Name: Kultur der Maus Neural Stem Cell Precursors (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-02-25T00:00:00.000+00:00
Duration: 27 min 44 s
Description: Lernen Sie die Isolierung von Neuralvorläuferzellen aus dem embryonalen Kortex der Maus für die Entwicklungsbiologie. Diese Methode ermöglicht die Kultivierung von Zellen zur Untersuchung neuronaler Entwicklungsprozesse.

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<ol><li> Maus neuralen Vorläuferzellen (NPCs) aus E12.5 Embryos Cortex isoliert. </li><li> Haut-und mesenchymale Schichten wurden von seziert telencephalic Vesikel entfernt. </li><li> Die Vesikel wurden in 0,05% Trypsin mit 0,02% EDTA und 0,2% BSA in HBSS für 20 Minuten bei 37 ° C inkubiert </li><li> Trypsinierung wurde von einem gleichen Volumen von 1 mg / ml Sojabohnen-Trypsin-Inhibitor (Sigma # T6522) in HBSS gestoppt. </li><li> Tissue verdaut wurden dissoziiert über mehrere Runden Verreiben mit feuerpolierte Pasteur Pipetten. </li><li> Die Zellen wurden einmal mit 0,2% BSA in HBSS gewaschen und plattiert bei 50.000 Zellen / ml auf Laminin-beschichtete Deckgläser in Medien mit 20 ng / ml EGF, 10 ng / ml FGF2 (R &amp; D Systems oder PeproTech) und 2 ug / ml Heparin ( Sigma). </li></ol>

<ol><li>Currle, D., Cheng, X., Hsu, C., Monuki, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+and+indirect+roles+of+CNS+dorsal+midline+cells+in+choroid+plexus+epithelial+formation%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Direct and indirect roles of CNS dorsal midline cells in choroid plexus epithelial formation.</a> Development. 132 (15), 3549-3559 (2005).</li>
<li>Flanagan, L., Rebaza, L., Derzic, S., Schwartz, P., Monuki, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulation+of+human+neural+precursor+cells+by+laminin+and+integrins%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Res%22%5BJournal%5D)">Regulation of human neural precursor cells by laminin and integrins.</a> J Neurosci Res. 83, 845-856 (2006).</li>
</ol>

Große Fortschritte in unserem Verständnis der Entwicklung des ZNS und Stammzellbiologie wurden möglich durch unsere Fähigkeit zu ernten, zu isolieren und Kultur embryonalen neuralen Stammzellen. Dieses Video zeigt die Zerlegung von E12.5 Maus Großhirnrinde und die anschließende Zerlegung und Kultivierung von embryonalen neuralen Stammzellen. Viele andere ähnliche Methoden wurden erfolgreich von anderen Forschern eingesetzt.

<table><tbody><tr><td>Gerade Iris-Scheren</td><td>Werkzeug</td><td>Fine Science Tools</td><td>14060-11</td><td></td></tr><tr><td>Mittlere Scheren</td><td>Werkzeug</td><td>Fine Science Tools</td><td>15024-10</td><td></td></tr><tr><td>Mikroscheren</td><td>Werkzeug</td><td>Fine Science Tools</td><td>15002-08</td><td></td></tr><tr><td>Abgewinkelte Pinzette</td><td>Werkzeug</td><td>Fine Science Tools</td><td>11251-35</td><td></td></tr></tbody></table>

