Name: LAD-Ligation: einem Mausmodell der Myokardinfarkt (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-10-14T23:30:00.000+00:00
Duration: 8 min 23 s
Description: Lernen Sie die LAD-Ligation zur Erzeugung eines Myokardinfarkts im Mausmodell. Diese chirurgische Methode ermöglicht die Untersuchung ischämischer Herzkrankheiten und die Entwicklung neuer Therapieansätze.

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Die Autoren danken Christiane Pahrmann für ihre technische Unterstützung und Durchführung der Histologie.

<html> Balb / C Mäuse mit einem Gewicht von mindestens 20g im Alter von 8 bis 12 Wochen sind von Charles River (Sandhofer Weg 7, D-97633 Sulzfeld) erworben. Mäuse sind unter üblichen Bedingungen, gefüttert Standard-Maus-Pellets und Wasser ad libitum untergebracht. Anesthetize Maus mit Isofluran (2%) mit einer Induktion Kammer. <ol><li> Shave Halsbereich und die linke Seite des Brustkorbs und desinfizieren mit 80% Ethanol. </li><li> Platzieren Sie die Maus auf den Rücken und legen Sie eine Gesichtsmaske über seinen Mund und Nase zu halten die Anästhesie. </li><li> Überprüfen Sie die Reflexe Einklemmen des Schwanzes und Hinterpfoten, um sicherzustellen, dass die Maus ausreichend narkotisiert ist. </li><li> Unter mikroskopischer Sicht führen Sie eine Mittellinie zervikale Inzision Trennung der Haut, Muskeln und Gewebe für die Luftröhre. </li><li> Wenn die Luftröhre freigelegt schneiden ein kleines Loch in das Gewebe zwischen zwei Patronen Ringe unterhalb der Glottis bis zu den Endotrachealtubus (Abbildung 1) einzufügen. Legen Sie die Endotrachealtubus Halten der kraniale Teil der Luftröhre mit mikrochirurgischen forecepts. Überprüfen Sie die Brust Bewegung sicher sein, dass beide Lungenflügel gut belüftet sind. </li><li> Die Atemfrequenz (RR) sollte etwa 110 pro Minute, mit einer inspiratorischen Druck von 17 bis 18cm H 2 O. Drehen Sie die Maus vorsichtig, liegt auf der rechten Seite, mit Blick auf die linke Seite. Führen Sie eine leftsided Thorakotomie zwischen dem 3. und der 4. Rippe und sezieren das Gewebe und Muskeln vorsichtig mit einem Kauter, um Blutungen zu verhindern. </li><li> Öffnen Sie den Brustkorb sorgfältig, nachdem der Brustkorb geöffnet wird, finden die Herzen, ohne die Lunge mit einem spitzen Gegenstand. Entfernen Sie nun den Teil der Herzbeutel, die für das Herz ist. </li><li> Die LAD ist zwischen Lungenarterie und dem linken Vorhof befindet. Verwenden Sie einen 8-0 Prolene Naht (Ethicon, Norderstedt, Deutschland), um die LAD proximal mit einer einzigen Naht (Abb. 2) zu unterbinden. </li><li> Legen Sie eine Thoraxdrainage (28G, käuflich Katheter), zwischen dem 4. und dem 5. Rippe. </li><li> Schließen Sie die Brust Einschnitt in Schichten mit 6-0 Prolene fortlaufenden Nähten (Ethicon, Norderstedt, Deutschland) an den Rippen und 4:0 Prolene fortlaufenden Nähten (Ethicon, Norderstedt, Deutschland) Adaption auf der Haut zu schließen. </li><li> Lassen Sie den Brustkorb mit Hilfe einer Spritze 2ml sorgfältig (Abbildung 3). Platzieren Sie die Maus auf dem Rücken. Jetzt nimmt man den Tubus aus und passen Sie die tracheale