Name: Messung Caenorhabditis elegans Life Span auf festen Medien (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-05-12T00:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 49 s
Description: Lernen Sie die Lebensspanne von Caenorhabditis elegans auf festen Medien mit UV-getöteten Bakterien zu messen. Diese Methode ermöglicht präzise Alterungsstudien im Modellorganismus.

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<p class="jove_content"> Diese Arbeit wurde durch ein Glenn / AFAR Durchbrüche in der Gerontologie Award und NIH Grant 1R01AG031108-01 bis MKGS wird durch NIH Ausbildungsförderung P30AG013280 unterstützt werden. MK ist eine Ellison Medical Foundation New Scholar in Aging. </p>

<p class="jove_title"> Teil 1: Bereiten Nematoden Nährmedien (NGM)-Platten </p><p class="jove_content"> Dieser Abschnitt beschreibt die Herstellung der festen NGM-Platten für den Einsatz in der Lebensdauer zu experimentieren. Eine grundlegende Lebensdauer Experiment erfordert zwei Arten von Platten: Standard NGM-Platten, die keine Zusatzstoffe und Amp / FUDR Platten, die sowohl Ampicillin (Amp) und Fluordeoxyuridin (FUDR) hinzugefügt, um die NGM haben enthalten. Ampicillin wird verwendet, um ausländische bakterielle Kontamination zu vermeiden. FUDR hemmt die Zellteilung, reduziert Eierproduktion, und verhindert, dass Eier aus dem Schlüpfen. Die Verwendung von FUDR für Langlebigkeit Analyse hat keinen Einfluss auf das Erwachsenenleben Spannweite und beseitigt die Notwendigkeit, Würmer übertragen alle paar Tage, um sie von der wachsenden Larve zu trennen. Beide Arten von Platten sind mit <em>E.</em> ausgesät <em>coli</em> OP50 Bakterien, die anschließend durch Bestrahlung mit UV getötet wird. </p><ol><li> Bereiten NGM (siehe Abschnitt 5 für die Rezept-und Storage-Noten) und Label-Petrischalen. Sie benötigen 1 60 mm Petrischale pro 10 ml NGM. Wenn Sie mit den zuvor hergestellten festen NGM beginnen, weiter auf 1,2 Schritt. Wenn Sie mit frisch autoklaviert NGM ab, fahren bis 1,4 Schritt. </li><li> Vollständig zu schmelzen solide NGM durch die Mikrowelle auf hoher in 30 Sekunden Impulse. Swirl Medien zwischen den Impulsen, um Druck Gasblasen aus dem Aufbau zu verhindern. </li><li> Legen Flüssigkeit NGM in 55 ° C Wasserbad oder auf der Bank, um abzukühlen. </li><li> Sobald NGM erreicht 55 ° C add 33 ul 150 mM FUDR und 100 ul von 100 mg / mL Ampicillin pro 100 ml NGM (für Amp / FUDR Platten) und wirbeln zu mischen. Für NGM-Platten ohne zusätzliche Medikamente gehen direkt bis 1,5 Schritt. </li><li> Mit einer sterilen Technik Pipette 10 mL NGM in jede 60 mm Petrischale. Vermeiden Sie Blasen bildet, wenn möglich. Wenn sich Blasen bilden, können sie tauchte mit einer Pipettenspitze werden. </li><li> Lassen Platten auf dem Arbeitstisch mit Deckel auf, damit NGM zu festigen und zu trocknen. Wenn möglich, die Platten auf Sitzbank für 2 Tage vor dem Hinzufügen von Bakterien, aber 1 Tag funktioniert, wenn die Platten früher benötigt werden. </li><li> Am Tag, bevor die Platten fertig Trocknen, Samenflüssigkeit LB-Kultur mit einer einzelnen Kolonie von einer frischen Spur von <em>E. coli</em> OP50 Bakterien auf LB-Agar. Sie sollten mindestens 1 mL einer Übernachtkultur OP50 Kultur pro 60 mm-Platte vorbereiten. </li><li> Legen Sie OP50 Kultur in 37 ° C Schüttler und lassen Bakterien wachsen über Nacht (Kultur sollte