als Ergebnis wurden fünfzehn Komponenten identifiziert, die nach Verabreichung von XY-Abkochung in das Blut aufgenommen wurden: Stachyose, Quercetin-3-O-beta-glucopyranosyl-7-O-alpha-rhamnopyranosid; Imperialin; Spinosin B; Peimin; Flavon-Basis + 3O, 2MeO, O-Hex; Picropodophyllotoxin; (2S,3R,4S,5S,6R)-2-[(2R,3R,4S,5S,6R)-4,5-dihydroxy-2 [[(3S,5R,8R,10R,12R,13R,14R,17S)-12-hydroxy-17-(2-hydroxy-6-methylhept-5-en-2-yl) 4,4,8,10,14-pentamethyl-2,3,5,6,7,9,11,12,13,15,16,17-dodecahydro-1H cyclopenta[a]phenanthren-3-yl]oxy]-6-(hydroxymethyl)oxan-3-yl]oxy-6-(hydroxymethyl)oxan-3,4,5-triol; Tricin; Ginsenosid Rg1; (20R)-Ginsenosid Rh1; Jujubosid B; Aucubin; Ginsenosid Rg3; und Beta-Elemonsäure. Tierversuche zeigten, dass die XY-Abkochung das Tumorwachstum hemmte, pathologische Veränderungen verbesserte und die Apoptose der Tumorzellen dosisabhängig förderte. Die beteiligten Mechanismen könnten mit der Hochregulierung der p-JNK- und p-P38-Proteinexpression im MAPK-Signalweg und der Herunterregulierung der p-ERK-Proteinexpression im MAPK-Signalweg zusammenhängen. Zusammenfassend lässt sich sagen, dass die XY-Abkochung das Potenzial hat, den MAPK-Signalweg zu regulieren und therapeutische Wirkungen gegen das Lungenadenokarzinom auszuüben.

Einleitung

Die Inzidenz von Lungenkrebs steigt weltweit. Sie macht 18 % aller bösartigen Erkrankungen aus und ist für eine beträchtliche Anzahl krebsbedingter Todesfälle verantwortlich 1,2. Nicht-kleinzelliger Lungenkrebs (NSCLC) ist eine weit verbreitete Form von Lungenkrebs, wobei das Adenokarzinom der wichtigste pathologische Typ3 ist. Aufgrund seiner schleichenden Symptome wird NSCLC oft erst in einem fortgeschrittenen Stadium diagnostiziert und hat eine hohe Sterblichkeitsratevon 4,5. NSCLC-Patienten im Stadium IV haben eine Fünf-Jahres-Überlebensrate von nur 5 %6, während selbst chirurgisch resezierbare NSCLC-Patienten im Frühstadium eine Fünf-Jahres-Überlebensrate von nur 50 % aufweisen7.

Derzeit umfasst die Behandlung des Lungenadenokarzinoms Operationen, Strahlentherapien, Chemotherapien, Immuntherapien und gezielten Therapien. Darüber hinaus wird die Traditionelle Chinesische Medizin (TCM) bei Lungenadenokarzinomen zunehmend anerkannt und geschätzt8. Die TCM hat eine lange Geschichte und wurde bei der Behandlung verschiedener onkologischer Erkrankungen mit wirksamen therapeutischen Ergebnissen eingesetzt 9,10. Es betrachtet den menschlichen Körper als Ganzes, wobei sich das therapeutische Prinzip auf die Wiederherstellung der Bewegung des Qi (Qi bezieht sich auf die Lebensenergie, die die Zirkulation von Blut und Körperflüssigkeiten fördert und zu einer verbesserten Immunität und reduzierten Entzündungen bei NSCLC-Patienten beiträgt) in den inneren Organen konzentriert, um das allgemeine Gleichgewicht wiederherzustellen und das Fortschreiten der Krebserkrankung zu hemmen.

Die TCM behandelt nicht nur onkologische Erkrankungen mit geringer Toxizität, mehreren Angriffspunkten und hoher Effizienz11, sondern erleichtert auch die Reparatur von Schäden, die durch Strahlen- und Chemotherapie verursacht wurden, und verlängert dadurch das Überleben12.