Patrone Ringe mit einem einzigen Stich mit 7-0 Prolene Fäden (Ethicon, Norderstedt, Deutschland). </li><li> Legen Sie die Maske auf der Maus und schließen Sie die Haut mit 4-0 Prolene fortlaufenden Nähten (Ethicon, Norderstedt, Deutschland). </li></ol> Bestätigung Es gibt verschiedene Möglichkeiten, um den Erfolg des LAD-Ligation zu bestätigen. Der Troponin-Test kann von 6 bis 18 Stunden nach der Operation durchgeführt werden, mit nur 150 l Blut, ohne die Notwendigkeit, das Tier einzuschläfern. Das Blut wird auf eine individuelle Troponin-Test-Kit (TROP T Sensitive, Roche, Mannheim) (Abbildung 4). Troponin ist ein regulative Protein in der Aktin-Filamente der Muskelzelle, gibt es verschiedene Isotypen in den drei Arten von Muskeln. Die Isotypen cTnI und cTnT sind im Herzen gefunden und sind in Gewebeverletzung freigesetzt. Der standardisierte Test für Troponin T (cTnT) auf zwei Herzen spezifischen monoklonalen Antikörper, einer fängt die Troponin in der Blutprobe basiert, ist der zweite Marker. Das Infarktareal kann makroskopisch nach 3 Tagen (Abbildung 5) identifiziert werden. TTC (2,3,5-Triphenyltetrazoliumchlorid) Färbung Maßnahmen Gewebeviabilität zur Infarktgröße zu bewerten. Evans blauen Farbstoff (1,5%, 1,0 ml) in Phosphat-gepufferter Salzlösung (PBS) in den linken Ventrikel injiziert, um den myokardialen ischämischen Bereich zu messen. Die Maus ist eingeschläfert und das Herz wird geerntet und geschnitten in Scheiben schneiden. Die Gewebeschnitte werden in 1% TTC PBS-Lösung, pH 7,4 bei 37 ° C für 20min inkubiert. Die Gewebe werden in 10% PBS-gepuffertem Formalin über Nacht bei 2-8 ° C fixiert TTC wird ex vivo zu färben Evans blue-negative Bereiche (Abb. 6) verabreicht werden. Für die Histologie der Maus muss eingeschläfert werden und das Herz hat für die weitere Verarbeitung eingebettet werden. Nach der Durchführung Paraffinschnitte werden Objektträger mit H &amp; E (Hämatoxylin und Eosin) gefärbten oder Trichrom zu Bindegewebe (Abb. 7) zu visualisieren. <img src="/files/ftp_upload/1438/1438fig1.jpg" alt="Abbildung 1" /> Abbildung 1: Trachealtubus. 1A: Exposed Luftröhre, nach ventral zervikalen Inzision. 1B: Trachea ist zwei Knorpelspangen kaudal des Kehlkopfes eröffnet. 1C: Trachealtubus in die Luftröhre eingeführt. <img src="/files/ftp_upload/1438/1438fig2.jpg" alt="Abbildung 2" /> Abbildung 2: Das Herz durch eine linksseitige Thorakotomie ausgesetzt ist, die LAD ligiert. t &quot;&gt; <img src="/files/ftp_upload/1438/1438fig3.jpg" alt="Abbildung 3" /> Abbildung 3: Nach dem Brustkorb geschlossen wird, eine Pleura drain durchgeführt wird. Die Maus ist immer noch unter Narkose. <img src="/files/ftp_upload/1438/1438fig4.jpg" alt="Abbildung 4" /> Abbildung 4: Zwei Linien erscheinen nach ein paar Minuten, wenn die Troponin-Test ist positiv. <img src="/files/ftp_upload/1438/1438fig5.jpg" alt="Abbildung 5" /> Abbildung 5: Zeigt die explantierten Herzen. 5A: Makroskopische Ansicht des Herzens mit den ischämischen Bereich mit einem verschossenen weißliche Farbe. 5B: Querschnitt durch den Infarkt Herz, zeigt den ischämischen Bereich in der oberen rechten Ecke.

