Pharmakologische Modulation der Stressachse des ALDH2-SIRT1-endoplasmatischen Retikulums bei MNU-induzierter Netzhautdegeneration bei C57BL/6-Mäusen: Eine In-vivo-Studie

Zusammenfassung

Die Studie umfasste die Verabreichung von Methyl-Nitrosourea an C57BL/6-Mäuse, um Netzhautschäden zu induzieren, gefolgt von einer Behandlung mit ALDH2-Aktivatoren und -Inhibitoren zusammen mit SIRT1- und endoplasmatischen Retikulum-Stressmodulatoren (ERS). Das Protokoll zielte darauf ab, die schützenden Effekte dieser Behandlungen auf die Netzhautdegeneration und deren Einfluss auf den Aldehydstoffwechsel zu untersuchen.

Zusammenfassung

Diese Studie untersuchte die schützenden Effekte der Aktivierung der Aldehyddehydrogenase 2 (ALDH2) (über Alda-1), der ALDH2-Hemmung (über Daidzin) sowie der Modulation von Sirtuin 1 (SIRT1) und endoplasmatischem Retikulumstress (ERS) auf durch Methyl-Nitrosourea (MNU)-induzierte Netzhautschäden bei C57BL/6-Mäusen. Zweiundsiebzig Mäuse wurden zufällig acht Gruppen zugeteilt, darunter eine Kontrollgruppe, eine MNU-Only-Gruppe und verschiedene Kombinationsgruppen für Behandlungen. Mäuse wurden mit intraperitonealen Injektionen von Agonisten und Inhibitoren verabreicht, die jeweils auf die ALDH2-SIRT1-ERS-Achse abzielten. Körpergewicht, Netzhautschichtdicke und Aldehydstoffwechsel-Biomarker wurden am zweiten und vierten Tag nach der Behandlung bewertet. Die Verabreichung der MNU führte zu einer Netzhautabart, was in allen Gruppen außer der Kontrollgruppe zu einem signifikanten Gewichtsverlust führte. Die Behandlung mit Alda-1 schwächte die Netzhautschädigung ab, während Daidzin sie verschlimmerte. Die pharmakologische Hemmung von SIRT1 (über EX-527) verringerte die schützenden Effekte von Alda-1, und die ERS-Induktion (über TUN) machte seine Vorteile nahezu zunichte. Umgekehrt milderte die SIRT1-Aktivierung (über SRT1720) die Nebenwirkungen von Daidzin, während die ERS-Hemmung (über 4-PBA) die Wirkung von Daidzin teilweise milderte. Darüber hinaus erhöhte MNU die Werte der Aldehydstoffwechselmarker (Malondialdehyd [MDA] und 4-Hydroxy-2-nonenal [4-HNE]), wobei Alda-1 diese Werte senkte und Daidzin diese Werte erhöhte. Darüber hinaus griff die pharmakologische Modulation der SIRT1/ERS-Signalwege in die regulatorischen Effekte von Alda-1 und Daidzin auf den Aldehydstoffwechsel ein. Insgesamt schützte die ALDH2-Aktivierung die Netzhautstruktur und regulierte den Aldehydstoffwechsel, was die entscheidende Rolle der ALDH2-SIRT1/ERS-Signalachse bei der Abschwächung der Netzhautdegeneration unterstreicht.

Einleitung

Netzhautdegeneration, eine weltweit führende Ursache für Blindheit, umfasst Erkrankungen wie Retinitis pigmentosa (RP), altersbedingte Makuladegeneration (AMD) und diabetische Retinopathie (DR), die zusammen Millionen von Menschen betreffen und erhebliche sozioökonomische Belastungen verursachen ^1,2,3. Allerdings fehlt es derzeit an hochwirksamen pharmakologischen Therapien, um das Fortschreiten dieser verblendenden Netzhauterkrankungen in der klinischen Praxis zu stoppen. Die Pathogenese der Netzhautdegeneration ist multifaktoriell und umfasst oxidativen Stress, chronische Entzündungen und endoplasmatischen Retikulumstress (ERS), die die Netzhautzellhomöostase stört. Diese Stressoren werden häufig durch interne metabolische Dysregulation (z. B. mitochondriale Dysfunktion) ausgelöst, was letztlich zu Apoptose und irreversiblen Netzhautschäden^führt. Methyl-Nitrosourea (MNU), ein potentes DNA-Alkylationsmittel, hat sich als weit verbreiteter chemischer Induktor zur Modellierung der Netzhautdegeneration⁵ etabliert. Das von MNU induzierte Netzhauterkrankungsmodell dient als wertvolles Werkzeug zur Untersuchung von Krankheitsmechanismen und zur Bewertung potenzieller therapeutischer Interventionen. Mechanistisch induziert MNU oxidativen Stress, indem es reaktive Sauerstoffspezies (ROS) erzeugt und das Redox-Gleichgewicht stört, wodurch Photorezeptormembranen und Organellen beschädigt werden. Dies könnte auch den Aldehydstoffwechsel beeinträchtigen und die Entgiftung der Lipidperoxidation beeinträchtigen. Die anschließende Ansammlung toxischer Aldehyde könnte oxidative Schäden verschlimmern und die Apoptose des Photorezeptors⁶ verstärken.

