Forschungsartikel

Multimodale Bewertung der schützenden Wirkung von Gentiopicrosid bei CDCA-induzierter HepG2-Zellschädigung

DOI:

10.3791/68320

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25. Juli 2025

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1School of Pharmacy, Chengdu University of Traditional Chinese Medicine, 2TCM Regulating Metabolic Diseases Key Laboratory of Sichuan Province, Hospital of Chengdu University of Traditional Chinese Medicine, 3Internal Medicine of Traditional Chinese Medicine, Traditional Chinese Medicine Hospital of Meishan, 4Institute of High Altitude Multimorbidity/TCM-Integrated High Altitude Medicine Center, Hospital of Chengdu University of TCM, 5Chengdu Tianxing Zhiyuan Biotechnology Co., Ltd.

In diesem Artikel

Zusammenfassung

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Diese Studie zeigte, dass Gentiopicrosid cholestatische Leberschäden behandeln kann, indem es die Produktion und den Stoffwechsel von Gallensäuren und Lipiden kontrolliert und oxidativen Stress und Entzündungsreaktionen verhindert.

Zusammenfassung

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Es wurde gezeigt, dass der primäre Wirkstoff von Swertia chirayita, Gentiopicrosid (GPS), die Leber bei Cholestase schützt. Um den Schutzmechanismus von GPS bei cholestatischen Leberschäden aufzuklären, wurden HepG2-Zellen mit Chenodesoxycholsäure (CDCA) behandelt, um das Cholestasmilieu in vitro zu simulieren, und die CCK-8-Methode wurde verwendet, um die schützende Wirkung von GPS auf HepG2-Zellen zu bestimmen. Mit Hilfe eines biologischen Kits wurden die Gehalte an intrazellulärer TBA, T-CHO, TG, ALP, ALT, AST, GSH, IL-1β, IL-6, TNF-α, SOD und MDA nachgewiesen. Die konfokale Lasermikroskopie wurde verwendet, um das Niveau der ROS zu bestätigen. Die Expression von SHP-2, Tgr5, CYP7A1 und NTCP in HepG2-Zellen wurde mittels Immunfluoreszenz und Western-Blot-Analyse untersucht. Die Autodock-Software wurde dann verwendet, um das molekulare Andocken seiner Hauptwirkstoffe zu überprüfen. Die Ergebnisse zeigten, dass GPS die Schäden, die CDCA an HepG2-Zellen verursachte, signifikant verhinderte. Diese schützende Wirkung wurde möglicherweise durch die Kontrolle der Produktion und des Stoffwechsels von Gallensäuren und Lipiden in der Zelle und die Verhinderung von oxidativem Stress und Entzündungsreaktionen erreicht.

Einleitung

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Der Stoffwechselort des Verdauungssystems des Körpers ist die Leber. Die Gallensekretion ist ein Schlüsselmechanismus im Fettabbauprozess des hepatobiliären Systems. Die Hauptbestandteile der Galle, die Gallensäuren, werden von den Leberzellen freigesetzt und sind entscheidend für die Aufrechterhaltung des Gleichgewichts des Fettstoffwechsels. Sowohl bei gesunden als auch bei kranken Menschen hängen die physiologischen und pathologischen Prozesse der Leber vom Gleichgewicht der freien und konjugierten Gallensäuren in der Leber ab. Wenn dieses Gleichgewicht gestört ist, funktioniert der Gallensäurekreislauf nicht normal, was zu einer intrahepatischen Cholestase und anschließenden Leberschäden führen kann1. Nach bereits durchgeführten Forschungen ist die cholestatische Leberschädigung (CLI) eine Erkrankung, die mit Stoffwechselstörungen, einem Ungleichgewicht der Darmmikrobiota und Leberzellnekrose verbundenist 2. Es wird durch eine Behinderung des Gallenflusses und die Ansammlung von Gallensäuren in den Leberzellen für CLI verursacht. Schwere Fälle von CLI können zu Leberzirrhose, Leberfibrose und Leberversagen führen3. Derzeit ist der Mechanismus, der der CLI zugrunde liegt, noch etwas unklar und komplex, und die Mehrheit der Patienten erhält eine geringe Wirksamkeit der medikamentösen Therapie4 zusammen mit erheblichen Nebenwirkungen5. Infolgedessen ist eines der drängendsten Probleme, mit denen die medizinische Gemeinschaft heute konfrontiert ist, die Suche nach wirksamen CLI-Medikamenten.

