Identifizierung von Nagetieren I

Die korrekte Identifizierung von Labortieren ist eine grundlegende Voraussetzung der biomedizinischen Forschung. Für die Forscher ist es unerlässlich, zwischen einzelnen Tieren unterscheiden zu können, damit das richtige Tier für die Versuchsverfahren und die Datenerhebung verwendet wird. Wissenschaftler haben mehrere dauerhafte und temporäre Methoden entwickelt, um einzelne Labortiere zu identifizieren. Hier werden wir die beiden am häufigsten verwendeten Methoden besprechen: Ear Tagging und Ear Punching.

Bevor wir uns mit dem Verfahren zum Ohrstanzen befassen, stellen wir uns mit dem Ohrstanzcode und den verfügbaren Arten von Stanzen vor und besprechen die Vor- und Nachteile dieser Methode. Wie Sie vielleicht schon vermutet haben, wird beim Ohrlochen ein Loch oder eine Kerbe in das äußere Ohr oder die Ohrmuschel des Tieres gestanzt. Um diese Methode zu standardisieren, wurden universelle Ohrlochcodes entwickelt.

Je nach Position stehen die Kerben auf dem rechten Ohr für einstellige Ziffern, wie 1, 3 und 5, und eine doppelte Kerbe für 2. Wenn Sie verschiedene Kombinationen dieser Kerben verwenden und den Wert für jede Kerbe addieren, können Sie das Tier mit einer Skala von 1 bis 9 beschriften. Ähnlich verhält es sich auf dem linken Ohr, wo die gleichen Kerben die Zehner darstellen. Und auch hier decken verschiedene Kombinationen den Bereich von 10 bis 90 ab. Löcher in der Mitte der rechten und linken Ohrmuschel stellen 100 bzw. 200 dar. Und Löcher in beiden zeigen 300 an. Wenn Sie also zum Beispiel das Tier mit 173 bezeichnen möchten, sollten Sie ein Loch in der Mitte des rechten Ohrs für 100 stanzen, drei Kerben im linken Jahr, um die Gesamtsumme auf 70 zu addieren, und eine einzelne Kerbe im oberen rechten Ohr, die die Stelle der Einheit "drei" darstellt.

Lassen Sie uns nun die drei Arten von im Handel erhältlichen Ohrstanzen besprechen: den Scherenschlag, den Daumenschlag und den Hebelstanzer. Jeder von ihnen hat seine Vor- und Nachteile.

Der Daumenschlag erfordert eine Kneifbewegung, ist aber klein genug, um in eine Eppendorf-Röhre zu passen, damit das Ohrgewebe leichter entnommen werden kann. Ergonomisch ist der Hebellocher einfacher zu bedienen als der Daumenlocher, insbesondere für die dickeren Ohren der älteren Ratten. Der Scherenstempel erfordert keine Einklemmbewegung, wodurch Ermüdung und Verletzung des Karpaltunnels vermieden werden.

Obwohl es sich um eine schnelle und einfache Methode zur Identifizierung handelt, hat das Ohrlochen einige Einschränkungen. Erstens hat der oben diskutierte Ohrstanzcode eine Obergrenze von 399, was die Verwendung dieser Methode in einigen groß angelegten Studien einschränken könnte. Eine weitere Einschränkung besteht darin, dass die meisten Tiere am Genick gegriffen werden müssen, um den Code zu lesen, wodurch sich die Handhabungszeiten verlängern. Mit zunehmendem Alter verdickt sich die Haut ihrer Ohren und es ist schwierig, Ohrschläge durchzuführen, ohne das Tier erheblich zu belasten. Daher ist es am besten, die Ohrschläge bei jungen Ratten durchzuführen, wenn sie entwöhnt werden. Bei erwachsenen Ratten, die eine Identifizierung benötigen, sollte die Verwendung einer Inhalationsanästhesie in Betracht gezogen werden, wenn Ohrschläge durchgeführt werden.

Nachdem Sie nun einige Hintergrundinformationen über den Ohrstanzcode und die verfügbaren Werkzeuge haben, lernen wir, wie Sie diese Technik bei Mäusen durchführen.

Es wird empfohlen, Stanzwerkzeuge vor Beginn des Eingriffs mit einer Desinfektionslösung zu reinigen, mit Alkohol abzuspülen und gründlich zu trocknen. Vermeiden Sie es, die Ohrstanzen zu autoklavieren, da sie dadurch schließlich stumpf werden.

