Ein Abonnement von JoVE ist erforderlich, um diesen Inhalt anzuzeigen. Melden Sie sich an oder beginnen Sie noch heute mit einer kostenlosen Testphase.

Forschungsartikel

Mechanismus des Jianpi-Shengxue-Abkoks zur Linderung der zyklophosphamidinduzierten Myelosuppression bei Mäusen

551 Aufrufe

⸱

DOI:

10.3791/69542

⸱

2. Januar 2026

 ,  ,  ,  ,  , 
1Hunan University of Chinese Medicine, 2Department of Traditional Chinese Medicine /Integrative Oncology, Hunan Cancer Hospital/The Affiliated Cancer Hospital of Xiangya School of Medicine, Central South University

In diesem Artikel

Zusammenfassung

Dieses Protokoll erläutert systematisch, wie Jianpi Shengxue-Abkok die durch Cyclophosphamid-induzierte Myelosuppression durch einen integrierten Netzwerk-Pharmakologie- und Tierversuchsansatz abmildert, und offenbart seine Multi-Zielmechanismen und sein Potenzial als Adjuvanstherapie.

Zusammenfassung

Das Papier zielt darauf ab, zu untersuchen, wie Jianpi Shengxue Decoction (JPSXD) durch Chemotherapie-induzierte Myelosuppression durch Netzwerkpharmakologie und Tierversuche lindert. Dazu wurden Schlüsselkomponenten und Ziele analysiert und ein Protein-Protein-Interaktionsnetzwerk (PPI) sowie Kräuter-Komponenten-Ziel-Netzwerke konstruiert. Die Genontologie (GO) und die Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes (KEGG) Anreicherung identifizierten wichtige Signalwege. Ein von Cyclophosphamid (CTX) induziertes Myelosuppressionsmodell wurde bei 60 C57/BL6-Mäusen etabliert. JPSXD wurde in unterschiedlichen Dosierungen für 7 Tage verabreicht. Periphere Blutwerte, Zytokine (Thrombopoietin [TPO], Erythropoietin [EPO], Granulozyten-Makrophagen-Kolonie-stimulierender Faktor [GM-CSF]), Thymusindex, Knochenmarkmorphologie, CD34+-Zellen sowie die Expression von AKT1, JAK2 und EGFR wurden untersucht. Die Netzwerkanalyse identifizierte 172 Verbindungen und 454 Ziele und hob die PI3K-Akt- und JAK-STAT-Signalwege hervor. In vivo senkte CTX die Leukozyten- und Signalproteinspiegel, während JPSXD die Zählungen wiederherstellte, AKT1, JAK2 und EGFR hochregulierte und den Thymusindex verbesserte (p < 0,05). Mittel- und hochdosierte JPSXD erhöhte TPO-, EPO-, GM-CSF- UND CD34+- Zellen und verbesserte die Knochenmarkstruktur, wobei die hohe Dosis die stärkste Wirkung zeigte. Abschließend lindert JPSXD die Myelosuppression durch Multi-Target-, Multi-Pathway-Regulation und unterstützt damit ihr Potenzial als Zusatztherapie für Chemotherapie-induzierte Leukopenie.

Einleitung

Chemotherapie ist ein Grundpfeiler in der Behandlung verschiedener Bösartigkeiten, hauptsächlich durch die Hemmung der Proliferation und des Überlebensvon Krebszellen 1,2 und damit die Überlebensverlängerung der Patienten. Aufgrund mangelnder Selektivität bei der Zielerfassung normaler Gewebe verursachen Chemotherapiemedikamente jedoch oft schwere Schäden an gesunden Zellen und Geweben, was zu einer Reihe vonNebenwirkungen führt. Eine der häufigsten und schwerwiegendsten Nebenwirkungen der Chemotherapie ist die Myelosuppression, die durch eine Verringerung der Blutkörperchenproduktion gekennzeichnet ist, darunter weiße Blutkörperchen (WBC), rote Blutkörperchen (RBC) und Blutplättchen (PLTs)2,4. Myelosuppression beeinträchtigt das Immunsystem stark und erhöht das Risiko für Infektionen, Blutungen, Anämie und andere Komplikationen. Es verringert außerdem erheblich die Lebensqualität der Patienten und kann sogar lebensbedrohlichsein. Daher ist es entscheidend, die durch Chemotherapie induzierte Myelosuppression zu lindern und zu verhindern, um die Toleranz der Patienten gegenüber Chemotherapie und das allgemeine Überleben zu verbessern.

Aktuelle klinische Behandlungen der Myelosuppression beinhalten hauptsächlich hämatopoietische Wachstumsfaktoren wie den Granulozytenkolonie-stimulierenden Faktor [G-CSF], Erythropoietin [EPO]) und Transfusionstherapie 6,7. Diese Ansätze sind jedoch oft mit hohen Kosten, potenziellen Nebenwirkungen und begrenzter Wirksamkeit verbunden. Daher bleibt die Suche nach sichereren und wirksameren Methoden zur Vorbeugung und Linderung von Myelosuppression ein zentraler Forschungsschwerpunkt. In den letzten Jahren hat die traditionelle chinesische Medizin (TCM) aufgrund ihrer Rolle bei der Krebsbehandlung und der Behandlung von chemotherapiebedingten Nebenwirkungengroße Aufmerksamkeit erlangt 8,9. Viele TCM-Formulierungen sollen stärkende und immunregulierende Effekte haben, wie Shengxuebao-Abkok10, Dihuang-Shengbai-Tabletten11 und Ginsenosid-Verbindungen12, die nicht nur normale Zellen schützen und toxische Nebenwirkungen reduzieren, sondern auch die antitumorale Wirksamkeit erhöhen.

Jianpi Shengxue Decoction (JPSXD) ist eine klassische TCM-Formel, die die therapeutischen Prinzipien der Tonifizierung von Qi und der Ernährung von Blut13 veranschaulicht. Diese Formel ist eine ausgeklügelte Modifikation des Sijunzi-Abkoks, kombiniert mit Er Zhi Wan, die die synergistischen Effekte mehrerer Kräuter zur Behandlung von Qi und Blutmangel14 integriert. Die Formel besteht aus Ginseng (Ren Shen), Astragalus (Huang Qi), Epimedium (Yin Yang Huo), Atractylodes (Bai Zhu), Yams (Shan Yao), Salvia (Dan Shen), zubereitetem Rehmannia (Shu Di Huang), Dodder-Samen (Tu Si Zi), Wolfsbeere (Gou Qi Zi), Ligustrum (Nv Zhen Zi), Angelica (Dang Gui), gebratener Gerste (Chao Mai Ya), frittiertem Hühnermagen (Chao Ji Nei Jin). Getrocknete Mandarinenschale (Chen Pi), Coix-Samen (Yi Yi Ren) und mehrere andere Kräuter. Jedes Kraut spielt eine spezifische Rolle in der Formel und folgt dem TCM-Prinzip der souveränen, Minister-, Assistenten- und Leitkräuter, was eine ausgewogene und zielgerichtete therapeutische Wirkung gewährleistet.