Die Flüssigchromatographie-Massenspektrometrie-Technologie (LC-MS) integriert die Flüssigchromatographie mit der Massenspektrometrie, um die Trennung und Detektion von Komponenten in komplexen Verbindungsgemischenzu erreichen 13. LC-MS bietet eine hohe Auflösung, eine hohe Empfindlichkeit und eine hohe Spezifität und ermöglicht die Trennung und Identifizierung verschiedener chemischer Komponenten in Abkochungen der Traditionellen Chinesischen Medizin (TCM). In Kombination mit der medizinischen Serumchemie, die Wirkstoffe für den Bluteintritt nach oraler Verabreichung trennt und nachweist14,15, ermöglicht die LC-MS die Vorhersage und Analyse potenzieller Wirkstoffwirkmechanismen. Dieser Ansatz hilft beim Verständnis der chemischen Zusammensetzung und der pharmakologischen Komponenten von TCM-Abkochungen und liefert wesentliche Daten für eine eingehende Forschung über ihre pharmakologischen Wirkungen und klinischen Anwendungen, wodurch er in der TCM-Forschung sehr anwendbar ist16,17.

Der MAPK-Signalweg spielt eine entscheidende Rolle bei der Entstehung, Progression, Metastasierung und Invasion von Lungenkrebs, wobei Erk, p38 und JNK wichtige Unterfamilien sind. Es wurde gezeigt, dass TCM-Abkochungen die Expression von Proteinen im MAPK-Signalweg beeinflussen18. Die XiaoYi (XY)-Abkochung wird von der YiGuan-Abkochung abgeleitet und wird zur Behandlung des Lungenadenokarzinoms im First Affiliated Hospital der Changchun University of Chinese Medicine (Abbildung 1) eingesetzt, wobei eine präzise klinische Wirksamkeit nachgewiesen wird. Der therapeutische Mechanismus ist jedoch noch unklar.

In dieser Studie wurde die Ultrahochleistungsflüssigkeitschromatographie in Verbindung mit der Q-Exactive Orbitrap-Massenspektrometrie (UHPLC-QE-MS) eingesetzt, um den möglichen therapeutischen Mechanismus der XY-Abkochung gegen Lungenadenokarzinome aufzuklären, und seine Wirkungen wurden durch in vivo-Studien validiert.

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Protokoll

Alle tierexperimentellen Verfahren wurden von der Tierethikkommission der Universität für Traditionelle Chinesische Medizin Changchun genehmigt (Ethik Nr. 2024008). Sechs Wochen alte männliche Mäuse des Typs C57BL/6 (20 ± 2 g), die unter spezifischen pathogenfreien (SPF) Bedingungen gezüchtet wurden, zeigten typische körperliche Aktivitätsmuster in einer kontrollierten Umgebung mit konstanter Temperatur und Luftfeuchtigkeit. Sie hatten ad libitum Zugang zu Nahrung und Wasser und wurden unter einem 12-stündigen Hell-Dunkel-Zyklus gehalten. Einzelheiten zu den in dieser Studie verwendeten Reagenzien und Geräten sind in der Materialtabelle enthalten.