Aldehyddehydrogenase 2 (ALDH2), ein mitochondriales NAD⁺-abhängiges Enzym, spielt eine entscheidende Rolle bei der Entgiftung toxischer Aldehyde wie 4-Hydroxy-2-Nonenal (4-HNE) und Malondialdehyd (MDA), indem sie sie in weniger reaktive Carbonsäuren umwandelt und so oxidative^{Schäden verhindert}. Eine robuste ALDH2-Aktivität ist entscheidend für die Aufrechterhaltung der Redoxhomöostase, und eine beeinträchtigte ALDH2-Funktion wurde mit beschleunigtem Altern und neurodegenerativen Pathologien in Verbindung gebracht⁸. Die pharmakologische Aktivierung von ALDH2, insbesondere über den Kleinmolekülagonisten Alda-1, wurde in verschiedenen Modellen ^9,10 als zytoprotektor nachweisbar. Sirtuin 1 (SIRT1), eine Deacetylase abhängig von Nikotinamid-Adenin-Adin-Dinukleotid + (NAD+), reguliert Stressreaktionen und Energiestoffwechsel, indem sie Transkriptionsfaktoren moduliert, darunter p53 und Nuclear Factor kappa B (NF-κB)¹¹. Die Aktivierung von SIRT1 hat vielversprechende Ergebnisse bei der Förderung der mitochondrialen Funktion und des Überlebens der Zellen gezeigt, wobei Studien ihre Hochregulation mit reduzierten oxidativen Schäden und Entzündungen bei der Netzhautendegeneration¹² in Verbindung bringen. Endoplasmatischer Retikulumstress (ERS), ausgelöst durch die Ansammlung fehlgefalteter Proteine, aktiviert die ungefaltete Proteinantwort (UPR), die unter chronischem Stress zu einer pro-apoptotischen Kaskade werden kann. ERS wurde mit Netzhautdegeneration in Verbindung gebracht und trägt zur Photorezeptor-Apoptose¹³ bei. Trotz dieser Ergebnisse ist das spezifische Zusammenspiel zwischen ALDH2, SIRT1 und ERS im Kontext des MNU-induzierten Netzhautdegenerationsmodells weiterhin wenig verstanden. Darüber hinaus erfordern die koordinierten Rollen dieser miteinander verbundenen Wege eine weitere systematische Untersuchung.

Daher zielte die aktuelle Studie darauf ab, die Auswirkungen wichtiger Komponenten der ALDH2-SIRT1-ERS-Achse – ALDH2 (über Alda-1 oder Daidzin), SIRT1 (über SRT1720 oder EX527) und ERS (über 4-PBA oder TUN) – auf MNU-induzierte Netzhautschäden bei C57BL/6-Mäusen zu untersuchen. Anhand histopathologischer und biochemischer Analysen untersuchten wir, wie das Zielen auf diese Achse das Überleben der Photorezeptoren und den Aldehydstoffwechsel beeinflusst. Wir stellten die Hypothese auf, dass die koordinierte Aktivierung von ALDH2, die Verstärkung von SIRT1 und die Unterdrückung von ERS synergetisch die durch MNU-induzierte Netzhautdegeneration mindern und somit eine Begründung für die Zielsetzung dieser Achse bei retinal degenerativen Erkrankungen liefern würden.