Der Sijunzi-Skok, eine grundlegende Formel in der TCM, ist bekannt für seine Fähigkeit, Qi zu stärken und die Milz zu stärken. Es wurde weit verbreitet zur Behandlung von Erkrankungen im Zusammenhang mit Qi und Blutmangel eingesetzt, wie Müdigkeit, schlechtem Appetit und geschwächtem Immunsystem. Moderne pharmakologische Studien haben gezeigt, dass Sijunzi-Abkok die Immunfunktion verbessert, die Hämatopoese fördert und die Selbstreparaturfähigkeit des Körpers verbessert15,16. Aufbauend auf dieser Grundlage integriert JPSXD zusätzliche Kräuter, um seine Wirksamkeit bei der Ernährung des Blutes weiter zu steigern und komplexere Mängel zu beheben. Zum Beispiel sind präparierte Rehmannia und Angelica wichtige blutnährende Kräuter17, während Astragalus und Ginseng synergetisch wirken, um Qi zu steigern und die allgemeine Vitalitätzu verbessern.

Jüngste Studien haben die potenziellen anti-tumoralen Effekte von JPSXD hervorgehoben und deuten darauf hin, dass sein Multikomponenten-, Multi-Ziel-Ansatz das Tumorwachstum hemmen und die Wirksamkeit konventioneller Krebsbehandlungen steigern könnte19,20. Die Fähigkeit der Formel, die Immunantworten zu modulieren und die hämatopoietische Funktion zu verbessern, macht sie besonders wertvoll zur Unterstützung von Patienten, die sich einer Chemotherapie oder Strahlentherapie unterziehen und häufig Qi- und Blutmangel als Nebenwirkung der Behandlungerleben. Darüber hinaus wurde gezeigt, dass die Einbeziehung von Kräutern wie Salvia und Epimedium die Mikrozirkulation verbessert und die zelluläre Reparaturmechanismen fördert, was zu den allgemeinen therapeutischen Vorteilen der Formel beiträgt22.

Moderne pharmakologische Studien haben gezeigt, dass jedes einzelne Kraut in JPSXD pharmakologische Aktivitäten besitzt, die mit der hämatopoietischen Funktion, Antimyelosuppression, Immunmodulation und Antioxidation sowie der Mikrokreislaufverbesserung zusammenhängen, was indirekte Forschungsunterstützung für den Einsatz von JPSXD zur Linderung der chemotherapiebedingten Myelosuppression bietet. Tabelle 1 fasst die primären pharmakologischen Effekte jedes Krauts zusammen mit den entsprechenden Referenzen zusammen, mit Schwerpunkt auf Studien zur Hämatopoiese, antimyelosuppressiver Wirkung, Immunmodulation sowie antioxidativen oder mikrozirkulationsfördernden Eigenschaften. Die komplexe Synergie der Komponenten in JPSXD beinhaltet sowohl kooperative als auch antagonistische Interaktionen zwischen den Kräutern und zielt auf mehrere Wege ab, um einen ganzheitlichen therapeutischen Effekt zu erzielen. Zum Beispiel arbeiten Ginseng und Astragalus zusammen zur Stärkung des Qi, während Salvia und präparierte Rehmannia zusammenwirken, um das Blut zu nähren und die Durchblutung zu verbessern. Gleichzeitig helfen Kräuter wie getrocknete Mandarinenschale und frittierte Gerste, die Verdauung zu regulieren und Stagnation zu verhindern, sodass die stärkenden Wirkung der Formel effektiv aufgenommen undvom Körper genutzt wird. Dieser vielschichtige Ansatz entspricht der TCM-Philosophie, die Ursache der Krankheit zu behandeln und gleichzeitig ihre Symptome anzugehen.

Abschließend lässt sich sagen, dass JPSXD eine ausgewogene und wissenschaftlich fundierte TCM-Formel ist, die die Prinzipien von Qi und Blutentgiftung verkörpert. Seine potenziellen Anwendungen zur Stärkung des Immunsystems, zur Förderung der Hämatopoese und zur Unterstützung der Antitumortherapie machen es zu einer wertvollen Ergänzung sowohl für traditionelle als auch moderne medizinische Praktiken. Allerdings fehlen weiterhin hochwertige klinische Evidenz, die die Wirksamkeit von JPSXD bei der Linderung der chemotherapiebedingten Myelosuppression direkt bewerten. Weitere Forschung ist erforderlich, um die zugrunde liegenden Mechanismen aufzuklären und die klinischen Anwendungsstrategien zu optimieren. Daher zielt diese Studie darauf ab, einen Nachweis für die potenziellen therapeutischen Effekte von JPSXD aus einer präklinischen mechanistischen Perspektive zu liefern.

Netzwerkpharmakologie mit ihrer systemischen und integrativen Natur wurde weit verbreitet eingesetzt, um Wirkstoffe chinesischer Arzneimittel zu identifizieren und deren Wirkmechanismen zu erläutern24,25. In dieser Studie wurde Netzwerkpharmakologie eingesetzt, um die potenziellen Signalwege und Schlüsselziele zu analysieren, die von JPSXD im Kontext der Myelosuppression betroffen sind. Zusätzlich wurde ein von Cyclophosphamid (CTX) induziertes Myelosuppressions-Mausmodell erstellt, um relevante Indikatoren zu bewerten und die Auswirkungen von JPSXD auf die Myelosuppression zu bewerten. Eine vorläufige Validierung der wichtigsten Ziele und Wege, die durch die Netzwerkpharmakologie identifiziert wurden, wurde ebenfalls durchgeführt. Dies ist die erste Studie, die systematisch Netzwerkpharmakologie mit Tierversuchen integriert, um den molekularen Mechanismus aufzuklären, durch den JPSXD die durch Chemotherapie induzierte Myelosuppression durch die multizielige Regulation von Signalwegen, wie dem PI3K-AKT-Weg, lindert und so eine Lücke im mechanistischen Verständnis der hämatopoetischen Schutzwirkungen dieser Verbindung schließt.

Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.

Protokoll

Alle Tierversuche wurden in strikter Übereinstimmung mit den Vorschriften zur Verwaltung von Labortieren und den ethischen Richtlinien des Versuchstierzentrums des Hunan Krebskrankenhauses durchgeführt. Das Studienprotokoll wurde vom Tierethikkomitee des Hunan Cancer Hospital genehmigt (Genehmigungsnummer: KNZY-202416). Während der gesamten Studie unternahmen die Forscher alle Anstrengungen, die Anzahl der eingesetzten Tiere zu minimieren und ihr Leiden zu lindern.

