Name: Dissection der hippocampalen von erwachsenen Maus (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-11-17T20:30:00.000+00:00
Duration: 7 min 42 s
Description: Lernen Sie die Präparation des Gyrus dentatus aus dem Hippocampus erwachsener Mäuse unter dem Stereomikroskop. Diese Technik ermöglicht die Gewinnung intakter Proben für transkriptomische und proteomische Analysen.

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Wir danken Dr. Yoko Nabeshima an der Kyoto University für ihren Unterricht auf der Dissektionstechnik und Frau Aki Miyakawa bei Fujita Health der Universität für ihre Unterstützung zu filmen. Von MEXT in Japan, und durch - Diese Arbeit wurde durch das Programm zur Förderung der Grundrechte Studies in Health Sciences der National Institute of Biomedical Innovation, ein Grant-in-Aid for Scientific Research auf Schwerpunktbereiche-Integrative Hirnforschung (Shien) unterstützt Grant-in-Aid von CREST der Japan Science and Technology Agency.

Dissection der hippocampalen <ol><li> In einer tief narkotisierten Maus, sorgfältig sezieren das Gehirn aus dem Schädel und legen Sie sie in eiskaltes Phosphat-gepufferter Salzlösung (PBS). </li><li> In eine Petrischale mit eiskaltem PBS, schneiden das Gehirn entlang der Längsfissur des Großhirns mit einem chirurgischen Messer und schnitt den Regionen hinter Lambda (Mittelhirn, Hinterhirn und Kleinhirn). </li><li> Legen Sie die Gehirnhälfte medialen Seite und, mit einer Pinzette vorsichtig entfernen das Zwischenhirn (Thalamus und Hypothalamus) im Rahmen einer Dissektionsmikroskop. Dies legt die mediale Seite des Hippocampus, so dass für die Visualisierung des Gyrus dentatus. Der Gyrus dentatus ist zu unterscheiden von Ammonshorn durch die Lücken zwischen ihnen. Eine Verletzung des Hippocampus oder Umgebung wird es immer schwieriger, die Gyrus dentatus zu isolieren. </li><li> Legen Sie eine scharfe Nadelspitze (zB 27-Gauge-Nadel) in jeder Seite des Gyrus dentatus (Grenzen des Gyrus dentatus und Ammonshorn; Abbildung 1), und schieben Sie die Nadeln nur oberflächlich entlang der Septo-zeitliche Achse des Hippocampus zu isolieren Gyrus dentatus. </li><li> Nehmen Sie den isolierten Gyrus dentatus mit einer Nadel oder einer Pinzette und legen Sie sie in ein Probenröhrchen. Die so erhaltenen Gyrus dentatus Gewebeprobe kann ab sofort für jeden Assay verwendet werden oder in eine Tiefkühltruhe für den späteren Gebrauch. </li><li> Isolieren Sie die Gyrus dentatus von der anderen Gehirnhälfte mit der gleichen Methode. </li></ol> Quantitative real-time PCR Der Gyrus dentatus wurde unter Verwendung der oben genannten Methode und die übrigen Hippocampus wurde als Ammonshorn Probe von Wildtyp-Mäusen seziert. Real-time PCR von beta-Aktin, TDO2, DSP, Mrg1b und Tyro3 wurden mit dem Gyrus dentatus und der Ammonshorn Proben wie zuvor beschrieben 1 durchgeführt. Primer 5&#39;-CTGGCGAGATCACGATGACG und 5&#39;-AAGCTACGCTGTTGTCTAACC wurden Mrg1b und GCCTCCAAATTGCCCGTCA und 5&#39;-CCAGCACTGGTACATGAGATCA für Tyro3 verwendet. Microarray-Analyse (- Mäuse alpha-CaMKII + /), wie beschrieben bisher 1 Microarray-Experimente wurden mit männlichen Wildtyp-Mäusen und Mäusen, die heterozygot für die alpha-Isoform der Calcium / Calmodulin-abhängige Proteinkinase II durchgeführt. Kurz gesagt, wurde RNA aus dem gesamten Hippocampus oder Gyrus dentatus von Wildtyp-und mutierten Mäusen isoliert mit einem Mouse Genome 430 2,0 Array (Affymetrix, Santa Clara, CA) hybridisiert, und jeder GeneChip wurde durch eine Affymetrix GeneChip Scanner 3000 (GCS3000) gescannt . GeneChip Analyse wurde mit Microarray Analysis Suite Version 5.0 durchgeführt.