Protokoll

Ethische Aussage
Alle experimentellen Protokolle wurden vom Experimental Animal Care and Use Committee des Fuzong Clinical Medical College der Fujian Medical University überprüft und genehmigt und in strikter Übereinstimmung mit der Erklärung der Association for Research in Vision and Ophthalmology (ARVO) zur Nutzung von Tieren in der Augen- und Sehforschung durchgeführt.

Tiere und Gruppenzuteilung
Insgesamt wurden 72 männliche C57BL/6 Mäuse (8–10 Wochen alt, Körpergewicht 20–25 g) vom zertifizierten Anbieter bezogen, die den nationalen Standards für die Zucht von Labortieren entsprechen. Die Mäuse wurden in einzeln belüfteten Käfigen unter standardisierten Umweltbedingungen untergebracht, darunter ein 12-Stunden-Hell/Dunkel-Zyklus, kontrollierte Temperatur (22 ± 2 °C) und relative Luftfeuchtigkeit (50 % ± 10 %), mit ad-libitum-Zugang zu Futter und Wasser. Um die modulatorischen Effekte von ALDH2, SIRT1 und ERS-Wegen auf durch MNU induzierte Netzhautschäden zu untersuchen, wurden die Mäuse zufällig in acht experimentelle Gruppen (n = 9 pro Gruppe; n = 5 für die Gruppe zweiter Tag; n = 4 für die Gruppe am vierten Tag) unter Verwendung einer computergenerierten Randomisierungssequenz eingeteilt, um Selektionsverzerrung zu minimieren. Die grafische Zusammenfassung der Studie wurde in Abbildung 1 dargestellt.

Vorbereitung und Behandlung von Reagenzien
Die in dieser Studie verwendeten experimentellen Reagenzien wurden in der Materialtabelle aufgeführt, mit detaillierten Angaben zu Zubereitung und Dosierung wie folgt. (1) MNU (50 mg/kg): 100 mg MNU wurden in 2 ml Kochsalzlösung gelöst, um eine 50 mg/ml-Lösung herzustellen. Anschließend wurden 1,4 ml dieser Lösung mit 5,6 ml normaler Kochsalzlösung auf eine Endkonzentration von 10 mg/mL für die tierische Verabreichung verdünnt. (2) Alda-1 (10 mg/kg): 50 mg Alda-1-Pulver wurden in 1 ml Dimethylsulfoxid (DMSO) gelöst, um eine 50 mg/mL Lösung herzustellen, die mit 24 ml normaler Kochsalzlösung auf eine Endkonzentration von 2 mg/ml verdünnt wurde. (3) Daidzin (10 mg/kg): 50 mg Daidzin-Pulver wurden in 1 ml DMSO gelöst, um eine 50 mg/mL Lösung herzustellen, die dann mit 24 ml normaler Kochsalzlösung auf eine Endkonzentration von 2 mg/ml verdünnt wurde. (4) EX-527 (10 mg/kg): 5 mg EX-527-Pulver wurden in 0,1 mL DMSO gelöst, um eine 50 mg/mL-Lösung herzustellen, die mit 2,4 mL Kochsalzlösung auf eine Endkonzentration von 2 mg/mL verdünnt wurde. (5) SRT1720 (10 mg/kg): 5 mg SRT1720 Pulver wurden in 0,1 ml DMSO gelöst und gut gemischt. Anschließend wurden 400 μL PEG300, 50 μL Tween-80 und 450 μL Kochsalzlösung zugegeben, um eine 2 mg/mL Arbeitslösung herzustellen. (6) TUN (10 mg/kg): 5 mg TUN-Pulver wurden in 0,1 ml DMSO gelöst, um eine 50 mg/mL Lösung herzustellen, die dann mit 2,4 ml Kochsalzlösung auf eine Endkonzentration von 2 mg/ml verdünnt wurde. (7) 4-Phenylbutyrat (4-PBA; 10 mg/kg): 2 mg 4-PBA-Pulver wurden in 1 ml Kochsalzlösung gelöst, um eine 2 mg/mL Lösung herzustellen. Alle oben genannten Verabreichungsvolumina betrugen 5 × M Milliliter (wobei M = Tierkörpergewicht in kg). Danach wurden die Mäuse in acht Gruppen mit folgenden Behandlungsprotokollen eingeteilt:

