Name: Studieren Aggression in Drosophila (Taufliege) (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-02-25T00:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 6 s
Description: Lernen Sie die Untersuchung von Aggression bei Drosophila durch kontrollierte Kämpfe in speziellen Kammern. Diese Methode ermöglicht die Analyse neuraler Mechanismen im Verhalten.

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1. Montage der Kammerwände <ol><li> Nehmen Sie zwei einfache Glasobjektträger, markieren Sie die Mitte an den beiden Kanten und mit einem geraden Kanten Herrscher als ein Führer, erzielt das Glas mit dem Diamantschleifer. </li><li> Schieben Sie die Diamantschleifer hin und her ein paar Mal, bis Sie ein kratzendes Geräusch zu hören. </li><li> Waschen Sie die Glas-, und hielt ihn mit zwei Papierhandtüchern über ein zerbrochenes Glas Behälter, sanften Druck in der Nähe der erzielten Übereinstimmung mit den erzielten Seite abgewandten Sie die Folie in zwei Hälften zu brechen. </li><li> Großzügig gelten die Glas-Klebstoff entlang einer Kante von einem Stück Glas und drücken Sie ein zweites Stück aus Glas gegen den Kleber in einem rechten Winkel zu dem ersten Stück. Legen Sie unten auf eine ebene Oberfläche (Aluminium-Folie, Pergamentpapier oder normales Papier) und lassen Sie sie für mindestens eine Stunde eingestellt. </li><li> Nach einer Stunde, wiederholen Sie die Anwendung des Klebers Schritt zu einer quadratischen Kammer bilden und erhärten lassen über Nacht. <img src="/files/ftp_upload/old/155_2008_9_3_3/155_figure-01.png" alt="Abbildung 1" width="358" height="266" /> </li></ol> 2. Platzierung der Wände in einer Petrischale <ol><li> Nehmen Sie die Spitze einer Petrischale und füllen bis zu einer Tiefe von mindestens 5 mm mit einer erhitzten Lösung von 2% Agarose (Mikrowelle die Agarose in VE-Wasser, bis es sich auflöst voll). </li><li> Warten Sie ein paar Minuten, aber dennoch aufgelöst, statt den Wänden der Kammer in der Mitte der Schale. Nehmen Sie die Unterseite der Petrischale, legen Sie es der Unterseite nach oben. Mit einer Flamme erwärmt gerade Präpariernadel, machen eine Reihe von kleinen Löchern (&gt; 1mm) in der Mitte der Schale für die Belüftung. Machen Sie ein größeres Loch (ca. 4 mm Durchmesser) leicht zur Seite für die Einführung fliegt in die Kammer. Legen Sie ein Stück abnehmbar Etikettenband über das größere Loch. <img src="/files/ftp_upload/old/155_2008_9_3_4/155_figure-02.png" alt="Abbildung 2" width="447" height="207" /> <img src="/files/ftp_upload/old/155_2008_9_3_5/155_figure-03.png" alt="Abbildung 3" width="328" height="211" /> </li></ol> 3. Making the Food Tasse <ol><li> Erhitzen Sie eine Flasche fliegen Lebensmittel bis zu dem Punkt, wo das Essen ist geschmolzen. Verwenden einer Pasteurpipette auf Nahrung zu einem Scintillationsfläschchen Schließungen Befüllen auf einer ebenen Fläche an der Spitze Form zu übertragen. Seien Sie vorsichtig, um Luftblasen zu vermeiden und abkühlen lassen. </li><li> Machen Sie frische Hefe Paste durch Schleifen eine kleine Menge Trockenhefe und ein paar Tropfen Wasser in einem Mörser zerstoßen. Fügen Sie mehr Hefe oder Wasser, bis die Konsistenz dick genug ist, um eine kleine sichtbare Drop von einem Zahnstocher abgeholt werden und auf die Mitte des Lebensmittel-Oberfläche. </li><li> Legen Sie die Flasche mit der Nahrung in der Mitte der Kammer und platzieren Sie den Boden der Petrischale, so dass die Seiten vorhanden sind und nicht verdeckt die Sicht auf der Kammer invertiert. Führen zwei 3-5 Tag alt fliegt durch Aspiration in die Kammer durch das größere Loch in der Spitze. Abdeckung das Loch mit Klebeband und legen ein Stück schwarzes Filterpapier mit einer 2 cm Loch in es in die Top Schüssel. </li><li> Legen Sie eine Schreibtischlampe über der Kammer, weit genug weg, dass es nicht Hitze der Kammer, und so positioniert, dass sie das Essen zu beleuchten. Der gesamte Aufbau sollte idealerweise in einer Umgebung mit hoher Luftfeuchtigkeit und einer Temperatur von 22-25 ° C platziert werden <img src="/files/ftp_upload/old/155_2008_9_3_6/155_figure-04.png" alt="Abbildung 4" width="284" height="212" /> </li></ol> 4. Begin Videoaufnahmen durch die vordere Wand der Kammer, wenn beide Fliegen auf dem foodsurface sind.