<ol><li>Atkins, B. Z., Hueman, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+cardiomyoplasty+improves+diastolic+properties+of+injured+Heart%5BTitle%5D)+AND+%22J+Surg+Res%22%5BJournal%5D)">Cellular cardiomyoplasty improves diastolic properties of injured Heart.</a> J Surg Res. 85 (2), 234-242 (1999).</li>
<li>Jaquet, K., KT, K. rause <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reduction+of+myocardial+scar+size+after+implantation+of+mesenchymal+stem+cells+in+rats%3A+what+is+the+mechanism%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells+Dev%22%5BJournal%5D)">Reduction of myocardial scar size after implantation of mesenchymal stem cells in rats: what is the mechanism.</a> Stem Cells Dev. 14 (3), 299-309 (2005).</li>
<li>Joung, B., Kim, I. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bone+marrow+mononuclear+stem+cells+transplanted+in+rat+infarct+myocardium+improved+the+electrical+conduction+without+evidence+of+proarrhythmic+effects%5BTitle%5D)+AND+%22Yonsei+Med+J%22%5BJournal%5D)">Bone marrow mononuclear stem cells transplanted in rat infarct myocardium improved the electrical conduction without evidence of proarrhythmic effects.</a> Yonsei Med J. 48 (5), 754-764 (2007).</li>
</ol>

Finanzierung Die vorliegende Studie wurde von der Universitätsklinik Hamburg (MK, Frau Habilitation Grant), DFG (SS, SCHR992/3-1), ISHLT (TD, Research Award 2009) unterstützt. Aussage Alle Tiere erhielten menschlicher Obhut in Übereinstimmung mit den Prinzipien des Laboratory Animal Care, wurden Experimente an Tieren in Übereinstimmung mit den Richtlinien und Vorschriften her von der Nationalen Gesellschaft für Medizinische Forschung und der Leitfaden für die Pflege und Verwendung von Labortieren durch die veröffentlichten durchgeführt National Institutes of Health (National Institutes of Health Veröffentlichung 85-23, revised 1985). Alle Tiere wurden von Charles River Laboratories (Sulzfeld, Deutschland) erhalten und wurden in der Tierpflege Einrichtungen des Universitätsklinikums Hamburg Eppendorf gepflegt. Die Tiere erhielten Standard-Futter und Wasser ad libitum.

Zusammenfassend visualisiert dieses Video der LAD-Ligatur-Modell Schritt-für-Schritt identifiziert und LAD-Ligation in Mäusen als leicht durchführbar chirurgischen Eingriffen.

lad-ligation: einem mausmodell der myokardinfarkt

LAD-Ligation: A Murine Model of Myocardial Infarction

Forschung Modelle der Infarkt und Ischämie sind unerlässlich, um die akute und chronische pathobiologischen und pathophysiologischen Prozessen in Myokardischämie zu untersuchen und zu entwickeln und zu optimieren künftige Behandlung. Zwei verschiedene Methoden zur Erstellung Myokardischämie sind in Labornagern durchgeführt. Die erste Methode ist die Kryo-Infarkt, eine schnelle, aber ungenaue Methode, wo ein Kryo-Stift auf der Oberfläche des Herzens (1-3) angewendet wird, zu schaffen. Mit dieser Methode kann der Wissenschaftler nicht garantieren, dass die Kryo-Narbe Ischämie führt, auch eine große Myokardschäden erstellt, zeigt pathophysiologischen Nebenwirkungen, die nicht auf Herzinfarkt in Zusammenhang stehen. Die zweite Methode ist die permanente Ligation der linken vorderen absteigenden Arterie (LAD). Hier werden die LAD ist mit einem einzigen Stich ligiert und bilden eine Ischämie, die fast sofort gesehen werden kann. Durch das Schließen der LAD, sind keine weiteren Blutfluss in diesem Bereich nicht erlaubt, während die umgebenden Herzmuskelgewebe ist fast nicht betroffen. Dieses chirurgische Verfahren ahmt die pathobiologischen und pathophysiologische Aspekte auftretenden Infarkt-bezogenen Myokardischämie. Die Methode in diesem Video vorgestellt zeigt den chirurgischen Eingriff einer Maus Infarkt Modell durch Ligation der LAD. Dieses Modell ist für pathobiologischen und pathophysiologischen sowie immunbiologische Studien über Herzinfarkt bequem. Die gezeigten Technik bietet eine hohe Genauigkeit und korreliert gut mit histologischen Schnitten.