1. Zubereitung von wässrigem Extrakt aus XY-Abkochung

  1. Panax Ginseng C.A. Mey (Renshen, 15 g), Chinemys reevesii (Gray) (Guiban, 30 g) und Trionyx sinensis Wiegmann (Biejia, 30 g) in einen Abkochtopf geben. Fügen Sie 1000 mL entionisiertes Wasser hinzu und lassen Sie es 30 Minuten bei Raumtemperatur einweichen.
  2. Die drei Kräuter aus Schritt 1.1 1 h kochen. Gleichzeitig Rehmannia glutinosa Libosch (Dihuang, 30 g), Trichosanthes kirilowii Maxim. (Tianhuafen, 30 g), Coix lacryma-jobi L. var. mayuen (römisch.) Stapf (Yiyiren, 20 g), Paeonia lactiflora Pall. (Baishao, 30 g), Boswellia carterii Birdw. (Ruxiang, 7 g), Commiphora myrrha engl. (Moyao, 7 g), Agrimonia pilosa Ledeb. (Xianhecao, 20 g), Alpinia oxyphylla Miq. (Yizhiren, 20 g), Ziziphus jujuba Mühle. var. spinosa (Bunge) (Suanzaoren, 30 g), Melia toosendan Sieb. et Zucc. (Chuanlianzi, 5 g), Fritillaria thunbergii Miq. (Zhebeimu, 15 g), Anemarrhena asphodeloides Bge. (Zhimu, 10 g), Platycodon grandiflorum (Jacq.) (Jiegeng, 10 g), Polygala tenuifolia Willd. (Yuanzhi, 15 g) und Phragmites communis Trin. (Lugen, 30 g) in einem anderen Behälter für 30 min. Nach dem Einweichen in den Abkochtopf aus Schritt 1.1 umfüllen.
  3. Alle 18 Kräuter aus Schritt 1.1 und Schritt 1.2 30 min kochen. Gießen Sie die Kräuterflüssigkeit aus, fügen Sie 1000 ml deionisiertes Wasser hinzu und kochen Sie weitere 30 Minuten lang. Wiederholen Sie diesen Kochvorgang dreimal, um drei Portionen Kräuterflüssigkeit zu erhalten, und mischen Sie sie dann gründlich.
  4. Filtern Sie die gemischte Kräuterflüssigkeit durch ein 400-Mesh-Tuch. Konzentrieren Sie das Filtrat unter reduziertem Druck und überführen Sie dann die konzentrierte Kräuterflüssigkeit zur weiteren Verarbeitung in eine Kühlanlage.
  5. Gießen Sie die konzentrierte Kräuterflüssigkeit in eine Lyophilisationsschale und stellen Sie sie in die Vorgefrierkammer eines Vakuum-Lyophilisators. Sobald das Vorgefrieren abgeschlossen ist, stellen Sie das Tablett in die Sublimationstrockenkammer, um Wasser zu entfernen.
  6. Entfernen Sie die Restfeuchtigkeit bei hoher Temperatur. Pulverisieren Sie den gefriergetrockneten Kräuterextrakt mit einem Pulverisierer, um fein lyophilisiertes XY-Abkochpulver zu erhalten (Abbildung 2).

2. Arzneimittelhaltiges Serumpräparat

  1. Ordnen Sie sechs Wochen alte männliche C57BL/6-Mäuse (20 ± 2 g) nach dem Zufallsprinzip entweder der XiaoYi (XY)-Gruppe oder der Kontrollgruppe zu.
    HINWEIS: Die Mausdosis wurde unter Verwendung des Umrechnungsfaktors von Mensch zu Maus berechnet:
    Äquivalente experimentelle Dosis für Mäuse (g/kg) = {Dosis beim Menschen (g/kg) / Körpergewicht (70 kg)} x 9,1
    Basierend auf dieser Berechnung wurde die Dosierung für Mäuse auf 2,6 g/kg festgelegt.
  2. Wiegen Sie 0,9152 g lyophilisiertes XY-Abkochpulver und lösen Sie es in 3,2 ml destilliertem Wasser auf, um die Arzneimittellösung herzustellen.
    HINWEIS: Mäuse wurden vor der oralen Verabreichung 12 Stunden lang nüchtern.
  3. Verabreichen Sie den Mäusen in der XY-Gruppe den XY-Sud über eine Sonde, während Sie der Kontrollgruppe ein entsprechendes Volumen an deionisiertem Wasser verabreichten.
  4. 2 h nach der oralen Verabreichung die Mäuse mit Pentobarbital-Natrium anästhesieren (nach institutionell anerkannten Protokollen). Entkernen Sie die Augäpfel mit einer Pinzette, um Blutproben zu entnehmen, und euthanasieren Sie die Mäuse dann durch CO2 -Erstickung, gefolgt von einer Gebärmutterhalsluxation gemäß ethischen Richtlinien19.
  5. Lassen Sie die Blutproben 90 Minuten lang bei Raumtemperatur stabilisieren. Bei 3450 x g (4 °C) für 15 min zentrifugieren, um den Überstand aufzufangen.

