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Forschungsartikel

Die Verwendung von Piper amalago var. amalago als umweltfreundlicher Insektizid-Synergist bei der Behandlung von Aedes aegypti

538 Aufrufe

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DOI:

10.3791/68723

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24. Oktober 2025

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In diesem Artikel

Zusammenfassung

Ethanolische Extrakte aus Piper amalago var. amalago zeigen synergistische Effekte, wenn sie mit Deltamethrin gegen Ae. aegypti verwendet werden. Die nachgewiesene synergistische Aktivität ist das Ergebnis seines Wirkstoffs Piperin, eines Inhibitors von CYPs, von dem bekannt ist, dass er bei Mücken, die eine Resistenz gegen Insektizide zeigen, hochreguliert wird.

Zusammenfassung

Die Resistenz gegen Insektizide stellt eine Herausforderung für den Umgang mit Ae. aegypti dar, dem Hauptüberträger von Dengue-, Chikungunya- und Zika-Viren in der Karibik und Lateinamerika. Die Entwicklung neuartiger Vektormanagementstrategien ist entscheidend, um die Übertragung seiner Krankheiten zu reduzieren. Piper spp., die traditionell wegen ihrer kulinarischen Eigenschaften verwendet werden, haben eine insektizide Wirkung gezeigt. Die Studie untersucht Extrakte aus Piper amalago var. amalago, einer in der Karibik und Lateinamerika beheimateten Sorte, als Insektizidsynergisten, Verbindungen, die für Insekten mäßig giftig sind, aber die Toxizität erhöhen, wenn sie in Kombination mit synthetischen Insektiziden verwendet werden.

Die Toxizität von Deltamethrin bei Feldaufnahmen von Ae. aegypti wurde mit dem CDC-Flaschen-Bioassay bewertet. Nach Bestätigung der Resistenz wurden Ethanol- oder Hexanextrakte aus den oberirdischen Teilen von Piper amalago var. amalago hergestellt. Die Extrakte wurden auf nachfolgende im Labor gezüchtete Ae. aegypti-Generationen angewendet. Von den hergestellten Fraktionen war der Stängel-Ethanol-Extrakt mitLD-50-Werten von 0,007 mg/mg (Pflanzenextrakt/weibliches Ae. aegypti-Körpergewicht ) am wirksamsten. Der Stamm-Ethanol-Extrakt zeigte einen synergistischen Effekt mit Deltamethrin unter Verwendung eines modifizierten CDC-Flaschen-Bioassays. Die Mortalität stieg von 22 % ± 0,42 % mit Deltamethrin allein, bei einer Dosis von 10 μg Wirkstoff in 30 min auf 96 % ± 0,17 % mit der Anwendung von Stamm-Ethanol-Extrakt (LD25 = 2,2 μg/mg), gefolgt von Deltamethrin in der angegebenen Dosis und Zeit. GC-MS-Studien zeigten, dass Piperin die am häufigsten vorkommende Verbindung in den hergestellten Extrakten ist. Die Studie zeigt die Verwendung von Piper amalago var. amalago als wirksamer Synergist gegen Ae. aegypti.

Einleitung

Aedes aegypti ist ein wichtiger anthropophiler Mückenvektor in Lateinamerika und der Karibik (LAC)1. Mehrere Faktoren, darunter der Zugang zu angemessener Versorgung mit sauberem Wasser, die Qualität der öffentlichen Gesundheitsdienste, Veränderungen der Wettermuster, die menschliche Bewegung und der Handel, haben nicht nur die Verbreitung dieses opportunistischen Vektors erleichtert, sondern auch die Verteilung der von der Speziesübertragenen Krankheitserreger 2,3 in der gesamten Region 1,4. Der Vektor legt wahllos Eizellen in feuchtigkeitssammelnden Behältern in und um menschliche Behausungen ab, und ihre Eier sind dürreresistent, was ein Überleben unter rauen Umweltbedingungen ermöglicht5. Ae. aegypti-Mücken sind temperaturangepasste Vektoren, bei denen die Schlupfrate der Eier, die Blutzufuhr und die Virusübertragung mit steigenden Temperaturen zunehmen 6,7,8,9. Ae. aegypti-Mücken sind in der Lage, Flaviviren (Dengue, Zika, West-Nil-Virus, Gelbfieber) und ein Alphavirus (Chikungunya)1 zu übertragen, die auf menschliche Wirte in endemischen Ländern abzielen. Mit Ausnahme von Gelbfieber befinden sich Impfstoffe gegen Erreger, die durch Aedes spp. übertragen werden, noch in der Entwicklungs- oder präklinischen Erprobungsphase oder sind nicht ohne weiteres verfügbar10,11. Die Einführung neuartiger Aedes-übertragener Viren in der Region zwischen 2013 und 2016 sowie die Zunahme der Beobachtungen von Dengue-Fällen seit 2019 12,13,14 haben den Bedarf an einem verbesserten Aedes-Vektormanagement innerhalb der LAC15 erhöht.