Tierzubereitung
Insgesamt wurden 60 10 Wochen alte männliche C57/BL6-Mäuse von der Hunan Slack Jingda Laboratory Animal Co., Ltd. bezogen (Lizenznummer: SCXK [Hu] 2021-0002). Alle Mäuse wurden im Versuchstierzentrum des Hunan Krebskrankenhauses unter kontrollierten Umweltbedingungen untergebracht: Temperatur: 23 ± 2 °C, Luftfeuchtigkeit: 50 % ± 10 % und ein 12-Stunden-Hell/Dunkel-Zyklus (8:30–20:30). Mäuse hatten ad libitum Zugang zu Nahrung und Wasser. Vor den Experimenten wurden sie durch tägliche Handhabung von 5 Minuten über einen Zeitraum von drei Tagen an die Umgebung gewöhnt. Nach der Akklimatisierung wurden alle 60 Mäuse nach Körpergewicht geschichtet und zufällig in sechs Gruppen (n = 10 pro Gruppe) mithilfe einer computergenerierten Zufallszahlentabelle eingeteilt. Die Gruppen umfassten: Blankkontrolle, Modell, Normalsalzlösung (NS) Kontrolle, hochdosierte JPSXD (40 mg/kg), mitteldosierte JPSXD (30 mg/kg) und niedrigdosierte JPSXD (20 mg/kg). Der Randomisierungsprozess stellte sicher, dass es keine signifikanten Unterschiede im mittleren Körpergewicht zwischen den Gruppen gab (s. > 0,05). Die Randomisierungssequenz wurde von Forschern generiert und durchgeführt, die nicht an nachfolgenden experimentellen Verfahren beteiligt waren, um Verzerrungen zu minimieren.

Materialvorbereitung
Sicherheit und Abfallentsorgung: Diese Studie betraf CTX, ein hochgiftiges Chemotherapeutikanzum. Alle Verfahren wurden strikt gemäß den Vorschriften zum Sicherheitsmanagement gefährlicher Chemikalien und den Biosicherheitsstandards der Stufe 2 durchgeführt. Zu den spezifischen Vorsichtsmaßnahmen gehörten die Verwendung von Einweg-Schutzkleidung, Nitrilhandschuhen, N95-Atemschutzmasken und Schutzbrillen durch alle Mitarbeiter. Die CTX-Vorbereitung und -Verabreichung wurden in einem Biosicherheitsschrank der Klasse II durchgeführt. Die Herstellung der CTX-Injektionslösung erfolgte in einer Abzughaube mit speziellen Instrumenten, um die Bildung von Aerosolen zu verhindern. Scharfe Gegenstände und mit CTX kontaminierte Gegenstände, wie Spritzen und Handschuhe, wurden in punktfesten Behältern entsorgt. Andere kontaminierte Materialien (z. B. Bettzeug, Tiergewebe) wurden durch 24 Stunden durch Eintauchen in 10%igen Natriumhypochlorit inaktiviert und anschließend von einem zertifizierten Anbieter für medizinische Abfälle verbrannt. Im Falle eines CTX-Verlaufs wurde der Bereich sofort mit absorbierender Baumwolle bedeckt und mit einer 1%igen Natriumthiosulfatlösung neutralisiert. Der Vorfall wurde dann dem Sicherheitsbeauftragten gemeldet.

Medikamente und Reagenzien: Die CTX-Injektion wurde von der Baxter Oncology GmbH, Deutschland, gewonnen (Chargennummer: HJ20160467). JPSXD wurde von der Abteilung für Traditionelle Chinesische Medizin am Krebskrankenhaus Hunan vorbereitet. Sie bestand aus 15 traditionellen Kräutern – Panax ginseng, Astragalus membranaceus, Epimedium brevicornum, Atractylodes macrocephala, Dioscorea opposita, Salvia miltiorrhiza, Rehmannia glutinosa, Cuscuta chinensis, Lycium barbarum, Ligustrum lucidum, Angelica sinensis, Bratmalz, Hühner-Gizzard-Futter, getrocknete Mandarinenschale und Coix-Samen – kombiniert nach klassischen Kompatibilitätsverhältnissen20. Der Skok wurde auf eine Endkonzentration von 3 kg/L (d. h. 3 g/mL) konzentriert. Vor dem Gavage wurde das Konzentrat mit NS verdünnt, um die erforderlichen Konzentrationen für jede Dosisgruppe zu erreichen: 4 mg/mL für die Hochdosisgruppe (40 mg/kg), 3 mg/mL für die mittlere Dosisgruppe (30 mg/kg) und 2 mg/mL für die niedrige Dosisgruppe (20 mg/kg)26. Das Gavagevolumen wurde mit 0,1 mL pro 10 g Körpergewicht berechnet, was zu einem Endabgabevolumen von 0,2–0,25 mL pro Maus (basierend auf einem Gewichtsbereich von 20–25 g) führte.

ELISA-Kits: Kommerziell erhältliche ELISA-Kits für Maus Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor (GM-CSF), EPO und Thrombopoietin (TPO) wurden verwendet. Serumproben wurden vor der Untersuchung 1:5 im PBS-Puffer (pH 7,4) verdünnt. Die Standards wurden in 100 μL pro Bohrloch rekonstituiert.

Sekundärer Antikörper: Das HRP-konjugierte Ziegen-Anti-Kaninchen-IgG wurde um 1:5000 (Endkonzentration: 0,04 μg/mL) im TBST-Puffer mit 5 % fettarmer Trockenmilch und 0,05 % Tween-20 verdünnt. Die Lösung wurde frisch zubereitet und bei Zimmertemperatur 1 Stunde inkubiert.

Primäre Antikörper gegen Western Blot: GAPDH (polyklonales Kaninchen), AKT (polyklonales Kaninchen), JAK2 (monoklonales Kaninchen) und EGFR (monoklonales Maus) wurden verwendet. Alle Antikörper wurden in einem TBST-Puffer mit 5 % BSA verdünnt: GAPDH (1:1000), AKT (1:1000), JAK2 (1:800) und EGFR (1:800). Das Inkubationsvolumen betrug 100 μL pro Membran.

Gewebefixator: Eine 4%ige Paraformaldehydlösung (PFA) wurde durch Auflösung von PFA-Pulver in PBS (pH 7,4) hergestellt. Das Gewebe wurde 24 Stunden lang repariert.

Hämatoxylin- und Eosin-(H&E)-Färbelösung: Hämatoxylinlösung (0,1 % Harris-Hämatoxylin) und Eosin-Y-Lösung (0,5 %) wurden gemäß den Standardprotokollen der Pathologiehergestellt 28. Die Färbungsdauer betrug 5 Minuten für Hämatoxylin und 3 Minuten für Eosin.

Immunfluoreszenz-Blockpuffer: Für die Blockierung wurde ein PBS-Puffer mit 10 % Ziegenserum und 1 % BSA verwendet, mit einer 30-minütigen Inkubation.

Antikörper-Verdünnungspuffer für Immunfluoreszenz: Primäre Antikörper (CD34+, TPO, EPO, GM-CSF) für Immunfluoreszenz wurden in einem PBS-Puffer mit 1 % BSA verdünnt, entsprechend dem vom Hersteller empfohlenen Verdünnungsverhältnis (1:200), was eine Endkonzentration von 2,5 μg/mL ergab. Das Inkubationsvolumen betrug 50 μL pro Gewebeschnitt.