Aktuelle Forschungen haben die Bedeutung einiger weniger Kernrezeptoren für den Stoffwechsel von Gallensäurenachgewiesen 6. Unter diesen ist der Gallensäurerezeptor ein wichtiger regulatorischer Rezeptor der Gallensäure, der an BAs binden und die Protein-Tyrosinphosphatase (SHP) aktivieren kann7. Auf der anderen Seite würde eine übermäßige Akkumulation von BAs in Hepatozyten, die zu Cholestase führt, den SHP-Rezeptor negativ hemmen und den CYP7A1-Rezeptor (Cytochrom P450 7A1) aktivieren, was zur Produktion von Gallensäureführt 8. Darüber hinaus blockierte es den G-Protein-gekoppelten Gallensäurerezeptor TGR5 von der Sekretion von BAs und stimulierte den Natriumtaurocholat-Cotransporting-Polypeptide (NTCP)-Rezeptor zum Transport von BAs. Es führt dazu, dass sich Gallensäuren in den Leberzellen ansammeln, was die Leber schädigt9. Folglich könnten zusätzliche Forschungen zu diesem Mechanismus Aufschluss über praktikablere CLI-Behandlungsoptionen geben.

Mit einer langen Geschichte der Verwendung in der Medizin ist Swertia chirayita eine traditionelle chinesische tibetische Medizin. Es gilt als das beste Tida und wird von den Einheimischen häufig zur Behandlung von Gallenblasen- und Lebererkrankungen eingesetzt10. Es wird häufig zur Behandlung von Gallensteinen, Cholezystitis, Zirrhose, Hepatitis und anderen Lebererkrankungen eingesetzt11. Jüngste Forschungen haben gezeigt, dass einige chemische Iridoid-Bestandteile von Swertia sowie seine Wirkstoffe eine gute therapeutische Wirkung auf Lebererkrankungen wie Leberfibrose und akute Leberschäden haben 12,13,14. Die Wirkstoffe von Swertia chirayita lindern Lebererkrankungen, indem sie Entzündungen15 und ihre antioxidativen Eigenschaften16 senken. Unsere vorläufigen Untersuchungen haben gezeigt, dass die tibetische Arzneimittelformel mit Swertia chirayita als Hauptbestandteil eine günstige therapeutische Wirkung auf CLI zeigt, was darauf hindeutet, dass Swertia chirayita Potenzial zur Behandlung von CLIhat 17. Der primäre Wirkstoff, der aus Swertia chirayita extrahiert und gereinigt wird, ist GPS (Gentiopicrosid)18, das eine Reihe von pharmakologischen Wirkungen hat, wie z. B. Leberschutz19, Regulierung des Glukosestoffwechsels20, Verbesserung des Darmmikrobioms21 und Antitumoreigenschaften22. Frühere Forschungen haben gezeigt, dass GPS Leberschäden unter cholestatischen Bedingungen verbessert und die intrahepatische Cholestase verringert, indem es die Expression von Gallensäuretransportern hochreguliert23,24. In ähnlicher Weise haben sowohl in vivo als auch in vitro durchgeführte Forschungen gezeigt, dass GPS Leberschäden verringern kann, indem es den Fettstoffwechsel verbessert, Entzündungen reduziert und oxidativen Stress reduziert25,26.