studieren aggression in drosophila (taufliege)

Studying Aggression in Drosophila (fruit flies)

Aggression ist eine angeborene Verhalten, das im Rahmen der Verteidigung oder um Ressourcen entwickelt. Diese komplexe soziale Verhalten wird durch genetische, hormonelle und Umweltfaktoren beeinflusst. In vielen Organismen ist die Aggression entscheidend für das Überleben, sondern die Kontrolle und Unterdrückung Aggression in verschiedenen Kontexten auch immer wichtiger geworden. In den letzten Jahren haben Wirbellosen immer nützlich, als Modellsysteme zur Untersuchung der genetischen und biologischen Systemen aufgrund der komplexen Sozialverhalten. Dies ist zum Teil auf das vielfältige Repertoire von Verhaltensweisen, die von diesen Organismen ausgestellt. Im dazugehörigen Video, skizzieren wir ein Verfahren zur Analyse Aggression in Drosophila, deren Design umfasst wichtige Öko-Ethologie Einschränkungen. Details umfassen Schritte für: making a kämpfen Kammer; Isolierung und Malerei fliegt; Zugabe fliegt, um den Kampf Kammer und Videoaufnahmen kämpft. Dieser Ansatz wird derzeit verwendet werden, um Kandidatengene wichtig in Aggression zu erkennen und bei der Ausarbeitung der neuronalen Schaltkreise, unterliegt die Ausgabe von Aggression und andere soziale Verhaltensweisen.

Studieren Aggression in Drosophila (Taufliege)

Aggression ist ein angeborenes Verhalten, das sich im Rahmen der Verteidigung oder Erlangung von Ressourcen entwickelt hat. Dieses komplexe soziale Verhalten wird beeinflusst durch ...