Induktion eines Tiermodells
60 Mäuse wurden zufällig in sechs Gruppen eingeteilt (n = 10 pro Gruppe): Blank-Kontrolle, Modell-, Hochdosis-, Mittel-Dosis, Niedrigdosis und NS-Kontrolle. Mit Ausnahme der Blank-Kontrollgruppe erhielten alle Mäuse intraperitoneale Injektionen von CTX (20 mg/kg) einmal täglich für 3 aufeinanderfolgende Tage, um ein Myelosuppressionsmodell zu etablieren. Alle Modellmäuse zeigten weiße Blutkörperchen < 1,8 × 109/L, PLT < 85 × 10⁹/L sowie >55 % Reduktion der Keimzellen im Knochenmark 24 Stunden nach der letzten Injektion. Dieses Protokoll stimmt mit etablierten CTX-induzierten Myelosuppressionsmodellen29,30 überein. Nach der Injektion wurden die Mäuse täglich auf den allgemeinen Zustand überwacht, einschließlich Aktivitätsniveau, Fellbild und Veränderungen des Körpergewichts. Von Beginn der Modellierung bis zum Ende des Experiments wurde das Körpergewicht jeden Tag zur gleichen Zeit mit einer elektronischen Waage erfasst. Die Veränderungsrate des Körpergewichts wurde wie folgt berechnet: (Endgewicht / Anfangsgewicht) x 100 %, um den allgemeinen physiologischen Status und die potenzielle Schutzwirkung von JPSXD zu bewerten. Nach der Injektion wurden die Mäuse in einzeln belüfteten Käfigen (IVCs) untergebracht, die jeweils deutlich als CTX-kontaminiert gekennzeichnet waren. Die Einstreu wurde alle zwei Tage gewechselt, und alle verwendeten Einstreu wurden gemäß den oben beschriebenen Protokollen für gefährliche Abfälle entsorgt.

Intragastrische Verabreichung
Mäuse in den Hoch-, Mittel- und Niedrigdosis-Gruppen erhielten JPSXD per Gavage in Dosen von 40 mg/kg, 30 mg/kg bzw. 20 mg/kg. Die Kochsalzkontrollgruppe erhielt ein gleiches Volumen NS. Gavage-Lösungen wurden in Konzentrationen von 4 mg/mL, 3 mg/ml bzw. 2 mg/mL hergestellt und mit einem Volumen von 0,1 mL pro 10 g Körpergewicht verabreicht. Alle Mäuse wurden zweimal täglich sieben aufeinanderfolgende Tage hinweg geschädigt. Die Kochsalzkontrollgruppe erhielt 0,2–0,25 mL pro Maus NS. Für die Blank- und Modellgruppen wurde keine Behandlung durchgeführt. Das Fehlen von Husten oder Kämpfen während der Gavage deutet auf die korrekte Verabreichungsmethode hin.

Blutentnahme und Serumvorbereitung
Am drittenTag nach der CTX-Injektion wurden 0,2 ml Blut aus der Schwanzvene entnommen, um den Erfolg der Modellbildung durch Messung der peripheren Blutzellzahlen mit einem vollautomatischen Hämatologie-Analysator zu bewerten. 24 Stunden nach der endgültigen Gabe von JPSXD wurde Blut aus dem Orbitalsinus von zufällig ausgewählten Mäusen entnommen (n = 10 pro Gruppe). Ein Teil des Blutes wurde für die vollständige Blutbildanalyse verwendet, während der Rest zur Serumpräparation verarbeitet wurde. Die Proben wurden bei 3.000 x g für 15 Minuten bei 4 °C zentrifugiert. Das Supernatant (eine klare, blassgelbe obere Schicht) wurde als Serum gesammelt und für die Lagerung bei -80 °C für nachfolgende ELISA-Tests und Leber-/Nierenfunktionstests aliquotiert. Die Serumschicht war klar von der Blutzellschicht getrennt, ohne Anzeichen von Hämolyse oder Trübung. Hämatologische Parameter umfassten die WBC, RBC, PLT und Hämoglobinwerte (Hb).

Leber- und Nierenfunktionsbewertung
Ein vollautomatischer biochemischer Analysator wurde verwendet, um Serum-Leberfunktionsmarker – Alanin-Aminotransferase (ALT) und Aspartat-Aminotransferase (AST) – sowie Nierenfunktionsmarker – Blut-Harnstoff, Stickstoff (BUN) und Kreatinin (Cre) – zu messen. Alle Verfahren folgten dem Standardprotokoll des Instruments. Konkret wurden 100 μL Serum mit den entsprechenden Prüfkits (ALT, AST, BUN und Cre) gemischt und bei 37 °C für 5 Minuten inkubiert. Die Absorption wurde bei 340 nm gemessen. Jede Probe wurde doppelt getestet, und der Durchschnittswert wurde für die Analyse verwendet.

Berechnung des Organindexes
24 Stunden nach der abschließenden Verabreichung von JPSXD wurden die Mäuse durch schrittweise Kohlendioxidinhalation (CO2) (Durchflussrate: 20 % Kammervolumen/min) eingeschläfert, gefolgt von zervikaler Dislokation als sekundäreMethode 31. Unmittelbar nach der Euthanasie wurden Leber, Nieren, Milz und Thymus aseptisch durch einen ventralen Mittellinienschnitt entnommen. Die Organe wurden vorsichtig von umliegendem Bindegewebe und Fett seziert und anschließend in eiskalten Kochsalzlösung (NS) ausgespült, um Restblut zu entfernen. Die Organe wurden mit vorgewogenem Filterpapier unter standardisiertem Druck (3 sanfte Pressungen) trocken getupft und sofort auf einer kalibrierten elektronischen Waage (Genauigkeit: ±0,1 mg) bei Raumtemperatur (22 ± 1°C) gewogen.

Alle Verfahren wurden auf einer vorgekühlten Edelstahlschale durchgeführt, um die Autolyse zu minimieren. Der Organindex wurde als Organgewicht (mg) geteilt durch das Körpergewicht (g) berechnet, um die Auswirkungen von JPSXD auf Hauptorgane zu bewerten. Teile jedes Gewebes wurden für die Western-Blot-Analyse reserviert, während die übrigen Proben für eine anschließende histologische Bewertung in 4 % PFA fixiert wurden.

ELISA
Die Serumkonzentrationen von TPO, EPO und GM-CSF wurden mit ELISA-Kits gemäß den Anweisungen des Herstellers gemessen. Alle Zentrifugationsschritte, einschließlich Probenreinigung und Reagenzien-Rekonstruktion, wurden bei Raumtemperatur bei 1.000 x g für 5 Minuten durchgeführt. Die Waschschritte wurden mit PBST-Puffer durchgeführt (PBS enthält 0,05 % Tween-20), wobei pro Bohrloch 300 μL Waschlösung hinzugefügt und dreimal wiederholt wurden. Nach dem Waschen blieb keine Restflüssigkeit am Boden der Brunnen zurück. Nach der Farbentwicklung war ein deutlicher blauer Niederschlag sichtbar. Die Absorption wurde mit 450 nm mit einem Mikroplattenleser gemessen, nachdem die Reaktion beendet war.

