Name: Mausmodell für Morbus Parkinson: von 6-OH Dopamin Läsion Behavioral-Test (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-01-15T00:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 6 s
Description: Erfahren Sie die stereotaktische 6-OH-Dopamin-Läsion bei Mäusen zur Modellierung von Morbus Parkinson. Diese Methode ermöglicht die Bewertung motorischer Beeinträchtigungen durch den Apomorphin-Rotationstest für therapeutische Studien.

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Alle Chemikalien in fester Form gespeichert wird, wie 6-OHDA und Apomorphin, wurden in sterile Injektion Wasser verdünnt und filtriert in einem Laminar-Flow-Haube, um Verunreinigungen zu vermeiden. Darüber hinaus wurden Neurotoxine und neuroaktiven Stoffe gelagert, zubereitet, behandelt und entsorgt werden gemäß den Vorschriften von internationalen Richtlinien 6 und der örtlichen Kommission für Biosicherheit gesetzt. 1 - Anästhesie und Chirurgie Erwachsene männliche Swiss-Mäuse (25-30g) werden mit Atropin (0,2 mg / kg, sc) vorbehandelt, um Vagotonus zu reduzieren und dann betäubt mit einer intraperitonealen Injektion von Ketamin (90-120 mg / kg) und Xylazin (10 mg / Kg) . Das Tier ist auf einer elektronisch gesteuerten Heizkissen (Insight) platziert, um sicherzustellen, Körpertemperatur bei 37 ° C gehalten, wie die Induktion von Sedierung dauert einige Minuten. Die Anästhesie-Ebene ist während des gesamten Verfahrens durch die Prüfung der Abwesenheit des Rücktritts Reflex überprüft. Betäubungsmittel Dosierung sollte für jeden Stamm / Kolonie ajusted werden. Je nach Tier und Dauer der Operation, können zusätzliche Dosen von Ketamin notwendig sein. Danach wird Kochsalzlösung (NaCl 0,9%) auf beiden Augen aufgetragen, um die Hornhaut vor dem Austrocknen zu schützen und testen Sie die Abwesenheit des Blinkreflex in diesem ersten Augenblick an. Das Fell über die gesamte Kopf ist mit einem Trimmer rasiert wie möglich den Kontakt mit unsterilen Bereichen zu gewährleisten. Lokalanästhetikum (Xylocain) ist an das Ohr Bars angewendet, um Beschwerden zu vermeiden. Nur einmal Entzug und Blinkreflex sind verschwunden, die den Grad der Narkose ist tief genug für Chirurgie (Stufe 3), wird das Tier auf dem stereotaktischen Rahmen mit Mundstück und Ohr Bars speziell für diese Art (Insight) konzipiert positioniert. Sobald positionated, eine augenärztliche Salbe (MARCA) wird angewandt, um das Tier die Augen über alle Operationen zu schützen. Erst nachdem sicher sein, dass die Augen richtig geschützt sind, das Verfahren mit der Desinfektion der Haut des chirurgischen Region weiterhin durch Wiederholung drei Anwendungen von Povidon-Iod mit 70% Ethanol gefolgt, mit sterilen Tupfern Baumwollstoffe Nach, ist die richtige Platzierung des Ohres Bars gewährleistet durch die Prüfung für Seitwärtsbewegungen des Kopfes (der Kopf darf sich nicht bewegen, um sicherzustellen, dass die Balken sicher befestigt sind). Proper dorsoventrale Neigung des Kopfes wird später überprüft werden, wenn Schädel Wahrzeichen enthüllt werden. Ein sagittaler Schnitt (1,5 cm) ist mit einem sterilen Skalpell (# 15 Klinge) gefertigt. Das Periost über dem Bereich von Interesse ist sanft entfernt mit einem neuen Klinge abgeschabt und der Knochen sauber gewischt, mit steriler Blick und Wattestäbchen, um Schädel Sehenswürdigkeiten entdecken: Bregma als Schnittpunkt der sagittalen und Koronarnaht definiert, während lambda ist der Schnittpunkt der Sutura sagittalis und die beste Passform, die durch den linken und rechten Teile der Lambdanaht. Die Spitze eines vertikal ausgerichteten Referenz Nadel wird zunächst mit dem Bregma Null, geprüft durch das Operationsmikroskop, und wechselte dann als Lambda-Punkt zu berühren. Wenn der Kopf richtig positioniert ist, sollte Lambda gleichzeitig dorso-ventralen Ebene Bregma werden, und beide Wahrzeichen sollte um 4,2 mm entlang der rostro-caudalen Achse entfernt. Wenn nicht, sollten die Ohren Bars und Mundstück werden lockern und den Kopf vorsichtig gekippt um die interauralen Achse, um die gewünschte Position, die die &quot;flachen Schädel&quot; Referenz