Dieses Video zeigt, wie eine schnelle und zuverlässige Modell nutzen, um pathobiologischen und pathophysiologischen Prozessen der Myokardischämie zu studieren.

LAD-Ligation: einem Mausmodell der Myokardinfarkt

Forschungsmodelle für Infarkte und Myokardischämien sind essenziell, um die akuten und chronischen pathobiologischen sowie pathophysiologischen Prozesse zu untersuchen ...

Es wird ein medianer zervikaler Schnitt durchgeführt, um die Luftröhre freizulegen, und ein kleines Loch in die Luftröhre geschnitten, um einen endotrachealen Tubus einzuführen. Die Maus wird auf die rechte Seite gedreht und eine linksseitige Thorakotomie zwischen der dritten und vierten Rippe durchgeführt. Das Herz wird freigelegt und die A. coronaria sinistra (LAD) mit einem einzelnen Faden ligiert.Nach der Platzierung eines Thoraxdrains und der Verschließung der Inzision wird der Thorax durch vorsichtiges Absaugen mit der Spritze entleert. Abschließend wird die Maus auf den Rücken gedreht.Der Trachealtubus wird entfernt und die Trachea sowie der zervikale Schnitt werden verschlossen. Hallo, ich bin Sonya Refa. Ich bin Professorin für Immunologie und Herzchirurgie an der Abteilung für Herz- und Gefäßchirurgie im UniversitätsHerzzentrum Hamburg.Unser Labor konzentriert sich auf die Immunbiologie von Stammzellen und die Transplantationsimmunologie. Heute stellen wir Ihnen das LID-Ligationsmodell vor. In unserem Labor verwenden wir dieses Modell, um die Wirkung einer Stammzelltherapie zur Regeneration des Herzens nach einem Myokardinfarkt zu untersuchen.Und ich bin KA Wan, Student an der Stanford University und Sommerstipendiat im TSI-Labor von Drer. Und ich bin Mandy Cooch aus dem TSI-Labor des UniversitätsHerzzentrums Hamburg. Ich werde Ihnen zeigen, wie man eine Ligatur bei einer Maus durchführt, und anschließend werden wir Ihnen verschiedene Methoden vorstellen, mit denen der Erfolg einer myokardialen Ischämie verifiziert werden kann.Beginnen wir. Rasieren Sie den Nackenbereich und die linke Seite des Rippenkäfigs der anesthetisierten Maus. Legen Sie die Maus auf den Rücken und platzieren Sie eine Gesichtsmaske über Nase und Mund, um die Anästhesie mit 2% Isofluran aufrechtzuerhalten.Verwenden Sie vor Beginn der Operation Beta-Isod und kneifen Sie Schwanz und Hinterpfoten der Maus, um zu bestätigen, dass sie ausreichend anästhesiert ist. Unter mikroskopischer Sicht führen Sie einen medianen zervikalen Schnitt durch, um die Haut, Muskulatur und das Gewebe, das die Trachea bedeckt, zu trennen. Sobald die Trachea freigelegt ist, schneiden Sie ein kleines Loch in das Gewebe zwischen zwei Knorpelringen unterhalb des Glottisbereichs, um den endotrachealen Tubus einzuführen.Führen Sie den endotrachealen Tubus ein, während Sie den kranialen Teil der Trachea festhalten. Überprüfen Sie mit mikrochirurgischer Pinzette die thorakale Bewegung, um sicherzustellen, dass beide Lungen gut belüftet sind. Die Atemfrequenz sollte etwa 110 pro Minute betragen bei einem inspiratorischen Druck von 17 bis 18 Zentimetern H₂O.Drehen Sie die Maus vorsichtig und legen Sie sie auf ihre rechte Seite, sodass Sie der linken Seite zugewandt sind. Führen Sie eine linksseitige Thorakotomie zwischen der dritten und vierten Rippe durch und dissezieren Sie das Gewebe und den Muskel. Verwenden Sie vorsichtig einen Coer, um Blutungen zu verhindern.