Sättigung zu erreichen). </li><li> Pellet OP50 Bakterien durch Spinnen bei 3.500 g für 10 Minuten. </li><li> Nehmen Sie 90% der Überstand und resuspendieren Bakterien zu konzentrieren Kultur 10x. </li><li> Je 100 ul von 10x konzentriert OP50 Kultur in den Mittelpunkt verfestigt NGM-Platten. Swirl Platten vorsichtig, um sich auszubreiten Bakterienkultur, wenn nötig (idealerweise Bakterien sollte der zentrale Bereich der NGM, ohne kommenden nahe der Platte Wände bedecken). Versuchen Sie zu vermeiden, berühren die Pipettenspitze an die Oberfläche der NGM, wie Fehler in der Oberfläche der Medien die Würmer erlauben, sich in das NGM. </li><li> Lassen Platten auf dem Arbeitstisch über Nacht zu ermöglichen Bakterienkultur auf der soliden NGM (dauert in der Regel etwa 24 Stunden) trocknen lassen. </li><li> Nach dem Trocknen aussetzen die Oberfläche der Platten mit einer UV-Dosis ausreichend, um das Wachstum der Bakterien zu verhaften. Wenn Sie einen Stratagene UV Stratalinker 2400: <ul><li> Legen Platten in der Stratalinker und entfernen Deckel </li><li> Schließen Sie die Tür und schalten Sie den Stratalinker </li><li> Drücken Sie 'Energy' </li><li> Geben Sie '9999 'über die Tastatur </li><li> Drücken Sie 'Start' </li><li> Die Platten werden mit UV für ca. 5 Minuten ausgesetzt werden </li></ul></li><li> Platten mit UV-abgetöteten Bakterien können auf den Kopf bei 4 ° C gelagert werden bis zu 1 Monat. </li></ol><p class="jove_title"> Teil 2: Führen Sie eine zeitgesteuerte Eiablage zu einem Alter synchronisierten Population von Tieren zu erwerben </p><p class="jove_content"> In diesem Abschnitt erzeugen wir eine Bevölkerung von Würmern mit einem gemeinsamen Luke-date. Dies wird erreicht, indem reproduktiv aktiven Erwachsenen, Eier auf einem Teller legen für einen definierten Zeitraum und damit die Eier zu entwickeln durchgeführt. </p><ol><li> (Optional) Transfer ca. 20 jungen erwachsenen Würmer eine frische NGM Platte ohne FUDR. Lassen Platten bei 25 ° C, damit Würmer zu verbreiten und durch alle bakteriellen essen. Nach der bakteriellen Lebensmittel verbraucht worden ist frisch geschlüpften Würmer treten wird das Wachstum verhaftet dauer Bühne. Sie beginnt zu dauer Larve um zu sehen innerhalb einer Woche, je nachdem, wie viele Würmer man die Platte zunächst zu übertragen. Dauer Larve kann für die nächsten Schritte für bis zu 1 Monat verwendet werden. </li><li> (Optional) Transfer von 20 bis 30 dauer Larve eine frische NGM Platte ohne FUDR. In Anwesenheit von Nahrung dauer Larve wird reproduktiv aktiven Erwachsenen werden innerhalb von 2 Tagen und bleiben reproduktiv aktiv für ein paar Tage danach bei 25 ° C. </li><li> Übertragung von 10 bis 15 reproduktiv aktiven Erwachsenen eine frische NGM Platte ohne FUDR. Diese Platte wird als zeitlich Eiablage (TEL) Platte bezeichnet. </li><li> Verlassen Sie die TEL Platte bei 25 ° C für 6 Stunden, um t erlaubener Würmer Zeit, um Eier zu legen. </li><li> Entfernen erwachsenen Würmer aus TEL Platte. Platte kann visuell für Eier vor dem Entfernen Erwachsenen kontrolliert werden. Wenn die Würmer nicht eine ausreichende Zahl der gelegten Eier haben die TEL Platte kann bei 25 ° C für bis zu einer Gesamtzahl von 24 Stunden vor dem Entfernen von erwachsenen Würmer links. </li><li> Ort TEL Platte bei 20 ° C, bis die Eier ausgebrütet haben und die Würmer haben die L4 Larvenstadium (dies