Mein Name ist Sarah Ertel und ich bin Postdoktorandin im Labor von Ed Kravitz in der Abteilung für Neurobiologie an der Harvard Medical School. Mein Name ist Sibu. Ich bin Medizinstudent aus Deutschland und absolviere hier im Kravitz-Labor eine forschende Rotation.Und wir möchten Ihnen zeigen, wie wir Kampfsituationen einrichten und die Aggression bei Fruchtfliegen untersuchen. Zunächst bereiten wir Isolationsröhrchen vor, indem wir Fliegenfutter in der Mikrowelle erwärmen und hinzufügen, wenn das Futter erstarrt ist, 1,5 mL in ein Kulturröhrchen. Anschließend verschließen wir es mit Watte.Der erste Schritt besteht darin, sozial naiv verhaltene Fliegen zu erhalten, also Fliegen, die noch keine andere Fliege gesehen haben. Dazu entnehmen wir späte Puppenstadien der Fliegenarten, die uns interessieren, und entfernen die Puppen vorsichtig mit einer Pinzette aus dem Reagenzglas.Nehmen Sie die vorbereitete Isolierphiole, entfernen Sie die Baumwollstopfen und platzieren Sie die Puppen vorsichtig hinein, verschließen Sie die Phiole und beschriften Sie sie. Diese Puppen werden anschließend in den licht- und temperaturgesteuerten Inkubator mit Tag-Nacht-Zyklus zurückgebracht. Am nächsten Tag überprüfen wir, ob sie eingeschlossen haben, und notieren das Datum, an dem die Fliegen eingeschlossen wurden.Dann lagern wir sie drei bis fünf Tage lang und tragen während dieser Zeit Farbe auf die Hinterleiber der Fliegen auf, um sie identifizieren zu können. Nun stellen wir die Kammern für die eigentlichen Kämpfe her. Dazu verwenden wir zwei gewöhnliche Objektträger, messen die Mitte aus, machen Markierungen mit einer Diamantschneidnadel, ritzen die Oberfläche ein und brechen den Objektträger dann an der markierten Stelle leicht entlang der Kerbe in zwei Hälften. Okay.Dann verkleben wir die Ränder der Objektträger mit Klebstoff. Anschließend werden die beiden Hälften zusammengeklebt, um eine Box zu bilden. Wir können sie mit 70 % Ethanol und anschließend etwas Wasser reinigen, um Rückstände von unseren Fingern zu entfernen.Füllen Sie den Boden der Kammer mit 1 % Agar und stellen Sie die Kammer hinein. Das sorgt für Luftfeuchtigkeit für die Fliegen. Danach wollen wir den Fliegen etwas geben, worum sie kämpfen können.Und so geben wir ihnen, obwohl die eigentliche Größe der Kammer als Territorium betrachtet werden kann, Nahrung. Und wir geben diese Nahrung in ein Szintillationsfläschchen. Dadurch entsteht eine zusätzliche Ebene möglicher Territorialität, die eine Fliege verteidigen könnte.Ich nehme nun das frisch mikrowellenerhitzte Futter und fülle es in Futtergefäße, die eigentlich Szintillationskappen sind und später als Kampfarena dienen werden, in der die Fliegen gegeneinander antreten. Es ist wichtig, die Oberfläche leicht konvex zu gestalten, damit die gesamte Fläche gut sichtbar ist. Außerdem sollten Luftblasen vermieden werden, da diese eine Behinderung für die Fliegen darstellen, wenn sie auf dem Futtergefäß laufen, um sie zum Futtergefäß hin anzulocken.Wir werden außerdem einen Tropfen Hefepaste in die Mitte des Futterbechers geben. Zuvor müssen wir jedoch die Hefepaste herstellen. Dazu nehmen wir einfach frische Hefepaste, geben sie in einen Futterbecher und fügen dann einen Tropfen Wasser hinzu, das wir so lange unterrühren, bis sich eine Paste gebildet hat.Nachdem die Futtergefäße abgekühlt sind, geben Sie die Hefepaste oder nur einen kleinen Tropfen davon in die Mitte des Futtergefäßes. Wir befinden uns gerade im Verhaltensraum, einem unserer beiden Verhaltensräume. Dieser Raum ist vollständig dunkel, wenn wir alle Lichter einschalten, und er verfügt über eine feuchte- und temperaturkontrollierte Umgebung.Wir halten die Temperatur also bei 25 Grad und versuchen, die Luftfeuchtigkeit über 40 % zu halten, um die Fliegen unter so kontrollierten Bedingungen wie möglich zu halten. Und jetzt werde ich die Kämpfe einrichten. Die Futtergefäße, die wir zuvor vorbereitet haben, stehen hier, und ich werde sie in diese Kammern einsetzen.Versuchen Sie, sie in die Mitte der Kammer zu platzieren. Wir setzen den Deckel wieder auf. Okay. Und ich werde diesen Aspirator verwenden, um genau ein Paar Fliegen abzusaugen.Ich werde also zwei Fliegen nehmen, sie hier hinein ansaugen und anschließend in die Kammer einbringen. Das ist es, was ich tun werde. Nun halte ich das Gefäß auf diese Weise, da bekannt ist, dass die Fliegen gegen die Schwerkraft und in Richtung des Lichts wandern, weshalb sie tendenziell nach oben fliegen.So ist es für mich einfacher, sie zu fangen, wenn ich die Baumwolle entferne. Wie Sie sehen, habe ich derzeit beide Fliegen im Gefäß. Außerdem muss ich sicherstellen, dass ich – da es sich hier um markierte Fliegen handelt – eine markierte und eine nicht markierte Fliege nehme.Oder wenn wir zwei Farben verwenden, eine, die in einer Farbe und eine in der anderen Farbe gefärbt ist, aber sie haben das gleiche Genotyp. Nun setze ich sie dafür in die Kammer ein. Ich entferne den Wachsbolzen.Es gibt ein kleines Loch, durch das ich die Fliegen einführen werde, und ich versuche, den Deckel so zu positionieren, dass die Fliegen beim Klopfen nicht entkommen können. Sie fallen etwas nach unten, und dann blase ich sie sanft hinein, nur leicht, damit ich sie nicht mit großer Kraft hineinblasen muss, was sie stören würde. Es dauert zwischen drei und sagen wir 40 Minuten, bis sie sich beruhigen und die Umgebung in der Kammer erkundet haben.Dann beginnen sie, die Futterkammer zu besetzen, und der Kampf wird ausbrechen. Nun nehme ich die gesamte Kammer und stelle sie vor die Kamera. Ich muss die Höhe anpassen, sodass ich die Futterkammer aus einem leichten Winkel filme, damit wir die gesamte Futterkammer sehen können. Und die gesamte Futterkammer ist scharf gestellt.Und der Raum, in dem diese Aggressionsassays durchgeführt werden, ist wichtig. Es handelt sich um einen abgeschotteten Raum, der frei von Durchgangsverkehr und Lärm gehalten wird. Die Temperatur beträgt konstant 25 Grad, und wir versuchen, die Luftfeuchtigkeit zwischen 45 und 55 % zu halten, um die Fliegen in dieser Situation zufrieden und gesund zu halten.Und außerdem dimmen wir das Deckenlicht, damit das Licht auf dem Futterbecher ebenfalls eine Anziehung auf die Fliegen ausübt. Die Verwendung von DFA als Modellsystem sowie diese Art des Versuchsaufbaus ermöglicht es uns, nicht nur die Aggressivitätsintensitäten zu untersuchen, sondern auch die spezifischen Muster der Aggression, die wir beobachten. Besonders interessieren uns die spezifischen Verhaltensweisen, bei denen wir wissen möchten, wie das Gehirn während der Entwicklung verdrahtet ist und wie sich dies dann im ausgewachsenen Tier manifestiert, das diese Verhaltensweisen nicht erlernt hat.Sobald sie sehen, wie die anderen Fliegen beginnen, miteinander zu interagieren, zeigen sie sofort dieses Verhalten. Sie wissen, wie man zustößt, sie wissen, wie man aggressiv ist. Wir möchten daher wissen, wie diese Verhaltensweisen in das Nervensystem der Fliegen eingebaut sind und wie sie anschließend gesteuert werden.

