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Forschungsartikel

Gastrodin lindert die Tau-Hyperphosphorylierung, die mit Veränderungen der AKT/GSK-3β-Signalübertragung in einem Alzheimer-Zellmodell assoziiert ist

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DOI:

10.3791/70432

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24. März 2026

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1College of Life Sciences and Medicine, Zhejiang Sci-Tech University, 2Zhejiang Sci-Tech University Shaoxing Academy of Biomedicine

* These authors contributed equally

In diesem Artikel

Zusammenfassung

Hier präsentieren wir ein Protokoll zur Etablierung eines Okadainsäure-induzierten Alzheimer-Krankheits-Zellmodells in SH-SY5Y-Zellen und zur Bewertung der neuroprotektiven Effekte von Gastrodin mittels oxidativem Stress und AKT/GSK-3β-Weganalysen.

Zusammenfassung

Die Alzheimer-Krankheit (AD) ist eine häufige neurodegenerative Erkrankung, für die es derzeit nur wenige wirksame Medikamente gibt. Als der wichtigste bioaktive Wirkstoff, der aus Gastrodia elata gewonnen wird, hat Gastrodin (GAS) ein klares therapeutisches Potenzial zur Behandlung von AD gezeigt; der molekulare Mechanismus seiner Wirkung bleibt jedoch noch zu klären. In dieser Studie wollen wir den Mechanismus der Wirkung von GAS auf AD-Modellzellen untersuchen. Netzwerkpharmakologie wird eingesetzt, um die Ziel- und Signalwege zu analysieren, die von GAS in AD beeinflusst werden. Ein AD-Zellmodell wird konstruiert, indem humane Neuroblastomzellen SH-SY5Y mit Okadainsäure (OA) induziert werden. Die Zellviabilität wurde mit dem CCK-8-Test bewertet, während die Werte von SOD, MDA und T-AOC gemessen wurden. Die Apoptoserate wurde mittels Annexin V-FITC/PI-Doppelfärbung bestimmt, und die Expression apoptose-bezogener Faktoren sowie AKT, GSK-3β, p-Tau (Ser396) und p-Tau (Thr181) wurden mit RT-qPCR und Western Blotting-Techniken analysiert. Die pharmakologische Analyse des Netzwerks legt nahe, dass GAS das Potenzial hat, die zelluläre Apoptose und die damit verbundenen Signalwege, einschließlich PI3K/AKT, zu regulieren. Unsere Experimente zeigen, dass GAS die MDA-Spiegel hemmen, T-AOC und SOD in den AD-Modellzellen erhöhen und die Apoptose der Zellen reduzieren kann. Western-Blotting-Ergebnisse zeigen, dass GAS die hemmenden Auswirkungen von OA auf die Expression von p-AKT (Ser473) und p-GSK-3β (Ser9) mindert. Außerdem dämpft es die Überexpression von p-Tau (Ser396) und p-Tau (Thr181), unterdrückt die Bax-Expression und verstärkt die Bcl-2-Expression. GAS zeigt die Fähigkeit, oxidative Belastungsverletzungen durch Arthrose zu mildern und Apoptose zu mildern. GAS kann die Tau-Hyperphosphorylierung unterdrücken, die mit Veränderungen im AKT/GSK-3β-Signalweg einhergeht, und so potenzielle neuroprotektive Effekte ausüben.

Einleitung

Die Alzheimer-Krankheit (AD) ist eine fortschreitende neurodegenerative Erkrankung, die hauptsächlich durch Gedächtnisverlust und kognitive Beeinträchtigungen gekennzeichnet ist und die weltweit am häufigsten verbreitete Form der Demenz darstellt und etwa 60 % bis 80 % der Fälleausmacht. Die zugrundeliegende Pathogenese von AD bleibt komplex und noch nicht vollständig geklärt2. Wichtige pathologische Merkmale, die in klinischen AD-Fällen beobachtet werden, sind die Ansammlung von senilen Plaques (SP) und neurofibrillären Tangles (NFTs) im Gehirn 3,4. Es ist allgemein bekannt, dass die beiden zentralen pathologischen Ereignisse bei AD die extrazelluläre Ablagerung von β-Amyloid-Protein (Aβ) zur Bildung seniler Plaques und die intrazelluläre Aggregation von hyperphosphoryliertem Tau-Protein zur Bildung neurofibrillärer Tangles 5,6,7 sind. Darüber hinaus sind oxidativer Stress und Neuroinflammation zusätzliche Faktoren, die zur Verschlechterung von AD 8,9,10,11 beitragen können.