für stereotaxical Maßnahmen definiert zu erreichen. Die Spitze des Referenz-Nadel wird dann an der gewünschten Koordinaten positioniert: anterior-posterior (AP +0,5 mm) und lateralen (L -2,0 mm, links). Die Lage ist auf dem Schädel markiert und eine kleine (1,2 mm Durchmesser) Loch ist mit einer sterilisierten Bohrer eröffnet, mit intermittierenden Maßnahmen zur Wärme der Umgebung zu verhindern. Knochenfragmente werden sorgfältig mit einer zahnärztlichen Kürette entfernt und mit sterilen warmen 0,9% NaCl. Die sterilisierte 5 pl Hamilton-Spritze (26s messen; 0,47 mm Außendurchmesser) wird mit dem 6-OHDA-Lösung (oder Vehikel für Kontrolltiere) geladen und vertikal in den stereotaktischen Apparat ausgerichtet. Die Spitze der Nadel (Typ-2-oder 12 ° Fase) wird dann in das geöffnete Loch eingeführt, bis berühren pialen Oberfläche, auf den Referenzpunkt der dorso-ventralen koordinieren bestimmte. Sobald bestimmte diese zu koordinieren, wird die Nadel langsam abgesenkt, um die Koordinaten des Striatum zu erreichen (AP: +0,5; L: -2,0 und DV: -3,0 mm, unten pialen Oberfläche 7). Die 6-OHDA-Lösung (10 pg 6-OHDA in 0,9% NaCl mit 0,02% Ascorbinsäure), die bereit und filtriert in einem Laminar-Flow-Haube, und muss von Licht durch Aluminium-Folie während des gesamten Verfahrens geschützt werden, wird dann an injizierten einer Durchflussrate von 0.1μL/min. Für Kontroll-Tieren ist das gleiche Volumen des Fahrzeugs (0,02% Ascorbinsäure und 0,9% NaCl in sterilem Wasser) injiziert. Sobald die gesamte 2,0 ul injiziert wurde, ist die Spritze in Platz für 5 min gehalten, bevor sie ganz langsam aus dem Gehirn zurückgezogen, in nicht weniger als in 5 Minuten. Der Schädel ist gereinigt und der Schnitt wird geschlossen mit einem # 6-0 Nylonfaden (Shalon). Um ein zusätzlichesPflege gegen eine Infektion, kann ein lokaler Antibiotika-Salbe, wie Neomycin, die genäht Haut aufgetragen werden. Die Tiere sind aus dem Rahmen, da 0,5 ml Kochsalzlösung (sc.), um eine Austrocknung zu verhindern entfernt und warm gehalten und unter genauer Beobachtung bis zur vollständigen Genesung. Sie werden dann mit Futter und Wasser ad libitum untergebracht. Schmerzmittel, die Trinkwasser-Flasche für den ersten beiden Tagen nach der Operation (bei einem durchschnittlichen täglichen Wasserverbrauch von 5,5 ml und einer empfohlenen Dosierung von 0,03 mg Ibuprofen / g Körpergewicht / Tag aufgenommen, fügen Sie 0,82 mL von 20 mg / mL Ibuprofen-Abbott Suspension auf 100 ml Trinkwasser). Mäuse in der Regel sofort wieder aus dem Verfahren, Wandern und griff nach Wasser Futterpellets leicht. In jedem Fall offensichtlicher Beschwerden oder Anzeichen einer Infektion, sollten die Tiere gemäß den örtlichen Richtlinien eingeschläfert werden. 2 - Behavioral-Test Obwohl motorischen Beeinträchtigungen nach einer Woche beobachtet werden können, ist eine post-Läsion Abstand von einem Monat, bevor verlässliche Quantifizierung mit der Rotation-Test erlaubt. Das Tier erhält eine subkutane Injektion von DA-Agonisten Apomorphin (0,5 mg / Kg) und ist in einem undurchsichtigen Zylinder von 30 cm Durchmesser platziert, platziert 45 cm unterhalb der Aufnahme-Kamera. Es ist wichtig, damit keine Rückstände und Gerüche aus bisher getesteten Tieren, die vor jedem Test zu entfernen. Nach 5 min Gewöhnung Zeit werden die Bewegungen über eine 5 min Zeitrahmen erfasst. Beide contra-und ipsilateral Ganzkörper-Rotation werden gemessen und verglichen mit der Kontrollgruppe (Fahrzeug gespritzt). Wenn das Verfahren korrekt durchgeführt wurde, wird Kontrolltiere zeigen keine Drehung, während 6-OHDA lädierten Tieren beginnt Hinwendung zu der kontralateralen Seite, da die Agonisten vorwiegend aktiviert die hochempfindliche denervierten Striatum auf der lädierten Seite. Tiere Scoring über 7 min (Anzeige mindestens 7 Ganzkörper-kontralateralen Umdrehungen pro Minute) gelten als erfolgreich lädierten. Das Tier kann sicher ans Gehäuse 30 min nach dem Test, die wöchentlich wiederholt werden können zurückgegeben werden. In unseren Händen, erscheint weniger als 5% der verletzten Mäuse suboptimal Drehraten.