HepG2-Zellen werden häufig in In-vitro-Studien zu Lebererkrankungen verwendet, da sie eine metabolische Enzymaktivität der Hepatozyten aufweisen27. In der Zwischenzeit können Hepatozyten mehr Galle absondern, wenn sie einer der vier Formen von freien Gallensäuren ausgesetzt sind, zu denen auch CDCA28 gehört. Infolgedessen kann CDCA verwendet werden, um ein Zellmodell für cholestatische Leberschäden zu erstellen und die cholestatische Umgebung in vitro nachzuahmen. Angesichts der Tatsache, dass die CDCA-induzierte Hepatozytenschädigung entscheidend durch oxidativen Stress und Entzündungswege vermittelt wird, und unter Berücksichtigung der dokumentierten antioxidativen und entzündungshemmenden Wirkungen von GPS in anderen hepatischen Kontexten26, stellen wir die Hypothese auf, dass GPS durch Linderung der CDCA-induzierten Zytotoxizität in HepG2-Zellen Schutz vor cholestatischen Leberschäden bieten kann. In dieser Arbeit wurde die schützende Wirkung von GPS auf CLI und ihr molekularer Mechanismus anhand eines Modells der CDCA-induzierten Schädigung von HepG2-Zellen untersucht.

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Protokoll

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Zellkultur und Behandlung
HepG2-Zellen und MEM-Medien wurden von einem kommerziellen Anbieter gekauft. HepG2-Zellen wurden in MEM-Medien gezüchtet, die mit 10 % FBS, 1 % 100 U/ml Penicillin und 100 U/ml Streptomycin bei 37 °C und 5 % CO2 -Atmosphäre ergänzt wurden. Nach der Zelladhäsion wurden die Nährmedien gewechselt. Die Zellen wurden nach 2-3 Tagen im Verhältnis 1:3 kultiviert und im Experiment verwendet, sobald die Zellkultur eine Konfluenz von 80 % erreicht hatte.

Assay zur Zellviabilität
An Tag 1 wurden die Zellen mit 2 x 104 HepG2-Zellen (2 x 105 Zellen/ml, 100 μl pro Well) in einer 96-Well-Platte in sechs Repliken ausgesät29. An Tag 2, nach 24 Stunden der Inokulation, wurden die Zellen 12 h lang mit CDCA in unterschiedlichen Konzentrationen von CDCA (0, 20, 40, 60, 80, 100 μM) behandelt. Die Zellviabilität wurde mit der CCK-8-Methode nachgewiesen. Nach 24 h initialer Zellaussaat wurden die Zellen 24 h lang mit CDCA in unterschiedlichen GPS-Konzentrationen (0, 25, 50, 100, 200, 400 und 800 μM) behandelt. An Tag 3 wurde die Zellviabilität mit der CCK-8-Methode nachgewiesen. An Tag 4 wurden 2 x 104 HepG2-Zellen (2 x 105 Zellen/ml, 100 μl pro Well) in einer 96-Well-Platte in sechs Replikaten für 24 Stunden ausgesät. An Tag 5 werden die Zellen in sechs Gruppen unterteilt: Kontrolle, Modell, Ursodeoxycholsäure (UDCA) und GPS: 25 μM, 50 μM und 100 μM. Mit Ausnahme der Kontrollgruppe wurden allen Gruppen 12 Stunden lang 60 μM CDCA-Lösung zugesetzt. Dann wurden UDCA-Lösung (60 μM) und GPS-Lösung (25 μM, 50 μM und 100 μM) für 24 Stunden zu UDCA bzw. den 3 GPS-Gruppen hinzugefügt. An Tag 6 wurde die Zellviabilität mit der CCK-8-Methode nachgewiesen.