<ol><li>Yamasaki, N., Maekawa, M., Kobayashi, K., Kajii, Y., Maeda, J., Soma, M., Takao, K., Tanda, K., Ohira, K., Toyama, K., Kanzaki, K., Fukunaga, K., Sudo, Y., Ichinose, H., Ikeda, M., Iwata, N., Ozaki, N., Suzuki, H., Higuchi, M., Suhara, T., Yuasa, S., Miyakawa, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alpha-CaMKII+deficiency+causes+immature+dentate+gyrus%2C+a+novel+candidate+endophenotype+of+psychiatric+disorders%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Brain%22%5BJournal%5D)">Alpha-CaMKII deficiency causes immature dentate gyrus, a novel candidate endophenotype of psychiatric disorders.</a> Mol. Brain. 1, 6-6 (2008).</li>
<li>Insausti, A. M., Megias, M., Crespo, D., Cruz-Orive, L. M., Dierssen, M., Vallina, I. F., Insausti, R., Florez, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hippocampal+volume+and+neuronal+number+in+Ts65Dn+mice%3A+a+murine+model+of+Down+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosci.+Lett%22%5BJournal%5D)">Hippocampal volume and neuronal number in Ts65Dn mice: a murine model of Down syndrome.</a> Neurosci. Lett. 253, 175-175 (1998).</li>
<li>Redwine, J. M., Kosofsky, B., Jacobs, R. E., Games, D., Reilly, J. F., Morrison, J. H., Young, W. G., Bloom, F. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dentate+gyrus+volume+is+reduced+before+onset+of+plaque+formation+in+PDAPP+mice%3A+a+magnetic+resonance+microscopy+and+stereologic+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Dentate gyrus volume is reduced before onset of plaque formation in PDAPP mice: a magnetic resonance microscopy and stereologic analysis.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 100, 1381-1381 (2003).</li>
<li>Lein, E. S., Zhao, X., Gage, F. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Defining+a+molecular+atlas+of+the+hippocampus+using+DNA+microarrays+and+high-throughput+in+situ+hybridization%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Defining a molecular atlas of the hippocampus using DNA microarrays and high-throughput in situ hybridization.</a> J. Neurosci. 24, 3879-3879 (2004).</li>
<li>Matsuo, N., Yamasaki, N., Ohira, K., Takao, K., Toyama, K., Eguchi, M., Yamaguchi, S., Miyakawa, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neural+activity+changes+underlying+the+working+memory+deficit+in+alpha-CaMKII+heterozygous+knockout+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Front.+Behav.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Neural activity changes underlying the working memory deficit in alpha-CaMKII heterozygous knockout mice.</a> Front. Behav. Neurosci. 3, 20-20 (2009).</li>
<li>Franklin, K. B. J., Paxinos, G. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aFranklin%2C+KBJ+%22The+Mouse+Brain+in+Stereotaxic+Coordinates%22">The Mouse Brain in Stereotaxic Coordinates</a>. , Academic Press Inc.. San Diego. (1997).</li>
</ol>

Tierversuche wurden in Übereinstimmung mit dem National Institute of Health Guide für Pflege und Verwendung von Labortieren durchgeführt, und von der Pflege der Tiere und die Nutzung Ausschuss bei Fujita Health University.

