Dieses Protokoll beschreibt die ex-vivo normotherme maschinelle Perfusion einer Rattenniere zur anschließenden Transplantation in eine Empfängerratte.
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Methodenartikel
Normothermic Machine Perfusion der Rattennieren für Transplantationen
* These authors contributed equally
In diesem Artikel
Zusammenfassung
Zusammenfassung
Die normotherme Machine Perfusion (NMP)-Technik ist eine vielversprechende Organerhaltungstechnologie, die eine Ex-vivo-Organbewertungs - und Interventionsplattform bietet. Aufgrund der begrenzten Verfügbarkeit klinisch weggeworfener Organe und der hohen Kosten für Großtiermodelle gilt das Kleintier-NMP-Modell als vielversprechende Alternative für die Forschung. Hier haben wir ein standardisiertes NMP- und Transplantationsprotokoll für Rattennieren etabliert und einen Schritt-für-Schritt-Leitfaden für die Nierenbeschaffung, NMP-Konservierung und -Transplantation bereitgestellt. Die NMP-Details und -parameter wurden aufgezeichnet. Alle Rattenempfänger überlebten mit diesem chirurgischen Eingriff und der NMP-Technik erfolgreich, und die Funktion des Nierentransplantats blieb nach der Transplantation normal. Die Überlebensrate und Graft-Histologie von NMP zeigten keinen signifikanten Unterschied zu der statischen Kaltspeicherung (SCS) am postoperativen Tag 7. Diese neuartige NMP-Strategie in Kleintiermodellen könnte in Zukunft grundlegenden Studien zur Organerhaltung, -bewertung und -intervention zugutekommen. Darüber hinaus bietet dieses Modell eine kosteneffiziente, skalierbare Plattform für präklinische Tests von Therapeutika, bildgebenden Techniken und perfusionsbezogenen Interventionen.
Einleitung
Endstadium der Nierenerkrankung (ESKD) ist eine schnell wachsende Belastung für Gesundheits- und Gesundheitssysteme weltweit 1,2,3. Obwohl Dialyse in den meisten Ländern die vorherrschende Therapie für ESKD ist, bleibt die Nierentransplantation der Goldstandard, die eine bessere Lebensqualität bietet und Überlebens- sowie Prognose verbessert im Vergleich zur Dialyse 1,3,4,5. Der Mangel an Spendernieren schränkt jedo....
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Protokoll
Tierprotokolle wurden vom Ausschuss für Tierpflege und -nutzung des Labortierzentrums der Sun Yat-sen Universität genehmigt (Nr. SYSU-IACUC-2023-000717). Alle Tiere in dieser Studie waren männliche Sprague–Dawley-Ratten im Alter von 7–8 Wochen (250–300 g), Specific Pathogen-Free (SPF) und erfüllten die Standardanforderungen zur Sicherheit von Labortieren (siehe die Liste der Krankheitserreger-Ausschlüsse in Ergänzungstabelle S1). Sie erhielten eine Standardnahrung und wurden in einem krankheitserregerfreien Raum im Labortierzentrum der Sun Yat-sen-Universität untergebracht.
Sterilisieren Sie alle chirurgischen Inst....
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Ergebnisse
Mit der beschriebenen Methode können isolierte Rattennieren mindestens 3 Stunden für ex vivo normotherme Maschinenperfusion geeignet bleiben. Während NMP wird die Perfusionsresistenz der Nieren (Abbildung 3A, der vollständige zugrundeliegende Datensatz von Abbildung 3 und Abbildung 4 , ist in Ergänzungstabelle S6 verfügbar) stabil bei 5,958 ± 1,106 mmHg/(mL/min) gehalten, w.......
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Diskussion
NMP kann die Dauer der Graftischämie verkürzen und die Beurteilung und Behandlung der Graftqualität ex vivo ermöglichen. Es gibt jedoch keinen einheitlichen Standard für das NMP des Rattenmodells. In diesem Artikel haben wir ein Tiermodell für NMP u.......
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Offenlegungen
Die Autoren haben keine Interessenkonflikte, die offengelegt werden müssen.
Danksagungen
Diese Arbeit wurde durch Mittel der National Natural Science Foundation of China (General Program, Fördernummer 82470778) unterstützt; der Nationalen Naturwissenschaftlichen Stiftung Chinas (Projekt der Jugendwissenschaftsstiftung, Zuschuss Nr. 82201961); der Naturwissenschaftlichen Stiftung der Provinz Guangdong (Allgemeines Programm, Zuschussnummer 2024A1515011447); und das Guangdong Provincial Key Laboratory für Organspende und Transplantationsimmunologie (Fördernummer 2023B1212060020); die Sun Yat-sen University – ARM Nierenregeneration und Wiederaufbau gemeinsames Labor (Fördernr. SYSU-50000-20240428-0001).