Die wichtigsten Bekämpfungsstrategien für Ae. aegypti beinhalten den Einsatz von synthetischen Insektiziden. Kommerzielle synthetische Mittel werden von öffentlichen Gesundheitsbehörden verwendet, um die Populationen von Ae. aegypti zu kontrollieren, um Krankheitsausbrüche zu reduzieren16,17, von Landwirten in der Agrarindustrie zur Bekämpfung von Schädlingen bei Feldfrüchten 16,18,19 und von der allgemeinen Bevölkerung in ihren Häusern 18,20,21 . Diese Chemikalien sind in der Regel unspezifisch und wirken sich aufgrund ihrer Nicht-Selektivität negativ auf die Umwelt aus. Der übermäßige Einsatz dieser Insektizide hat zu einer Entwicklung der Resistenz bei Stechmücken geführt19. Die Insektizidresistenz in diesem Vektor führt zu einem nicht enden wollenden Kreislauf des verstärkten Einsatzes der Insektizide zur Erzielung der Wirksamkeit19, sofern sie nicht unterbrochenwird 22. Die Erforschung neuer und wirksamer Methoden zur Kontrolle der Mückenpopulationen von Aedes aegypti ist wichtig, um die Übertragung ihrer krankheitserregenden Krankheitserreger zu verhindern23,24.

Pflanzen haben Sekundärmetaboliten entwickelt, die entweder giftig für Insekten sind oder vom Fressen abhalten. Somit stellen Pflanzen und ihre Metaboliten möglicherweise wirksame biorationale Chemikalien dar, die neuartige Alternativen zur Behandlung sowohl phytophager als auch hämatophager Insektenvektoren bieten können 23,25,26,27,28,29. Die LAC-Region beherbergt eine große Vielfalt an Pflanzen30, und die Gemeinschaften in der Region verfügen über ein ausgeprägtes Wissen über Pflanzen und ihre heilenden Eigenschaften31. Mehr als 80% der Menschen aus Entwicklungsländern sind auf die Verwendung von Pflanzen angewiesen, um die Kosten der allopathischen Medizin auszugleichen 32,33,34. Es ist bekannt, dass Pflanzen, die routinemäßig in der traditionellen Medizin verwendet werden, einzigartige Sekundärmetaboliten aufweisen, die sowohl für die pharmazeutische35 als auch für die landwirtschaftliche Industrie einen Mehrwert darstellen26,35. Die Artenvielfalt des LAC-Beckens 30,31,36 eignet sich für die Entdeckung einzigartiger pflanzlicher Metaboliten, die Alternativen zu synthetischen chemischen Insektiziden bieten können, die für Menschen und andere Organismen weniger giftig sein können 26. Insektizide auf pflanzlicher Basis können die Abhängigkeit von kommerziellen synthetischen Insektiziden verringern und damit den Selektionsdruck verringern, der mit der Entwicklung von Resistenzen gegen Insektizide bei Mücken verbunden ist.