Der Gyrus dentatus belegt ca. 25% bis 30% des Volumens des Hippokampus 2,3. Es hat eine einzigartige Zellzusammensetzung und spielt eine entscheidende Rolle in verschiedenen Funktionen des Gehirns. Daher sind Techniken, um die Gyrus dentatus zu isolieren für die Analyse der Ereignisse, die speziell treten in dieser Region. Hier haben wir gezeigt, ein Verfahren zur effizienten sezieren Gyrus dentatus aus adulten Maus Hippocampus und bestätigt die Genauigkeit der Technik. Zunächst zeigte histologische Untersuchung, dass der Gyrus dentatus ohne Verunreinigung durch andere Regionen (Abbildung 1) wurde abgetrennt, was darauf hinweist, dass eine reine Gyrus dentatus Probe vorbereitet werden können. Zweitens bestätigten wir, dass die präparierten Gewebe Gyrus dentatus ist durch die Durchführung real-time PCR des Gyrus dentatus-spezifische Gene, TDO2 und DSP-und Ammonshorn bereichert Gene, Mrg1b und Tyro3 4 (Abbildung 2). Die mRNA Expression von TDO2 (p = 0,000023; n ist = 4 bzw. 4) und DSP (p = 0,0000030; n ist = 4 bzw. 4) im Gyrus dentatus Proben wurden bei offensichtlich höhere erkannt, während Mrg1b (p = 0.000080; n ist = 4 bzw. 4) und Tyro3 (p = 0,00017; n ist = 4 bzw. 4) wurden niedrigere, als die im Ammonshorn Proben. Beta-Aktin-Expression nicht in diesen Proben unterscheiden (p = 0,11; n ist = 4 und 4, jeweils). So können wir überprüfen, ob der Gyrus dentatus genau wurde von der Durchführung solcher einfachen Echtzeit-PCR-Experimente seziert. Drittens, um den Nutzen dieser Methode Dissektion beurteilen, haben wir die mRNA Expression von ganzen Hippocampus mit dem Gyrus dentatus. Whole Hippocampus und Gyrus dentatus von Wildtyp-(n ist = 9 bzw. 4) und alpha-CaMKII + / erhalten - Mäuse (n ist = 18 bzw. 4) wurden für die Microarray-Analyse aufbereitet und für alle Gene hat, die fach- Veränderung wurde durch Division der Mutante Wert durch die wild-type-Wert berechnet. Die Ergebnisse zeigten, dass die Veränderungen in mRNA-Expression, insbesondere des Gyrus dentatus-spezifische Moleküle wie DSP und TDO2, mit wurden bis zu einem 5-fache Steigerung der Empfindlichkeit in Gyrus dentatus Proben im Vergleich zum gesamten Hippocampus-Proben (Tabelle 1) festgestellt. Wir haben bereits gezeigt, dass alpha-CaMKII + / - Mäuse zeigen Verhaltensweisen der menschlichen psychiatrischen Störungen wie Arbeitsspeicher Defizite und eine übertriebene infradian Rhythmus 1,5 verwandt. Darüber hinaus sind morphologische und elektrophysiologische Eigenschaften des Gyrus dentatus Neuronen in mutierten Mäusen ähneln denen von unreifen Gyrus dentatus Nervenzellen im normalen Nagern, was darauf hinweist, dass die Neuronen in diesen mutierten Mäusen bis zur Endfälligkeit zu 1 zu entwickeln scheitern. Die unreifen Gyrus dentatus und down-regulierten Expression von DSP und TDO2 mRNA in alpha-CaMKII + / - Mäuse sind im Einklang mit dem Befund, dass DSP und TDO2 als Marker für reife Körnerzellen kann im Gyrus dentatus (Ohira et al verwendet werden, nicht veröffentlicht. Daten). Zusammengenommen können diese bequeme und genaue Dissektionstechnik zuverlässig für Studien über den Gyrus dentatus konzentriert eingesetzt werden. Gyrus dentatus Gewebe unter Verwendung dieser Methode ist anwendbar auf andere Arten von Analysen sowie, einschließlich Proteomics und Zellbiologie Analysen. <img src="/files/ftp_upload/1543/1543fig1.jpg" alt="Abbildung 1" /> Abbildung 1. Verification der isolierten Gyrus dentatus durch die histologische Untersuchung. A Frontalschnitt des Gehirns nach Trennung Gyrus dentatus wurde für Nissl-Färbung (links) verarbeitet, und eine schematische Darstellung von Gehirn der Maus atlas6 angepasst repräsentiert die etwa auf dem Niveau des Abschnitts in der linken Seite (rechts) gezeigt. Die Pfeile zeigen die Richtung der Nadelspitze Insertion. Scale-bar, 1 mm. <img src="/files/ftp_upload/1543/1543fig2.jpg" alt="Abbildung 2" /> Abbildung 2. Nachweis der isolierten Gyrus dentatus durch real-time PCR. Der Gyrus dentatus und der Ammon s Horn von vier Wildtyp-Mäusen gewonnen wurden real-time PCR von beta-Aktin, TDO2, DSP, Mrg1b und Tyro3 verarbeitet. Die Ergebnisse werden präsentiert als Mittelwert ± SEM. Für die statistische Analyse wurde Student s t-Test eingesetzt, und p-Werte eingehalten werden: beta-Aktin, p = 0,11; TDO2, p = 0,000023 (** 1); Dsp, p = 0,0000030 (** 2); Mrg1b, p = 0.000080 (** 3); und Tyro3, ​​p = 0,00017 (** 4). Tabelle 1. . Microarray-Analyse der gesamten Hippocampus und Gyrus dentatus Gene differentiell in Gyrus dentatus und ganze Hippocampus von alpha-CaMKII ausgedrückt + / - Mäuse wurden durch die Berechnung der fold-change aus, dass in Wildtyp-Mäusen nachgewiesen bestimmt. Mäuse - Die Daten wurden auf statistische Signifikanz mit dem Student s t-Test zwischen Wildtyp-und alpha-CaMKII + / analysiert. Unter den Genen, deren Expression zeigte p &lt;0,05 inGyrus dentatus von alpha-CaMKII + / - Mäusen im Vergleich zu der Wildtyp-Mäusen sind die Top-50 Gene aufgelistet. Beachten Sie, dass die Zahl von Proben für Gyrus dentatus viel weniger als jene für die ganze Hippocampus sind. AffyID, Affymetrix-Sonde Kennung; CKII, alpha-CaMKII + / - Mäuse, WT, Wildtyp-Mäusen. <table