Da sich der weltweite Alterungstrend der Bevölkerung verschärft, ist die Zahl der Demenzpatienten deutlichgestiegen um 12.13. Die Behandlungsmöglichkeiten für AD bleiben jedoch begrenzt und bestehen überwiegend aus Einzelzielmedikamenten wie Memantin, Donepezil und Galantamin14. Ihre therapeutischen Wirkungen sind jedoch in erster Linie palliativ und nicht krankheitsmodifizierend, und bestimmte Nebenwirkungen wie Magen-Darm-Störungen, Schwindel und Bradykardie wurden berichtet. Daher bleibt die Entwicklung sichererer und wirksamerer therapeutischer Strategien eine wichtige Forschungspriorität15,16. Kürzlich eingeführte monoklonale Medikamente wie Lecanemab haben Patienten mit leichter AD neue Hoffnung gebracht. Doch ihre hohen Kosten und Einschränkungen decken den erheblichen therapeutischen Bedarf nicht. Die Prävention und Behandlung von AD stellt weiterhin eine bedeutende Herausforderung dar17,18. Die Ergebnisse verschiedener Studien haben gezeigt, dass Heilpflanzen, insbesondere traditionelle chinesische Medikamente, multikomponentige Effekte aufweisen, die mehrere Signalwege ansprechen, die an neurodegenerativen Erkrankungen wie AD beteiligt sind. Studien haben gezeigt, dass aktive Verbindungen von Ganoderma lucidum oxidative Schäden im Gehirngewebe von AD-Mäusen lindern, Apoptose hemmen, die Nekrose von hippocampalen Neuronen reduzieren und kognitive Beeinträchtigungen verbessernkönnen 19. In der AD-Forschung nutzten Bao et al. Netzwerkpharmakologie, um Schlüsselziele von Astragalosid IV bei AD-bedingten Entzündungen zu identifizieren. Ihre Ergebnisse zeigten, dass der epidermale Wachstumsfaktorrezeptor (EGFR) und Interleukin-1β (IL-1β) entscheidende Ziele sind und potenzielle therapeutische Kandidaten und Krankheitsziele für die klinische Behandlung neurodegenerativerErkrankungen bereitstellen. Dartigues et al.21 analysierten Ginkgo-biloba-Extrakt und zeigten, dass er positive Effekte auf die Verringerung des Demenz- und Mortalitätsrisikos bei älteren Menschen hat. Patienten, die mit Ginkgo-biloba-Extrakt behandelt wurden, zeigten eine niedrigere Sterblichkeitsrate:22.