kultur der maus neural stem cell precursors

Culture of Mouse Neural Stem Cell Precursors

Primäre neuronale Stammzellen Kulturen sind nützlich für die Untersuchung der Mechanismen des zentralen Nervensystems Entwicklung. Die Stammzellforschung wird unser Verständnis des Nervensystems und kann es uns ermöglichen, Therapien für bisher unheilbare Krankheiten und Verletzungen des Gehirns zu entwickeln. Darüber hinaus sollten Stammzellen für die Stammzellenforschung an die detaillierte Untersuchung von Mechanismen der neuronalen Differenzierung und Transdifferenzierung und die genetischen und umweltbedingten Signale unterstützt werden sollen, dass die direkte Spezialisierung der Zellen in bestimmten Zelltypen. Dieses Video zeigt eine Technik verwendet, um Zellen aus dem Embryonaltag 12,5 Maus dorsalen Vorderhirn aufzuschlüsseln. Die Dissektion Verfahren schließt die Gewinnung E12.5 Maus Embryonen aus der Gebärmutter, die Beseitigung der &quot;Haut&quot; mit feinen Pinzette und schließlich isoliert Stücke Großhirnrinde. Nach der Präparation wird das Gewebe verdaut und mechanisch dissoziiert. Die resuspendierten dissoziierten Zellen werden dann in &quot;Stammzelle&quot; Medien, die das Wachstum von neuralen Stammzellen bevorzugt kultiviert.

Dieses Video beschreibt die Methode zur Isolierung von neuroprecursors aus den Entwicklungsländern Kortex embryonaler Mäuse verwendet. Das Verfahren zur Entfernung von Embryonen aus der Gebärmutter, sezieren die kortikale Gewebe und verdauen die isolierten Hirnrinde dargestellt.

Kultur der Maus Neural Stem Cell Precursors

Primäre neurale Stammzellkulturen sind nützlich für die Untersuchung der Mechanismen, die der Entwicklung des zentralen Nervensystems zugrunde liegen. Die Stammzellforschung wird ...

Dies ist also der erste Schritt bei der Isolierung, Dissoziation und Kultivierung von neuralen Vorläuferzellen. Zunächst werde ich eine 24-Loch-Platte beschichten. Diese ist nicht für die Zellkultur behandelt.Ich werde es mit Laminin beschichten, damit die Zellen haften. Zuerst werde ich es mit einer Mischung aus Wasser und Poly-D-Lysin beschichten. Ich werde etwa 450 Mikroliter pro Vertiefung hinzufügen.Ich habe also die Hälfte der Platte, diese beiden Reihen hier, mit der Poly-D-Lysin-Lösung beschichtet. Anschließend werde ich sie fünf Minuten bei Raumtemperatur im Sicherheitswerkbank-Inkubator inkubieren. Die Inkubation dauert nun bereits fünf Minuten.Ich werde die PDL-Lösung hier mit einem Vakuum entfernen. Haushaltsvakuumanwendung. Nun werde ich die Vertiefungen erneut mit Wasser spülen, etwa 450 µL.Wirklich keine Inkubationszeit beim Spülen mit Wasser. Ich werde das Wasser einfach sofort abpipettieren. Nun werde ich die Laminatlösung hinzufügen.Das Laminate wird in EM-EM-Medium bei zwei Mikrogramm pro Milliliter gelöst. Ich werde also 450 Mikroliter der Laminat-Lösung zu jedem hinzufügen; im Moment beschichte ich Kunststoff. Man könnte aber auch Deckgläser in diese Vertiefung

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Research

Forschung

JoVE Journal

Biology

Biologie

Hier zeigen wir unsere Methode zur Maus epidermalen Neuralleiste Stammzellen (EPI-NCSC) zu isolieren. Technik beinhaltet Mikro-Sezieren Whisker Follikel, die Isolierung des Bulge und Silber reflektiert sie in Gewebekultur. EPI-NCSC beginnen mit Ausbuchtung Explantate auf das Substrat innerhalb von 3 auswandern - 4 Tage.

Maus Epidermal Neural Crest Stem Cell (EPI-NCSC) Kulturen

Dieses Video-Protokoll zeigt die Anwendung der Neurosphäre Assay für die Isolierung und Expansion von neuronalen Stammzellen, die aus den Ganglien-Eminenzen der embryonalen Tag 14-Maus-Gehirn.

Gründung Embryonale Maus Neural Stem Cell Culture Mit dem Neurosphäre Assay

Isolierung von embryonalen Neuralleiste vom Neuralrohr erleichtert die Verwendung...