border="1"><tbody><tr><td></td><td></td><td></td><td></td><td colspan="2"> Gyrus dentatus (p &lt;0,05) WT: n = 4, CKII + / -: n = 4 </td><td></td><td colspan="2"> Whole Hippocampus WT: n = 9, CKII + / -: n = 18 </td></tr><tr><td> Gene Titel </td><td> Genbank </td><td> AffyID </td><td></td><td> Falten Sie ändern </td><td> p-Wert </td><td></td><td> Falten Sie ändern </td><td> p-Wert </td></tr><tr><td> Desmoplakin </td><td> AV297961 </td><td> 1435494_s_at </td><td></td><td> 0,011018913 </td><td> 7.02694E-06 </td><td></td><td> 0,037021003 </td><td> 1.86126E-13 </td></tr><tr><td> Desmoplakin </td><td> AV297961 </td><td> 1435493_at </td><td></td><td> 0,014369734 </td><td> 7.86747E-06 </td><td></td><td> 0.04232106 </td><td> 1.00579E-12 </td></tr><tr><td> Tryptophan 2,3-Dioxygenase </td><td> AI098840 </td><td> 1419093_at </td><td></td><td> 0,020986484 </td><td> 5.23546E-09 </td><td></td><td> 0,101037776 </td><td> 4.14823E-13 </td></tr><tr><td> nephronectin </td><td> AA223007 </td><td> 1452106_at </td><td></td><td> 0,075479901 </td><td> 1.05191E-08 </td><td></td><td> 0,234001154 </td><td> 1.66301E-15 </td></tr><tr><td> nephronectin </td><td> AA223007 </td><td> 1452107_s_at </td><td></td><td> 0,079457767 </td><td> 1.40433E-07 </td><td></td><td> 0,177974715 </td><td> 3.9758E-12 </td></tr><tr><td> Thyreotropin-Releasing-Hormon-Rezeptor- </td><td> M59811 </td><td> 1449571_at </td><td></td><td> 0,103105815 </td><td> 0,003093796 </td><td></td><td> 0,801412732 </td><td> 0,283994361 </td></tr><tr><td> Ryanodinrezeptor 1, Skelettmuskel </td><td> X83932 </td><td> 1427306_at </td><td></td><td> 0,104825517 </td><td> 3.38513E-07 </td><td></td><td> 0,650685017 </td><td> 0,000308462 </td></tr><tr><td> nescient Helix Loop Helix 1 </td><td> NM_010916 </td><td> 1419533_at </td><td></td><td> 9.431896 </td><td> 6.7979E-06 </td><td></td><td> 4,078815314 </td><td> 5.27E-11 </td></tr><tr><td> copine Familienmitglied IX </td><td> BB274531 </td><td> 1454653_at </td><td></td><td> 9.159157 </td><td> 7.99492E-06 </td><td></td><td> 1,797304153 </td><td> 0,000296375 </td></tr><tr><td> Doublecortin-like Kinase-3 </td><td> BB326709 </td><td> 1436532_at </td><td></td><td> 0,109336662 </td><td> 1.95278E-07 </td><td></td><td> 0.56697229 </td><td> 2.62633E-08 </td></tr><tr><td> Calpain 3 </td><td> AF127766 </td><td> 1426043_a_at </td><td></td><td> 0,111269769 </td><td> 8.07053E-06 </td><td></td><td> 0,370956608 </td><td> 2.04421E-14 </td></tr><tr><td> Erwachsene männliche corpus striatum cDNA, RIKEN in voller Länge angereichert Bibliothek, Klon: C030023B07 Produkt: unklassifizierbare, voll Insertsequenz </td><td> BB357628 </td><td> 1460043_at </td><td></td><td> 0,118712341 </td><td> 6.16926E-07 </td><td></td><td> 0,682339204 </td><td> 2.33001E-06 </td></tr><tr><td> Kollagen und Calciumbindevermögen EGF Domänen 1 </td><td> AV264768 </td><td> 1437385_at </td><td></td><td> 0,124043978 </td><td> 3.65669E-05 </td><td></td><td> 0,488394112 </td><td> 4.05538E-06 </td></tr><tr><td> Amyloid-beta (A4)-Precursor-Protein-Bindung, Familie A, Mitglied 2-Bindungsprotein </td><td> AK013520 </td><td> 1431946_a_at </td><td></td><td> 7.7986307 </td><td> 1.2098E-06 </td><td></td><td> 2,099164713 </td><td> 1.67047E-06 </td></tr><tr><td> Calbindin-28K </td><td> BB177770 </td><td> 1456934_at </td><td></td><td> 0,130255444 </td><td> 3.32186E-06 </td><td></td><td> 0,572605751 </td><td> 1.99157E-10 </td></tr><tr><td> Transkribiert locus </td><td> AV328597 </td><td> 1443322_at </td><td></td><td> 0,133290835 </td><td> 5.43583E-06 </td><td></td><td> 0,562767164 </td><td> 7.56544E-06 </td></tr><tr><td> Neuropeptid Y-Rezeptor Y2 </td><td> NM_008731 </td><td> 1417489_at </td><td></td><td> 0,135319609 </td><td> 0,000113407 </td><td></td><td> 0,781498474 </td><td> 0.00394504 </td></tr><tr><td> ras responsive element binding protein 1 </td><td> BE197381 </td><td> 1428657_at </td><td></td><td> 0,138235114 </td><td> 7.93691E-07 </td><td></td><td> 0,651220705 </td><td> 2.94209E-05 </td></tr><tr><td> Glia-Zelllinie neurotrophen Faktor Familie Rezeptor alpha 2 </td><td> BB284482 </td><td> 1433716_x_at </td><td></td><td> 0,139062563 </td><td> 2.35371E-06 </td><td></td><td> 0,669544709 </td><td> 0,000214146 </td></tr><tr><td> preproenkephalin 1 </td><td> M13227 </td><td> 1427038_at </td><td></td><td> 6.9850435 </td><td> 2.39074E-08 </td><td></td><td> 1,766018828 </td><td> 0,000250501 </td></tr><tr><td> RIKEN cDNA 1810010H24 Gen </td><td> BI729991 </td><td> 1428809_at </td><td></td><td> 6.8658915 </td><td> 1.88516E-05 </td><td></td><td> 2.77573142 </td><td> 6.81865E-09 </td></tr><tr><td> Ryanodinrezeptor 1, Skelettmuskel </td><td> BG793713 </td><td> 1457347_at </td><td></td><td> 0,151364292 </td><td> 3.35612E-05 </td><td></td><td> 0,503144617 </td><td> 4.32907E-05 </td></tr><tr><td> Protocadherin 21 </td><td> NM_130878 </td><td> 1418304_at </td><td></td><td> 0,152671849 </td><td> 8.57783E-06 </td><td></td><td> 0,670714726 </td><td> 1.56309E-05 </td></tr><tr><td> cornichon homolog 3 (Drosophila) </td><td> NM_028408 </td><td> 1419517_at </td><td></td><td> 0,153724144 </td><td> 8.90755E-06 </td><td></td><td> 0.95780695 </td><td> 0,661055608 </td></tr><tr><td> Harakiri, BCL2 interagierende Protein (enthält nur BH3-Domäne) </td><td> BQ175572 </td><td> 1439854_at </td><td></td><td> 0,154284407 </td><td> 2.0118E-05 </td><td></td><td> 0.56516812 </td><td> 4.86925E-09 </td></tr><tr><td> Kohlenhydrat-(N-Acetyl 4-0) Sulfotransferase 9 </td><td> AK017407 </td><td> 1431897_at </td><td></td><td> 0,155238951 </td><td> 5.37423E-06 </td><td></td><td> 1.14910007 </td><td> 0,215637733 </td></tr><tr><td> Calpain 3 </td><td> AI323605 </td><td> 1433681_x_at </td><td></td><td> 0,160871988 </td><td> 1.07655E-05 </td><td></td><td> 0,477164757 </td><td> 1.33753E-11 </td></tr><tr><td> Zink-Finger, CCHC Domäne mit 5 </td><td> BQ126004 </td><td> 1437355_at </td><td></td><td> 0,161812078 </td><td> 3.08262E-06 </td><td></td><td> 0,421252632 </td><td> 0.01152969 </td></tr><tr><td> Loricrin </td><td> NM_008508 </td><td> 1448745_s_at </td><td></td><td> 0,165129967 </td><td> 1.86362E-05 </td><td></td><td> 0,639733409 </td><td> 0,000729772 </td></tr><tr><td> spondin 1, (f-spondin) der extrazellulären Matrix Protein </td><td> BC020531 </td><td> 1451342_at </td><td></td><td> 0,168035879 </td><td> 6.67867E-07 </td><td></td><td> 0,821042412 </td><td> 0,023650765 </td></tr><tr><td> RIKEN cDNA A930035E12 Gen </td><td> AV348640 </td><td> 1429906_at </td><td></td><td> 5.9086795 </td><td> 1.747E-07 </td><td></td><td> 1,470383201 </td><td> 0,104085454 </td></tr></tbody><tbody><tr><td> BB247294 RIKEN in voller Länge angereichert, 7 Tage die Neugeborenen Kleinhirn Mus musculus cDNA-Klon A730018G18 3 &#39;, mRNA-Sequenz. </td><td> BB247294 </td><td> 1447907_x_at </td><td></td><td> 5.9047494 </td><td> 1.04931E-05 </td><td></td><td> 1,968147585 </td><td> 0.00010636 </td></tr><tr><td> FERM Domäne mit 3 </td><td> BB099015 </td><td> 1437075_at </td><td></td><td> 5.860216 </td><td> 0,000345581 </td><td></td><td> 2,780297178 </td><td> 1.83072E-06 </td></tr><tr><td&gt; Neuronalen Pentraxin 2 / / / hypothetisches Protein LOC100044234 </td><td> NM_016789 </td><td> 1420720_at </td><td></td><td> 5.7568517 </td><td> 1.34227E-06 </td><td></td><td> 2,652516957 </td><td> 0,000206279 </td></tr><tr><td> Transkribiert Sequenzen </td><td> BG076361 </td><td> 1460101_at </td><td></td><td> 5.657735 </td><td> 2.5015E-06 </td><td></td><td> 1,296248831 </td><td> 0.22870031 </td></tr><tr><td> spondin 1, (f-spondin) der extrazellulären Matrix Protein </td><td> BC020531 </td><td> 1424415_s_at </td><td></td><td> 0.17783576 </td><td> 1.01658E-06 </td><td></td><td> 0,836181248 </td><td> 0,001380141 </td></tr><tr><td> Calbindin-28K </td><td> BB246032 </td><td> 1448738_at </td><td></td><td> 0,180317904 </td><td> 1.35961E-05 </td><td></td><td> 0,647334052 </td><td> 4.12268E-09 </td></tr><tr><td> MARCKS-like 1 </td><td> AV110584 </td><td> 1437226_x_at </td><td></td><td> 0,186235935 </td><td> 1.47067E-06 </td><td></td><td> 0,499291387 </td><td> 2.34984E-08 </td></tr><tr><td> Matrilin 2 </td><td> BB338441 </td><td> 1455978_a_at </td><td></td><td> 0,187783528 </td><td> 6.19122E-05 </td><td></td><td> 0.8967688 </td><td> 0,282337853 </td></tr><tr><td> Matrilin 2 </td><td> BC005429 </td><td> 1419442_at </td><td></td><td> 0,188195795 </td><td> 0,000105295 </td><td></td><td> 0,915528892 </td><td> 0.35282097 </td></tr><tr><td> spondin 1, (f-spondin) der extrazellulären Matrix Protein </td><td> BQ175871 </td><td> 1442613_at </td><td></td><td> 0,189956563 </td><td> 9.41195E-06 </td><td></td><td> 0,861033222 </td><td> 0.1394266 </td></tr><tr><td> Arrestin 3, retinale </td><td> NM_133205 </td><td> 1450329_a_at </td><td></td><td> 5.2130346 </td><td> 2.90599E-05 </td><td></td><td> 3,944218329 </td><td> 1.07437E-07 </td></tr><tr><td> RIKEN cDNA A330050F15 Gen </td><td> AV325555 </td><td> 1457558_at </td><td></td><td> 0.19186781 </td><td> 0,000119342 </td><td></td><td> 0,660282035 </td><td> 2.47342E-05 </td></tr><tr><td> Ansprechpartnerin 3 </td><td> BB559510 </td><td> 1438628_x_at </td><td></td><td> 0,194404608 </td><td> 4.08641E-07 </td><td></td><td> 0,918742591 </td><td> 0,022545297 </td></tr><tr><td> Calbindin-28K </td><td> BB246032 </td><td> 1417504_at </td><td></td><td> 0,196381321 </td><td> 2.24182E-05 </td><td></td><td> 0,619305124 </td><td> 3.6222E-06 </td></tr><tr><td> Gastrin Releasing Peptide </td><td> BC024515 </td><td> 1424525_at </td><td></td><td> 4.9436426 </td><td> 3.00588E-05 </td><td></td><td> 2,752845903 </td><td> 5.72954E-07 </td></tr><tr><td> Sortilin-bezogene VPS10 domain containing receptor 3 </td><td> AK018111 </td><td> 1425111_at </td><td></td><td> 4.885766 </td><td> 1.03645E-05 </td><td></td><td> 1.29051599 </td><td> 0,029733649 </td></tr><tr><td> Dopamin-Rezeptor-D1A </td><td> BE957273 </td><td> 1455629_at </td><td></td><td> 4.869493 </td><td> 3.77525E-05 </td><td></td><td> 1,815881979 </td><td> 0,000516498 </td></tr><tr><td> Proproteinkonvertase Subtilisin / kexin Typ 5 </td><td> BB241731 </td><td> 1437339_s_at </td><td></td><td> 0,210528027 </td><td> 7.83039E-05 </td><td></td><td> 0,574126078 </td><td> 9.15496E-05 </td></tr></tbody><tbody><tr><td> Interleukin-1 Rezeptor Typ I </td><td> NM_008362 </td><td> 1448950_at </td><td></td><td> 0,210572243 </td><td> 9.64524E-06 </td><td></td><td> 0,241135352 </td><td> 2.79816E-08 </td></tr></tbody></table>