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Research

Forschung

JoVE Journal

Biology

Biologie

Aggression ist ein angeborenes Verhalten und frühere Kampferfahrungen beeinflussen die Kampfstrategie und den Ausgang späterer Wettkämpfe in Fliegen. Dieses Video beschreibt einen Assay, der zur Untersuchung des aggressiven Verhaltens von Drosophila verwendet wird. Das Beispielprotokoll zeigt den Assay in einem Setup, das den Umgang mit Fliegen eliminiert und somit den Stress für die Tiere reduziert, der sich sonst auf die Leistung der Probanden auswirken würde.

Drosophila Aggressions-Assay: Eine Methode zum Testen der Verhaltensplastizität bei Fliegen

In diesem Video-Artikel beschreiben wir einen automatisierten Test, um die Wirkung von Hunger oder Sättigung auf olfaktorische abhängige Nahrungsmittel Suchverhalten in der Erwachsenen Obst messen Drosophila melanogaster.

Ein Single-fly-Assay für Sammelverhalten in Drosophila

Hier präsentieren wir ein Protokoll zur Quantifizierung der Vermeidung von gestressten Personen. Dieses Paradigma ist leistungsfähig und dennoch benutzerfreundlich und kann verwendet werden, um den Einfluss von Genen und Umwelt auf eine Art von sozialer Interaktion bei Drosophila melanogaster zu bewerten.

Einfache Assay zur Quantifizierung von Sozialvermeidung in Drosophila melanogaster

Während Fruchtfliege Kämpfe, die Verhaltensmuster beobachtet, kämpfen Dynamik, und die damit verbundenen Lern- und Gedächtnis werden von experimentellen Bedingungen beeinflusst. Die hier vorgestellte Protokoll beschreibt ein neues Verfahren, das vollständig eliminiert Handhabung von Fliegen während der Experimente. Dies verbessert Kampf Dynamik und ermöglicht die Bildung von starken "Verlierer" Effekte.