3. UHPLC-QE-MS-Analyse

  1. 100 mg lyophilisiertes XY-Abkochpulver zu 500 μl Extraktionslösung (Methanol: Wasser = 4:1) geben. Gründlich mischen, beschallen und 1 h in einem Eiswasserbad inkubieren.
  2. Die Mischung 1 h lang bei -40 °C halten, dann 15 min lang bei 13.800 x g (4 °C) zentrifugieren. Filtrieren Sie den Überstand durch eine 0,22 μm große Filtermembran und kombinieren Sie dann 100 μl jedes Überstands, um Proben für die Qualitätskontrolle (QC) zu erstellen.
  3. Nach dem Auftauen der Plasmaproben werden 400 μl der Plasmaprobe der Kontrollgruppe und 400 μl der Plasmaproben der XY-Gruppe entnommen. Geben Sie 40 μl Salzsäure (2 mol/l) in jede Probe. 1 min vortexen und die Mischung 15 min bei 4 °C stehen lassen. Wiederholen Sie diesen Schritt viermal.
  4. 1,6 ml Acetonitril hinzufügen und 5 Minuten lang vortexen. Zentrifugieren bei 13.800 x g für 5 min bei 4 °C. 1.800 μL des Überstands werden einer Stickstofftrocknung unterzogen.
  5. Die getrockneten Proben werden in 150 μl 80 % Methanol mit einem Gehalt von 10 μg/ml des internen Standards rekonstituiert, indem sie 5 Minuten lang vortexen. Zentrifugieren Sie 5 Minuten lang bei 13.800 × g und 4 °C und überführen Sie dann 120 μl des Überstands für die LC-MS-Analyse in ein frisches Glasfläschchen (Abbildung 3).

4. Zellkultur und Tierpräparation

  1. Entkernen Sie 1 ml Lewis-Lungenkarzinomzellen in einer Kulturschale mit Dulbeccos modifiziertem Eagle Medium (DMEM), ergänzt mit 10 % fötalem Rinderserum und 1 % Penicillin/Streptomycin. Inkubieren Sie die Zellen unter kontrollierten Bedingungen bei 37 °C mit 5 % CO2.
  2. Wenn die Zellen eine Konfluenz von 80 % erreichen, passieren Sie sie mit 0,25 % Trypsin. Setzen Sie die Passage fort, bis sich der Zellzustand stabilisiert hat, und stellen Sie dann die Zellkonzentration auf 3 x 106 Zellen/ml ein.
  3. Injizieren Sie 0,1 ml der vorbereiteten Zellsuspension subkutan in die rechte Achselhöhle männlicher C57BL/6-Mäuse, um das Lungenadenokarzinommodell zu etablieren.
    HINWEIS: Tumorgewebe kann 5 Tage nach der Inokulation in der Achselhöhle von Mäusen abgetastet werden.
  4. Nach 5 Tagen teilen Sie die Mäuse nach dem Zufallsprinzip in fünf Gruppen ein (n = 6 pro Gruppe): Modellgruppe (M) - Keine Behandlung; XY-Abkochung Niedrigdosisgruppe (XY-L) - 1,3 g/kg; XY-Abkochung mittlerer Dosis (XY-Z) - 2,6 g/kg; XY-Abkochung Hochdosisgruppe (XY-H) - 5,2 g/kg; Cisplatin-Gruppe (DDP) - Behandelt mit Cisplatin20.
  5. Das XY-Abkochpulver wird in 200 μl destilliertem Wasser in der entsprechenden Dosis aufgelöst und über eine Sonde verabreicht. Die M- und DDP-Gruppen erhalten über die Sonde die gleiche Menge an destilliertem Wasser.
  6. Verabreichen Sie der DDP-Gruppe einmal alle 3 Tage Cisplatin durch intraperitoneale Injektion (3 mg/kg). Injizieren Sie das gleiche Volumen physiologischer Kochsalzlösung in die anderen Gruppen.