Zahlreiche Studien haben die insektizide Wirkung von Extrakten aus der Gattung Piper (Piperaceae) nachgewiesen, einer Gattung, die für ihre reiche chemische Vielfalt bekannt ist 23,27,28,31,37,38. Piper amalago L., beheimatet in der LAC, mit drei intraspezifischen Varietäten39, von denen zwei in Jamaika vorkommen, werden traditionell zur Behandlung von Verdauungskrankheiten eingesetzt 31,40,41; Ihr Potenzial als Insektizide und/oder Synergisten von Insektiziden scheint jedoch wenig erforscht zu sein 23,42,43. Der Hexan-Aceton-Wurzelextrakt von Piper amalago var. nigrinodum (C. DC) Yunck., einem jamaikanischen Endemit, lieferte ein neuartiges Amid, 7-(3',4'-Methylendioxyphenyl)-2 E,4-E-Heptadiensäurepyrrolidid, das für die Larven von Ae. aegypti toxisch war42. Die andere Sorte, Piper amalago var. amalago, die in der Karibik, einschließlich Jamaika, und im südtropischen Amerikabeheimatet ist 39, Extrakt aus ätherischen Blattölen, zeigte das Potenzial als biologische Kontrolle, um die Vermehrung von zitrusfressenden Schmetterlingen zu verhindern43. Dieser Blattölextrakt kann Potenzial in der Agrarindustrie haben. Ethanolischer Extrakt aus dem Blatt und dem Stängel von Piper amalago var. amalago war mäßig giftig für im Labor gezüchtete Anopheles gambiae23. Mehrere Verbindungen mit einer Reihe von pharmakologischen Werten wurden aus Pflanzenteilen der Gattung Piper extrahiert, wobei die eluierten Verbindungen in Abhängigkeit von der Polarität des Extraktionslösungsmittels und der Art der Extraktion variieren 41,42,44,45,46,47,48,49. Aufbauend auf aktiven Metaboliten mit insektizider Wirkung, die bereits aus Piper amalagogewonnen wurden 27,28,50, setzen wir die Erforschung der insektiziden Wirkung von Piper amalago var. amalago fort. In dieser Studie wurden die Wirkungen von Ethanol- und Hexanextrakten von Piper amalago var. amalago als Insektizid und Synergist von Deltamethrin gegen Ae. aegypti sowie der mögliche Wirkmechanismus untersucht.

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Protokoll

Zubereitung von Pflanzenextrakten
Ein erstes Exemplar von Piper amalago var. amalago wurde im Februar 2018 gesammelt und über einen Zeitraum von 72 Stunden an der Luft trocknen gelassen. Das Exemplar wurde von dem Botaniker und dem Herbariumskurator identifiziert. Das Exemplar wurde unter den Gutscheinnummern 36616 und 36617 montiert und im Herbarium der University of the West Indies in Mona, Jamaika, deponiert. Nachfolgende Pflanzenproben wurden entnommen, um Ethanol- oder Hexanextrakte herzustellen. Die Extraktionen wurden wie folgt durchgeführt: Die getrockneten Blätter, Stängel sowie Blätter und Stängel wurden pulverisiert und dann 72 Stunden lang in 350 ml Ethanol oder Hexan in analytischer Qualität getaucht. Nach Ablauf der 72 Stunden wurde jeder Extrakt mit einem mit 90 mm dickem Filterpapier ausgekleideten Büchner-Trichter mit einer angebrachten Vakuumpumpe abgesaugt, um die Pflanzenpartikel vom Extrakt zu trennen. Der Extrakt wurde dann durch Rotationsverdampfung konzentriert, dekantiert und unter einen Abzug gelegt, um überschüssiges Lösungsmittelzu entfernen 23. Die endgültige Masse jedes Extrakts wurde erhalten. Um eine mögliche Oxidation der Extrakte zu verhindern, wurde routinemäßig Pflanzenmaterial gesammelt und extrahiert.

Mückenzucht
Ae. aegypti-Larven und -Puppen wurden zunächst im September 2019 von Mückenbrutstätten in Gemeinden in den Gemeinden Kingston und St. Andrew (KSA), Jamaica51, gesammelt, und nachfolgende Generationen (F1 - F12) wurden aufgezogen. Die Mücken wurden in einem Inkubator bei einer konstanten Temperatur von 27 ± 2 °C und 70 % ± 10 % Luftfeuchtigkeit gehalten. New Orleans (NO) Ae. aegypti-Stämme wurden als Kontrollstamm für alle Experimente verwendet. Routinemäßig wurden die Larven in Schalen gehalten und bis zur Verpuppung mit Koi-Pellets gefüttert. Die Puppen wurden entnommen und in Becher in Insektenaufzuchtkäfigen pro Stamm umgesiedelt. Erwachsene Mücken erhielten 10 % Saccharose ad libitum. Nachfolgende Mückensammlungen wurden durchgeführt, um ihre Populationen nahe an der von Feldmücken zu halten.