dauert in der Regel 2 Tage für Wildtyp C. elegans, kann aber länger dauern, Stämme mit langsamen Entwicklung Phänotypen) entwickelt. </li></ol><p class="jove_title"> Teil 3: Ergebnis Tiere Lebensdauer </p><p class="jove_content"> In diesem Abschnitt folgen wir dem Alter synchronisiert Bevölkerung von Würmern aus Teil 2, bis sie sterben. Worms auf Amp / FUDR Platten gehalten, um die Eiererzeugung und bakterielle Kontamination zu vermeiden und sind tot, wenn sie auf äußere Reize reagieren, nicht berücksichtigt. </p><ol><li> Transfer-L4 Larve zur ausgesät Amp / FUDR Platten. Für jeden Stamm oder Bedingung getestet, ist es üblich, einrichten 2-3 Platten mit 25-30 Würmer pro Platte. Bilder von der <em>C. elegans</em> Lebensphasen dienen (Abbildung 1). <sup>1</sup> </li><li> Legen Amp / FUDR Platten bei 20 ° C für 24 Stunden. </li><li> Nach 24 Stunden visuell beurteilen Würmer, Medien und Bakterien. Transfer-Würmer an die frische Amp / FUDR Platten, wenn eine der folgenden beobachtet: <ul><li> Worms haben die meisten der bakteriellen gegessen. Früh in der Lebensdauer Experiment Würmer müssen transferiert 1 bis 2 Mal pro Woche, um die Bakterien aus zur Neige zu verhindern. </li><li> Eine beträchtliche Anzahl von Larven vorhanden sind. Dies ist normalerweise ein Indiz dafür, dass die Würmer die Amp / FUDR Platten als junge Erwachsene statt L4s übertragen wurden und konnten einige Eier zu legen, bevor die FUDR in Kraft getreten. Die FUDR wird in der Regel verhindern, dass die Larven von Hineinwachsen in voller Erwachsenen, aber gelegentlich ein paar werden zu Erwachsenen wachsen und nicht zu verwechseln mit den Versuchstieren. </li><li> Live / Anzucht von Bakterien beobachtet werden. Im Allgemeinen wird die Kombination von Amp und UV-Tötung sicherzustellen, dass keine lebenden Bakterien das Experiment verseuchen, aber gelegentlich auftritt. </li><li> Pilzwachstum auf den Medien beobachtet. Bei frühem genug ist, kann das Pilzwachstum in der Regel ausgeschnitten werden mit einer Pipettenspitze oder Spachtel. Sobald es wächst, größer zu sein als ein paar Millimeter im Durchmesser ist es meist einfacher, die Würmer auf eine neue Platte übertragen. </li><li> Mit der Zerlegung Umfang, festzustellen, ob jeder Wurm lebt oder tot ist. </li><li> Klopfen Sie leicht die Platte. Der Wurm lebt, wenn es in Reaktion auf das Klopfen bewegt. </li><li> Wenn der Wurm reagiert nicht auf Klopfen der Platte, zoomen Sie auf den Kopfbereich. </li><li> Klopfen Sie leicht den Wurm den Kopf mit Platin Abholservice. Ergebnis der Wurm als tot, wenn sie nicht durch Bewegungen seines Kopfes reagiert. </li><li> Tote Würmer können von der Platte entfernt werden. </li></ul></li><li> Notieren Sie den Zeitpunkt und die Anzahl der Würmer, die lebendig und tot sind. </li><li> Zurück Platten bis 20 ° C. </li><li> Wiederholen Sie die Schritte 3.3 bis 3,6 alle 2 bis 3 Tage, bis alle Würmer gestorben. </li></ol><p class="jove_title"> Teil 4: Repräsentative Ergebnisse. </p><p class="jove_content"> Die Rohdaten von einem Nematoden Lebensdauer Experiment erzeugt wird, eine Liste von Terminen mit entsprechenden Anzahl von Würmern, die lebendig und tot für jeden Stamm getestet werden. Die Zahl der Würmer, die an jedem Tag sterben ist in der Regel umgekehrt, um den Anteil der Würmer lebend an jedem Tag (Abbildung 2A), die graphisch als Überlebensstrategie Kurve (Abbildung 2B dargestellt berechnen, der Tag der zeitlich Eiablage wird als Tag 0 ). Die Lebensdauer für jeden einzelnen Wurm in der Studie kann von der Anzahl der Würmer, die an jedem Tag sterben berechnet und verwendet werden, um mittlere und mittlere Lebensdauer für den Vergleich zwischen den Stämmen zu berechnen. Die Anzahl der Anzahl der Würmer lebend an jedem Tag wird nicht direkt in Lebensdauer-Analyse verwendet. Worms auf festen Medien gepflegt wird gelegentlich "fliehen", oder kriechen entweder an der Wand der Platte oder sich unter den Medien. Die Zahl der Würmer lebend an jedem Tag können Sie bestimmen, wie viele Würmer flohen im Laufe des Experiments werden. Worms, die fliehen, sind in der Regel aus der Analyse entfernt. Als Orientierungsgröße gilt, die typische mittlere Lebensdauer für N2, die <em>C. elegans</em> Wildtypstamm, auf UV-abgetöteten Bakterien bei 20 ° C gehalten wird ca. 25 Tage vom Ei gemessen. </p><p class="jove_title"> Teil 5: Lösungen </p><table border="0"><tbody><tr><td colspan="2"> <strong>Nematode Growth Media (NGM), 100 ml:</strong> </td></tr><tr><td colspan="2"> Kombinieren Sie: </td></tr><tr><td> 0,3 g </td><td> NaCl </td></tr><tr><td> 0,25 g </td><td> Pepton </td></tr><tr><td> 2 g </td><td> Agar </td></tr><tr><td colspan="2"> <strong>Autoklaven für 40 Minuten abkühlen lassen und auf 55 ° C, dann hinzuzufügen:</strong> </td></tr><tr><td> 100 ul </td><td> 1 M MgSO <sub>4</sub> </td></tr><tr><td> 100 ul </td><td> 5 mg / ml Cholesterin </td></tr><tr><td> 100 ul </td><td> 1 M CaCl<sub>2</sub> </td></tr><tr><td> 1,625 mL </td><td> 1,5 M KPi pH 6,0 </td></tr><tr><td colspan="2"> Flüssige NGM kann sofort verwendet werden, um Platten gießen oder erstarren gelassen und langfristig aufbewahrt bei Raumtemperatur </td></tr></tbody></table><table border="0"><tbody><tr><td colspan="2"> <strong>Luria Broth (LB), 1L:</strong> </td></tr><tr><td> 10 g </td><td> BactoTryptone </td></tr><tr><td> 5 g </td><td> Hefeextrakt </td></tr><tr><td> 10 g </td><td> NaCl </td></tr><tr><td> 10 mL </td><td> 1 M Tris pH 8,0 </td></tr><tr><td> 1 L </td><td> VE-Wasser </td></tr><tr><td colspan="2"> Autoklaven und bei Raumtemperatur lagern. </td></tr></tbody></table><table border="0"><tbody><tr><td colspan="2"> <strong>1 M MgSO <sub>4,</sub> 300 ml:</strong> </td></tr><tr><td> 73,95 g </td><td> MgSO <sub>4</sub> </td></tr><tr><td> 300 mL </td><td> VE-Wasser </td></tr><tr><td colspan="2"> Autoklaven und bei Raumtemperatur lagern. </td></tr></tbody></table><table border="0"><tbody><tr><td colspan="2"> <strong>5 mg / ml Cholesterin, 200 ml:</strong> </td></tr><tr><td> 1 g </td><td> Cholesterin </td></tr><tr><td> 200 mL </td><td> 100% Ethanol </td></tr><tr><td colspan="2"> Filter sterilisiert und bei Raumtemperatur lagern. </td></tr></tbody></table><table border="0"><tbody><tr><td colspan="2"> <strong>1 M CaCl <sub>2,</sub> 500 mL:</strong> </td></tr><tr><td> 27.75 g </td><td> CaCl <sub>2</sub> </td></tr><tr><td> 500 mL </td><td> VE-Wasser </td></tr><tr><td colspan="2"> Filter sterilisiert und bei Raumtemperatur lagern. </td></tr></tbody></table><table border="0"><tbody><tr><td colspan="2"> <strong>1,5 M KPi pH 6,0, 1L:</strong> </td></tr><tr><td colspan="2"> Kombinieren Sie: </td></tr><tr><td> 31,4 g </td><td> KPi zweibasische </td></tr><tr><td> 179,6 g </td><td> KPi einbasischen </td></tr><tr><td> 850 ml </td><td> VE-Wasser </td></tr><tr><td colspan="2"> Hitze beim Mischen zu ermöglichen KPi in Lösung aufzulösen. Der pH-Wert auf 6,0 mit 10 N NaOH. </td></tr><tr><td colspan="2"> Add entionisiertem Wasser auf 1 L. </td></tr><tr><td colspan="2"> Autoklaven und bei Raumtemperatur lagern. </td></tr></tbody></table><table border="0"><tbody><tr><td colspan="2"> <strong>1 M Tris, pH 8,0:</strong> </td></tr><tr><td> 60,57 g </td><td> Tris </td></tr><tr><td> 400 mL </td><td> VE-Wasser </td></tr><tr><td colspan="2"> Der pH-Wert auf 8,0 mit HCl. </td></tr><tr><td colspan="2"> Add entionisiertem Wasser auf 500 mL. </td></tr><tr><td colspan="2"> Filter sterilisiert und bei Raumtemperatur lagern. </td></tr></tbody></table><table border="0"><tbody><tr><td colspan="2"> <strong>150 mM Fluordeoxyuridin (FUDR), 10 mL:</strong> </td></tr><tr><td> 0,3693 g </td><td> FUDR </td></tr><tr><td> 10 mL </td><td> sterilem, deionisiertem Wasser </td></tr><tr><td colspan="2"> Lagerung bei -20 ° C. </td></tr></tbody></table><table border="0"><tbody><tr><td colspan="2"> <strong>100 mg / mL Ampicillin (Amp), 10 mL:</strong> </td></tr><tr><td> 1 g </td><td> Ampicillin </td></tr><tr><td> 10 mL </td><td> sterilem, deionisiertem Wasser </td></tr><tr><td colspan="2"> Lagerung bei -20 ° C. </td></tr></tbody></table><table border="0"><tbody><tr><td colspan="2"> <strong>50 mg / mL Carbenicillin (CARB), 10 mL:</strong> </td></tr><tr><td> 500 mg </td><td> Carbenicillin </td></tr><tr><td> 10 mL </td><td> sterilem, deionisiertem Wasser </td></tr><tr><td colspan="2"> Lagerung bei -20 ° C. </td></tr></tbody></table><table border="0"><tbody><tr><td colspan="2"> <strong>1 M Isopropyl β-D-thiogalactopyranosid (IPTG), 10 mL:</strong> </td></tr><tr><td> 2,38 g </td><td> IPTG </td></tr><tr><td> 10 mL </td><td> sterilem, deionisiertem Wasser </td></tr><tr><td colspan="2"> Lagerung bei -20 ° C. </td></tr></tbody></table><p class="jove_content"><img src="/files/ftp_upload/1152/Figure%201.png" alt="Abbildung 1"><br> <strong>Abbildung 1.</strong> Hellfeld Bilder von <em>C. elegans</em> Lebensstadien, einschließlich der Eier, die vier Larvenstadien (L1 - L4) und Erwachsenen. Alle Tafeln zeigen Hermaphroditen mit Ausnahme der unteren rechten, die einem erwachsenen Mann (Image von Holz (1988)) zeigt. </p><p class="jove_content"><img src="/files/ftp_upload/1152/Figure%202.png" alt="Abbildung 2"><br> <strong>Abbildung 2.</strong> Repräsentative Ergebnisse aus einer <em>C. elegans</em> Lebensdauer Experiment verglichen Wildtypstamm N2 zu einem Stamm, einer Mutation in der <em>daf-2-Gen.</em> (A) Eine Tabelle mit den gesammelten Daten, einschließlich der Anzahl der Tage seit Würmer wurden Eier, die Anzahl der toten Würmer auf jeden Tag beobachtet, und der Prozentsatz der ursprünglichen Probe noch auf jeden Tag lebendig (wie aus der täglichen Grafen von toten Würmer berechnet) . (B) Überlebenskurven entsprechend der Lebensdauer von Daten in (A) zur Verfügung gestellt. </p><p class="jove_content"><imgsrc files alt='"Bild'></imgsrc> <strong>Abbildung 3.</strong> Representative Vergleich von Lipofuszin zwischen jungen und alten Erwachsenen <em>C. elegans.</em> Hellfeld Bilder sind auf der linken und DAPI Kanal Fluoreszenz-Aufnahmen auf der rechten Seite angezeigt. Top Tafeln zeigen eine 4 Tage alte Wurm und Bodenplatten zeigen eine 11 Tage alten Wurm (wie vom Ei gemessen). </p>