5. Pathologische Analyse des Tumorgewebes

  1. Nach 21 Tagen werden alle Mäuse mit CO2 -Erstickung und anschließender Zervixluxation (gemäß den ethischen Richtlinien) eingeschläfert und das Tumorgewebe entfernt21. Messen Sie das Tumorvolumen und -gewicht (Abbildung 4).
  2. Fixieren Sie das herausgeschnittene Tumorgewebe 24 h lang in 4% Paraformaldehyd). Dehydrieren Sie das Gewebe mit abgestuften Ethanollösungen.
  3. Reinigen Sie die dehydrierten Gewebeblöcke mit Xylol und betten Sie sie dann in geschmolzenes Paraffinwachs ein. Lassen Sie das Wachs zu einem Paraffinblock erstarren. Schneiden Sie den Gewebeblock mit einem Mikrotom in 5 μm dicke Scheiben.
  4. Entwachsen Sie die Gewebeabschnitte in Xylol, gefolgt von der Rehydratation in abgestuften Ethanollösungen. Färben Sie die Abschnitte 5 Minuten lang mit Hämatoxylin und spülen Sie sie dann mit entionisiertem Wasser ab.
  5. Die Abschnitte 1 min lang mit 0,5%iger Eosinlösung gegenfärben. Beobachten Sie die gefärbten Schnitte unter einem optischen Mikroskop und nehmen Sie Bilder für die Analyse auf.

6. Immunhistochemische Analyse von Tumorgewebe

  1. Führen Sie die Deparaffinierung und Rehydrierung gemäß den in den Schritten 5.2-5.4 beschriebenen Verfahren durch.
  2. Inkubieren Sie die Schnitte in einem endogenen Peroxidaseblocker bei Raumtemperatur für 15 min. Blockieren Sie die unspezifische Bindung, indem Sie die Abschnitte mit Ziegenserum inkubieren.
  3. Wenden Sie die primären Antikörper an: Ki-67 (1:600) und Caspase-3 (1:100). Die Schnitte werden über Nacht bei 4 °C inkubiert. Mit PBS-Puffer waschen), dann einen Allzweck-Sekundärantikörper (1:500) auftragen und 30 min bei 37 °C inkubieren.
  4. Entwickeln Sie die Farbreaktion durch Zugabe von DAB-Lösung. Färben Sie die Abschnitte mit Hämatoxylinlösung.
  5. Führen Sie die Dehydratisierung, Reinigung und Versiegelung der fleckigen Abschnitte durch. Beobachten Sie die Proteinexpression unter einem optischen Mikroskop und nehmen Sie Bilder für die Analyse auf.

7. Westliche Blot-Analyse

  1. Homogenisieren Sie das Tumorgewebe mit einem Gewebelyser. Extrahieren Sie das Gesamtprotein und bestimmen Sie seine Konzentration mit einem Bicinchoninsäure (BCA)-Assay-Kit (siehe Materialtabelle).
  2. Führen Sie eine Proteinquantifizierung durch, gefolgt von einer SDS-PAGE-Elektrophorese und einem Proteintransfer auf eine Membran.
  3. Inkubieren Sie die Membran über Nacht bei 4 °C mit den Primärantikörpern P38 (1:2000), p-P38 (1:1000), ERK (1:20000), p-ERK (1:500), JNK (1:2000), p-JNK (1:5000), β-Aktin (1:200) (siehe Materialtabelle).
  4. Am nächsten Tag inkubieren Sie die Membran mit Meerrettichperoxidase (HRP)-konjugierten Sekundärantikörpern bei Raumtemperatur für 1,5 h. Erkennen Sie Proteinbanden mit einem ECL-System (Enhanced Chemilumineszenz).
    HINWEIS: Die Intensitäten der Proteinbanden wurden mit der ImageJ-Software quantifiziert.

