Effiziente Techniken für eine umfassende Probenahme von zugänglichem Gewebe bei adulten Xenopus

Summary

Dies ist der erste Teil eines umfassenden Xenopus-Sampling-Protokolls. Bei den entnommenen Geweben handelt es sich um den Herzventrikel, den arteriellen Stamm, den linken Leberlappen, die Gallenblase, die Lunge, die Bauchspeicheldrüse, die Milz, den Kehlkopf, den Kehlkopf, die Speiseröhre, den Magen, den Darm, die Hoden, die Fettkörper, den Eileiter, die paarigen Nieren, den Ischiasplexus, die Haut, den Thymus und das ganze Auge.

Abstract

Xenopus ist seit langem ein zentraler Modellorganismus für die Erforschung der Entwicklung und Krankheit von Wirbeltieren und bietet tiefe Einblicke in zelluläre Prozesse und Genfunktionen. Trotz der Fülle an Informationen über embryonale Xenopus gibt es nach wie vor eine erhebliche Lücke bei standardisierten Methoden für die Probenahme von adultem Gewebe, insbesondere bei modernen Ansätzen wie der quantitativen Proteomik. Diese Studie stellt ein umfassendes Protokoll für die schnelle, präzise und effiziente Probenahme mehrerer Gewebe bei adulten Xenopus vor. Das Protokoll befasst sich mit den Herausforderungen, die mit den subtilen anatomischen Unterschieden im Vergleich zu anderen Anuren verbunden sind, und gewährleistet die Reproduzierbarkeit auch für diejenigen mit begrenzter Erfahrung in der Froschdissektion. Dieses Protokoll ist für qualitativ hochwertige biochemische Analysen optimiert, indem die Frische der Probe im Vordergrund steht. Wir ermöglichen die schnelle Entnahme von bis zu 18 Geweben innerhalb einer Stunde. Darüber hinaus gelten die Methoden für perfundierte und nicht perfundierte Bedingungen, was Flexibilität für eine Reihe von experimentellen Anforderungen bietet. Diese Arbeit schließt nicht nur eine kritische methodische Lücke für Xenopus laevis und tropicalis , sondern dient auch als wertvolle Ressource für Forscher, die Techniken an ähnliche Amphibienmodelle anpassen und dadurch den Umfang und die Zuverlässigkeit vergleichender biologischer und evolutionärer Studien verbessern.

Introduction

Xenopus bietet einzigartige Vorteile gegenüber Mäusen, Zebrafischen und anderen Modellorganismen bei der Erforschung menschlicher Krankheiten, insbesondere in entwicklungs- und evolutionären Kontexten. Die äußere Embryonalentwicklung und die großen, leicht manipulierbaren Embryonen ermöglichen Echtzeitbeobachtungen und experimentelle Eingriffe (z. B. Gewebetransplantation, Geneditierung), die bei Mäusen, die sich intern entwickeln und invasive Eingriffe erfordern, eine Herausforderung darstellen. Darüber hinaus stellen die dreikammerigen Herz- und Tetrapodengliedmaßen von Xenopus eine direktere evolutionäre Brücke fü....

Protocol

Alle Versuche wurden von der Harvard Medical School IACUC (Institutional Animal Care and Use Committee IS 00001365_3) genehmigt und in Übereinstimmung mit diesen durchgeführt. Wenn das Perfusionsprotokoll¹³ vor der Probenahme befolgt wird, fahren Sie mit Schritt 2.3 fort.

1. Zubereitung (ohne Perfusion)

1. Stellen Sie sicher, dass die Forschungseinrichtung die in diesem Protokoll beschriebene Euthanasietechnik genehmigt hat.
2. Eine Lösung aus 5 g/l MS-222 (Tricain-Methansulfonat) und 5 g/l Natriumbicarbonat herstellen (siehe Materialtabelle). Überprü....

Results

Durch Befolgung aller Schritte dieses Protokolls wurden der Herzventrikel, der arterielle Rumpf, der linke Leberlappen, die Gallenblase, die Lunge, die Bauchspeicheldrüse, die Milz, der Kehlkopf, die Speiseröhre, der Magen, der Darm, die Hoden, die Fettkörper, der Eileiter, die paarigen Nieren, der Ischiasplexus, die Haut, der Thymus und das ganze Auge innerhalb einer Stunde nach der Euthanasie sauber herausgeschnitten (siehe Abbildung 1, Abbildung 2,

Discussion

Das hier vorgestellte Protokoll ist so konzipiert, dass es Anwendern auf verschiedenen Erfahrungsstufen Flexibilität bietet und gleichzeitig die rechtzeitige und effiziente Entnahme von essentiellem Gewebe gewährleistet. Neuen Anwendern wird empfohlen, jeden Schritt des Protokolls wie beschrieben zu befolgen, um eine systematische Gewebeentnahme zu gewährleisten. Erfahrenere Benutzer können sich jedoch dafür entscheiden, bestimmte Schritte zu überspringen und nur das Gewebe zu entnehmen,.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
1x PBS	Corning	21-040-CV
5x Lupe mit LED-Licht und Stativ		amazon.com	B08QJ6J8P1 Licht darf keine Hitze erzeugen
Einweg-Transferpipetten	VWR	414004-036
Präparierzange mit feiner	Spitze Fisher Scientific	08-875
Präparierschere scharfer Piont, gerade 6,5"	VWR	76457-374
Sezierschale	Fisher Scientific	14-370-284	Styroporplatten sind eine akzeptable Alternative
Euthanasie-Behälter	US Plastic	Artikel  2860	alternative undurchsichtige Behälter akzeptabel
Euthanasie-Behälterdeckel	US Plastic	Artikel  3047
Iridektomie-Schere 6"	VWR	470018-938	Irisschere ist eine akzeptable Alternative
MS-222: Syncain (ehemals Tricain)	Pentair AES	TRS1
Rattenzahnzange 5,5 Zoll, Edelstahl	Fisher Scientific	S08100
Natriumbicarbonat, Pulver, USP	Fisher Scientific	18-606-333
Probenzange, gezahnt	VWR	82027-442
T-Stifte zum Präparieren	Fisher Scinetific	S99385