Gastrodia elata, die zur Familie der Orchidaceae gehört, ist ein traditionelles chinesisches Kraut, essbar und medizinisch. Das Rhizom von Gastrodia elata ist reichlich an Gastrodin (GAS), Gastrodia-Polysacchariden und Alkaloiden enthalten. Jüngste pharmakologische Forschungen haben gezeigt, dass diese Wirkstoffe sowohl gedächtnisfördernde als auch kognitiv verbessernde Effekte sowie neuroprotektive Eigenschaften und Wirksamkeit bei der Behandlung von Schlaflosigkeit und Schwindelbesitzen 23. Die wichtigste bioaktive Verbindung von Gastrodia elata ist GAS, das aus der Knolle gewonnen wird und medizinische Eigenschaften besitzt. GAS, auch bekannt als 4-Hydroxybenzylalkohol 4-O-β-d-Glucosid, gehört zur Klasse der phenolischen Glykoside24. Die chemische Struktur von GAS ist in Abbildung 1 dargestellt und zeigt ein Molekulargewicht von 286,278. Die relativ niedrige Molekularmasse von Glykosiden und Monoglykosiden erleichtert deren effizientes Durchdringen durch die Blut-Hirn-Schranke und bildet somit die grundlegende Grundlage für die neuroprotektive Rollevon GAS 25. Darüber hinaus erhöht ihre hohe Aufnahmefähigkeit ihre Wirksamkeitweiter 26. In den letzten Jahren haben zahlreiche Studien das Potenzial von GAS bei der Behandlung verschiedener Hirnerkrankungen gezeigt, darunter AD27, 28, 29, 30, Parkinson (PD)31 und zerebrale Ischämie32. GAS weist eine breite Palette pharmakologischer Eigenschaften auf, darunter antioxidative, hypolipidämische, entzündungshemmende und anti-Aging-Effekte 33,34. Ihr Wirkmechanismus umfasst mehrere Signalwege wie Nrf2, NF-κB und AMPK35. GAS übt neuroprotektive Effekte in einem Mausmodell der Pb-induzierten neurologischen Verletzung aus, indem es den Wnt/Nrf2-Weg36 moduliert, und zeigt zudem eine anti-apoptotische Wirkung bei der Behandlung neurodegenerativer Erkrankungen durch die Regulation des Nrf2-Signalwegs37. GAS hatte außerdem eine positive Wirkung auf AD, indem es die hippocampale BACE1-Expression über den Protein-Kinase/eukaryotischen Initiationsfaktor-2α (PKR/eIF2α)-Signalweg38 unterdrückte. Darüber hinaus zeigte GAS hemmende Effekte auf die TCDD-induzierte NF-κB-Signalaktivierung, wodurch die Apoptose der PC12-Neuronen und die Aktivierung der Astrozyten39 abgeschwächt wurde.

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Abbildung 1: Chemische Strukturformel von GAS. Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzusehen.

OA, abgeleitet vom schwarzen Schwamm der Gattung Halichondria, gehört zu einer Klasse langkettiger Fettsäuren und dient als Hauptbestandteil des Durchfall-Schalentiergifts (DSP). Es hemmt effektiv die Aktivitäten von Proteinphosphatasen, insbesondere PP1A und PP2A, was zu zellulärer Hyperphosphorylierung und Störung der zellulären Homöostaseführt. Diese Eigenschaft macht sie zu einem wertvollen Werkzeug zur Untersuchung von Krankheiten, die mit der Proteinphosphorylierung verbunden sind. Daher ermöglicht die Nutzung von OA den Aufbau von AD-Zellmodellen, die Veränderungen in der Phosphorylierung von Tau-Proteinen aufweisen. Diese Studie zielt darauf ab, die Auswirkungen und den Mechanismus von GAS, dem primären aktiven Bestandteil von Gastrodia elata, auf das durch OA induzierte AD-Zellmodell zu untersuchen und dessen neuroprotektiven Effekt auf AD-Modellzellen durch gezielte Zielerfassung des AKT/GSK-3β-Signalwegs zu klären.

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Protokoll

Alle Netzwerkpharmakologie-Operationen wurden gemäß den Richtlinien für Netzwerkpharmakologie-Evaluationsmethoden durchgeführt. Alle experimentellen Verfahren wurden in Übereinstimmung mit den Vorschriften der Laborverwaltung der Zhejiang Sci-Tech University durchgeführt.

Netzwerkpharmakologie
Vorhersage potenzieller Ziele von GAS: Die kanonischen SMILES of GAS (PubChem CID: 1150) wurde aus der PubChem-Datenbank42 abgerufen. Die SMILES-Struktur wurde in die SwissTargetPrediction-Datenbank (http://www.swisstargetprediction.ch/)43 hochgeladen. Der Artparameter wurde auf Homo sapiens gesetzt. Vorhergesagte Ziele mit einem Wahrscheinlichkeitswert > 0,1 wurden beibehalten, um falsch-positive Vorhersagen zu reduzieren. Alle vorhergesagten Proteinziele wurden auf offizielle Gensymbole mit Hilfe der UniProt-Datenbank43 standardisiert (Spezies beschränkt auf Homo sapiens), und doppelte Einträge wurden entfernt.