H&E-Färbung
Nach der Euthanasie wurden Thymus und Oberschenkelknochen entnommen. Der Thymus wurde gewogen, um den Thymusindex (Thymusgewicht [mg]/Körpergewicht [g]) zu berechnen. Nach dem Wiegen wurde ein Teil der Thymus für die Western-Blot-Analyse verwendet, während der Rest zusammen mit dem Oberschenkelknochen mit 4 % PFA fixiert wurde. Femurproben wurden für jeweils 1 Stunde einer graduierten Ethanoldehydrierung unterzogen (jeweils 70 %, 80 %, 95 % und jeweils 100 %). Eine richtige Dehydrierung zeigte sich durch ein einheitlich weißes Aussehen, ohne Weichheit oder Verformung. Paraffin-eingebettete Gewebeblöcke wurden mit einer Dicke von 4 μm mit einem rotierenden Mikrotom, das mit hochpräzisen Wolframkarbidblättern (Typ H31) ausgestattet war, geschnitten. Die Schnitte wurden in einem 40 °C Wasserbad mit 0,5 % Gelatinelösung schwimmen lassen, um Falten zu beseitigen, und anschließend auf Objektträger montiert. Alle Schnitte zeigten intakte Morphologie, glatte Kanten und gleichmäßige Durchsichtigkeit unter Lichtmikroskopie, was eine optimale Schnittqualität bestätigte. Es wurde eine H&E-Färbung durchgeführt, gefolgt von der Montage mit einem wässrigen Montagemedium28. Nach der Färbung erschienen die Kerne blau und das Zytoplasma rosa, mit einer klar definierten zellulären Architektur unter mikroskopischer Beobachtung mit einem umgekehrten Mikroskop. Die histomorphologische Analyse wurde mit Software durchgeführt. Für jeden H&E-gefärbten Abschnitt wurden drei zufällige Felder mit 200-facher Vergrößerung ausgewählt. Die Software quantifizierte automatisch die Anzahl der nukleierten Zellen pro Flächeneinheit nach manueller Abgrenzung des Interessenbereichs, und die Ergebnisse wurden als Mittelwert ± Standardabweichung (x̄ ± s) angegeben.

Westlicher Blot
Thymusgewebe (50 ± 2 mg/Probe) wurden in einem eiskalten RIPA-Puffer homogenisiert, der 1x Proteaseinhibitor-Cocktail enthielt, in einem präzisen Verhältnis von 100 mg Gewebe pro 1 mL Puffer, unter Verwendung eines motorisierten Pellet-Stößelhomogenisierers mit RNase-freien Stößeln. Die Homogenisierung erfolgte auf Eis mit 15 Impulsen (1 s Impuls/2 s Pause), gefolgt von einer 30-minütigen Inkubation auf Eis mit Vortexen alle 10 Minuten. Das Homogenat wurde bei 12.000 x g für 20 Minuten bei 4 °C zentrifugiert, und der resultierende Supernatant wurde zur Proteinquantifizierung gesammelt. Der Supernatant erschien klar und transparent, frei von Niederschlag oder Lipidschichten. Die Proteinkonzentration wurde mit einem BCA-Protein-Assay-Kit gemessen, mit einem Standardkurvenbereich von 0–2000 μg/mL. Western Blot wurde durchgeführt, um die Expressionsniveaus von AKT1, JAK2 und EGFR im Thymusgewebe zu bewerten, wobei GAPDH als interne Kontrolle verwendet wurde. Nach Elektrophorese und Membrantransfer zeigte der Proteinmarker (10–200 kDa) klare Bänder, und die Zielbänder waren mit den erwarteten Molekulargewichten ausgerichtet (AKT1: 60 kDa, JAK2: 130 kDa, EGFR: 170 kDa und GAPDH: 37 kDa).

Die densitometrische Analyse der Western-Blot-Bänder wurde mit Software durchgeführt. Vor der Analyse wurden die Bänder visuell inspiziert, um das Fehlen von Verschmierung oder Diffusion zu bestätigen. Das Analyseverfahren umfasste: Manuelle Auswahl der Zielbandbereiche nach dem Bildimport, mit automatischer Kantenerkennung durch die Software, gefolgt von lokaler Hintergrundsubtraktion unter Verwendung der an die Bänder angrenzenden Bereiche zur Korrektur von Grauwerten. Anschließend wurde das Grauwertverhältnis zwischen dem Zielprotein und der internen Kontrolle zur relativen Quantifizierung berechnet. Die verwendete Normalisierungsformel war:

Relative Expression des Zielproteins = (grauer Wert des Zielbandes −lokaler Hintergrund) / (grauer Wert der internen Kontrolle −lokaler Hintergrund)

Immunhistochemie
An Oberschenkelschnitten wurde eine immunhistochemische Färbung durchgeführt. Die Scheiben wurden mit 0,1 % Triton X-100 für 10 Minuten permeabilisiert, gefolgt von 30 Minuten Blocken. Primäre Antikörper wurden über Nacht bei 4 °C inkubiert, sekundäre Antikörper für 1 Stunde bei Zimmertemperatur. Nach der Färbung wurden unter einem Lichtmikroskop deutliche positive Signale mit niedrigem Hintergrund und ohne unspezifische Färbung beobachtet. Die Objektträger wurden mit einem Anti-Fade-Medium montiert, das DAPI enthielt, das die Kerne blau färbte. Die Expression von CD34+, TPO, EPO und GM-CSF wurde anschließend ausgewertet. Die immunhistochemischen Bilder wurden mit digitaler Pathologiesoftware (Version 2.1.0) analysiert. Vor der Analyse wurden die Bilder als frei von Überbelichtung oder Signalverschlechterung überprüft. Das Analyseverfahren32umfasste:

Modellauswahl: Ein vortrainiertes Knochenmarksegmentierungsmodell (U-Net-basiert) wurde verwendet, um automatisch Geweberegionen33 zu identifizieren.
Schwellenwerteinstellung: Positive Signalschwellenwerte wurden basierend auf der negativen Kontrollgruppe definiert. Regionen mit einer chromogenen Intensität, die den Hintergrundmittelwert um drei Standardabweichungen übersteigt, wurden als positiv klassifiziert.
ROI-Definition: Die Software teilte jedes Feld automatisch in 500 × 500 μm große Gitterbereiche ein und berechnete die Anzahl positiver Zellen pro Flächeneinheit (positive Zellanzahl/Feldfläche).
Datenexport: Ein statistischer Bericht über positive Zelldichte wurde automatisch erstellt.

Statistische Analyse
Die statistische Analyse wurde mit SPSS-Software (Version 22.0) durchgeführt. Die Daten wurden als x̄ ± s ausgedrückt. Vor den Intergruppenvergleichen wurde die Normalität mit dem Shapiro-Wilk-Test bewertet, und die Homogenität der Varianzen wurde mit dem Levene-Test bewertet. Wenn sowohl die Normalverteilung (p > 0,05) als auch die Varianzhomogenität (p > 0,05) bestätigt wurden, wurde Einweg-ANOVA für Gruppenvergleiche verwendet. Post-hoc-Mehrfachvergleiche wurden mit der Least Significant Difference (LSD)-Methode durchgeführt; um den Typ-I-Fehler zu kontrollieren, wurden alle posthoc P-Werte mittels der Bonferroni-Korrektur angepasst, wobei das angepasste p < 0,05 als statistisch signifikant angesehen wurde.

Wenn die Daten die Annahmen von Normalität oder Varianzhomogenität (p ≤0,05 in beiden Tests) nicht erfüllten, wurde der Kruskal-Wallis-Test angewendet, gefolgt von Dunns Test für Post-hoc-Analyse mit Bonferroni-Korrektur. Alle statistischen Diagramme und Visualisierungen wurden mit GraphPad Prism (Version 9.0) erstellt. Das Signifikanzniveau wurde auf α = 0,05 gesetzt. Alle gemeldeten p-Werte waren angepasste Werte. Ausreißer wurden mittels Grubbs-Test identifiziert (α = 0,05) und nur dann ausgeschlossen, wenn sie eindeutig auf experimentelle Fehler zurückzuführen waren. Alle übrigen Daten wurden in die Endanalyse einbezogen. Die Ergebnisse werden als x̄ ± s präsentiert.