Zytokin-Assay
Laut der berichteten Literatur wurden TNF-α-, IL-6- und IL-1β-Kits verwendet, um den Gehalt an Entzündungsfaktoren in HepG2-Zellen nach verschiedenen Behandlungen nachzuweisen30. Nach 24 Stunden CDCA- oder CDCA+GPS-Intervention entsorgen Sie das Nährmedium und spülen Sie es mit PBS aus. Die Zellsuspension bei 69 x g für 10 min zentrifugieren, den Überstand verwerfen und den Zellniederschlag entnehmen. Geben Sie PBS-Lösung hinzu und homogenisieren Sie sie unter Eiswasserbadbedingungen, um Zellhomogenate herzustellen. Nach einer 10-minütigen Zentrifugation bei 10.005 x g und 4 °C wurde der Überstand entfernt und die BCA-Technik zur Messung des Gesamtproteins im Zellinhalt verwendet. Gemäß den Anweisungen des Herstellers wurden die Spiegel von TNF-α, IL-6 und IL-1β im Zellüberstand mittels ELISA bestimmt. Die Extinktion wurde bei 450 nm mit einem multifunktionalen Mikroplatten-Reader gemessen.

Nachweis von TBA, TG und T-CHO
Die TBA-, TG- und T-CHO-Tests wurden in Übereinstimmung mit den Anweisungen des Kits verwendet, um den Gallensäure- und Lipidstoffwechsel der HepG2-Zellen zu identifizieren31. TBA, TG und T-CHO wurden kommerziell erworben. Nachdem die Zellfällungen in einem Eiswasserbad mit Ultraschall aufgebrochen wurden, wurde das Zellhomogenat durch Zugabe von Lysat RIPA für 30 min hergestellt. Die Extinktion wurde bei 450 nm mit einem multifunktionalen Mikroplatten-Reader gemessen. Nach der Zugabe von BCA-Arbeitslösungen zu jeder Vertiefung und der Homogenisierung der Zellen wurde die Extinktion bei 562 nm mit einem Enzymoleter gemessen, und die Inkubationszeit betrug 30 Minuten. Die Extinktion des Standardprodukts wurde verwendet, um die Standardkurve zu erstellen, und die folgende Formel wurde verwendet, um den Absorptionswert zu erhalten:
TBA-Gehalt (μmol/gprot) = (AProbe -A Leerwert)/(AStandard -A Leerwert)×CKalibrierung/Cpr
T-CHO, TG-Gehalt (mmol/gprot) = (AProbe -A Leerwert)/(AStandard - ALeerwert)×CStandard / Cpr

Beurteilung der Leberfunktion
Die Leberfunktion wurde anhand von ALT, AST und ALP beurteilt. ALT, AST und ALP wurden kommerziell erworben. Nach zwei Runden der PBS-Pufferreinigung an den gesammelten Zellen wurden die Zellen 10 Minuten lang bei 69 x g zentrifugiert, der Überstand entfernt, die Zellen ausgefällt, PBS-Puffer hinzugefügt und das Homogenat durch Ultraschallzerkleinerung in einem Eiswasserbad hergestellt. Anschließend wurden die Test- und Kontrolllöcher gesetzt. Der Operationstisch wurde befolgt, während das Reagenz hinzugefügt wurde, die Lochplatte vorsichtig geschüttelt und gemischt und 15 Minuten lang bei Raumtemperatur gelagert wurde. Der OD-Wert jedes Lochs wurde mit einem Enzymoleter mit einer Wellenlänge von 505 nm bestimmt. Anschließend wurde der absolute OD-Wert in die Normkurve eingetragen und eine zusätzliche quantitative Analyse anhand der Formel durchgeführt.