AD-bezogene Gene wurden aus der GeneCards-Datenbank (https://www.genecards.org/)44,45 und der OIM-Datenbank (https://www.omim.org/)46 gesammelt, wobei "Alzheimer-Krankheit" als Suchbegriff verwendet wurde. In GeneCards wurden Gene mit einem Relevance Score > 10 ausgewählt. Ziele, die von GeneCards und OMIM gewonnen wurden, wurden zusammengeführt, Duplikate entfernt, und Gennamen wurden mit UniProt standardisiert.

Die vorhergesagten GAS-Ziele und AD-bezogenen Gene wurden in die Online-Plattform Venny 2.1 importiert, um überlappende Ziele zu erhalten. Insgesamt wurden 52 sich überschneidende Gene (siehe ergänzende Tabelle 1) als potenzielle therapeutische Ziele von GAS bei AD identifiziert.

Die 52 sich schneidenden Ziele wurden zur PPI-Analyse in die STRING-Datenbank (https://string-db.org/)47 hochgeladen. Die Art wurde auf Homo sapiens gesetzt, und der minimale erforderliche Interaktionswert wurde auf 0,4 (mittlere Zuverlässigkeit) gesetzt. Getrennte Knoten waren versteckt. Die resultierenden Interaktionsdaten wurden exportiert und mit der Cytoscape-Software (Version 3.9.1) visualisiert.

GO- und KEGG-Anreicherungsanalyse: Die 52 sich überschneidenden Ziele wurden in die Metascape-Datenbank (https://metascape.org/)48 für Gene Ontology (GO) und Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes (KEGG) Anreicherungsanalysen hochgeladen. Die Art wurde auf Homo sapiens gesetzt. Die Anreicherungskriterien wurden definiert als p-Wert < 0,01, minimale Überlappung ≥ 3 und Anreicherungsfaktor > 1,5. KEGG-Signalwege wurden nach p-Wert bewertet, und die 20 wichtigsten signifikant angereicherten Wege wurden für die Visualisierung ausgewählt. Die Anreicherungsergebnisse wurden mithilfe einer Online-Bioinformatikplattform visualisiert.

Die Proteinstrukturdatei von GSK-3β wurde aus der RCSB PDB-Datenbank bezogen. Die Strukturdatei von GAS im SDF-Format wurde aus der PubChem-Datenbank heruntergeladen und anschließend mit der Open Babel GUI-Software in das Mol2-Format konvertiert. Die oben genannten Dateien wurden mit der AutoDock-Software verarbeitet, um Wasserstoffatome hinzuzufügen, Wassermoleküle zu entfernen und Ladungen zuzuweisen. Die verarbeiteten Dateien wurden anschließend im PDBQT-Format gespeichert. Nach der Erkennung und Verarbeitung von Torsionsbindungen in den Ligandenmolekülen wurden die Dateien anschließend im PDBQT-Format gespeichert. Die niedrigste Bindungsenergie zwischen den beiden Molekülen wurde durch molekulares Andocken mit der AutoDock Vina-Software erreicht. Anschließend wurden die Andockergebnisse mit PyMOL visualisiert und analysiert.

Lagerlösungsvorbereitung
Das OA-Pulver (25 μg) wurde vollständig in 1200 μL 10%igen Dimethylsulfoxid (DMSO) gelöst, das mit steriler phosphatgepufferter Kochsalzlösung (PBS) hergestellt wurde, um eine 25 μM große Lagerlösung zu erzeugen. Die Lagerlösung wurde aliquotiert und bei -80 °C gelagert. Vor jedem Experiment wurde OA frisch mit vollständigem Dulbeccos Modified Eagle Medium (DMEM) (siehe Materialtabelle) auf die gewünschten Arbeitskonzentrationen verdünnt. GAS-Pulver (20 mg) wurde in 1,4 mL sterilem PBS gelöst, durch eine 0,22 μm-Membran zur Sterilisation gefiltert und als 50-mM-Lagerlösung hergestellt, die bei -20 °C gelagert wurde. Vor der Verwendung wurde die Serienlösung mit vollständigem DMEM auf die angegebenen Arbeitskonzentrationen verdünnt.