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Ergebnisse

XY-Pulverlösungs- und Serumproben aus der Kontrollgruppe und der XY-Gruppe wurden mittels UHPLC-QE-MS analysiert, wobei gut getrennte Peaks sichtbar wurden. Die Gesamtionisationsdiagramme für die positiven und negativen Ionenmoden sind in Abbildung 3 dargestellt. Die Zusammensetzung des XY-Suds wurde anhand der Retentionszeit, des Erfassungsmodus und der Massenspektrumfragmente identifiziert. Fünfzehn Bluteintrittskomponenten wurden durch den Vergleich des Se...

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Diskussion

Die Inzidenz von Krebs steigt jährlich und stößt auf erhebliches klinisches und Forschungsinteresse22,23. Neuere Studien haben die Wirksamkeit der Traditionellen Chinesischen Medizin (TCM) bei der Behandlung von Lungenkrebs nachgewiesen 24,25,26. Zum Beispiel hat sich gezeigt, dass die Abkochung von Maimendong die Anzahl und Aktivität vo...

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Offenlegungen

Die Autoren haben nichts offenzulegen.

Danksagungen

Diese Arbeit wurde durch den Wissenschafts- und Technologieentwicklungsplan der Provinz Jilin, Punkt (YDZJ202301ZYTS459) unterstützt.