Kontrollgruppe: Eine einzelne intraperitoneale Injektion von normaler Kochsalzlösung.
MNU-Gruppe: Eine einzelne intraperitoneale Injektion von MNU.
MNU + Alda-1 Gruppe: Intraperitoneale Injektion von Alda-1, gefolgt von einer einmaligen Verabreichung von MNU 2 Stunden später. Alda-1 wurde dann einmal täglich intraperitoneal verabreicht.
MNU + Daidzin-Gruppe: Intraperitonealinjektion von Daidzin, gefolgt von einer einmaligen MNU-Injektion 2 Stunden später. Daidzin wurde dann intraperitoneal einmal täglich verabreicht.
MNU + Alda-1 + EX-527 Gruppe: Intraperitoneale Injektion von Alda-1, gefolgt von EX-527 Injektion 1 Stunde später und MNU-Injektion 1 Stunde danach (Einzelverabreichung). Alda-1 wurde dann einmal täglich intraperitoneal verabreicht.
MNU + Alda-1 + TUN-Gruppe: Intraperitoneale Injektion von Alda-1, gefolgt von TUN-Injektion eine Stunde später und MNU-Injektion 1 Stunde danach. Alda-1 wurde dann einmal täglich intraperitoneal verabreicht.
MNU + Daidzin + SRT1720 Gruppe: Intraperitoneale Injektion von Daidzin, gefolgt von SRT1720 Injektion 1 Stunde später und MNU-Injektion 1 Stunde danach. Daidzin wurde dann intraperitoneal einmal täglich verabreicht.
MNU + Daidzin + 4-PBA Gruppe: Intraperitoneale Injektion von Daidzin, gefolgt von 4-PBA-Injektion 1 Stunde später und MNU-Injektion 1 Stunde danach. Daidzin wurde dann intraperitoneal einmal täglich verabreicht.

Körpergewichtsüberwachung
Systemische Toxizität und behandlungsbezogene physiologische Effekte wurden überwacht, indem das Körpergewicht jeder Maus täglich an vier aufeinanderfolgenden Tagen nach der MNU-Verabreichung erfasst wurde. Die Gewichte wurden mit einer präzisen digitalen Waage mit einer Genauigkeit von ±0,1 g gemessen, und Daten wurden dokumentiert, um Trends bei Gewichtsverlust oder -zunahme zwischen den Gruppen zu verfolgen, die als indirekte Indikatoren für Behandlungstoleranz und systemischen Stress dienten.

Netzhauthistopathologische Untersuchung
Zu den Zeitpunkten des zweiten und vierten Tages nach dem Experiment wurden die Mäuse durch eine zervikale Verrenkung nach Anästhesie mit intraperitonealer (i.p.) Injektion von Natriumpentobarbital in einer Dosis von 50–60 mg/kg Körpergewicht eingeschläfert, wobei die institutionellen Euthanasierichtlinien strikt befolgt wurden. Die Augen, insbesondere das linke, wurden sofort enukleiert. Vor der Enukleation wurde ein kleiner Schnitt am nasalen Limbus gemacht, um die Ausrichtung zu markieren. Die Kugeln wurden anschließend 24 Stunden lang in 4 % Paraformaldehyd (PFA) in phosphatgepufferter Kochsalzlösung (PBS, pH 7,4) bei 4 °C zur Fixierung eingetaucht. Die fixierten Augen wurden dann durch eine graduierte Ethanolserie (70 %, 80 %, 95 % und 100 %) enttrocknet, in Xylol gereinigt und in Paraffinblöcke für die histologische Verarbeitung eingebettet. Während des Einbettens wurde die Ausrichtung standardisiert, indem die markierte Nasenseite nach unten positioniert wurde.

Serielle Schnitte (5 μm dick) wurden mit einem rotierenden Mikrotom durch den Sehnervenkopf (ONH) vorbereitet, um eine repräsentative Probenahme der zentralen Netzhautregion sicherzustellen. Konkret wurden Abschnitte von der oberen Seite bis zum markierten Nasenpunkt zugeschnitten, sodass alle Abschnitte durch das ONH führten. Die Abschnitte wurden dann auf positiv geladenen Glasschlitten montiert. Die Färbung von Hämatoxylin und Eosin (HE) wurde gemäß Standardprotokollen durchgeführt. Die Netzhautmorphologie wurde mittels Lichtmikroskopie mit 400× Vergrößerung untersucht. Messungen wurden systematisch von der temporalen Netzhaut in vorgegebenen Abständen zum ONH durchgeführt: 200, 400, 600, 800, 1000 und 1200 μm. An jedem Ort wurden die gesamte Netzhautdicke, die innere und äußere Segmentlänge (IS/OS), die Dicke der äußeren Nuklearschicht (ONL), die Dicke der äußeren plexiformen Schicht (OPL) sowie die innere Kernschicht (INL) gemessen.