Methodik der Netzwerkpharmakologie
Diese Studie verwendete einen Netzwerkpharmakologie-Ansatz, um die möglichen Mechanismen zu erforschen, durch die JPSXD die durch Chemotherapie induzierte Myelosuppression lindert. Zunächst wurden die chemischen Bestandteile von JPSXD und ihre entsprechenden Ziele aus der Traditional Chinese Medicine Systems Pharmacology Database and Analysis Platform (TCMSP, https://old.tcmsp-e.com/tcmsp.php) abgerufen. Die Screening-Kriterien wurden wie folgt festgelegt: orale Bioverfügbarkeit (OB) ≥30 % und Arzneimittelähnlichkeit (DL) ≥0,18. Für Verbindungen, die nicht in der TCMSP-Datenbank enthalten sind, wurde die Zielvorhersage mit der Plattform SwissTargetPrediction (https://www.swisstargetprediction.ch/) durchgeführt.

Um sicherzustellen, dass die ausgewählten Verbindungen die wichtigsten bioaktiven Bestandteile von JPSXD abdecken, wurde auf die Pharmakopoea der Volksrepublik China34 verwiesen. Konkret identifizierten wir Markerverbindungen wie Ginsenoside, Astragalosid IV, Icariin und Salvianolsäuren, indem wir die Identifikations- und Prüfabschnitte für jedes Kraut überprüften. Diese Verbindungen, die üblicherweise als Qualitätskontrollmarker35 verwendet werden, haben definierte chemische Strukturen und quantitative Anforderungen. Zur Genauigkeit haben wir die Allgemeinen Mitteilungen und Anhänge der Pharmakopoei abgeglichen, um Namenskonventionen und analytische Methoden (z. B. Hochleistungs-Flüssigkeitschromatographie, HPLC) zu bestätigen. Die Analyse bestätigte, dass die Screening-Kriterien (OB ≥30 %, DL ≥0,18) die Kernverbindungen der Formel36 effektiv erfassten, darunter wichtige pharmakopeale Bestandteile wie Ginsenoside Rg1 und Rb1 (aus Panax ginseng), Astragalosid IV (aus Astragalus membranaceus) und Icariin (aus Epimedium brevicornum), was darauf hindeutet, dass die ausgewählten Verbindungen repräsentativ sind und die primären Wirkstoffe umfassen, die für die Qi- und Bluttonifizierung von JPSXD verantwortlich sind Effekte.

Anschließend wurden Genziele, die mit Myelosuppression in Verbindung stehen, aus der GeneCards-Datenbank (https://www.genecards.org/) abgerufen und die Ergebnisse in eine Tabelle heruntergeladen. Gene mit einem Relevanzwert ≥44 wurden für weitere Analysen ausgewählt. Die Schnittmenge von Arzneimittelzielen und krankheitsbezogenen Genen wurde mit einem Venn-Diagramm visualisiert, und die sich überlappenden Gene wurden in die STRING-Datenbank importiert (https://string-db.org/). Der Organismus war auf Mensch gesetzt, und die Interaktionsquellen waren auf Experimente und Datenbanken beschränkt, mit einem Mindestwert > 0,7. Das resultierende Protein-Protein-Interaktionsnetzwerk (PPI) wurde anschließend auf topologische Eigenschaften analysiert, um Kernziele zu identifizieren und mit Cytoscape 3.10.2 visualisiert.

Basierend auf den identifizierten Kernzielen wurden Gene Ontology (GO) und Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes (KEGG) Anreicherungsanalysen mit der DAVID-Datenbank (https://david.ncifcrf.gov/) durchgeführt. Die Parameter wurden wie folgt festgelegt: Zahl ≥5, EASE-Wert ≥0,05 und p-Wert < 0,01. Die Anreicherungsergebnisse wurden über die Microbiological Letter-Plattform (http://www.bioinfo-cloud.org/) visualisiert. Die Signalweganalyse klärt die wichtigsten Signalwege und regulatorischen Marker weiter und zeigt so die möglichen Mechanismen auf, durch die JPSXD die durch Chemotherapie induzierte Myelosuppression mindert.

Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.

Ergebnisse

Analyse der Netzwerkpharmakologie
Identifikation von Wirkstoffen und Zielen
Wir identifizierten zunächst die primären Markerverbindungen jedes Krauts in JPSXD anhand der Literatur, umeine umfassende Auswahl zu gewährleisten34. Konkret haben wir durch die Konsultation der pharmakopeialen Einträge für relevante Kräuter (z. B. Panax Ginseng, Astragalus membranaceus, Angelica sinensis) eine Liste der offiziellen Markerbestand...

Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.

Diskussion

Angesichts der weltweit steigenden Krebsinzidenz steht die medizinische Gemeinschaft vor doppelten Herausforderungen: nicht nur der Behandlung des Krebses selbst, sondern auch der Behandlung der damit verbundenen Nebenwirkungen, zu denen Myelosuppression eine besonders häufige und schwerwiegende Nebenwirkung ist43. Diese Studie untersuchte systematisch die Rolle und mögliche Mechanismen von JPSXD bei der Linderung der CTX-induzierten Myelosuppression bei Mäusen un...

Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.

Offenlegungen

Die Autoren erklären, dass sie keine Interessenkonflikte haben.

Danksagungen

Diese Forschung wurde finanziell vom Integrative Western and Traditional Chinese Medicine Focus-DCA Mode Intervention zur Vorbeugung postoperativer Infektionen bei älteren Patienten mit gastrointestinalen Malignitäten unterstützt, mit der Projektnummer A2023053, finanziert von der Provinzverwaltung für traditionelle chinesische Medizin von Hunan.

Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien
NameUnternehmenKatalognummerKommentare
4 % Paraformaldehyd (PFA)Sigma-AldrichP6148
AKT (Pfanne) Rabbit mAbZell-Signaltechnik#4691
Automatische Mikroplatten-UnterlegmaschineBioTek (Agilent)ELx405
BC-2800vet Autohämatologie-AnalysatorMindrayBC-2800vet
Kryostat-MikrotomThermo Fisher ScientificCryoStar NX50
Cyclophosphamid-InjektionBaxter Oncology GmbHN/A (Charge: HJ20160467)
E100-MikroskopNikonE100
EGFR-Antikörper (A-10)Santa Cruz BiotechnologieSC-373746
EinbettungsmaschineLeicaEG1150
EPO (Maus) ELISA-KitR& D-SystemeMEP00B
GAPDH Polyklonaler Antikörper gegen KaninchenProteintech10494-1-AP
GM-CSF (Maus) ELISA-KitR& D-SystemeMMC00B
Ziegen-Anti-Kaninchen-IgG HRP-konjugiertJackson ImmunoResearch111-035-003
H& E-FärbungssetSigma-AldrichHT10
Hochgeschwindigkeits-KühlzentrifugeThermo Fisher ScientificSorvall ST 16R
Hochdurchsatz-GewebeschleiferServicebioKZ-II
Immunhistochemie-PenVektorlaboreH-4000
JAK2 Rabbit mAbAbcamab108596
Jianpi Shengxue Dekoktion (JPSXD)Apotheke des Hunan KrebskrankenhausesIndividuelle Formulierung
MikroplattenleserBioTek (Agilent)Synergie H1
KochsalzlösungBaxter2B1324X
Rotatorisches MikrotomLeicaRM2016
GewebeprozessorLeicaASP300S
TPO (Maus) ELISA KitR& D-SystemeMTP00B
Vortex-MixerServicebioMX-F