Konstruktion des AD-Zellmodells
Humane Neuroblastom-SH-SY5Y-Zellen wurden gewonnen und in dieser Studie verwendet (siehe Materialtabelle). SH-SY5Y-Zellen wurden mit Gradientenkonzentrationen von OA (0, 10, 20, 40, 80, 160 nM) für Dauern von 12, 24 bzw. 36 Stunden induziert, um das AD-Zellmodell zu etablieren.

Zellviabilitätstest
Um die optimale Konzentration und Induktionsdauer von OA für die Etablierung des AD-Zellmodells zu bestimmen, wurden SH-SY5Y-Zellen mit Gradientenkonzentrationen von OA (0, 10, 20, 40, 80 und 160 nM) für verschiedene Zeiträume (12, 24 und 36 Stunden) behandelt, und die Zellviabilität wurde mit dem CCK-8-Test49 bewertet. SH-SY5Y-Zellen wurden in 96-Well-Platten mit einer Dichte von 7,5 × 103 Zellen pro Bohrloch in 100 μL vollständigem DMEM eingesetzt. Die Platten wurden bei 37 °C in einem befeuchteten Inkubator mit 5 % CO₂ für 24 Stunden inkubiert, um eine Zellbindung zu ermöglichen. Nach 24 Stunden Anbindung wurde jedem Bohrloch 100 μL OA-Arbeitslösung zugegeben, um Endkonzentrationen von 0, 10, 20, 40, 80 und 160 nM in einem Gesamtvolumen von 200 μL pro Bohrloch zu erreichen. Die Kontrollgruppe (CON) erhielt ein gleiches Volumen vollständigen DMEM ohne OA, während die OA-Gruppe OA bei den angegebenen Konzentrationen erhielt. Die Zellen wurden 12 Stunden, 24 oder 36 Stunden unter Standardkulturbedingungen inkubiert. Jeder Konzentrations- und Zeitpunkt wurde mit sechs Replikationsbrunnen festgelegt. Drei Leerbrunnen (nur Medium) wurden zur Hintergrundkorrektur einbezogen.

Bestimmung des zellulären oxidativen Stressindex
Die SH-SY5Y-Zellen in der logarithmischen Wachstumsphase wurden in eine 6-Well-Platte eingepflanzt. Nach der Zellbehandlung wurde das vorherige Medium aus den Brunnen entsorgt. Anschließend wurden die Brunnen dreimal mit vorgekühltem PBS bei 4 °C gewaschen. Danach wurde ein Zelllysepuffer hinzugefügt, und die Zellen wurden auf Eis mit der entsprechenden Methode wie vom Kit angegeben lysiert. Der Proteingehalt der Proben wurde mit dem BCA-Protein-Testkit quantifiziert (siehe Materialtabelle). Die Aktivitäten von T-AOC, SOD und MDA wurden gemäß den Anweisungen der jeweiligen Prüfkits bestimmt (siehe Materialtabelle).

Zellapoptose-Nachweis
Die Zellapoptose wurde mit einem Annexin V-FITC/PI Doppelfärbungsset (siehe Materialtabelle) gemäß den Anweisungen des Herstellers untersucht. Kurzzeitig wurden sowohl schwebende als auch adhärente Zellen gesammelt. Adhärente Zellen wurden mittels Trypsin ohne EDTA verdaut, um Schäden an künstlicher Membran zu vermeiden, und kombiniert mit schwimmenden Zellen. Die Zellen wurden zweimal mit kaltem PBS gewaschen und in 500 μL 1× Bindungspuffer mit einer Dichte von 0,5–1 × 106Zellen neu suspendiert.