Prüfung der Insektizidresistenz (IR)
Die Anfälligkeit des KSA-Stammes gegenüber Deltamethrin wurde mit dem Flaschentest 52,53,54 der Centers for Disease Control and Prevention (CDC) bewertet. Flaschen-Bioassays wurden an erwachsenen Weibchen im Alter von 3-5 Tagen durchgeführt. Erwachsene, die nicht mit Blut gefüttert wurden (n = 20-25), wurden mit einem Aspirator, der durch Absaugung von der Inhalation angetrieben wurde, aus ihrem Käfig auf 250-ml-Flaschen übertragen, die mit Deltamethrin in der CDC-diagnostischen Dosis von 10 μg/Flasche vorbeschichtet waren. Die Kontrollflaschen wurden mit Aceton vorbeschichtet. Die Mortalität wurde alle 15 min bis zu 2 h53,54 aufgezeichnet. Mücken galten als tot, wenn sie nicht stehen konnten53,54. Das Experiment wurde dreimal wiederholt. Die Testmücken wurden nach der CDC-Richtlinie53,54 als anfällig oder resistent eingestuft.

Insektizider Assay - Topische Anwendung
Jeder vorbereitete Pflanzenextrakt wurde in Ethanol resuspendiert, um eine anfängliche Stammlösung (1 mg/μl) zu erhalten, und weiter seriell (0-0,25 mg/μl) mit Ethanol verdünnt. Der resuspendierte Extrakt wurde topisch auf den Thorax von 3-5 Tage alten, nicht blutgefütterten adulten weiblichen Mücken (n = 10) nach den zuvor veröffentlichten Methodenaufgetragen 23,24,55. Kurz gesagt, die weiblichen Mücken wurden mit einem Inhalationsaspirator aus ihrem Käfig in Becher umgesiedelt und auf Eis betäubt/niedergeschlagen. Der resuspendierte Extrakt von 0,2 μl wurde mit einer 10-μl-Spritze der Serie 700, die an einem Repeating-Dispenser befestigt war, auf den dorsalen Thorax aufgetragen. Für die Kontrollgruppe wurde Ethanol, 0,2 μl, topisch aufgetragen. Nach jeder Behandlungsexposition wurden die Mücken in Pappbecher umgefüllt und mit 10%iger Saccharoselösung gefüttert. Veränderungen des Fluges oder des Gangs der Mücken, falls vorhanden, wurden in den ersten 5 Stunden nach der ersten Exposition festgestellt. Die Mortalität wurde nach 24 Stunden unter normalen insektarischen Bedingungen gemessen. Jede Assay-Konzentration wurde in dreifacher Ausfertigung durchgeführt. Das Experiment wurde zweimal durchgeführt.