Entscheiden Sie sich zunächst für den experimentellen Code des Tieres und den zu verwendenden Stempel. Nehmen wir hier den Code 173 und den Scherenstanzer als Beispiele. Das gleiche Verfahren gilt für jeden anderen Code oder Punch. Wenn Sie bereit sind, halten Sie das Tier fest, indem Sie es am Genick greifen, so dass die Ohren leicht zugänglich sind. Beginnen Sie mit dem Loch für 100. Setze das rechte Ohr so in die Stanze, dass das Loch der Stanze vom Ohrmuschelrand weg positioniert ist. Üben Sie anschließend Druck aus, um die Schere schnell und fest zu schließen und die Haut zu durchtrennen. Lassen Sie dann den Stempel los und entfernen Sie ihn aus dem Ohr. Vermeiden Sie es, an der Stanze zu ziehen oder zu drehen, um ein Reißen des Ohrs zu verhindern. Um eine Kerbe zu machen, platzieren Sie den Stempel am Rand der Ohrmuschel an der richtigen Stelle, in diesem Fall oben auf dem rechten Ohr für die "Drei" an der Einheitsstelle des Codes, und machen Sie dasselbe - üben Sie schnellen und festen Druck aus und öffnen Sie dann die Schere, um sie zu entfernen. Wiederholen Sie den gleichen Vorgang am anderen Ohr, um drei Kerben zu stanzen - zwei für "20" in der Nähe der äußeren Ecke und eine für "50" in der Nähe der inneren Ecke, wodurch der Code auf "70" summiert wird.

Vergewissern Sie sich, dass der richtige Code eingegeben wurde, bevor Sie das Tier wieder in den Käfig setzen. Reinigen Sie den Punsch wieder mit einem Desinfektionsmittel, spülen Sie ihn mit Alkohol ab und trocknen Sie ihn gründlich ab, um Rost zu vermeiden.

Kommen wir nun zum Ear Tagging, einer weiteren kostengünstigen und einfach durchzuführenden Methode zur individuellen Identifizierung von Mäusen und Ratten. Es gibt eine Vielzahl von im Handel erhältlichen Ohrmarken. Dazu gehören: Metalletiketten, auf denen eine Reihe von Zahlen und/oder Buchstaben eingraviert sind, und Kunststoffetiketten mit Zeichen oder Barcodes auf buntem Hintergrund.

Ein Nachteil von Metalletiketten ist, dass es oft notwendig ist, das Tier aufzuheben, um den Code zu lesen. Im Gegensatz dazu sind Kunststoffetiketten leicht zu lesen, ohne dass die Tiere angefasst werden müssen. Ein weiterer Vorteil von Kunststoff-Tags ist ihre Kompatibilität mit der MRT-Bildgebung. Die Tags bieten zwar eine individuelle Kennung für eine Maus oder Ratte, sind aber nicht unfehlbar. Marken können durch übermäßige Fellpflege, Dermatitis oder Infektionen, Selbsttraumata beim Versuch, Marken aufgrund von Unverträglichkeit, Kämpfen und aggressivem Brutverhalten zu entfernen, verloren gehen. Sind mehrere Tiere im selben Käfig untergebracht, kann der Verlust einer Ohrmarke lästig sein. Um dieses Problem zu umgehen, sollte eine sekundäre Form der Identifizierung verwendet werden, wie z. B. ein Lochcode auf dem Ohr gegenüber dem Etikett. Eine Einrichtung sollte sowohl die Wahl des zu markierenden Ohrs als auch den Code, der auf dem anderen Ohr verwendet werden soll, standardisieren, und alle Codes sollten auf der Käfigkarte angegeben sein.

Lassen Sie uns nun lernen, wie Sie eine Ohrmarke richtig anbringen, da eine falsche Positionierung mehrere unglückliche Folgen haben kann. Nach der Anwendung werden wir auch auf die Entfernung der Ohrmarke eingehen, die in der Regel im Falle einer Infektion aufgrund der Ohrmarke durchgeführt wird.

Der erste Schritt besteht darin, eine geeignete Marke für die zu identifizierenden Tiere auszuwählen. Hier werden wir ein Metalletikett verwenden, um das Verfahren an Mäusen zu demonstrieren. Stellen Sie sicher, dass Sie den Applikationscode bestellen, der für die jeweilige Größe und den Stil der verwendeten Ohrmarken geeignet ist. Entfernen Sie das Etikett vorsichtig aus dem Kartonhalter und richten Sie es so in den Applikator ein, dass das Ende mit dem Loch über dem eingekerbten Bereich des Applikators positioniert ist. Das spitze Ende des Etiketts sollte sich gegenüber der Kerbe befinden.

Wenn Sie bereit sind, die Ohrmarke anzubringen, halten Sie das Tier so fest, dass die Ohren leicht zugänglich sind. Es ist weniger wahrscheinlich, dass Tiere Schwierigkeiten haben, wenn die Hinterbeine auf einer Oberfläche wie der Käfigplatte oder einer Arbeitsplatte ruhen können. Sobald das Tier fixiert ist, positionieren Sie die Spitze der Ohrmarke tief in der Concha des Ohrs, so dass die Ohrmarkennummern auf den Rücken des Tieres zeigen. Drücken Sie dann den Applikationsknopf fest zu; Die Ohrmarke durchbohrt das Ohr und verriegelt sich. Wenn Sie loslassen, fällt das markierte Ohr aus dem Applier. Vergewissern Sie sich, dass das Tag richtig positioniert und angewendet wurde. Wenn Sie es vorziehen, dass die Ohrmarkennummern zur Nase des Tieres zeigen, platzieren Sie die Spitze des Ohretiketts an der Basis der Ohrmuschel auf der Rückseite des Ohrs und drücken Sie dann, um das Ohr zu verriegeln.