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</ol>

Die Experimente wurden in Übereinstimmung mit den internationalen Richtlinien für die Pflege und Nutzung der Säugetiere in Neuroscience and Behavior Forschung durchgeführt<sup&gt; 6</sup&gt;, Nach Genehmigung durch die Institutional Animal Care und Verwenden Committee (Comissão de avaliação de Uso de Animais em Fortgeschrittenen: UFRJ / CAUAP Protokoll # DAHEICB 027). Angemessene Maßnahmen wurden ergriffen, um die Schmerzen und Beschwerden der Versuchstiere zu minimieren.

Umfangreiche einseitige Läsion des nigro-striatalen Bahn zuverlässig bei Mäusen erzielt werden durch eine einzige stereotaktische Injektion von 6-OHDA in das Striatum. Die Ausdehnung der Läsion kann post-mortem durch Immunhistochemie nachgewiesen werden für Tyrosinhydroxylase (was katalysiert den geschwindigkeitsbestimmenden Schritt der Synthese von DA, dh die Umwandlung von L-Tyrosin zu Dihydroxyphenylalanin), wie in dem Video dargestellt. In vivo sind kontralateralen Rotationen durch Apomo...

<table><tbody><tr><td>Ketaminhydrochlorid</td><td>K&amp;#246;nig</td><td></td><td>90–120 mg/kg</td></tr><tr><td>Xylazinhydrochlorid</td><td>K&amp;#246;nig</td><td></td><td>10 mg/kg</td></tr><tr><td>Atropinsulfat</td><td>Isofarma</td><td></td><td>Isofarma</td></tr><tr><td>6&amp;#8211;Hydroxydopaminhydrochlorid</td><td>Sigma-Aldrich</td><td></td><td>5 &amp;#x03BC;g/&amp;#x03BC;L</td></tr><tr><td>L-Ascorbinsäure</td><td>USB Corp., Affymetrix</td><td></td><td>0,2 %</td></tr><tr><td>Xylocain (Lidocainhydrochlorid)</td><td>AstraZeneca</td><td></td><td>5 %&lt;br/&gt;50 mg</td></tr><tr><td>Nebacetin (Neomycinsulfat + Bacitracin)</td><td>Altana Pharma</td><td></td><td>5 mg/g + 250 IE/g</td></tr><tr><td>R-(–)-Apomorphinhydrochlorid</td><td>Sigma-Aldrich</td><td></td><td>0,5 mg/kg</td></tr><tr><td>GenTeal Augensalbe mit Hypromellose</td><td>Novartis AG</td><td></td><td>&lt;br/&gt;0,33 %</td></tr><tr><td>Ibuprofen</td><td>Abbott Laboratories</td><td></td><td>4 mg/100 ml Trinkwasser</td></tr><tr><td>Povidon</td><td>Johnson Diversey</td><td></td><td></td></tr><tr><td>R-(–)-Apomorphinhydrochlorid</td><td>Sigma-Aldrich</td><td></td><td>0,5 mg/kg</td></tr></tbody></table>