Ein neuer Ansatz, die Handhabung für ein Studium Aggression Eliminiert und die &quot;Loser&quot; Effect in<em&gt; Drosophila melanogaster</em

Wir beschreiben ein Protokoll zur Induktion lohnend und nonrewarding Erfahrungen in Fruchtfliegen (Drosophila melanogaster) mit freiwilligen Ethanolkonsum als Maß für Änderungen in Lohn Staaten.

Ein einfacher Weg zu messen Veränderungen in Reward-seeking Verhalten verwenden<em&gt; Drosophila melanogaster</em

Dieser Artikel beschreibt einen Verhaltenstest , die männliche Paarungs Laufwerk verwendet in Drosophila melanogaste r Motivation zu studieren. Mit dieser Methode können die Forscher fortgeschrittene Fliegenneurogenetischen Techniken verwenden, um die genetischen, molekularen aufzudecken und zellulären Mechanismen, die diese Motivation zu Grunde liegen.

Messen und Ändern von Mating Antrieb in Male<em&gt; Drosophila melanogaster</em

Dieses Protokoll beschreibt eine Drosophila Lern-und Gedächtnis-Assay namens Balz Konditionierung. Dieser klassische Assay basiert auf einer Verringerung des männlichen Balzverhaltens nach sexueller Ablehnung durch eine nicht-rezeptive vorbereitete Frau. Diese natürliche Form der Verhaltens-Plastizität kann verwendet werden, um Lernen, Kurzzeitgedächtnis und Langzeitgedächtnis zu testen.

Drosophila Courtship Conditioning Als Maß für Lernen und Gedächtnis

Der Flypub-Assay misst das Verhalten, das die Fruchtfliege Drosophila melanogaster unter dem Einfluss von Ethanol zeigt. Der Assay kann leicht von Experimentatoren auf allen Ebenen gemeistert und auf verschiedene verdampfte Reize angewendet werden, was Substanzmissbrauch und Suchtstudien erleichtert.

Flypub zur Untersuchung von Ethanol induzierte Verhaltenshemmung und Sensibilisierung

Dieses Protokoll beschreibt, wie man eine einfache Erwachsene Drosophila Verhaltensbeobachtungskammer macht und wie man hochauflösende Fotos / Videos der Morphologie oder des Verhaltens verschiedener Arten von Fruchtfliegen in der Beobachtungskammer mit relativ einfachen und erschwinglichen Methoden macht.

Ein einstellbares Hochauflösendes Bildgebungssystem für Verhaltensstudien von Drosophila Erwachsenen

Diese Arbeit beschreibt ein einfaches Verhaltensparadigma, das die Analyse des aversiven assoziativen Lernens bei erwachsenen Fruchtfliegen ermöglicht. Die Methode basiert auf der Unterdrückung des angeborenen negativen Geotaxis-Verhaltens aufgrund der Assoziation zwischen einem bestimmten Umweltkontext und einem elektrischen Schlag.

Drosophila Passives Vermeidungsverhalten als neues Paradigma zur Untersuchung assoziativen aversiven Lernens

Die Autismus-Spektrum-Störung (ASS) ist mit einer Beeinträchtigung des sozialen und kommunikativen Verhaltens und dem Auftreten von sich wiederholendem Verhalten verbunden. Um die Wechselbeziehung zwischen ASD-Genen und Verhaltensdefiziten im Drosophila-Modell zu untersuchen, werden in dieser Arbeit fünf Verhaltensparadigmen zur Untersuchung von sozialem Abstand, Aggression, Balz, Pflege und Gewöhnungsverhalten beschrieben.

Paradigmen für die Verhaltensbewertung im Drosophila-Modell der Autismus-Spektrum-Störung

Lernen Sie die Untersuchung von Aggression bei Drosophila durch kontrollierte Kämpfe in speziellen Kammern. Diese Methode ermöglicht die Analyse neuraler Mechanismen im Verhalten.

Studieren Aggression in Drosophila (Taufliege)

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