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Materialien
| Name | Unternehmen | Katalognummer | Kommentare |
|---|---|---|---|
| Alkohol (75 %) | MUSIYAN | JJ-75-1 | |
| Bluttransfusionsapparat | Foshan Youzhan Tech Co., Ltd | YZDW-15-5 | |
| Rinderserum-Albumin (BSA) | Aladdin Scientific Corp. | B265991-100g | |
| Zellsieb (70 & mu; m) | Corning Life Science (Wujiang) Co., Ltd | 352350 | |
| Zentrifugenröhre (1,5 mL) | Corning Life Science (Wujiang) Co., Ltd | MCT-150-C-1 | |
| Zentrifugenröhre (15 mL) | ExCell Bio | CS015-0001 | |
| Wattebausch | Henan PiaoAn Group Co., Ltd | Kleine Größe | |
| Wattestäbchen | Foshan Shunde Kangzheng Sanitary Material Co., Ltd | KZ3-12 | |
| Kreatinin | Shanghai yuanye Bio-Technology Co., Ltd | S20198-100g | |
| Doppelte Rundnadel-Nylonnaht (11-0) | Ningbo Medical Needle Co., Ltd | SYZ-11-0 | |
| Elektronische Waage | SENSSUN | EHA17 | |
| Flüssigkeitsspender | Zhiyu Medical | YZ-00-0231 | |
| Gaze | ZITTAR | C11001-001 | |
| Heizpolster | Guangzhou Dewei Biological Technology Co., Ltd | DK0032 | |
| Heparin-Natriuminjektion (12500 U, 2 mL) | Chengdu Hepatunn Pharmaceutical Co., Ltd | H51021209 | |
| Infrarotthermometer | Deli | DL333380 | |
| Injektionsspritze (1 ml) | Gewinner Medical (Human) Co, Ltd. | ZT-ZS 1ml | |
| Injektionsspritze (10 ml) | Gewinner Medical (Human) Co, Ltd. | ZT-ZS 10ml | |
| Injektionsspritze (20 ml) | Gewinner Medical (Human) Co, Ltd. | ZT-ZS 20ml | |
| Isoflurane | RWD Life Science Co., LTD | R510-22-10 | |
| i-STAT 1 Blutanalysator | Abbott | 04P75-03 (USA) | |
| i-STAT CG4+ Patrone | Abbott | 03P85-25 | |
| i-STAT CHEM8+ Patrone | Abbott | 09P31-25 | |
| Flüssigkeitsverlängerungsrohr | Jiangxi Hongda Medical Equipment Group LTD | ZJ983 | |
| Micro-1 Ratten-Oxygenator | Dongguan Kewei Medical Instrument Co-, Ltd | Micro-MO | |
| Mikropumpe | EDCAPTAIN | SYS-3011 | |
| Nadelfilter (0,22 & mu; m) | Merck millipore | SLGPR33RB | |
| Lösung zur Organerhaltung | Jangtse-Fluss-Pharmakonzern | HCA II | |
| Oxygenator | Owgels | OZ-3-02HWO | |
| Penicillin-Streptomycin (10.000 U/mL) | Thermo Fisher Scientific Inc. | 15140122 | |
| Peristaltische Pumpe | Kamoer Fluid Tech (Shanghai) Co., Ltd. | LLS Plus V2 | |
| Peristaltische Pumpenschlauch | Foshan Youzhan Tech Co., Ltd | LG-1-14 | |
| Petrischale | BKMAM | BKM001 | |
| Drucksensor | Edwards Lifesciences Corporation | JIBPT-A-01-EDW | |
| Drucksensor-Empfänger | Singularitätsmedizin | CB-202309001 | |
| RPMI 1640 (1x, 500 mL) | Corning Life Science (Wujiang) Co., Ltd | R10-040-CV | |
| Kochsalzlösung | YXH APOTHEKE | A1001346 | |
| SD-Ratten | Labortierzentrum der Sun Yat-Sen Universität | NA | |
| Rasierer | Beyotime | FS600 | |
| Einwinkel-Nadel-Nylonnaht (3-0) | Ningbo Medical Needle Co., Ltd | DJZ-3-0 | |
| Einzelne Rundnadel-Nylonnaht (8-0) | Ningbo Medical Needle Co., Ltd | DYZ-8-0 | |
| Kleintier-Anästhesiemaschine | RWD Life Science Co., LTD | R500 | |
| Mehrfach-Organ-Perfusionsmaschine für kleine Tiere | Life Perfusor Medizinische Medizin | PU-100 | Dazu gehören Metallschüssel, Wasserbad, Heizpumpe und Temperatursensor |
| Kleintier-Chirurgie-Set | Beyotime | FS500 | |
| Natriumbicarbonatlösung (NaHCO3, 5 %) | Dongguan Puji Medical Technology Co., Ltd | H20064480 | |
| Steriles Operationsblatt | HengAo-Technologie | SKR-BY-DD0001 | |
| Steriles Wasser | Haiwang-Biografie | H35021140 | |
| Katheter mit geradem Griff (24 G) | Foshan Youzhan Tech Co., Ltd | 20230816-1 | |
| Chirurgisches Operationsmikroskop | Murzider | MSD203 | |
| Band | Minnesota Mining and Manufacturing Co. Ltd | 1527C-0 | |
| Tee-Stecker | Foshan Youzhan Tech Co., Ltd | WGST-10 | |
| Y-Typ inzellierende I.V.-Katheternadel (24 G) | JIANGXI FENGLIN | YZDW-7-5 | |
| Y-Typ-I.V.-Katheternadel (26 G) | JIANGXI FENGLIN | YZDW-7-6 |
Referenzen
- Collins, A. J., et al. Excerpts from the US Renal Data System 2009 Annual Data Report. Am J Kidney Dis. 55 (1 Suppl 1), A6-A7 A1-A420 (2010).
- Skorecki, K., Chertow, G. M., Marsden, P. A., Taal, M. W., Yu, A. S. L. Brenner & Rector's The Kidney. , 10th ed, Elsevier. Philadelphia, PA. (2016).
- Thurlow....
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Nachdrucke und Genehmigungen