Isolierung und Kultivierung von Zellen der Neuralleiste aus embryonalen murinen Neuralrohr

Dieses Video zeigt ein detailliertes Protokoll zur Isolierung der lateralen Ventrikelwände aus dem erwachsenen Mausgehirn und zur Durchführung einer enzymatischen Gewebedissoziation, um einzelne Zellen zu erhalten. Diese Zellen werden dann spezifischen Kulturbedingungen ausgesetzt, die die Proliferation von neuralen Stammzellen selektiv fördern und ihre Differenzierung in Co-Kulturen von Oligodendrozyten und Astrozyten fördern.

Gewinnung einer gemischten Oligodendrozyten- und Astrozytenkultur aus adulten neuralen Stammzellen der Maus

Dieses Video demonstriert eine Methode zur in vitro Erzeugung von neuralen Vorläuferzellen (NPCs) aus embryonalen Stammzellen (mESCs) der Maus. Die mES-Zellen werden in Suspension kultiviert, um Embryoidkörper (EBs) zu bilden, die dann durch Retinsäurebehandlung in einer adhärenten Kultur zur Differenzierung in NPCs geführt werden.

Eine Technik zur Erzeugung neuraler Vorläuferzellen aus embryonalen Stammzellen der Maus

Hier beschreiben wir eine detaillierte Protokoll für die gleichzeitige Erzeugung von neuralen Vorläuferzellkulturen, entweder als Mono-oder haftNeuroSphären, aus der Subventrikularzone und Gyrus dentatus der einzelnen erwachsenen Mäusen.

Eine Maus, zwei Kulturen: Isolierung und Kultur von adulten neuralen Stammzellen aus dem Zwei Neurogene Zonen der einzelnen Mäuse

Dieses Protokoll beschreibt detailliert die Methode zur Erzeugung von neuralen Vorläuferzellen aus embryonalen Stammzellen unter Verwendung einer serumfreien Monolayer-Methode. Diese Vorläuferzellen können verwendet werden, um reife neuronale Zelltypen abzuleiten oder den Prozess der neuronalen Spezifikation zu untersuchen, und sind für die Skalierung im Multiwell-Format für das Screening von Verbindungen zugänglich.

Neuronale Differenzierung von embryonalen Stammzellen der Maus in Serum-freiem Monolayer-Kultur

Die Etablierung von Kultursystemen für die Expansion adulter neuraler Stammzellen (aNSCs) ermöglicht die Untersuchung und Anwendung von aNSCs für die Therapie. Die subkallosale Zone (SCZ) wurde kürzlich als neuartige Neuroblasten-bildende Region bei erwachsenen Mäusen erkannt. Hier werden Methoden zur Isolierung, Expansion und Differenzierung von SCZ-aNSCs beschrieben.

Isolierung und Kultur von adulten neuralen Stammzellen aus der Maus subcallosa Zone

Hier stellen wir eine neuartige mikrochirurgische Technik für die Isolierung von neuralen Stammzellen aus E13 Maus Embryo ganglionic Eminenz.

Isolation und Kultur der embryonalen Maus neurale Stammzellen

Wir beschreiben das Verfahren zur In-vitro-Differenzierung von embryonalen Stammzellen der Maus in neuronale Zellen mit der Hanging-Drop-Methode. Darüber hinaus führen wir eine umfassende phänotypische Analyse durch RT-qPCR, Immunfluoreszenz, RNA-seq und Durchflusszytometrie durch.

Differenzierung und Charakterisierung neuronaler Vorläufer und Neuronen aus embryonalen Stammzellen der Maus

Lernen Sie die Isolierung von Neuralvorläuferzellen aus dem embryonalen Kortex der Maus für die Entwicklungsbiologie. Diese Methode ermöglicht die Kultivierung von Zellen zur Untersuchung neuronaler Entwicklungsprozesse.

Kultur der Maus Neural Stem Cell Precursors

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