Um Objektivität zu gewährleisten und Messverzerrungen zu minimieren, wurde ein strenges Qualitätskontrollprotokoll implementiert. Konkret wurde jede der acht experimentellen Gruppen in fünf oder vier Untergruppen unterteilt (z. B. Untergruppe 1, 2, 3, 4, 5). Fünf oder vier unabhängige Beobachter, die für Gruppenzuweisungen blind waren, wurden beauftragt, dieselbe entsprechende Untergruppe über alle experimentellen Gruppen hinweg zu messen (z. B. maß Beobachter A immer Untergruppe 1 aus jeder Gruppe). An jedem Messpunkt wurden drei Messwerte innerhalb eines ~5 μm-Bereichs (z. B. bei 200 μm, 195 μm und 205 μm) durchgeführt und gemittelt, um technische Fehler zu minimieren. Quantitative Messungen wurden mit der ImageJ-Software (Version 1,54g) durchgeführt, und der mittlere Dickenwert für jeden Punkt wurde berechnet, um die Reproduzierbarkeit sicherzustellen.

Aldehydstoffwechselmarker
Zur Bewertung des oxidativen Stresses und des Aldehydstoffwechsels wurden Serumproben auf MDA- und 4-HNE-Werte analysiert, die wichtige Biomarker für Lipidperoxidation und Aldehydstress sind. Konkret wurden alle Mäuse mittels intraperitonealer (i.p.) Injektion von Natriumpentobarbital in einer Dosis von 50–60 mg/kg Körpergewicht betäubt. Nachdem die Mäuse tief betäubt worden waren, wurde die Euthanasie durch eine zervikale Verrenkung durchgeführt. Unmittelbar nach der Euthanasie wurden die Augäpfel enukleiert und retrobulbäres Blut schnell entnommen. Die Proben durften 30 Minuten bei Raumtemperatur gerinnen, gefolgt von einer Zentrifugation bei 3.000 × g für 10 Minuten. Die Serumfraktion wurde sorgfältig in enzymfreie Mikrozentrifugenröhren übertragen und bis zur späteren Analyse bei -80 °C gelagert. Die Serum-MDA-Werte wurden mit kommerziell erhältlichen enzymgebundenen Immunsorbent-Assay-Kits (ELISA) gemessen, die den Protokollen des Herstellers folgten. Kurz gesagt, Standards und Proben wurden auf vorbeschichtete Mikroplatten gegeben, mit spezifischen primären Antikörpern inkubiert, gereinigt, um ungebundene Materialien zu entfernen, und mit Meerrettichperoxidase (HRP)-konjugierten sekundären Antikörpern reagiert. Anschließend wurde das Substrat Tetramethylbenzidin (TMB) hinzugefügt, und die Reaktion wurde mit Schwefelsäure beendet. Die optischen Dichtewerte (OD) wurden bei 450 nm mit einem Mikroplattenleser ausgelesen, und MDA/4-HNE-Konzentrationen wurden durch Vergleich der OD-Werte mit Standardkurven bestimmt, die mit bekannten Konzentrationen der Analyte erzeugt wurden.

Statistische Analyse
Alle Daten wurden als Mittelwert ± Standardfehler (SE) dargestellt. Angesichts der kleinen Stichprobengröße (n = 5 für die Gruppe am zweiten Tag; n = 4 für die Gruppe am vierten Tag) wurden die statistischen Methoden des Bootstrap-Tests verwendet. Konkret wurde die Bootstrap-Resampling-Methode (1.000 Iterationen mit Ersatz) verwendet, um 95%-Konfidenzintervalle (KI) für Gruppenmittelwerte zu schätzen und Unterschiede zwischen Gruppen zu vergleichen. Für jedes Ergebnis (z. B. Gewicht, Netzhautdicke, MDA/4-HNE-Werte) wurden Bootstrap-Proben aus dem ursprünglichen Datensatz entnommen, und der Mittelwert wurde für jede Neustichprobe berechnet. Der 95%-KI wurde aus dem 2,5^. und 97,5^{. Perzentil} der Bootstrap-Verteilung abgeleitet. Die Signifik wurde indirekt durch den folgenden Ansatz bewertet, indem das Konfidenzintervall untersucht wurde. Wenn das CI der Bootstrap-Ergebnisse keine Null enthielt, deutete dies typischerweise darauf hin, dass der Unterschied signifikant war (vorausgesetzt, ein Vergleich der Mittelwerte zwischen zwei oder mehr Gruppen). Die Figuren wurden mit der Graphpad-Software (Version 5.01) erstellt.