mausmodell für morbus parkinson: von 6-oh dopamin läsion behavioral-test

Murine Model for Parkinson's Disease: from 6-OH Dopamine Lesion to Behavioral Test

Morbus Parkinson (PD) betrifft mindestens 6,5 Millionen Menschen weltweit, unabhängig von Geschlecht, sozialer, ethnischer, wirtschaftlicher oder geografische Grenzen. Key Symptome wie Tremor, Rigor und bradikinesia, entwickeln sich, wenn etwa 3 / 4 der dopaminergen Zellen in der Substantia nigra sind verloren, und nicht, um für den reibungslosen und koordinierten Regelung der striatalen Motorstromkreisen bieten. Depression und Halluzinationen sind häufig, und Demenz tritt schließlich in 20% der Patienten. Zu diesem Zeitpunkt gibt es keine Behandlung zu verzögern oder stoppen das Fortschreiten der PD. Vielmehr sind die zurzeit verfügbaren Medikamente zielen stärker auf die Linderung der Symptome. Neue OP-Strategien können reversibel an das funktionell beschädigt Schaltungen durch die elektrische Stimulation von tief Hirnstrukturen wechseln, aber obwohl die tiefe Hirnstimulation ist ein bedeutender Fortschritt, ist es nicht für alle Patienten geeignet. Es bleibt daher notwendig, neue Zelltherapie Ansätze in präklinischen Modellen zu testen. Selektive neurotoxische Störungen des dopaminergen Bahnen können durch Injektion von 6-Hydroxydopamin (6-OHDA) oder MPTP reproduziert werden (1-Methyl-4-phenyl-1 ,2,3,6-tertahydropyridine), während abbauenden Drogen und oxidative-schädliche Chemikalien können auch reproduzieren Besonderheiten der PD bei Nagetieren. Im Gegensatz zu MPTP, verursachen 6-OHDA Läsionen massiven irreversiblen Verlust von Nervenzellen und kann uni-oder bilateral. Die 6-OHDA Läsion Modell ist zuverlässig, führt zu robusten motorische Defizite, und ist die am weitesten nach 40 Jahren Forschung in rats1 verwendet. Da Wechselwirkungen zwischen transplantierten Zellen und Gastgeber können nun genauer in Mäusen als bei Ratten untersucht werden, hat das Modell bei Mäusen 2,3, wo es vor kurzem 4 gekennzeichnet umgesetzt worden. In diesem Video zeigen wir, wie man Läsion der linken nigro-striatalen Weg von narkotisierten Mäusen durch langsam liefert 2,0 ul der 6-OHDA durch eine stereotaxically eingefügt Mikro-Kanüle. Der Verlust von dopaminergen Input erfolgt innerhalb weniger Tage, und die funktionellen Beeinträchtigungen können über post-operative Wochen und Monaten nach Bewertung Tier Rotationen von dopaminergen Wirkstoffen 5 induzierte überwacht werden. Hier zeigen wir Ganzkörper-kontralateralen Rotationen auftretenden 10 Minuten nach einer einzigen subkutanen Verabreichung von Apomorphin, gemessen ein Monat nach der Läsion. Ergebnisse und Nachteile werden im Folgenden erörtert.