Öffnen Sie den Thorax vorsichtig. Sobald der Thorax geöffnet ist, suchen Sie das Herz auf, ohne die Lunge mit scharfen Gegenständen zu berühren. Entfernen Sie anschließend den Teil des Perikardbeutels, der das Herz bedeckt.Die A. descendens anterior (LAD) befindet sich zwischen der Lungenarterie und dem linken Arterienbogen. Die proximale LAD wird mit einer einzelnen 8-0-Prolinnaht ligiert. Platziere einen endotrachealen Schlauch, einen Venenkatheter mit 28 Gauge, zwischen die vierte und die fünfte Rippe.Schließen Sie den thorakalen Schnitt schichtweise mit sechs-oh-Prolin-Laufnähten zur Adaptation der Rippen und vier-oh-Prolin-Laufnähten. Zum Verschließen der Haut entleeren Sie den Thorax vorsichtig mithilfe einer Zwei-Milliliter-Spritze. Nach der Thoraxentleerung legen Sie die Maus auf den Rücken.Legen Sie die Gesichtsmaske auf die Maus und ziehen Sie den endotrachealen Schlauch heraus. Befestigen Sie die Tragerringe des Trachealkartuschen mit einem einzelnen Stich unter Verwendung von 7-0 Prolen-Nähten und verschließen Sie die Haut mit laufenden 4-0 Prolen-Nähten. Wir konnten zeigen, dass das LAD-Ligationsmodell an der Maus eine elegante und zuverlässige Methode zur Erzeugung eines Myokardinfarkts darstellt.Es gibt verschiedene Möglichkeiten, einen erfolgreichen Myokardinfarkt zu bestätigen. Eine Methode ist der Troponin-Test, bei dem 150 µL Blut der Maus auf einen speziell angefertigten Troponin-Testkit aufgetragen werden. Ein positives Ergebnis, bei dem nach wenigen Minuten zwei Linien erscheinen, weist auf die Freisetzung von Troponin T aus dem Herzen aufgrund einer Gewebeschädigung hin.Ein zweiter Ansatz zur Bestätigung eines erfolgreichen Myokardinfarkts besteht darin, Querschnitte des Herzens mit 2,3,5-Triphenyltetrazoliumchlorid oder TTC zu färben, um die Gewebeviabilität zu messen und die Infarktgröße zu bewerten. Das Herz wird mit TTC bedeckt und 20 Minuten bei 37 Grad Celsius inkubiert. Das vitale Gewebe färbt sich rot, während der infarzierte Bereich weiß erscheint.Schließlich kann das Herz der Maus in Paraffin eingebettet und für die Histologie geschnitten werden. Die Schnitte werden mit Tri-Chrom gefärbt, um fibrotisches Gewebe sichtbar zu machen. Ich habe Ihnen soeben gezeigt, wie man eine LAD-Ligatur an Mäusen durchführt.Wir haben Ihnen verschiedene Methoden gezeigt, wie man den erfolgreichen Myokardinfarkt entweder Stunden nach der LAD-Ligatur oder Wochen später bei Durchführung einer LAD-Ligatur bestätigen kann. Es ist wichtig, das Lungengewebe zu meiden, um eine Lungenschädigung zu vermeiden. Das war's.Vielen Dank für das Anschauen des Videos und viel Erfolg bei Ihren Experimenten.