Bestimmung von SOD-, MDA-, GSH-Aktivitäten
Die SOD-Aktivität, der MDA-Gehalt und der GSH-Gehalt wurden gemäß den Anweisungen des Herstellers bewertet. SOD, MDA und GSH wurden kommerziell erworben. Kurz gesagt, wurde eine Sechs-Well-Platte verwendet, um die Zellen zu impfen. Nach der Behandlung wurden die Zellen gemäß den experimentellen Anweisungen des Kits einer Vorbehandlung (Entnahme und Brechen) unterzogen. Die entsprechenden Arbeitslösungen wurden dann auf die Zelldetektionsplatte gegossen, nachdem Blindlöcher, Normlöcher und Messlöcher gemäß den Arbeitsschritten der Anleitung eingerichtet worden waren. Anschließend werden die Zellen bei der Temperatur und Dauer kultiviert, die in den Anweisungen des Kits angegeben sind. Anschließend wurde ein BCA-Nachweiskit verwendet, um den Proteingehalt zu quantifizieren. Letztendlich wurde die Absorption bei der entsprechenden Wellenlänge bestimmt und eine gründlichere quantitative Analyse des oxidativen Stressindex durchgeführt.

Nachweis von Veränderungen der ROS in HepG2-Zellen mit Hilfe der DCFH-DA-Sonde
Es wurde eine routinemäßige Kultur zur Zellzählung durchgeführt. HepG2-Zellen mit einer Dichte von 1 x 105 Zellen/ml wurden in Glasbodenschalen zu je 1,5 ml inokuliert und nach der oben genannten Methode kultiviert. Nach der Kultivierung wurde das Medium verworfen und die Zellen mit PBS gewaschen. Das DCFH-DA wurde auf eine Konzentration von 1:1000 verdünnt, mit 1,5 mL Verdünnungsmittel pro Vertiefung versetzt und 20 Minuten lang inkubiert. Nach der Inkubation wurden die Zellen 3x mit MEM-Basiskulturlösung gespült. Dann wurden jeder Schale 100 μl Antifade-Eindeckmedium mit DAPI zugesetzt. Ein konfokales Fluoreszenzmikroskop wurde verwendet, um Bilder bei 488 nm für die Anregung und 525 nm für die Emission32 zu betrachten und aufzunehmen.

Immunfluoreszenz-Bildgebung
Die Zellen wurden nach der Inkubation 3x mit PBS-Puffer gewaschen. Nach 30 min Fixierung mit 4% Paraformaldehyd wurden die Zellen mit PBS-Puffer auf einem Rütteltisch gereinigt. Das Verdünnungsmittel wurde hinzugefügt und dann über Nacht bei 4 °C lichtgeschützt gekühlt. Danach wurden die Zellen mit fluoreszierendem Verdünnungsmittel beschichtet und 1 h bei 37 °C lichtgeschützt inkubiert. Nach der Inkubation wurden die Zellen dreimal mit PBS-Puffer gewaschen. Nach einer 30-minütigen Fixierung mit 4% Paraformaldehyd wurden die Zellen mit PBS-Puffer auf einem Rotationsschüttler gespült. Anschließend wurden 150 μl Primärantikörperverdünnungsmittel zugegeben und über Nacht bei 4 °C unter lichtgeschützten Bedingungen inkubiert. Das primäre Antikörperverdünnungsmittel wurde zurückgewonnen, gefolgt von der Zugabe eines ausreichenden Volumens PBS-Puffer und einem Schütteln für 5 Minuten; Dieser Waschvorgang wurde dreimal wiederholt. Jede Schale erhielt dann 150 μl fluoreszierendes Sekundärantikörper-Verdünnungsmittel und wurde bei 37 °C für 1 h in einem lichtgeschützten Inkubator inkubiert. Jedem Gericht wurde eine angemessene Menge PBS-Puffer zugesetzt und auf einem Rotationsschüttler 8 Minuten lang gewaschen, was drei Zyklen lang wiederholt wurde. Schließlich wurden die Zellen 10 Minuten lang mit ausreichend DAPI-Färbelösung bedeckt, mit Antifading-Eindeckmedium eingraviert und unter Verwendung eines hochauflösenden Bildgebungssystems33 abgebildet.