Synergistische Assays
Um das Potenzial des Extrakts als Synergist zu bestimmen, wurde ein modifizierter Flaschenbioassay mit einem Synergisten verwendet23. Nicht mit Blut gefütterte weibliche Mücken, 3-5 Tage alt (n = 20-25), wurden topisch Pflanzenextrakt in der Letaldosis von 25% (LD25) Konzentration ausgesetzt, während sie betäubt/niedergeschlagen wurden, wie oben beschrieben. Die Mücken wurden in einen Netzbecher umgefüllt und 1 Stunde lang beobachtet. Nach 1 h aktivem Fliegen wurden die Mücken mit einem Aspirator, der durch Absaugung aus der Inhalation55 angetrieben wurde, vorsichtig aus den Bechern entfernt und dann in Flaschen überführt, die mit 10 μg Deltamethrin vorbeschichtet waren (insgesamt beschichtete Flaschen = 4). Ethanol wurde als Kontrollmittel für die topische Anwendung verwendet. Die Kontrollflaschen wurden mit Aceton beschichtet. Die Mortalitätsrate wurde alle 15 Minuten bis zu 2 Stunden oder bis zum Erreichen einer 100%igen Mortalität beobachtet. Die Wirksamkeit des Extrakts als Synergist wurde mit der eines bekannten Synergisten, Piperonylbutoxid (PBO), verglichen, wie zuvor vermutetwurde 53,54. Zunächst wurden die Mücken 1 h lang Flaschen ausgesetzt, die mit 400 μg PBO behandelt wurden. Nach der 1-stündigen Exposition wurden die Mücken dann in Netzbecher umgefüllt und mit einer 10%igen Zuckerlösung gefüttert. Nach 1 h wurden die Mücken mit Hilfe des Aspirators schonend auf Flaschen übertragen, die mit 10 μg Deltamethrin beschichtet waren (Gesamt beschichtete Flaschen = 4)53,54. Die Mücken wurden alle 15 Minuten bis zu 2 Stunden oder bis zu einer 100%igen Mortalität beobachtet. Das Experiment wurde dreimal durchgeführt.

Charakterisierung von Pflanzenextrakten mittels Gaschromatographie - Massenspektrometrie (GC - MS) und Hochleistungsflüssigkeitschromatographie (HPLC)
Der Extrakt von P. amalago var. amalago wurde mittels GC-MS-System analysiert, das mit einem massenselektiven Detektor mit DB-5 ms-Säule gekoppelt war (60 m × 0,25 mm; 0,25 μm Schichtdicke). Als Trägergas wurde reines Helium mit einer Durchflussrate von 1 mL/min verwendet. Das Temperaturprogramm wurde bei 45 °C gestartet und mit einer Rate von 1 °C/min auf 280 °C erhöht, wo die Rate dann auf 2 °C/min erhöht wurde. Die Temperaturen des Injektors und des Detektors wurden bei 210 °C bzw. 220 °C gehalten. Das Injektionsvolumen des Extrakts betrug 1 μl. Die Retentionsindizes wurden nach dem Kovats-Verfahren berechnet. Die Verbindungen im Extrakt wurden durch einen Vergleich der Massenspektraldaten mit denen der Massenspektraldatenbank (NIST) 17 des National Institute of Standards and Technology identifiziert, wie zuvor beschrieben56.

Die Identifizierung der vorhandenen Verbindung erfolgte durch Vergleich des Extrakts mit einem Referenzstandard mittels HPLC. Die Trennung des Extrakts erfolgte mittels einer stationären HPLC. Die verwendete Säule war C-18 mit 75 % Acetonitril und 25 % Wasser als Lösungsmittel. Der Extrakt wurde gegen den wichtigsten sekundären Pflanzenstoff standardisiert, der durch die GC-MS-Analyse mit einer Sicherheit von 99 % identifiziert wurde.

In-vitro-Mücken-CYP-Assays
Die Michaelis-Menten-Kinetik wurde zunächst für CYP9J32 (90 pmol/ml; Km 19,52 μM) Enzym, die Konzentration, die im inhibitorischen Assay verwendet wird. Die CYP-Assays wurden unter Verwendung des gereinigten Piperinextrakts durchgeführt, der in einer Endkonzentration von 0,1 % Acetonitril gelöst war. Das fluorogene Substrat DEF wurde in DMSO gelöst. Die Endkonzentration von DMSO betrug 0,5 %. Eine Lösungsmittelkontrolle, die mit 0,5 % DMSO und 0,1 % Endacetonitril hergestellt wurde, wurde getestet, um etwaige Auswirkungen der Lösungsmittel über den gesamten Verdünnungsbereich zu korrigieren. Als Referenz zum Vergleich der inhibitorischen Eigenschaft von Piperin wurden Deltamethrin und PBO als Standardkontrollen verwendet. Das Verfahren folgte ähnlichen Methoden wie zuvor beschrieben23. Die enzymatischen Reaktionen wurden in 96-Well-Platten in 50 mM Kaliumphosphatpufferlösung mit 5 mM MgCl2 durchgeführt, angepasst an pH 7,4, wobei die Konzentration der Testverbindung variiert wurde. Alle Reaktionen wurden 5 Minuten lang bei 37 °C vorinkubiert, während 420 U/min auf einem Schüttler gehalten wurden. Ein NADPH-erzeugendes System, das aus NADP+ (0,001 mM), Glucose-6-Phosphat (0,025 mM) und Glucose-6-Phosphat-Dehydrogenase (5 Einheiten/ml) bestand, wurde hinzugefügt, um die Reaktion zu initiieren. Das endgültige Volumen in jeder Vertiefung betrug 200 μl. Die Reaktionen wurden bei 485 nm/530 nm (Anregung/Emission) mit einem Fluoreszenzspektrophotometer mit Inkubator und Shaker überwacht. Die inhibitorischen Daten werden als Mittelwert ± Standardfehler des Mittelwerts (SEM) dargestellt. Die Untersuchungsergebnisse wurden in dreifacher Ausfertigung durchgeführt.