<ol><li>Wood, W. B. <em><a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aWood%2C+WB+%22The+Nematode+Caenorhabditis+elegans%22">The Nematode Caenorhabditis elegans</a></em>. Wood, W. B. , Cold Spring Harbor Laboratory Press. Cold Spring Harbor, NY. 1-16 (1988).</li>
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</ol>

<p class="jove_content"> Die genetische Kontrolle der Langlebigkeit wurde ausgiebig in <em>C.</em> studierte <em>elegans,</em> vor allem wegen der Leichtigkeit und Schnelligkeit, mit der Lebensdauer bestimmt werden kann. Das Protokoll in diesem Artikel beschrieben wird ein Grundgerüst für den Erhalt von reproduzierbaren Lebensdauer von Daten in <em>C. elegans</em> und kann auch auf relatednematode Arten angewendet werden. <sup>2</sup> Durch ein paar einfache Änderungen dieser Verfahren angepasst Lebensdauer unter verschiedenen Bedingungen gemes...

<table><tbody><tr><td>Agar</td><td>Reagenz</td><td>Fisher Scientific</td><td>DF0145-17-0 (214530)</td><td></td></tr><tr><td>Ampicillin</td><td>Reagenz</td><td>MidSci</td><td>0339</td><td></td></tr><tr><td>Bacto-Tryptone</td><td>Reagenz</td><td>Fisher Scientific</td><td>DF0123-17-3 (211705)</td><td></td></tr><tr><td>Bacto-Pepton</td><td>Reagenz</td><td>Fisher Scientific</td><td>DF0118-17-0 (211677)</td><td></td></tr><tr><td>CaCl&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;</td><td>Reagenz</td><td>Fisher Scientific</td><td>NC9699248 (1332-01)</td><td></td></tr><tr><td>Carbenicillin</td><td>Reagenz</td><td>Gold Biotechnology</td><td>C0109</td><td></td></tr><tr><td>Cholesterin</td><td>Reagenz</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C75209</td><td></td></tr><tr><td>Fluorodeoxyuridin (FUDR)</td><td>Reagenz</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>F0503</td><td></td></tr><tr><td>Isopropyl &amp;#946;-d-Thiogalactopyranosid (IPTG)</td><td>Reagenz</td><td>Gold Biotechnology</td><td>I2481C5</td><td></td></tr><tr><td>KPi, dibasisch</td><td>Reagenz</td><td>Fisher Scientific</td><td>5087862 (3252-01)</td><td></td></tr><tr><td>KPi, monobasisch</td><td>Reagenz</td><td>Fisher Scientific</td><td>5087861 (3246-01)</td><td></td></tr><tr><td>MgSO&lt;sub&gt;4&lt;/sub&gt;</td><td>Reagenz</td><td>Fisher Scientific</td><td>NC9561800 (2500-01)</td><td></td></tr><tr><td>NaCl</td><td>Reagenz</td><td>Fisher Scientific</td><td>S251</td><td></td></tr><tr><td>Tris</td><td>Reagenz</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T1503</td><td></td></tr><tr><td>Hefeextrakt</td><td>Reagenz</td><td>Fisher Scientific</td><td>DF0886-17-0 (288620)</td><td></td></tr></tbody></table>