lad-ligation-a-murine-model-of-myocardial-infarction

Research

Forschung

JoVE Journal

Biology

Biologie

Das Rattenmodell der akuten Myokardinfarkt (AMI) ist nützlich, um die Folge eines MI auf die kardiale pathophysiologischen und physiologischen Funktion zu untersuchen.

Akuter Myokardinfarkt bei Ratten

Zahlreiche genetische Manipulationen und / oder intramyokardialen Injektionen von Genen, Proteinen, Zellen und / oder Biomaterialien basieren auf die Dimension der Zeit in Studien zur akuten Ischämie / Reperfusion und chronischer Umbau in Mäusen überlagert. Dieses Video zeigt die mikrochirurgische Verfahren für die Ischämie / Reperfusion, permanent koronare Ligation und intramyokardialen Injektion Studien.

Koronare Ligation und intramyokardialen Injection in einem Mausmodell der Infarkt

Das chirurgische Verfahren zum experimentellen Herzinfarkt in Mäusen zu induzieren beginnt mit linken Thorakotomie zwischen der dritten und der vierten Rippe, um die vordere Oberfläche des Herzens und linken Lunge visualisieren. Die linke Koronararterie ligiert ist, wird die Brust geschlossen und der Maus erlaubt ist, spontan zu erholen.

Geändert Technik für Coronary Artery Ligation in Mäuse

In diesem Video beschreiben wir einen chirurgischen Eingriff, um ein Mausmodell für einen Myokardinfarkt zu erstellen, indem die linke anteriore absteigende Koronararterie dauerhaft ligiert wird.

Generierung eines Mausmodells des Myokardinfarkts: Ein chirurgisches Verfahren zur dauerhaften Ligatur der linken vorderen absteigenden Koronararterie im Mausmodell

Wir stellen ein chirurgisches Verfahren, experimentelle Ischämie / Reperfusions (I / R) Schädigung induzieren Myokardinfarkt (MI) in Mausmodellen, die für mehr Klarheit in der Positionierung der Ligation an der linken vorderen absteigenden Arterie (LAD) simulieren können, um die Reproduzierbarkeit zu erhöhen MI Experimente in Mäusen.

Einem Mausmodell der myokardialen Ischämie-Reperfusion Injury durch Ligation des linken vorderen absteigenden Arterie

Herzinsuffizienz ist die Hauptursache für Krankenhausaufenthalte und eine der Haupttodesursachen. Ein Modell der permanenten Ligatur der linken anterioren absteigenden Koronararterie bei Mäusen wird angewendet, um den ventrikulären Umbau und die kardiale Dysfunktion nach einem Myokardinfarkt zu untersuchen. Die Technik der invasiven hämodynamischen Messungen an Mäusen wird vorgestellt.

Permanent Ligation des linken vorderen absteigenden Koronararterie bei Mäusen: Ein Modell der Post-Myokardinfarkt Umbau und Herzinsuffizienz

Wir bieten eine zuverlässige Methode für die Ligatur der linken vorderen absteigenden Arterie (LAD) in einem Mausmodell an. Diese Methode ist vergleichsweise weniger invasiv als andere Methoden, die eine endotracheale Intubation, einen linksseitigen Thorakotomieansatz und eine Thorakozentese umfassen. Diese Methode kann sowohl als Modell für akuten als auch für chronischen Myokardinfarkt (MI) verwendet werden.

Murine linken vorderen absteigenden (LAD) Koronararterienligatur: ein verbessertes und vereinfachtes Modell für Myokardinfarkts

Hierin beschreiben wir ein chirurgisches Verfahren, das zeigt, wie eine dauerhafte Ligation der links-vorderen absteigenden Herzkranzgefäße bei Mäusen erreicht werden kann. Dieses Modell ist von hoher Relevanz für die Untersuchung der Pathophysiologie des Myokardinfarkts und der damit einhergehenden biologischen Prozesse.

Murine Myokardinfarkt Modell mit permanenten Ligation der linken Anterior absteigende Koronararterie

Hier beschreiben wir eine einfache und reproduzierbare Methode, die bei Mäusen durch Präzisionsligation der linken vorderen absteigenden Koronararterie durch Mikromanipulation einen Myokardinfarkt oder eine myokardiale Ischämie-Reperfusionsverletzung induzieren kann.

Induktion von Myokardinfarkt und myokardialer Ischämie-Reperfusionsschädigung bei Mäusen

Hier wird ein chirurgisches Verfahren zur permanenten Ligatur der linken Koronararterie bei Mäusen vorgestellt. Mit diesem Modell kann die Pathophysiologie und die damit verbundene Entzündungsreaktion nach Myokardinfarkt untersucht werden.

Linke Koronararterienligatur: Ein chirurgisches Mausmodell des Myokardinfarkts

Lernen Sie die LAD-Ligation zur Erzeugung eines Myokardinfarkts im Mausmodell. Diese chirurgische Methode ermöglicht die Untersuchung ischämischer Herzkrankheiten und die Entwicklung neuer Therapieansätze.

LAD-Ligation: einem Mausmodell der Myokardinfarkt

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