Homologie-Modellierung
Vorläufige Strukturmodelle für CYP9J32 (Ae. aegypti) wurden mit AlphaFold57 erstellt. Die Häm-Gruppe wurde nach einer strukturellen Ausrichtung mit Homo sapiens CYP3A4 (PDB-ID: 6DAA)58 positioniert. Eine molekulardynamische Simulation der Strukturkoordinaten für CYP9J32 im Wasser wurde unter Verwendung der zuvor beschriebenen Parameter23 durchgeführt.

Molekulares Andocken
Die endgültigen Koordinaten der oben beschriebenen Molekulardynamik-Simulation wurden verwendet, um molekulare Docking-Analysen mit Piperin unter Verwendung eines zuvor beschriebenen Protokolls23 durchzuführen.

Datenanalyse
Die Toxizitätsdaten bei der Verwendung von Insektiziden werden als % Mortalität ± Standardabweichung (SD) angegeben. Die Toxizitätstests für Pflanzenextrakte wurden in dreifacher Ausfertigung durchgeführt. Die Daten der Toxizitätstests für Pflanzenextrakte werden als letale Dosen (Konzentration des Pflanzenextrakts pro Körpergewicht des weiblichen Ae. Aegypti) bei einer Mortalität von 50 % und 95 % ± einem Konfidenzintervall von 95 % (95 % KI) pro Population (R-Version 3.6.2). Die Mortalität in der Kontrollgruppe betrug bei allen Toxizitätstests weniger als 20 %. Abbotts Formel wurde verwendet, um die Mortalitätsrate in jeder behandelten Gruppe bei Bedarf zu korrigieren72. Die statistischen Auswertungen wurden mit SPSS für Windows (Version 17.0) durchgeführt. Eine unidirektionale Varianzanalyse (ANOVA) wurde verwendet, um nach Möglichkeit signifikante Unterschiede (p < 0,05) zwischen den Mittelwerten zu bestimmen.

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Ergebnisse

Die Anfälligkeit von Ae. aegypti , die in Kingston und St. Andrew (KSA), Jamaika, gesammelt wurde, für den CDC-Flaschen-Bioassay; Die diskriminierende Dosis von Deltamethrin wurde durch Messung der Mortalität von Mücken gegenüber Deltamethrin (10 μg Wirkstoff) zum Diagnosezeitpunkt von 30 min bestimmt. Die Mortalität gegenüber Deltamethrin wurde bis zu 2 Stunden beobachtet. Die wild gefangenen Mücken waren resistent gegen Deltamethrin, mit einer Mortalität zwischen 0 % und 22 %, während der anfällige Stamm aus N...

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Diskussion

Wir untersuchten die Extrakte von Piper amalago var. amalago, einer in der Karibik und Lateinamerika beheimateten Pflanze, als Insektizid und Synergist von Deltamethrin gegen Ae. aegypti. Es wurden ethanolische und Hexanextrakte aus den oberirdischen Teilen der Pflanze hergestellt. Alle ethanolischen Extrakte führten innerhalb von 24 Stunden zu einer Mortalität von 100 % (Tabelle 1). Das Stängelpräparat hatte die größte toxische Wirkung gegen d...