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Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien
NameUnternehmenKatalognummerKommentare
AcetonitrilCNW Technologies08.05.1975
2-Chlor-L-PhenylalaninShanghai Hengbo Biotechnology Co., Ltd.103616-89-3
AmmoniumhydroxidlösungChina National Pharmaceutical Group Chemisches Reagenz Co., Ltd.#2028
Antikörper-β--AktinAbcamab8228
Anti-Erk1 (pT202/pY204) + Erk2 (pT185/pY187) AntikörperAbcamab4819
Anti-ERK1/ERK2 AntikörperAbcamab184699
Anti-JNK1 (pY185) + JNK2 (pY185) + JNK3 (pY223) AntikörperAbcamab76572
Anti-JNK1/JNK2/JNK3 AntikörperAbcamab208035
Anti-Ki67 AntikörperZellsignaltechnologieGB121141
Anti-p38 (phospho T180) AntikörperAbcamab178867
Anti-p38 alpha/MAPK14 AntikörperAbcamab170099
BCA Proteinkonzentrationsassay KitBoster Biological Technology17E17B46
Rinderserumalbumin (BSA)DAKOBIOFROXX
Breitspektrum-Phosphatase-Inhibitor (100x)Boster Biological TechnologyAR1183
C57bl/6 MäuseLiaoning Changsheng Biotechnology Co., Ltd.SCXK2021-0006
Chromatographische SäuleWasserACQUITY UPLC BEH C18 1.7 μ m2,1 * 100 mm
CisplatinChina National Pharmaceutical Group Chemisches Reagenz Co., Ltd.232120
Citrat (pH 6,0) Antigen-RückgewinnungslösungWuhan Baiqiandu Biotechnology Co., Ltd.B2010
DeckglasJiangsu Shitai Laborgeräte Co., Ltd.10212432C
KryotischWuhan Junjie Electronics Co., Ltd.JB-L5
DAB Chromogenes KitJiangsu Shitai Laborgeräte Co., Ltd.
EntfärbungsschüttlerBeijing Liu Yi Instrument FactoryWD-9405A
DörrgerätWuhan Junjie Electronics Co., Ltd.JJ-12J
TrockenschrankShanghai Huitai Instrument Manufacturing Co., Ltd.DHG-9140A
Dulbeccos modifiziertes Eagle-MediumGibco8121587
EDTA (pH 8,0) Antigen-EntnahmelösungWuhan Baiqiandu Biotechnology Co., Ltd.B2001
EDTA (pH 9,0) Antigen-EntnahmelösungWuhan Baiqiandu Biotechnology Co., Ltd.B2002
Elektrophorese-PufferNCM Biotech20230801
EinbettungsmaschineWuhan Junjie Electronics Co., Ltd.JB-P5
- EosinChina National Pharmaceutical Group Chemisches Reagenz Co., Ltd.
EthanolChina National Pharmaceutical Group Chemisches Reagenz Co., Ltd.
Fötales RinderserumGibco2166090RP
AmeisensäureSIGMA64-18-6
GraphPad Prism SoftwareGraphPad Software, LLCVersion 9.0.0
HämatoxylinChina National Pharmaceutical Group Chemisches Reagenz Co., Ltd.H3136
Hochleistungs-FlüssigkeitschromatographieAgilent1260 Infinity II Prime
Kühlzentrifuge mit hoher GeschwindigkeitThermo Fisher ScientificLegend Micro 17R
Hochauflösende MassenspektrometrieThermo Fisher ScientificQ Exactive Focus
HRP-konjugierte Ziege Anti-MausSeraCare5220-0341
HRP-konjugierter Ziegen-Anti-Kaninchen-SeraCare5220-0336
HRP-konjugierter Ziegen-Anti-Kaninchen/Maus-Universal-SekundärantikörperDAKOK5007
HRP-konjugierter Ziegen-Anti-RatteSeraCare5220-0364
HRP-konjugierter Kaninchen-Anti-Kaninchen-SeraCare5220-0362
SalzsäureChina National Pharmaceutical Group Chemisches Reagenz Co., Ltd.H9892
WasserstoffperoxidChina National Pharmaceutical Group Chemisches Reagenz Co., Ltd.B12555
Überempfindliches ECL-Chemilumineszenz-KitNCM BiotechP10300
ImageJ SoftwareNational Institutes of Healthv1.8.0
BildgebungssystemNikon (Japan)NIKON DS-U3
Lewis-LungenkarzinomzellenChina National Pharmaceutical Group Chemical Reagent Co., Ltd.
Mesh-TuchBaijie100110779650
Metallheizungs-TemperaturkontrollinstrumentBaiwan Electronictechnology Co., Ltd.HG221-X3
MethanolAladdinM116118
MikropipetteDlab Scientific Co., Ltd.KE0003087/KA0056573
ObjektträgerJiangsu Shitai Laborgeräte Co., Ltd.10212432C
MikrotomShanghai Leica Instruments Co., Ltd.RM2016
MikrowellenherdGalanz Mikrowelle Elektrogeräte Co., Ltd.P70D20TL-P4
Neutraler BalsamChina National Pharmaceutical Group Chemisches Reagenz Co., Ltd.
Optisches MikroskopNikon (Japan)Nikon Eclipse CI
OvenShanghai Huitai Instrument Manufacturing Co., Ltd.DHG-9140A
PAGE Gel SchnellvorbereitungskitBiosharpPL566B-5
ParaformaldehydChina National Pharmaceutical Group Chemisches Reagenz Co., Ltd.8.18715
Phosphatgepufferte Kochsalzlösung (1x)Gibco8120485
Vorgefärbter Farbproteinmarker (10-180 kDa)Cywin Innovation (Beijing) Biotechnology Co., Ltd.SW176-02
Proteinladepuffer (5X)Boster Biological TechnologyAR1112
PulverisiererShangzhiqiao Co., Ltd.DFT-100A
PVDF (0,45 μ m)Cywin Innovation (Beijing) Biotechnology Co., Ltd.SW120-01
Schnelle MembrantransferlösungCywin Innovation (Beijing) Biotechnology Co., Ltd.Verifizierter Lieferant - SW171-02
RIPA LysatBoster Biological Technology Co., Ltd.AR0105
TBS-PufferNCM Biotech23HA0102
Gewebeflotations-WorkstationJinhua Kedi Instrument Equipment Co., Ltd., Provinz Zhejiang.KD-P
TransmembranpufferNCM Biotech23CA2000
Trypsin (0,25%, 1x)HyCloneJ210045
Ultraschall-ZellaufschlussgerätNingbo Xinyi Ultraschallgeräte Co., Ltd.JY92-IIDN
Aufrechtes optisches MikroskopNikon (Japan)Nikon Eclipse CI
Vakuum-LyophilisatorLanjing Co., Ltd.HD-LG20D
Vortex-MischerKylin-BellXW-80A
XylolChina National Pharmaceutical Group Chemisches Reagenz Co., Ltd.
2005289Verifizierter Lieferant - 2129544935119002010410004160214736

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