Die Markierungen müssen so angebracht werden, dass sie keine Biegung im Ohr verursachen, die Beweglichkeit des Tieres nicht beeinträchtigen oder sich an irgendeinem Teil des Käfigs verfangen. Wenn das Etikett zu nah am Ohrrand platziert wird, kann es leicht zerrissen werden. Wenn sie zu nahe am Kopf positioniert wird, kann sich die Haut des Halsbereichs in der Markierung verfangen, was zu Reizungen, Schmerzen und Bewegungseinschränkungen führt, die dann zu einem Selbsttrauma führen können. Gelegentlich können Metallanhänger zu Reizungen und Schwellungen des Ohrs führen. Dies führt häufig zu Infektionen der Ohrmuschel, und die unmittelbare Behandlung sollte die Entfernung der Markierung umfassen.

Um das Etikett zu entfernen, befeuchten Sie einen Applikator mit Wattespitze mit einer antiseptischen Lösung und verwenden Sie diese, um Schmutz um das Etikett herum zu entfernen. In schweren Fällen einer Infektion muss das Tier möglicherweise betäubt werden. Schneiden Sie dann mit einem Drahtschneider die Oberseite der Tag-Schlaufe von Kante zu Kante durch. Wichtig ist, dass Sie nicht über die flache Oberfläche schneiden, da dies das Etikett zusammendrückt, das Ohr einklemmt und das Ohr beschädigt. Führen Sie den Ohrhänger mit Hilfe von Hämostatika vorsichtig durch und aus dem Ohr heraus. Schieben Sie das Etikett heraus, damit das gequetschte Ende nicht durchgeht und ein Trauma und eine Vergrößerung des Einstechlochs verursacht. Sobald das Etikett weg ist, wischen Sie das Ohr mit einem antiseptisch getränkten Wattestäbchen ab und bringen Sie das Tier in seinen Käfig zurück. Bei einem eitrigen Ausfluss aus dem Ohr kann eine Nachbehandlung erforderlich sein und eine Rücksprache mit dem Tierarzt zur Beurteilung wird empfohlen.

Nachdem Sie nun wissen, wie Sie die Labortiere mit Ohrmarken und Stanzen markieren können, sehen wir uns einige Experimente an, in denen diese Methoden nützlich sein können. Ein großer Vorteil der Verwendung von Ear Punch Code besteht darin, dass die Stempel gleichzeitig als Gewebeproben für die Genotypisierung dienen können, wodurch der Stress für die Tiere durch wiederholte Handhabung reduziert wird. Wenn Sie jedoch vorhaben, die Stanzen zum Sammeln von PCR-Proben zu verwenden, denken Sie daran, das Gerät zuerst mindestens 3 Minuten lang in einer Oberflächendekontaminationslösung einzuweichen, um DNA- oder RNA-Reste zu entfernen, und dann vor Gebrauch mit Alkohol abzuspülen.

Die Bedeutung der Identifizierungstechnik nimmt weiter zu, wenn das Experiment über mehrere Tage dauert. In diesem Experiment markierten die Wissenschaftler die Tiere zum Beispiel zunächst mit einer Metallmarke und injizierten dann dem Ischiasnerv eine Suspension aus transgenen Tumorzellen, die das Luziferase-Protein exprimieren. Um das Fortschreiten der Krebserkrankung zu quantifizieren, bildeten sie die Tiere ein, zehn und achtzehn Tage nach der Injektion mittels Biolumineszenz ab.

Sie haben gerade die Präsentation von JoVE gesehen, in der die beiden am häufigsten verwendeten Methoden zur Identifizierung von Nagetieren demonstriert werden: Ohrmarken und Ohrstanzen. Sie sollten jetzt den Ohrlochcode verstehen, die verschiedenen Arten von im Handel erhältlichen Nagetier-Ohrmarken kennen und in der Lage sein, diese Verfahren genau durchzuführen, ohne den Tieren nennenswerte Beschwerden zu bereiten.

Denken Sie daran, dass jede Technik ihre Vor- und Nachteile hat, die in Bezug auf Ihre experimentellen Bedürfnisse berücksichtigt werden müssen. Neben der Berücksichtigung der Kosten sollten die Einfachheit der Technik und das Ausmaß der Schmerzen für die Tiere einige der wichtigsten Überlegungen bei der Auswahl der geeigneten Identifizierungsmethode sein. Wie immer vielen Dank fürs Zuschauen!