Parkinson-Krankheit ist durch den Verlust von dopaminergen Innervation des Striatum, die experimentell durch 6-OH-Dopamin induziert werden können verursacht werden. Wir beschreiben, wie eine stereotaktische Läsion durchzuführen und Apomorphin-induzierte Drehverhalten in Mäusen zu überwachen. Dieses Modell ist nützlich und zuverlässig für die Erprobung neuer Therapien für Parkinson-Krankheit.

Mausmodell für Morbus Parkinson: von 6-OH Dopamin Läsion Behavioral-Test

Die Parkinson-Krankheit (PD) betrifft weltweit mindestens 6,5 Millionen Menschen, unabhängig von Geschlecht, sozialen, ethnischen, wirtschaftlichen oder geografischen Grenzen. Wesentliche ...

Hallo, ich bin Fab sva. Ich bin Absolvent des Labors für biomedizinische Wissenschaften an der Bundesuniversität von Genic. In diesem Video werde ich eine stereotaktische Operation durchführen, um den sechsseitigen Wirkstoff Dopamin-Neurotoxin zu verabreichen, um eine Hirnläsion im Mausmodell zu induzieren. Diese Technik ist entscheidend für die Erforschung der Parkinson-Krankheit.Ich zeige außerdem, wie der Grad der motorischen Beeinträchtigung mittels des oberen, durch Morphin induzierten Rotationsversuchs bewertet werden kann. Materialien und Instrumente: Beginnen Sie das Verfahren, indem Sie Handschuhe und die geeignete Schutzkleidung tragen. Schalten Sie die Heizplatte ein und stellen Sie sie auf 37 Grad Celsius ein.Stellen Sie sicher, dass alle Teile der stereotaktischen Apparatur sowie das erforderliche Material und die Instrumente gereinigt und sterilisiert wurden; außerdem sollten alle Gele und Lösungen, die warm gehalten werden können, wie Anästhetika und sterile Kochsalzlösung, vorbereitet sein. Produkte, die in anhydrer Form aufbewahrt werden, wie beispielsweise 6-Hydroxydopamin und Apomorphin, sollten in steriler Injektionslösung verdünnt und im laminaren Flussabsaugha

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Research

Forschung

JoVE Journal

Biology

Biologie

Ein Protokoll zur Durchführung einseitige 6-OHDA Läsionen der mediale Vorderhirnbündel in Mäusen beschrieben. Dieses Verfahren hat eine niedrige Mortalitätsrate (13,3%) mit 89% der überlebenden Tiere mit&gt; 95% Verlust von striatalen Dopamin und 90,63 ± -4,02% ipsiversive Drehvorspannung nach der Seite der Läsion.

Entwicklung eines Einseitig-läsionierten 6-OHDA Mausmodell der Parkinson-Krankheit

Dieses Video zeigt ein Verfahren zur Erstellung eines Rattenmodells der Parkinson-Krankheit, indem das Neurotoxin 6-Hydroxydopamin (6-OHDA) in das Gehirn injiziert wird. Die Neurotoxin-Infusion in das mediale Vorderhirnbündel (MFB) zielt spezifisch auf dopaminerge Neuronen ab, die für die motorische Kontrolle verantwortlich sind, was zu ihrer Zerstörung und Replikation von Parkinson-Symptomen führt.

Generierung des 6-Hydroxydopamin-Rattenmodells der Parkinson-Krankheit

Bei der Parkinson-Erkrankung und Bewegungsstörungen in der Regel sind empfindlich und zuverlässig Verhaltensstörungen Assays die zum Testen neue potentielle Therapeutika. Hier beschreiben wir eine überschaubare Batterie sensomotorische Tests bei Mäusen, die empfindlich auf unterschiedlichem Grad der Schädigung des nigrostriatalen und nützlich für präklinische Studien sind.

Beurteilung der Sensomotorik in Maus-Modellen der Parkinson-Krankheit

Einrichtung von einem Mausmodell für Parkinson-Erkrankung mit MPTP und Verhaltensstörungen Bewertungen mit Zylinder und Freiland-Tests zur Messung der motorischen Funktion beschrieben. Wir verwenden dann l-Dopa als ein Beispiel zeigen, wie man dieses Modell in der Studie von PD Arzneimittel anwenden.