Western-Blot-Analyse
Nach unterschiedlichen Behandlungen wurde das gesamte Protein der HepG2-Zellen mit RIPA-Lysat extrahiert und die Proteinkonzentration mit der BCA-Technik bestimmt. Nach der Isolierung des Zielproteins mit 10% SDS-PAGE wurde es auf eine 0,45 μm PVDF-Membran übertragen. Danach wurde die Membran für 1,5 h bei 25 °C mit 5 % BSA versiegelt. Primäre Antikörper gegen SHP-2 (1:1000), CYP7A1 (1:1000), Tgr5 (1:1000), NTCP (1:1000) und β-Aktin (1:1000) wurden über Nacht bei 4 °C inkubiert. Als nächstes wurde die Membran 2 h lang bei 25 °C mit einem Anti-Kaninchen-Immunglobulin-G-Sekundärantikörper (1:10000) inkubiert, der mit Meerrettichperoxidase konjugiert wurde. Die mit Peroxidase beschichteten Banden wurden dann unter Verwendung einer ultrahochempfindlichen ECL-Chemilumineszenzlösung untersucht, und die Bilder wurden mit einem Bildgebungssystem34 aufgenommen.

Molekulares Andocken
Wie berichtet, wurde der molekulare Andockprozess nach den folgenden Verfahren durchgeführt35. Die Wirkstoffstruktur small molecule.mol2 wurde von der ChemicalBook-Plattform heruntergeladen, und die Ligandenproteinstruktur .sdf wurde von den Plattformen Uniprot und RCSBPDB heruntergeladen. Der Ligand und die Wassermoleküle wurden mit der Pymol-Software entfernt, und das Ligandenprotein wurde zur Hydrierung und Detektion in die AutoDock-Software importiert. Die endgültige Ausgabe erfolgt im PDBQT-Format. Die Analyse der Dockingbox, der RunAutoGrid-Funktion, der RunAutoDock und der AutoDock-Werkzeuge wurde in der AutoDock-Software durchgeführt, und die minimale Bindungsenergie jeder Gruppe von Andockergebnissen wurde eingespart. Die Konformation mit der niedrigsten freien Bindungsenergie jeder Gruppe wurde ausgewählt und ihre Liganden-Rezeptor-Konformation wurde mit der Pymol-Software visualisiert.

Statistische Analyse
Die oben genannten Daten wurden mit GraphPad Prism 9.2 statistisch sortiert, und alle experimentellen Ergebnisse wurden als mittlere ± SD angegeben. Um die Daten zwischen den Gruppen statistisch vergleichen zu können, wurde die One-Way-ANOVA eingesetzt. Die Differenz zwischen den beiden Gruppen wurde als signifikant angesehen, wennp < 0,05 betrug.

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Ergebnisse

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Die Konzentration von CDCA wurde für Experimente auf 0 μM, 20 μM, 40 μM, 60 μM, 80 μM und 100 μM Konzentrationsgradient eingestellt. Wenn die Konzentration von CDCA 60 μM betrug, unterschied sich die Zellaktivität signifikant von der der Kontrollgruppe, und schließlich wurden 60 μM als Konzentration von CDCA verwendet (Abbildung 1A). Die Ergebnisse zeigten, dass es nach einer Inkubation von 24 Stunden nach Verabreichung des Medikaments keinen signifikanten Unterschied in der Zellaktivität zw...

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Diskussion

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CLI ist eine Lebererkrankung, die durch die Behinderung der Gallenbildung, -sekretion oder -ausscheidung verursacht wird. Sie manifestiert sich klinisch als Juckreiz, Osteoporose und entwickelt sich sogar zu Leberfibrose, Zirrhose und anderen Krankheiten, die Leben und Gesundheit ernsthaft gefährden 36,37,38. UDCA gilt als das am häufigsten verwendete Medikament bei der Behandlung von CLI

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Offenlegungen

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Die Autoren haben nichts offenzulegen.