dissection der hippocampalen von erwachsenen maus

Dissection of Hippocampal Dentate Gyrus from Adult Mouse

Der Hippocampus ist eine der am häufigsten untersuchten Areale im Gehirn wegen der wichtige funktionelle Rolle in Memory-Processing und Lernen, seine bemerkenswerte Nervenzellen Plastizität und ihr Engagement in der Epilepsie, neurodegenerative Erkrankungen und psychische Störungen. Der Hippocampus ist der unterschiedliche Regionen zusammen, Gyrus dentatus, der hauptsächlich aus Nervenzellen Granulat und Ammonshorn, die vor allem Pyramidenneuronen umfasst, und den beiden Regionen werden sowohl anatomische und funktionelle Schaltungen verbunden. Viele verschiedene mRNAs und Proteine ​​werden selektiv im Gyrus dentatus exprimiert, und Gyrus dentatus ist eine Seite der adulten Neurogenese, das heißt, neue Neuronen sind ständig im erwachsenen Gyrus dentatus generiert. Um zu untersuchen, mRNA und Protein-Expression spezifisch für den Gyrus dentatus, ist die Laser-Mikrodissektion häufig verwendet. Diese Methode hat jedoch einige Einschränkungen, wie zum Beispiel die Notwendigkeit für spezielle Apparate und komplizierte Handhabung. In diesem Video aufgezeichnet Protokoll, zeigen wir eine Dissektionstechnik zum Entfernen des Gyrus dentatus aus adulten Maus unter einem Stereomikroskop. Gyrus dentatus Proben unter Verwendung dieser Technik eignen sich für jede Assay, einschließlich Transkriptom-, Proteom-und Zellbiologie Analysen. Wir haben bestätigt, dass die präparierten Gewebe Gyrus dentatus ist durch die Durchführung real-time PCR des Gyrus dentatus-spezifische Gene, Tryptophan 2,3-Dioxygenase (TDO2) und Desmoplakin (DSP) und Ammonshorn bereichert Gene, Meis-related gene 1b (Mrg1b ) und TYRO3 Protein-Tyrosin-Kinase-3 (Tyro3). Die mRNA Expression von TDO2 und DSP im Gyrus dentatus Proben wurden bei offensichtlich höhere erkannt, während Mrg1b und Tyro3 wurden niedrigere, als die im Ammonshorn Proben. Zur Demonstration der Vorteil dieser Methode führten wir DNA-Mikroarray-Analyse unter Verwendung von Proben der gesamten Hippocampus und Gyrus dentatus. Die mRNA-Expression von TDO2 und DSP, die selektiv im Gyrus dentatus exprimiert, in der gesamten Hippocampus von alpha-CaMKII + / - Mäusen zeigte 0,037 und 0,10-fache Veränderungen im Vergleich zu der Wildtyp-Mäusen, bzw.. In der isolierten Gyrus dentatus, jedoch zeigten diese Ausdrücke 0,011 und 0,021-fache Veränderungen im Vergleich zu der Wildtyp-Mäusen, die zeigen, dass Veränderungen der Genexpression im Gyrus dentatus mit größerer Empfindlichkeit nachgewiesen werden. Zusammengenommen können diese bequeme und genaue Dissektionstechnik zuverlässig für Studien über den Gyrus dentatus konzentriert eingesetzt werden.