messung<em> caenorhabditis elegans</em> life span auf festen medien

Measuring <em>Caenorhabditis elegans</em> Life Span on Solid Media

<p class="jove_content">Altern ist ein degenerativer Prozess durch eine progressive Verschlechterung der zellulären Bestandteile und Organellen aufgrund der Mortalität gekennzeichnet. Der Fadenwurm<em&gt; Caenorhabditis elegans</em&gt; Hat als Haupt-Modell verwendet, um die Biologie des Alterns Studie hervor. Da nahezu alle biologischen Subsystem erfährt funktionelle Rückgang mit zunehmendem Alter, das Leben ist span den primären Endpunkt von Interesse, wenn man Gesamtrate des Alterns. In Nematoden, ist Lebensdauer in der Regel als die Anzahl der Tage ein Tier reagiert weiterhin auf äußere Reize definiert. Nematoden können entweder propagierten in flüssigen Medien oder auf festen Medien in Platten, und Techniken zur Messung der Lebensdauer unter beiden Bedingungen entwickelt worden. Hier präsentieren wir eine allgemeine Verfahren zur Messung der Lebensdauer von Nematoden auf einem soliden Wachstum Nematoden Medien gepflegt und gefüttert eine Diät von UV-abgetöteten Bakterien. Diese Verfahren können leicht Assay Lebensdauer unter verschiedenen üblichen Bedingungen angepasst werden, einschließlich einer Diät, die aus lebenden Bakterien, diätetische Einschränkung und RNA-Interferenz.</p>

<p class="jove_content">In diesem Artikel präsentieren wir ein allgemeines Protokoll zur Messung der Lebensdauer von Nematoden auf festen Medien mit UV-getötet bakterielle Lebensmittel erhalten.</p>

Messung<em> Caenorhabditis elegans</em> Life Span auf festen Medien

Das Altern ist ein degenerativer Prozess, der durch eine fortschreitende Verschlechterung zellulärer Komponenten und Organellen gekennzeichnet ist und schließlich zum Tod führt. Der Nematode ...

<p>Um die Lebensdauer bei C. elegans zu messen, wird eine alterssynchrone Population durch eine zeitlich begrenzte Eiablage reproduktiv erzeugt. Aktive erwachsene hermaphrodite Würmer werden auf Nematoden-Wachstumsmedium-Platten überführt, die mit UV-bestrahltem E. coli beimpft sind, und dürfen sechs bis acht Stunden lang Eier ablegen, danach werden sie entfernt. Innerhalb der nächsten zwei Tage schlüpfen die Würmer aus diesen Eiern und entwickeln sich bis zum L4-Larvenstadium. Die L4-Larven werden auf neue NGM-Platten überführt, die Ampicillin zur Verhinderung von lebenden Bakterienkontaminationen und FUDR zur Unterbindung der Fortpflanzung enthalten, und dürfen sich dort zu erwachsenen Tieren entwickeln.</p><p>Von diesem Zeitpunkt an werden die erwachsenen Würmer alle zwei bis drei Tage beobachtet, bis alle Würmer verstorben sind. Zu jedem Zeitpunkt werden tote Würmer von der Platte entfernt und die Anzahl der lebenden und toten Würmer erfasst. Ich bin George Seton aus dem Labor von Matt Capline am Fachbereich Pathologie der University of Washington.</p><p>Heute zeigen wir Ihnen, wie man die Lebensdauer misst und unsere Hepatitis-Eleganz beobachtet. Wir verwenden dieses Verfahren in unserem Labor</p>

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Research

Forschung

JoVE Journal

Biology

Biologie

In diesem Protokoll wird eine Methode zur...

Messung<em> Caenorhabditis elegans</em> Life Span in 96 Well Mikrotiterplatten

Dieses Video beschreibt eine traditionelle, plattenbasierte Methode zur Messung der Lebensdauer von C. elegans. Das Beispielprotokoll misst die Lebensdauer von Würmern, die mit RNAi behandelt wurden.

Lebensdaueranalyse: Messung der Langlebigkeit <em>von C. elegans</em>

Ein Ei-in-Wurm (EIW)-Assay ist eine nützliche Methode, um Eiablageverhalten quantifizieren. Änderungen in Eiablage kann eine Verhaltensreaktion des Modells...

Messung der Auswirkungen von Bakterien auf<em&gt; C. Elegans</em&gt; Verhalten Mit einem Ei Retention Assay

Hier beschreiben wir Protokolle, die speziell zur Überwachung morphogener Defekte entwickelt wurden, die während der frühen und späten Phasen der embryonalen Elongation des Fadenwurms Caenorhabditis elegans auftreten. Letztendlich sind diese Protokolle darauf ausgelegt, Gene zu identifizieren, die diese Phasen regulieren, und ihre unterschiedlichen Anforderungen entlang der antero-posterioren Achse des Embryos zu charakterisieren.