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Offenlegungen

Die Autoren haben nichts offenzulegen.

Danksagungen

Wir danken Herrn M.T. Babumon für die Unterstützung bei den GC-MS- und HPLC-Assays.

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Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien
NameUnternehmenKatalognummerKommentare
250 mL FlaschenWheaton Industries, DWK Life SciencesN/AToxizitäts-Assay
Spritze der Serie 700 Hamilton, NV, Vereinigte Staaten von AmerikaN/AToxizitäts-Assay
90 mm FilterpapierWhatmanN/AExtraktions-Assay
Aceton (99%) Fisher Bioreagent (NJ, USA)https://www.fishersci.com/shop/
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Lösung auflösen, Kontrollreagenz
Acetonitril (99,8 %)Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, USA)https://www.sigmaaldrich.com/
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Lösung auflösen
Schwarze 96-Well-Platten Thermo Labsystems, Basingstoke, GroßbritannienN/AEnzym-Assay
DB-5 ms Spalte  (60m &m; 0,25 mm; 0,25 μ m Schichtdicke)Hewlett-PackardN/AIdentifizierung von aktiven Sekundärmetaboliten in der Pflanze
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Standard-Insektizid
Diethoxyfluorescein (DEF; 98,1 %)Cypex Ltd. (Dundee, Großbritannien)531001-10Enzym-Assay
Dimethylsulfoxid (DMSO) (99,9 %)Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, USA)https://www.sigmaaldrich.com/
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Lösung auflösen, Kontrollreagenz
GC–MS-System Agilent Technologies, Kalifornien, USAAgilent 7820 AIdentifizierung von aktiven Sekundärmetaboliten in der Pflanze
GC–MS-System Agilent Technologies, Kalifornien, USAAgilent 7820 AIdentifizierung von aktiven Sekundärmetaboliten in der Pflanze
Glukose-6-phosphatSigma-Aldrich (Gillingham, Vereinigtes Königreich)https://www.sigmaaldrich.com/
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Hexan (98%)Fisher Bioreagent (NJ, USA)https://www.fishersci.com/us/
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BrutkastenShel Lab, Sheldon Manufacturing, USANr. L127Insektenzucht
InsektenaufzuchtkäfigeBugdorm, TaiwanN/AInsektenzucht
MagnesiumchloridSigma-Aldrich (Gillingham, Vereinigtes Königreich)https://www.sigmaaldrich.com/
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chlorid?focus=produkte& Seite
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Massenselektiver DetektorAgilent Technologies, Kalifornien, USAAgilent 5975Identifizierung von aktiven Sekundärmetaboliten in der Pflanze
Nicotinamid-Adenin-Dinukleotidphosphat (NADP+)Sigma-Aldrich (Gillingham, Vereinigtes Königreich)https://www.sigmaaldrich.com/
DE/de/suche/Nicotinamid-
Adenin-Dinukleotid-Phosphat
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PB600 Repeating-Dispenser Hamilton, NV, Vereinigte Staaten von AmerikaToxizitäts-Assay
Piperin (97%) Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, USA)https://www.sigmaaldrich.com/
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Verbund-Standard
Piperonylbutoxid (PBO; 90 %)Fluka, Buchs (Schweiz)N/AStandard-Pyrethroid-Insektizid
KaliumphosphatSigma-Aldrich (Gillingham, Vereinigtes Königreich)https://www.sigmaaldrich.com/
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focus=produkte& Seite=1& pro Seite
=30& sortieren=Relevanz& term=Kalium
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Enzym-Assay
Rotationsverdampfer Bü chii (DE, USA)Nr. B-481Extraktions-Assay
SigmaPlot v. 10. Systat Software IncVersion 10.0Enzym-Assay
HPLC in stationärer Phase Agilent Technologies, Kalifornien, USAAgilent 1100 SerieIdentifizierung von aktiven Sekundärmetaboliten in der Pflanze
Vakuumpumpe GAST (USA)0523-V4-G588DXExtraktions-Assay
Varioskan ThermoFisher, GroßbritannienN/AEnzymassay, Fluoreszenzspektrophotometer mit Inkubator und Schüttler

Referenzen

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