Ergebnisse

Veränderungen des Körpergewichts
Vor dem Experiment gab es keine signifikanten Unterschiede im Körpergewicht zwischen den Gruppen. Am zweiten Tag nach dem Experiment, mit Ausnahme der Kontrollgruppe, die einen Anstieg des Körpergewichts von 17,0 ± 0,5 g auf 17,4 ± 0,4 g zeigte, sank das Körpergewicht der Mäuse in allen anderen Gruppen signifikant. Konkret sanken die Mäuse der MNU-Gruppe von 17,4 ± 0,3 g auf 16,2 g ± 0,2 g, die MNU + Alda-1 Gruppe von 17,3 ± 0,3 g auf ...

Diskussion

Frühere Studien deuteten darauf hin, dass ALDH2-Agonisten schützende Effekte gegen MNU-induzierte Netzhautdegeneration¹⁴ bieten könnten. Die Interventionswirkungen seines Inhibitors sowie potenzielle nachgelagerte Signalwege wie SIRT1 und ERS wurden jedoch noch nicht im Detail untersucht. Es gibt Studien, die die Beteiligung von SIRT1 und ERS an Netzhautdegenerationsmodellen zeigen, darunter lichtinduzierte Netzhautdegeneration und genetisch modifizierte Mäuse mit...

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
4HNE Kit	Elabscience,China	E-EL-0128	Zur Messung von Serum 4HNE-Spiegeln
4-Phenylbuttersäure (4-PBA)	MCE, US	HY-A0281	Reagenz zur ERS-Hemmung
Alda-1	MCE, US	HY-18936	ALDH2-Aktivator für die Forschung
Daidzin	MCE, US	HY-N0018	ALDH2-Inhibitor für die Forschung
Fluorescein-Natrium	Guangzhou	N/A	Verwendet für  erworben mit einem Fluoreszein-Angiographiesystem. Die angiografischen Bilder wurden auf das Vorhandensein von Leckagen, nicht durchbluteten Bereichen oder Veränderungen in der Morphologie der Netzhautgefäße untersucht.
ImageJ Software	National Institutes of Health, USA	Version 1.53t
MDA Kit	Beyotime, China	S0131S	Zur Messung von Serum MDA-Spiegeln
N-Nitroso-N-methylharnstoff (MNU)	MCE, US	HY-34758	DNA-Alkylierungsmittel zur Induktion von Netzhautdegeneration
Paraformaldehyd	Sigma-Aldrich, US	30525-89-4	Verwendet für Abschnitte von Netzhautgewebe
Präzisions-Digitalwaage	Elektronische Waage, China	SF-400	KAPAZITÄT: 5000 g & acute; 1 g/177ozX0.10z, verwendet für die Aufzeichnung des Körpergewichts jeder Maus
Prism	GraphPad	Version 5.01	Software zur statistischen Analyse
Rotary-Mikrotom	LEICA, Germany	RM2016	Verwendet für die Herstellung von Netzhautschnitten
Selisistat (EX-527)	MCE, US	HY-15452	SIRT1-Inhibitor für die Forschung
Natrium-Pentobarbital	Sigma-Aldrich, US	1.93248	Verwendet für die Anästhesie für spätere Forschungen durch intraperitoneale (IP) Injektion
SRT1720	MCE, US	HY-10532	SIRT1-Aktivator für die Forschung
Sumianxin	Jilin Shengda Animal Pharmaceutical Co	N/A	Verwendet für die Anästhesie für spätere Forschungen durch intraperitoneale (IP) Injektion
Tunicamycin (TUN)	MCE, US	HY-A0098	Reagenz zur ERS-Induktion