Anschließend wurden 5 μL Annexin V-FITC und 5 μL Propidiumiodid (PI) zu jeder Probe hinzugefügt, sanft gemischt und bei Raumtemperatur im Dunkeln 10–20 Minuten inkubiert. Die Proben wurden auf Eis gelegt und innerhalb von 1 Stunde mit einem Durchflusszytometer analysiert.

Für die Flowzytometrie wurden ungefärbte Kontrollen und Einzelfärbungskontrollen (nur Annexin V-FITC und nur PI) verwendet, um Kompensationsparameter und Quadrantengatter festzulegen. Zunächst wurde das Vorwärts- und Seitenstreu-Gating (FSC/SSC) angewendet, um Trümmer und Zellaggregate auszuschließen. Es wurden mindestens 10.000 Ereignisse pro Probe erfasst. Die Daten wurden mit der FlowJo-Software analysiert.

Echtzeit-quantitative PCR-Analyse (RT-qPCR)
Laut den Anweisungen des AG-Reverse-Transkriptions-Kit wurde die extrahierte RNA einer Reverse-Transkription unterzogen, um komplementäre DNA (cDNA) zu erzeugen, die anschließend zehnfach mit sterilem Wasser verdünnt wurde, um als Vorlage zu dienen. Das RT-qPCR-Reaktionssystem wurde nach dem Protokoll des Green Master Mix (No Rox)-Kits vorbereitet, und die Analyse erfolgte mit einem fluoreszierenden quantitativen PCR-Instrument (siehe Materialtabelle). Die erhaltenen CT-Werte wurden verarbeitet und analysiert, und die Expressionsniveaus der Zielgene wurden mit der 2-ΔΔCt-Methode berechnet, wobei ΔCt die Differenz zwischen den Ct-Werten in der Behandlungsgruppe und GAPDH darstellt und ΔΔCt die Differenz zwischen den ΔCt-Werten in der Behandlungsgruppe und der Kontrollgruppe. Die Liste der Primer findet sich in der ergänzenden Tabelle 2.

Westliche Blotting-Analyse
Der Zelllysepuffer wurde zusammen mit einem Proteaseinhibitor und einem Phosphataseinhibitor im Verhältnis 100:1:1 kombiniert. Die Zellen wurden lysiert, um zelluläre Proteine zu extrahieren. Die Proteinkonzentration wurde mit dem BCA-Testkit bestimmt. Proteine (20–30 μg pro Lane) wurden auf 10%igen SDS-PAGE-Gelen mit 80 V für das Stapelgel und 120 V für das auflösende Gel getrennt. Die Proteine wurden für 90 Minuten mittels Nasstransfer auf PVDF-Membranen (0,45 μm) bei 300 mA übertragen. Die Membran wurde mit 5 % Magermilch bei Raumtemperatur für 2 Stunden blockiert, gefolgt von einer nächtlichen Inkubation mit Primärantikörper (siehe Materialtabelle) bei 4 °C. Nach der 1 Stunde Inkubation mit dem sekundären Antikörper bei Raumtemperatur wurde die Membran jeweils viermal mit TBST für jeweils 5 Minuten gewaschen. Die Bänder wurden mit Enhanced Chemiluminescence (ECL)-Detektionsreagenzien visualisiert (siehe Materialtabelle), und der Nachweis erfolgte mit einem Gelbildgebungssystem. Die Graustufenwerte wurden mit der ImageJ-Software für Datenanalysen analysiert.

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Ergebnisse

GAS-bezogenes Zielscreening zur Behandlung von AD
Die Identifizierung der GAS-Ziele zur Behandlung von AD beinhaltete Datenbanksuchen und Softwareanalysen. Die Swiss Target Prediction-Datenbank lieferte 100 potenzielle Ziele, während OMIM und GeneCards (mit einem Relevanzwert > 10) für AD-bezogene Ziele abgefragt wurden, was insgesamt 2376 potenzielle Ziele ergab. Anschließend ermöglichte die Nutzung der Online-Plattform Venny 2.1 die Identifikation von 52 potenzielle...