Verhaltens Bewertungen der spontanen Fortbewegung in einem murinen MPTP-induzierten Parkinson-Erkrankung-Modell

Hier beschreiben wir das RatWalker-System, das durch die Neugestaltung des MouseWalker-Geräts erstellt wurde, um der zunehmenden Größe und dem Gewicht von Ratten gerecht zu werden. Dieses System verwendet frustrierte Totalreflexion (FTIR), Hochgeschwindigkeits-Videoaufzeichnung und Open-Access-Analysesoftware, um Gangparameter zu verfolgen und zu quantifizieren.

Anwendung des RatWalker-Systems zur Ganganalyse in einem genetischen Rattenmodell der Parkinson-Krankheit

Das 6-Hydroxydopamin (6-OHDA) -Modell wird seit Jahrzehnten verwendet, um das Verständnis der Parkinson-Krankheit voranzutreiben. In diesem Protokoll zeigen wir, wie man einseitige nigrostriatale Läsionen bei der Ratte durchführt, indem man 6-OHDA in das mediale Vorderhirnbündel injiziert, motorische Defizite beurteilt und Läsionen mit dem Schritttest vorhersagt.

Das 6-Hydroxydopamin-Rattenmodell der Parkinson-Krankheit

Nagetiermodelle von L-DOPA-induzierten Dyskinesien sind unschätzbare Werkzeuge, um therapeutische Interventionen zu identifizieren, um die Entwicklung abzuschwächen oder die Manifestationen zu lindern, die aufgrund der wiederholten Verabreichung von L-DOPA auftreten. Dieses Protokoll zeigt, wie dyskinetische Bewegungen im einseitig 6-OHDA-läsionierten Rattenmodell der Parkinson-Krankheit induziert und analysiert werden können.

Bewertung von L-DOPA-induzierten Dyskinesien im einseitig 6-OHDA-läsionierten Rattenmodell der Parkinson-Krankheit

Dieser Artikel beschreibt Methoden zur Induktion und Bewertung von Levodopa-induzierten Dyskinesien in einem Rattenmodell der Parkinson-Krankheit. Das Protokoll bietet detaillierte Informationen über die Intensität und Häufigkeit einer Reihe von dyskinetischen Verhaltensweisen, sowohl dystonisch als auch hyperkinetisch, und bietet ein zuverlässiges Werkzeug zum Testen von Behandlungen, die auf diesen ungedeckten medizinischen Bedarf abzielen.

Induktion und Bewertung von Levodopa-induzierten Dyskinesien in einem Rattenmodell der Parkinson-Krankheit

Das vorliegende Protokoll beschreibt die intrazerebroventrikuläre (ICV) Injektion von adulten Zebrafischen mit neurotoxischem 6-Hydroxydopamin (6-OHDA) am ventralen Zwischenhirn (Dn) und die Beurteilung der Beeinträchtigung und anschließenden Wiederherstellung der Nachbehandlung des Schwimmverhaltens unter Verwendung des offenen Tanktests, der von einer Analyse mit einer Video-Tracking-Software begleitet wird.

Lokomotorische Bewertung des 6-Hydroxydopamin-induzierten adulten Zebrafisch-basierten Parkinson-Modells

Zur Untersuchung der Entwicklungsprozesse von Ascosporen in Gibberella zeae, ein Verfahren für die Sammlung unter sterilen Bedingungen gefilmt wird, um ein Höchstmaß an Informationen für die Protokoll-Beschreibung zu generieren. Dies sollte die Reproduzierbarkeit der Experimente, ein entscheidender Aspekt, wenn sie voll Genom Expressionsprofil Tests durchgeführt werden.

Gibberella zeae Ascosporen Produktion und Sammlung für Microarray-Experimente.

Erfahren Sie die stereotaktische 6-OH-Dopamin-Läsion bei Mäusen zur Modellierung von Morbus Parkinson. Diese Methode ermöglicht die Bewertung motorischer Beeinträchtigungen durch den Apomorphin-Rotationstest für therapeutische Studien.

Mausmodell für Morbus Parkinson: von 6-OH Dopamin Läsion Behavioral-Test

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