Ein Dissektionstechnik zur Entfernung des Gyrus dentatus aus adulten Maus unter einem Stereomikroskop wurde in diesem Video aufgezeichnet Protokoll demonstriert.

Dissection der hippocampalen von erwachsenen Maus

Der Hippocampus ist aufgrund seiner wichtigen funktionellen Rolle bei der Gedächtnisverarbeitung und beim Lernen sowie seiner ... eines der am intensivsten untersuchten Gebiete im Gehirn.

Das Hippocampus ist eines der am weitesten erforschten Gebiete im Gehirn, da es eine wichtige funktionelle Rolle bei der Verarbeitung von Erinnerungen spielt. Es zeichnet sich durch bemerkenswerte Neuroplastizität aus und ist an Epilepsie, neurodegenerativen Erkrankungen und psychischen Störungen beteiligt. Das Hippocampus besteht aus unterschiedlichen Regionen, der DTO-Gyrus, CO eins und CS drei.Der Gyrus dentatus ist ein Ort der Neurogenese, und viele Forscher könnten daran interessiert sein, diese Region zu untersuchen. In diesem aufgezeichneten Video-Protokoll zeigen wir eine Dissektionsmethode zum Entfernen der Gyrus-dentatus-Gewebe aus dem adulten Gehirn unter sterilen mikroskopischen Bedingungen. Diese Technik ermöglicht es uns, intakte gesamte Gyrus-dentatus-Gewebe zu isolieren.Die Technik ist sehr nützlich, da eine große Menge an Proteinen, Mease und Neuronen aus den Enter-Gel-Proben gewonnen und für beliebige Analysen verwendet werden kann, einschließlich transkriptomischer, proteomischer und CE-Biologie-Analysen. Hier ist Dr. Gil. Er demonstriert in diesem Video seine hervorragende Dissektionstechnik.Ich habe einen Film gesehen und war beeindruckt, wie gekonnt und geschmeidig Sie den Gyrus dissezieren. Sie besitzen die Technik eines Experten. Wie oft mussten Sie diese Technik üben, um dieses Kompetenzniveau zu erreichen?Ich habe mit dieser Technik bereits über 100-mal aus einem Vintage-GY präpariert, aber vermutlich brauchte ich nur etwa 20 Präparationen, um dieses Können zu erreichen. Glauben Sie, dass jemand, der an dieser Technik interessiert ist, diese Fertigkeit erwerben kann? Ja, das glaube ich.Aber Sie müssen eine gute Kontrolle über Ihre Hände und Finger haben. Gibt es Chips, die Sie uns geben können, oder Dinge, auf die wir bei der Durchführung dieser Technik achten sollten? Ja. Beim Entfernen des Dia-Pfeffers ist es sehr wichtig, den Hippocampus oder das umgebende Gewebe nicht zu verletzen.Eine solche Verletzung erschwert die Identifizierung der Grenzen zwischen der Sehne und der ursprünglichen Position des Arms. Das Erhalten dieser Grenzen ist für den Patienten von entscheidender Bedeutung. Vielen Dank. Hier. Okay, los geht's. Legen Sie das Gehirn in HighCo.PVS. Schneiden Sie das Gehirn entlang der longitudinalen al.Schneiden Sie diese Läsionen hinter der Laden. Legen Sie das zelluläre Penia Media auf die andere Seite nach oben und entfernen Sie die mehreren. Dies ist die gemessene Seite des Hippocampus.Sie können die Grenze von Ditis und der CS-Drei-Region sehen. Führen Sie eine Nadelspitze in jede Seite der Ditis ein und schieben Sie die Nadel entlang der septotemporalen Achse, wobei das Hippocampus-I. isoliert wurde.

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Research

Forschung

JoVE Journal

Biology

Biologie

Dieser Artikel beschreibt Verfahren zur Herstellung von Schnitten des Hippocampus von Ratten und transgenen Mäusen für die Untersuchung der synaptischen Veränderungen mit Gehirn Altern und altersbedingte neurodegenerative Erkrankungen wie Alzheimer-Krankheit.