Novel Metrics zur Charakterisierung von Embryonic Dehnung des Nematode<em&gt; Caenorhabditis elegans</em

Hier präsentieren wir Ihnen einen Rahmen für die breite Palette diätetische Einschränkung auf Genexpression und Lebensdauer zu beziehen. Wir beschreiben Protokolle für die breite Palette diätetische Einschränkung und quantitative Bildgebung der Genexpression unter diesem Paradigma. Wir skizzieren weitere numerische Analysen zu offenbaren zugrunde liegenden Informationen Bearbeitungsfunktionen der genetischen Schaltungen in Essen-sensing beteiligt.

Quantifizierung der Information kodiert durch Gene Expression Ebenen während der Lebensdauer Modulation unter breiter Palette diätetische Einschränkung in <em>C. elegans</em>

Hier beschreiben wir die Replikatgruppe Methode, Vorgehensweise quantitativ Messen C. Elegans Lebensdauer/überleben und Healthspan in hohem Durchsatz und robuste Art und Weise, so dass Screening von vielen Bedingungen ohne Einbußen bei der Qualität der Daten. Dieses Protokoll beschreibt die Strategie und bietet ein Software-Tool für die Analyse der Replikatgruppe Daten.

Die Replica-Set-Methode: Eine Hochdurchsatz-Ansatz zu quantitativ Messen <em>Caenorhabditis Elegans</em> Lebensdauer

Caenorhabditis elegans dienen als hervorragendes Modellsystem mit robusten und kostengünstigen Methoden zur Untersuchung von Gesundheit, Lebensdauer und Stressresistenz.

Erhebung kostengünstiger Methoden zur Messung von Lebensdauer und Gesundheitserwartung bei <em>Caenorhabditis elegans</em>

Hier wird ein optimiertes Protokoll für die Kultivierung isolierter einzelner Nematoden auf festen Medien in mikrofabrizierten Multi-Well-Bauelementen vorgestellt. Dieser Ansatz ermöglicht es, einzelne Tiere ihr ganzes Leben lang auf eine Vielzahl von Phänotypen im Zusammenhang mit dem Altern und der Gesundheit zu überwachen, einschließlich Aktivität, Körpergröße und -form, Bewegungsgeometrie und Überleben.

Langzeitkultur und Monitoring von <em>isolierten Caenorhabditis elegans</em> auf festen Medien in Multi-Well-Geräten

In dieser Arbeit stellen wir ein Protokoll vor, um isolierte einzelne Nematoden auf festen Medien zu kultivieren, um eine lebenslange Verfolgung physiologischer Parameter und eine Fluoreszenzquantifizierung zu ermöglichen. Dieses Kultursystem umfasst eine Palmitinsäurebarriere um einzelne Wurmbrunnen, um die Flucht der Tiere zu verhindern, was den Einsatz aversiver Interventionen, einschließlich pathogener Bakterien und chemischer Stressoren, ermöglicht.

Langzeitkultur einzelner <em>Caenorhabditis elegans</em> auf festen Medien für longitudinales Fluoreszenzmonitoring und aversive Interventionen

In dieser Arbeit stellen wir eine allgemeine Methode vor, um die embryonale Lebensfähigkeit und die Gesamtzahl der produzierten Embryonen (Brut) mit dem Modellorganismus C. elegans zu bestimmen.

Messung der Embryonalviabilität und Brutgröße bei <em>Caenorhabditis elegans</em>

Dieses Protokoll beschreibt einen Assay zur Quantifizierung der Fütterungsrate von Caenorhabditis elegans , der auf der Messung der Clearance von Bakterien in Flüssigkulturen basiert.

Quantifizierung der Nahrungsaufnahme bei <em>Caenorhabditis elegans</em> durch Messung der bakteriellen Clearance

Lernen Sie die Lebensspanne von Caenorhabditis elegans auf festen Medien mit UV-getöteten Bakterien zu messen. Diese Methode ermöglicht präzise Alterungsstudien im Modellorganismus.

Messung Caenorhabditis elegans Life Span auf festen Medien

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