Danksagungen

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Diese Arbeit wird unterstützt von der Natural Science Foundation der Provinz Sichuan (2024NSFSC0697), Joint Innovation Fund Project der Chengdu University of Traditional Chinese Medicine (LH202402015).

Beitrag des Autors:
Caitong Wu: Methodik, formale Analyse, Datenkuration, Verfassen des ursprünglichen Entwurfs sowie Schreiben und Bearbeiten. Yang Xiao: Konzeptualisierung, Untersuchung, Visualisierung und Validierung. Fuhan Fan: Validierung und Bearbeitung. Zhangli Lei, Xianhua Zhou und Xianli Meng: Lektorat und Übersetzung. Yong Zeng, Hou Ya und Peng Shen: Konzeptualisierung, Methodik, Validierung, Untersuchung, Überprüfung und Korrektur des Entwurfs und Supervision.

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Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien
NameUnternehmenKatalognummerKommentare
ALPNanjing Jiancheng Bioengineering InstituteA059-2-2
ALTNanjing Jiancheng Bioengineering InstituteC009-2-1
ASTNanjing Jiancheng Bioengineering InstituteC010-2-1
BCABoster Biological Technology Co., LtdAR0146
CDCAChengdu Medesheng Technology Co., Ltd474-25-9
Zellzählkit-8Boster Biological Technology Co., LtdAR1160-500
Cytochrom P450 7A1 AntikörperAbmart Shanghai Co., Ltd.
DAPIBeyotime BiotechnologyC1005
DMSOBoster Biological Technology Co., LtdPYG0040
Ziege Anti-Kaninchen IgG (H& L)Chengdu Zen-Bioscience Co., Ltd.
Ziege Anti-Kaninchen IgG AF488Abmart Shanghai Co., Ltd.
GPSChengdu Medesheng Technology Co., LtdRP210717
GSHNanjing Jiancheng Bioengineering InstituteA006-2-1
HepG2-ZellenProcell Life Science & Technology Co., LtdCL-0103
HRP Ziege Anti-Kaninchen IgGWuhan   ABklonal  Verifizierter Lieferant - Biotechnology Co., Ltd.AS014
IL-1βElabscience Biotechnology Co., LtdE-EL-H0149c
IL-6Elabscience Biotechnology Co., LtdE-EL-H6156
MDANanjing Jiancheng Bioengineering InstituteA003-1-2
MEM-BasismediumProcell Life Science & Technology Co., Ltd PM150410
PBSBoster Biological Technology Co., LtdPYG0021
Rapid Transfer Puffer (20&fach;)NCM BiotechWB4600
RIPABoster Biological Technology Co., LtdBL651A
ROSBeyotime BiotechnologyS0033S
SHP2 Kaninchen pAbWuhan  ABklonal  Verifizierter Lieferant - Biotechnology Co., Ltd.A12486
SLC10A1 AntikörperAbmart Shanghai Co.,Ltd.
SODNanjing Jiancheng Bioengineering InstituteA001-3-1
TBANanjing Jiancheng Bioengineering InstituteE003-2-1
T-CHONanjing Jiancheng Bioengineering InstituteA111-1-1
TGNanjing Jiancheng Bioengineering InstituteA110-1-1
TGR5 Polyklonaler AntikörperImmunoWay Biotechnologie UnternehmenYT4636
TNF-αElabscience Biotechnology Co., LtdE-EL-H0109c
Trypsin-Lösung (0,25%)Yeasen Biotechnology (Shanghai) Co., Ltd40126ES60
UDCAChengdu Lemetian Medical Technology Co., LtdDSTDX007601
β-Aktin Kaninchen mAbWuhan  ABklonal  Verifizierter Lieferant - Biotechnology Co., Ltd.AC026
TD2612S511202M21012MPU276166S

Referenzen

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