Referenzen

  1. Wang, D. H., et al. Validated herbal extracts for alleviating chemotherapy-induced myelosuppression: A systematic review and meta-analysis. Phytomedicine. 141, 156659(2025).
  2. Goldschmidt, J., et al. Burden of chemotherapy-induced myelosuppression among patients with ES-SCLC in US community oncology settings. Future Onco. 18 (35), 3881-3894 (2022).
  3. Jia, W., Li, X., Zhang, T., Wang, C., Zhen, M. Efficiently normalizing leukopoiesis by gadofullerene nanoparticles to ameliorate radiation-triggered myelosuppression. J Mater Chem. B. 11 (31), 7401-7409 (2023).
  4. Hart, L., et al. Burden of chemotherapy-induced myelosuppression among patients with extensive-stage small cell lung cancer: A retrospective study from community oncology practices. Cancer med. 12 (8), 10020-10030 (2023).
  5. Pan, L., Zhang, T., Cao, H., Sun, H., Liu, G. Ginsenoside Rg3 for Chemotherapy-Induced Myelosuppression: A Meta-Analysis and Systematic Review. Front Pharmacol. 11, 649(2020).
  6. Schneider, A., Kuhn, H. -G., Schäbitz, W. R. A role for G-CSF (granulocyte-colony stimulating factor) in the central nervous system. Cell Cycle. 4 (12), 1753-1757 (2005).
  7. Hart, C., Grassinger, J., Andreesen, R., Hennemann, B. EPO in combination with G-CSF improves mobilization effectiveness after chemotherapy with ifosfamide, epirubicin and etoposide and reduces costs during mobilization and transplantation of autologous hematopoietic progenitor cells. Bone Marrow Transpl. 43 (3), 197-206 (2008).
  8. Miao, K., Liu, W., Xu, J., Qian, Z., Zhang, Q. Harnessing the power of traditional Chinese medicine monomers and compound prescriptions to boost cancer immunotherapy. Front Immunol. 14, 1277243(2023).
  9. Li, S., et al. Tailoring traditional Chinese medicine in cancer therapy. Mol Cancer. 24 (1), 27(2025).
  10. Ma, L. X., Ai, P., Li, H., Vardy, J. The prophylactic use of Chinese herbal medicine for chemotherapy-induced leucopenia in oncology patients: a systematic review and meta-analysis of randomized clinical trials. Support Care Cancer. 23 (2), 561-579 (2015).
  11. Han, J., et al. Study of the Effects and Mechanisms of Ginsenoside Compound K on Myelosuppression. J Agr Food Chem. 67 (5), 1402-1408 (2019).
  12. Shang, L., et al. Mechanism of Sijunzi Decoction in the treatment of colorectal cancer based on network pharmacology and experimental validation. J Ethnopharmacol. 302, 115876(2023).
  13. Zhao, N., et al. Jianpi-Yangxue-Jiedu decoction improves the energy metabolism of psoriasis mice by regulating the electron transfer of oxidative phosphorylation. J Ethnopharmacol. 324, 117714(2024).
  14. Zhang, S., et al. Jianpi Huayu Jiedu Decoction prevents the progression of H. pylori and MNU-induced gastric precancerous lesions by inhibiting ferroptosis and remodeling linoleic acid metabolism. J Ethnopharmacol. 352, 120217(2025).
  15. Gao, B., Wang, R., Peng, Y., Li, X. Effects of a homogeneous polysaccharide from Sijunzi decoction on human intestinal microbes and short chain fatty acids in vitro. J Ethnopharmacol. 224, 465-473 (2018).
  16. Luo, X., et al. STAT3 as a critical target of Sijunzi Decoction in the treatment of gastric cancer: evidence from integrated network pharmacology and experimental validation. Front Mol Biosci. 12, 1683806(2025).
  17. Zhang, L., et al. Danggui buxue decoction attenuates doxorubicin-induced cardiotoxicity by inhibiting ZBP1-mediated PANoptosis in vivo and in vitro. Phytomedicine. 145, 157037(2025).
  18. Mei, Z. G., et al. Fermented Chinese formula Shuan-Tong-Ling attenuates ischemic stroke by inhibiting inflammation and apoptosis. Neural Regen Res. 12 (3), 425-432 (2017).
  19. Huang, Q., et al. Jian-Pi-Bu-Xue-Formula Alleviates Cyclophosphamide-Induced Myelosuppression via Up-Regulating NRF2/HO1/NQO1 Signaling. Front Pharmacol. 11, 1302(2020).
  20. Yang, J., et al. Effect of Jianpi Shengxue Tablet on Iron Metabolism and Nutritional Status in Patients with Renal Anemia: A Prospective, Randomized, Open, Parallel Controlled and Multicenter Clinical Study. Curr Med Sci. 44 (3), 603-610 (2024).
  21. Hou, B., et al. Oral Chinese Herbal Medicine as an Adjuvant Treatment for Chemotherapy, or Radiotherapy, Induced Myelosuppression: A Systematic Review and Meta-Analysis of Randomized Controlled Trials. Evid-Based Compl Alt. 2017, 3432750(2017).
  22. Han, J. Y., et al. Ameliorating effects of compounds derived from Salvia miltiorrhiza root extract on microcirculatory disturbance and target organ injury by ischemia and reperfusion. Pharmacol Therapeut. 117 (2), 280-295 (2007).
  23. Liu, Y., et al. Integration of Network Pharmacology and Experimental Validation to Explore Jixueteng - Yinyanghuo Herb Pair Alleviate Cisplatin-Induced Myelosuppression. Integr Cancer Ther. 23, 15347354241237969(2024).
  24. Liu, Y., et al. Anti-Alzheimers molecular mechanism of icariin: insights from gut microbiota, metabolomics, and network pharmacology. J Transl Med. 21 (1), 277(2023).
  25. Zhang, H., et al. Bioinformatics and Network Pharmacology Identify the Therapeutic Role and Potential Mechanism of Melatonin in AD and Rosacea. Front Immunol. 12, 756550(2021).
  26. Qu, W., et al. Effect of Jianpi Shengxue Granule on Fertility and Early Embryo Development Toxicity of Rats. Chin J Integr Med. 37 (3), 356-359 (2017).
  27. Ouyang, X., et al. Induction of anaplastic lymphoma kinase (ALK) as a novel mechanism of EGFR inhibitor resistance in head and neck squamous cell carcinoma patient-derived models. Cancer Biol Ther. 19 (10), 921-933 (2018).
  28. Cinque, L., et al. Novel association of MEN1 gene mutations with parathyroid carcinoma. Oncol Lett. 14 (1), 23-30 (2017).
  29. Huyan, X. H., Lin, Y. P., Gao, T., Chen, R. Y., Fan, Y. M. Immunosuppressive effect of cyclophosphamide on white blood cells and lymphocyte subpopulations from peripheral blood of Balb/c mice. Int Immunopharmacol. 11 (9), 1293-1297 (2011).