Vorbereitung der akuten Schnitten des Hippocampus von Ratten und transgenen Mäusen für das Studium der Synaptic Veränderungen während des Alterns und Amyloid-Pathologie

Dieses Video zeigt die Aufzeichnung von rhythmischen neuronalen Netzwerkaktivitäten, auch bekannt als Theta-Oszillationen, in einem isolierten Hippocampus. Elektroden werden in verschiedene Schichten und räumliche Positionen eingeführt, um Theta-Oszillationen zu erkennen und zu analysieren. Dies zeigt die einzigartige neuronale Zusammensetzung und die Konnektivität des neuronalen Netzwerks über verschiedene Schichten des Hippocampus hinweg.

In vitro Aufzeichnung von Theta-Oszillationen im Hippocampus der Maus

Dieser Beitrag stellt eine komplette Methode für die Vorbereitung und die...

Verbesserte Zubereitung und Konservierung von Hippocampus Maus Slices für eine sehr stabile und reproduzierbare Erfassung der Langzeit-Potenzierung

Wir beschreiben zwei Methoden zur Visualisierung und Quantifizierung der dendritischen Arborisierung im Hippocampus von Mausmodellen: Echtzeit- und erweiterte Tiefenschärfebildgebung. Während die erste Methode eine ausgefeilte topographische Verfolgung und Quantifizierung des Ausmaßes der Verzweigung ermöglicht, ermöglicht die zweite eine schnelle Visualisierung des dendritischen Baumes.

Bewertung der dendritischen Verzweigung im Gyrus dentatus des Hippocampus-Region an der Maus

Ein Protokoll zur Generierung eines Co-Kultursystems, bestehend aus Neuronen, die von induzierten pluripotenten Stammzellen (iPSCs) abstammen, primären kortikalen Neuronen und Astrozyten wird beschrieben. Dieses Co-Kultursystem ermöglicht den Nachweis der Bildung von synaptischen Kontakten und Schaltkreisen zwischen neuen, iPSC-abgeleiteten Neuronen und bereits vorhandenen kortikalen Neuronen, die Channelrhodopsin-2 exprimieren.

Ein optogenetische Ansatz zur Abschätzung Bildung neuronaler Verbindungen in einer Co-Kultursystem

Diese Methode beschreibt eine chronische Zubereitung, die den optischen Zugang zum Hippocampus lebender Mäuse ermöglicht. Dieses Präparat kann verwendet werden, um längsinale optische Bildgebung der neuronalen strukturellen Plastizität und aktivitätsbeschworenen zellulären Plastizität über einen Zeitraum von mehreren Wochen durchzuführen.

Längs-Zwei-Photon-Bildgebung des Dorsal Hippocampal CA1 in lebenden Mäusen

Dies ist ein Protokoll zur akuten Scheibenpräparation von erwachsenen und alternden Maus Hippocampi, die Vorteile der transkardialen Perfusion und Schneiden schneiden mit eiskalten NMDG-aCSF nutzt, um hypoxische Schäden am Gewebe zu reduzieren. Die resultierenden Scheiben bleiben über viele Stunden gesund und eignen sich für Langzeit-Patch-Clamp- und Field-Recordings.

Minimierung der Hypoxie in Hippocampal Scheiben von erwachsenen und alternden Mäusen

Dieser Artikel zielt darauf ab, ein systematisches Protokoll zu beschreiben, um horizontale Hippocampus-Gehirnscheiben bei Mäusen zu erhalten. Das Ziel dieser Methode ist es, die Integrität von Hippocampus-Faserwegen zu erhalten, wie dem Perforantenweg und dem moosigen Fasertrakt, um dentate Gyrus-bezogene neurologische Prozesse zu bewerten.

Horizontale Hippocampal Scheiben der Maus Gehirn

Wir stellen ein Protokoll zur Vorbereitung von Akutscheiben aus dem dorsal-zwischengeschalteten Hippocampus von Mäusen vor. Wir vergleichen dieses transversale Präparat mit koronalen Schnitten in Bezug auf die Qualität der Aufnahmen und die Erhaltung morphologischer Merkmale aufgezeichneter Neuronen.

Vorbereitung von akuten Scheiben aus dem Dorsal Hippocampus für die Ganzzellaufnahme und neuronale Rekonstruktion im Dentate Gyrus von erwachsenen Mäusen

Hier zeigen wir, wie die Transfektion von primären hippokampalen Nagetierneuronen mit konfokaler Bildgebung in lebenden Zellen kombiniert werden kann, um pathologische Protein-induzierte Effekte auf den axonalen Transport zu analysieren und mechanistische Signalwege zu identifizieren, die diese Effekte vermitteln.

Verwendung von Lebendzell-Imaging zur Messung der Auswirkungen pathologischer Proteine auf den axonalen Transport in primären Hippocampus-Neuronen

Lernen Sie die Präparation des Gyrus dentatus aus dem Hippocampus erwachsener Mäuse unter dem Stereomikroskop. Diese Technik ermöglicht die Gewinnung intakter Proben für transkriptomische und proteomische Analysen.

Dissection der hippocampalen von erwachsenen Maus

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