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Diskussion

In den letzten Jahren hat die Prävalenz von AD weltweit zugenommen. Diese Erkrankung zeichnet sich durch einen chronischen Verlauf, irreversible Natur, Behinderung und erhöhte Sterblichkeitsraten aus, was sie im Kontext einer alternden Weltbevölkerung zu einer erheblichen Herausforderung macht. Trotz ihrer Bedeutung ist die Ätiologie von AD komplex, und ihre Pathogenese bleibt unvollständig verstanden51.

Die traditionelle chinesische Me...

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Offenlegungen

Die Autoren haben nichts offenzulegen.

Danksagungen

Diese Forschung wurde vom Open Fund der Zhejiang Sci-Tech University, Shaoxing Academy of Biomedicine (SXAB202007) unterstützt.

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Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien
NameUnternehmenKatalognummerKommentare
7500 Echtzeit-PCR-SystemAPExBIO S0080Verwendet zum Nachweis apoptotischer Zellen
A450 Enzym-MarkierungsinstrumentProteintech 50599-2-IgWB, Verdünnung 1:1000
Annexin V-FITC Apoptose-DetektionskitProteintech 60178-1-IgWB, Verdünnung 1:1000
Anti-Bax-AntikörperProteintech 10494-1-APWB, Verdünnung 1:1000
Anti-Bcl-2-AntikörperAbcam ab32057WB, Verdünnung 1:1000
Anti-GAPDH-AntikörperProteintech 28866-1-APWB, Verdünnung 1:1000
Anti-p-Tau (Ser396) AntikörperBiofroxx 1172Blockpuffer für WB
Anti-p-Tau (Thr181) AntikörperVazyme Biotech 
A311-01/02		Verwendet für den Zellviabilitätstest
Biofroxx MagermilchpulverSolarbio Science & Technologie D8371Lösungsmittel für Verbindungen
CCK-8-BausatzWisent-Biotechnologie319-105-CLFür Zellkultur
Dimethylsulfoxidid (DMSO)APExBIO (USA)K1231WB-Detektionsreagenz
DMEM-HochglukosemediumAladdin Biochemische Technologie G111309Wirkstoff
ECL chemilumineszente ReagenzPromega   A6101Für qPCR-Verstärkung
DurchflusszytometerSolarbio Science & Technologie BC6410Lipidperoxidationstest
Gastrodin (GAS) Pulver, Reinheit & Ge; 98%MedChemExpressHY-N6785Induzator der Tau-Hyperphosphorylierung
GelbildgebungssystemBeyotime BiotechnologieC0221AWasche die Zellen
GoTaq qPCR Master MixProteintech SA00001-1WB, Verdünnung 1:5000
MDA-Testkit (Malondialdehyd)Proteintech SA00001-2WB, Verdünnung 1:5000
Okadainsäure (OA)ATCCCRL-2266Zelle
PBSBeyotime BiotechnologieS0101MFür oxidatives Stress-Assay
Sekundärer Antikörper (Ziegen-Antimaus-IgG, HRP-konjugiert)Solarbio Science & Technologie BC1315Erkennung der antioxidativen Kapazität
Sekundärer Antikörper (Ziegen-Antikaninchen-IgG, HRP-konjugiert)Beyotime Biotechnologie R0016RNA-Extraktion
SH-SY5YSigma-Aldrich 
9002-07-7		Zellverdauung
SOD-Testkit (totale Superoxiddismutase)Thermo Fisher ScientificA45072Multifunktionaler Mikroplattenleser zur Absorptionserkennung
Total Antioxidant Capacity (T-AOC) KitBecton, Dickinson und Co.661310Für Multi-Parameter-Einzelzellanalyse und Zellsortierung.
TrizolreagenzThermo Fisher Scientific4351104Genexpressionsanalyse
TrypsinBio Rad1708195DNA/RNA/Protein-Gel-Bildgebung

Referenzen

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