  30. He, Y., et al. Mesenchymal stem cells empower T cells in the lymph nodes via MCP-1/PD-L1 axis. Cell Death Dis. 13 (4), 365(2022).
  31. Recordati, C., et al. Repeated oral administration of low doses of silver in mice: tissue distribution and effects on central nervous system. Part Fibre Toxicol. 18 (1), 23(2021).
  32. Ram, S., et al. Pixelwise H-score: A novel digital image analysis-based metric to quantify membrane biomarker expression from immunohistochemistry images. Plos One. 16 (9), e0245638(2021).
  33. Woo, B., et al. Automated anomaly-aware 3D segmentation of bones and cartilages in knee MR images from the Osteoarthritis Initiative. Med Image Anal. 93, 103089(2024).
  34. Chinese Pharmacopoeia Commission. Pharmacopeia of the People's Republic of China. , People's Medical Publishing House. Beijing, China. (2005).
  35. Chen, Y., et al. Quality Control of Glehniae Radix, the Root of Glehnia Littoralis Fr. Schmidt ex Miq. Along its Value Chains. Front Pharmacol. 12, 729554(2021).
  36. Ru, J., et al. TCMSP: a database of systems pharmacology for drug discovery from herbal medicines. J Cheminformatics. 6, 13(2014).
  37. Matsuura, S., et al. Negative effects of GM-CSF signaling in a murine model of t(8;21)-induced leukemia. Blood. 119 (13), 3155-3163 (2012).
  38. Tsiftsoglou, A. S. Erythropoietin (EPO) as a Key Regulator of Erythropoiesis, Bone Remodeling and Endothelial Transdifferentiation of Multipotent Mesenchymal Stem Cells (MSCs): Implications in Regenerative Medicine. Cells. 10 (8), 2140(2021).
  39. Yu, L., Wei, J., Liu, P. Attacking the PI3K/Akt/mTOR signaling pathway for targeted therapeutic treatment in human cancer. Semin Cancer Biol. 85, 69-94 (2021).
  40. Alves, C. L., Ditzel, H. J. Drugging the PI3K/AKT/mTOR Pathway in ER+ Breast Cancer. Int J Mol Sci. 24 (5), 4522(2023).
  41. Guan, P., Cui, R., Wang, Q., Sun, Y. A 3D hydrogel loaded with exosomes derived from bone marrow stem cells promotes cartilage repair in rats by modulating immunological microenvironment. Nanfang Yike Daxue Xuebao. 42 (4), 528-537 (2022).
  42. Liu, Z., et al. Activating Angiogenesis and Immunoregulation to Propel Bone Regeneration via Deferoxamine-Laden Mg-Mediated Tantalum Oxide Nanoplatform. Acs Appl Mater Inter. 16 (19), 24384-24397 (2024).
  43. McCloskey, E. V., Guest, J. F., Kanis, J. A. The clinical and cost considerations of bisphosphonates in preventing bone complications in patients with metastatic breast cancer or multiple myeloma. Drugs. 61 (9), 1253-1274 (2001).
  44. Lin, L., et al. Characterization of Differences in Chemical Profiles and Antioxidant Activities of Schisandra chinensis and Schisandra sphenanthera Based on Multi-Technique Data Fusion. Molecules. 29 (20), 4865(2024).
  45. Dabeek, W. M., Marra, M. V. Dietary Quercetin and Kaempferol: Bioavailability and Potential Cardiovascular-Related Bioactivity in Humans. Nutrients. 11 (10), 2288(2019).
  46. Li, W., et al. Flavonoids from Glycyrrhiza pallidiflora hairy root cultures. Phytochemistry. 60 (4), 351-355 (2002).
  47. Nian, Q., Liu, R., Zeng, J. Unraveling the pathogenesis of myelosuppression and therapeutic potential of natural products. Phytomedicine. 132, 155810(2024).
  48. Kellogg, C., Equils, O. The role of the thymus in COVID-19 disease severity: implications for antibody treatment and immunization. Hum Vaccin Immunother. 17 (3), 638-643 (2020).
  49. Liu, X., et al. Critical role of niche S100A8 for acute myeloid leukemia progression and hematopoiesis regeneration. Blood Adv. 9 (24), 6575-6589 (2025).
  50. Jafari, M., Ghadami, E., Dadkhah, T., Akhavan-Niaki, H. PI3k/AKT signaling pathway: Erythropoiesis and beyond. J Cell Physiol. 234 (3), 2373-2385 (2018).
  51. Novoplansky, O., et al. Activation of the EGFR/PI3K/AKT pathway limits the efficacy of trametinib treatment in head and neck cancer. Mol Oncol. 17 (12), 2618-2636 (2023).
  52. Weidemann, A., Johnson, R. S. Nonrenal regulation of EPO synthesis. Kidney Int. 75 (7), 682-688 (2009).
  53. Pallard, C., et al. Thrombopoietin activates a STAT5-like factor in hematopoietic cells. Embo J. 14 (12), 2847-2856 (1995).
  54. Stasi, R., et al. Thrombopoietic agents. Blood Reviews. 24 (4-5), 179-190 (2010).
  55. He, K., et al. G-CSF/GM-CSF-induced hematopoietic dysregulation in the progression of solid tumors. FEBS Open Bio. 12 (7), 1268-1285 (2022).
  56. Patsoukis, N., et al. Immunometabolic Regulations Mediated by Coinhibitory Receptors and Their Impact on T Cell Immune Responses. Front Immunol. 8, 330(2017).
  57. Geraud, A., et al. Clinical Pharmacology and Interplay of Immune Checkpoint Agents: A Yin-Yang Balance. Annu Rev Pharmacol. 61, 85-112 (2020).
  58. Naveiras, O., et al. Bone-marrow adipocytes as negative regulators of the haematopoietic microenvironment. Nature. 460 (7252), 259-263 (2009).
  59. Ambrosi, T. H., et al. Adipocyte Accumulation in the Bone Marrow during Obesity and Aging Impairs Stem Cell-Based Hematopoietic and Bone Regeneration. Cell Stem Cell. 20 (6), 771-784 (2017).
  60. Zhang, L., et al. Qingjie Fuzheng Granule attenuates 5-fluorouracil-induced intestinal mucosal damage. Biomed Pharmacother. 118, 109223(2019).

Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.

Nachdrucke und Genehmigungen

Tags

Cyclophosphamid-induzierte MyelosuppressionNetzwerkpharmakologieProtein-InteraktionsnetzwerkKEGG-EnrichmentGenontologiePI3K-Akt-SignalwegJAK-STAT-SignalwegCD34-positive ZellenChemotherapie-induzierte Leukopenie

Dieser Artikel wurde veröffentlicht

Video demnächst verfügbar

Kontaktieren Sie uns
Der Bibliothek empfehlen

Datenschutz

Nutzungsbedingungen

Richtlinien

Urheberrecht © 2026 MyJoVE Corporation. Alle Rechte vorbehalten.